目的:基于网络药理学探讨王浆酸(10-HDA)对人结肠癌SW620细胞增殖和迁移的影响,阐明其相关分子机制.方法:利用中药系统药理学(TMSCP)数据库和中医药综合数据库(TCMID)以关键词"蜂王浆"进行检索得到 10-HDA等活性成分及对应靶点,采用Swiss Target Prediction数据库预测小分子靶点.采用GeneCards数据库和在线人类孟德尔遗传(OMIM)数据库以关键词"Colon Cancer"获得靶点,利用String数据库和Cytoscape 3.8.0 软件构建蛋白-蛋白互作(PPI)网络,筛选核心靶点;利用Metascape数据库对基因本体(GO)功能富集和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路进行富集分析,筛选特有成分10-HDA进行体外活性实验.将生长状态良好的人结肠癌SW620细胞分为对照组和不同剂量(1、5、10、15和20 mmol·L-1)10-HDA组,采用MTT法检测各组细胞活性并计算细胞存活率.SW620细胞分为对照组、低剂量(5 mmol·L-1)10-HDA 组、中 剂 量(10 mmol·L-1)10-HDA 组 和 高 剂 量(15 mmol·L-1)10-HDA 组,Hoechst33342染色法观察各组细胞形态表现,细胞划痕实验检测各组细胞划痕愈合率,流式细胞术检测各组不同细胞周期细胞百分率,生化法检测各组细胞中总抗氧化能力(T-AOC)和超氧化物歧化酶(SOD)活性,Western blotting法检测各组细胞中B细胞淋巴瘤 2(Bcl-2)、Bcl-2 相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶 3(Caspase-3)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶 9(Caspase-9)、糖原合成酶激酶3β(GSK3β)、β-连环蛋白(β-catenin)和细胞周期蛋白D1(CyclinD1)蛋白表达水平.结果:TCMSP数据库筛选得到蜂王浆6种活性成分,10-HDA治疗结肠癌核心靶点28个.GO功能富集分析主要涉及细胞增殖和细胞凋亡等信号通路;KEGG信号通路富集分析涉及细胞周期、前列腺癌、细胞衰老和p53等信号通路,GSK3β/β-catenin信号通路与细胞周期有密切关联.与对照组比较,5、10、15和20 mmol·L-1 10-HDA组细胞存活率呈剂量依赖性降低(P<0.05或P<0.01).与对照组比较,不同剂量10-HDA组细胞中凋亡细胞数明显增多,细胞划痕愈合率明显降低(P<0.05 或P<0.01),中和高剂量 10-HDA组细胞中S期细胞百分率明显升高(P<0.05 或P<0.01),不同剂量 10-HDA组细胞中T-AOC和SOD活性明显降低(P<0.05或P<0.01).与对照组比较,低剂量10-HDA组细胞中Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.01),GSK3β蛋白表达水平明显升高(P<0.05);与对照组比较,中和高剂量 10-HDA组细胞中 Bax、Caspase-3、Caspase-9 和GSK3β蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01),Bcl-2、β-catenin和CyclinD1蛋白表达水平明显降低(P<0.01).结论:10-HDA可明显抑制结肠癌细胞增殖和迁移,并可促进结肠癌细胞的凋亡和氧化水平,其作用机制可能与激活GSK3β/β-catenin信号通路有关.

熊蜂是重要的商业传粉昆虫之一,人工驯养和应用熊蜂传粉是弥补自然传粉蜂锐减,满足现代农业授粉需求的重要举措.营养和饲料是实现熊蜂驯养和工厂化生产的关键问题之一.本文综述了单一和混合花粉饲料,不同蛋白质和脂肪比例的饲料,不同氨基酸水平的饲料,以及碳水化合物饲料中添加营养元素或者蜂王浆等对熊蜂发育的影响.其中,混合花粉相比单一花粉对幼虫体重发育有促进作用;欧洲地熊蜂Bombus terrestris成年蜂摄取的蛋白质和脂肪的最佳比例为14∶1;高浓度的氨基酸饲料对蜂王产卵和幼虫成熟有促进作用;碳水化合物中添加营养元素能够促进蜂王产卵,蜂群成群;饲料中添加蜂王浆能够提高蜂王存活率和产卵率.建议未来以本土熊蜂的生产群体为研究对象,针对熊蜂阶段性营养需求及可能影响熊蜂发育的肠道共生菌等因素开展研究.

目的 建立10-羟基-α-癸烯酸(10-HAD)含量测定方法,分析钴60辐照前后10-HAD的含量变化,结合微生物检测指标,评价制剂钴60辐照灭菌的适用性.方法 采用HPLC法进行含量测定.C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:甲醇-0.4％ 磷酸溶液(50:50);流速1 mL/min;柱温30℃;检测波长210 nm.通过外标标准曲线法定量,并检验微生物指标.结果 制剂中10-HAD钴60辐照前后含量基本一致,未出现显著差异.成分的含量在0.04～0.52μg范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率为97.5％(RSD=1.1％,n=9).微生物灭菌效果理想,符合要求.结论 此研究为参景片钴60辐照(辐照剂量9kGy)灭菌的适用性提供了依据.

蜜蜂是整个大自然生态系统中不可或缺的一部分,能有效地为多种植物和农作物授粉.蜜蜂是典型的真社会性昆虫,其生殖劳动分工现象有重要进化意义.而级型分化是导致劳动分工的一个重要因素,蜜蜂级型分化现象的机理研究已成为目前重要的研究热点之一.本文对近年来蜜蜂级型分化机理方面的研究进展进行了综述.国内外很多学者从营养、激素、基因表达、蛋白质和表观遗传等方面对蜜蜂级型分化机理进行了研究.蜂王浆中富含的57 kDa、蜂王幼虫期充足的食物量以及蜂王幼虫期高滴度的保幼激素(JH)和蜕皮激素(MA)等都可促进蜂王卵巢的发育以及诱导蜂王表型产生;而工蜂浆中富含的双香豆酸可诱使工蜂表型的产生.近年研究表明,表皮生长因子受体(Egfr)、胰岛素受体底物基因(Irs)、雷帕霉素基因(Tor)和甲基转移酶3(Dnmt3)等基因均可影响蜂王和工蜂的分化;蛋白质表达谱分析表明,不同时间点的蜂王幼虫和工蜂幼虫表达的差异蛋白质很多;表观遗传分析表明,DNA甲基化、microRNAs以及组蛋白乙酰化均是导致蜂王和工蜂级型分化的因素.此外,发育空间和蜂王浆均可通过调控基因的DNA甲基化水平影响蜜蜂幼虫的级型分化.

目的 建立测定蜂王浆(honeybee royal jelly,RJ)中葵二酸(sebacic acid,SA)含量的液-质联用方法.方法在样品前处理阶段,28个新鲜RJ样品经过了固相萃取(solid phase extraction,SPE);在目标分析物检测阶段,脂肪酸富集物经过了超高效液相色谱-串联质谱多反应监测(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry under multiple reaction monitoring,UPLC-MRM-MS/MS).结果SA标准曲线相关系数(r)为0.998410,日内、日间准确度和精密度分别为98％和116％以及1.94％和2.18％,检测限和定量限分别为16、108 ng/ml;低、中、高SA添加水平的SPE前、后标准品添加RJ样品回收率和基质效应分别为94％、98％和95％,以及2.4％、1.2％和1.7％;RJ样品SA含量测定值为(0.0722±0.0107) g/100g.结论 SPE/UPLC-MRM-MS/MS可以测定RJ中SA含量.

迁延性和慢性肝炎的病程较长，部分病例的血清转氨酶停留于较高水平，虽经多种方法治疗，常难以奏效。1961年以来我们曾以鲜王浆、丙酸睾丸酮、硫辛酸、促肾上腺皮质激素或肾上腺皮质激素类药物治疗转氨酶持续升高的迁延性和慢性肝炎患者共120例，疗效不令人满意。

目的 探讨蜂王浆对顺铂诱导人胚肾细胞损伤的保护作用及其可能的机制.方法 将细胞分为损伤组(100 μg/ml CDDP)、蜂王浆(RJ)不同剂量组(CDDP+25、50、100 μg/ml RJ)和正常对照组(等量溶剂).各组经处理后,通过CCK-8法检测细胞增殖活力,比色法测定培养基乳酸脱氢酶(LDH)活性反映细胞损伤情况;Hoechst33342/PI双染法分析细胞凋亡情况;测定细胞活性氧(ROS)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性.结果 与对照组比较,损伤组培养液中LDH活性增加,细胞损伤增加、增殖活力降低、凋亡增加,差异具有统计学意义(P＜0.05);细胞内SOD、CAT和GSH-Px活性降低,ROS含量增加,差异具有统计学意义(P＜0.05).25～100 μg/ml浓度范围内RJ能明显改善这些指标,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.O1),且改善作用和浓度呈正相关(P＜0.05).结论 100 μg/ml CDDP可通过氧化损伤诱导的HEK-293细胞凋亡,活力降低.25～100 μg/ml浓度范围内RJ能增加胞内SOD、CAT和GSH-Px 3种抗氧化酶活性,降低ROS含量,减轻这种损伤.

用于生产生物燃料的微藻生物技术正处于十字路口,但仍在不断发展.微藻衍生的多产品技术的发展将大大提高经济可行性,特别是结合生产高附加值化合物.研究结果表明敲除海洋微拟球藻中的DWARF1(DWF1)基因的突变株具有比野生型更高的色素含量和光合效率,并且还可以显著降低胆固醇积累(这可能是人类心血管疾病的主要危险因素),使其从原本占总甾醇(TSs)超过70％的含量减少至零.相比之下,其前体24-亚甲基胆固醇(一种对人类健康有益的蜂王浆的关键微量营养素)的产量则从零增加到60％以上.结合海洋微拟球藻中ω-3脂肪酸含量高的特点,我们预计在工业规模上开发该菌株将带来可观的利润.

Lozenge蛋白(Lz蛋白)是昆虫的重要转录因子,在昆虫胚胎发育过程中发挥重要作用.为研究Lozenge在西方蜜蜂Apis mellifera中的作用,本研究克隆了Lozenge基因,并对其进行生物信息学分析,同时基于荧光定量PCR技术检测该基因在西方蜜蜂不同发育时期(卵期、幼虫期、蛹期和成年蜂)和 10 日龄哺育蜂各组织的表达谱.生物信息学分析结果显示,Lozenge基因的开放阅读框(ORF)为1554 bp,共编码 517 个氨基酸,预测分子量为54.63918 kDa,等电点为6.08;结构域预测分析发现Lozenge蛋白含有一个Runt结构域,多物种蛋白序列对比发现该蛋白同源性高.时期表达谱表明,该基因在第1 日卵和第 2 日卵的表达量远高于其他时期,在卵期表达量随时间依次递减,幼虫期表达量极低,蛹期表达量呈先增后减的趋势,而成年蜂中均有表达;组织表达谱显示,该基因在哺育蜂头部、上颚腺中的表达量较高,而在腹部的表达量低.这些结果表明,Lozenge基因可能在西方蜜蜂胚胎期细胞发育过程、哺育蜂蜂王浆合成和分泌过程中发挥重要作用,这些结果为该基因功能的深入研究提供了重要的理论参考.

目的 通过有效成分测定、自由基清除和免疫调节实验研究植物酵素/蜂王浆混合物的生物活性.方法 采用HPLC法、BCA法及亚硝酸钠-硝酸铝比色法分别测定10-羟基-2-葵烯酸和没食子酸、蛋白质及黄酮类化合物的含量;通过测定植物酵素/蜂王浆混合物对自由基的清除率及免疫低下小鼠免疫指标的影响考察其抗氧化及免疫调节活性.结果 植物酵素/蜂王浆混合物中10-羟基-2-葵烯酸、蛋白质含量分别为3.30 mg·mL-1、145.90 mg·g-1,酵素原浆中没食子酸、黄酮类化合物分别为0.35 mg·mL-1、0.16 mg·mL-1.植物酵素/蜂王浆混合物对DPPH·、超氧阴离子自由基及羟自由基的清除率分别为85.11％、72.20％及44.51％.中、高剂量组的植物酵素/蜂王浆混合物均能显著提高模型组小鼠的免疫脏器指数(P＜0.05),高剂量组在一定程度上能修复免疫低下小鼠免疫器官的形态结构,植物酵素/蜂王浆混合物各剂量组均可显著提高小鼠血清中IgM、IL-1β和TNF-α细胞因子的含量(P＜0.01),具有免疫增强作用.结论 植物酵素/蜂王浆混合物具有较好的抗氧化性能及增强免疫低下小鼠免疫功能的作用.