目的:探究甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶1(MASP1)对肝癌细胞生物学行为的影响及可能分子机制。方法:选取2022年1月10日至10月25日在南通大学附属医院行肝癌切除手术患者的20对新鲜肝癌组织和癌旁(距癌组织3 cm)正常组织标本并分析MASP1的表达情况。收集2012年3月1日至2017年5月20日南通大学附属医院病理科组织标本库中67例肝癌患者的癌组织及对应的癌旁(距癌组织3 cm)正常组织，分析MASP1的表达水平与肝癌患者临床资料的相关性。培养人肝癌细胞系SK-Hep1、Hep3B并构建 MASP1过表达和 MASP1敲减细胞株，设立SK-Hep1阴性对照、SK-Hep1 MASP1过表达组与Hep3B阴性对照和Hep3B MASP1敲减组。通过裸鼠皮下移植瘤实验分析MASP1对肝癌细胞增殖的影响。通过蛋白质印迹法检测MASP1对上皮-间质转化相关蛋白质[神经钙黏素、基质金属蛋白酶9(MMP9)、上皮钙黏素]表达的影响，以及MASP1对磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路相关蛋白质的表达及其磷酸化水平的影响。统计学方法采用独立样本 t检验、配对 t检验和卡方检验。 结果:20对新鲜组织标本的免疫组织化学染色结果显示，MASP1在肝癌组织中的表达低于癌旁正常组织(3.73±1.03比6.76±1.46)，差异有统计学意义( t＝16.97， P<0.001)。67例肝癌患者的临床资料与MASP1的表达水平相关性分析显示，MASP1的表达水平与肿瘤有无侵犯血管有关，差异有统计学意义( χ2＝5.20， P＝0.023)。裸鼠皮下移植瘤实验显示，SK-Hep1 MASP1过表达组小鼠的皮下肿瘤比SK-Hep1阴性对照组体积更小、重量更轻[(165.42±149.08) mm 3比(260.42±179.78) mm 3、(0.13±0.12) g比(0.18±0.12) g]，差异均有统计学意义( t＝5.15、3.89，均 P<0.05)。蛋白质印迹法显示，SK-Hep1 MASP1过表达组神经钙黏素和MMP9表达低于SK-Hep1阴性对照组，上皮钙黏素表达高于SK-Hep1阴性对照组(0.73±0.01比1.02±0.02、0.40±0.01比0.69±0.01、0.91±0.02比0.78±0.02)，差异均有统计学意义( t＝24.23、36.87、9.27，均 P<0.001)。Hep3B MASP1敲减组神经钙黏素和MMP9表达高于Hep3B阴性对照组，上皮钙黏素表达低于Hep3B阴性对照组(1.04±0.01比0.31±0.01、0.54±0.02比0.04±0.01、0.56±0.01比0.93±0.01)，差异均有统计学意义( t＝163.20、53.16、60.74，均 P<0.001)。SK-Hep1 MASP1过表达组的磷酸化PI3K、磷酸化Akt、磷酸化mTOR的表达低于SK-Hep1阴性对照组(0.59±0.01比1.02±0.01、0.64±0.01比1.12±0.02、0.10±0.01比1.05±0.02)，Hep3B MASP1敲减组的磷酸化PI3K、磷酸化Akt、磷酸化mTOR的表达高于Hep3B阴性对照组(0.96±0.01比0.55±0.01、0.99±0.01比0.38±0.01、0.93±0.02比0.06±0.01)，差异均有统计学意义( t＝40.87、40.91、87.30、44.17、107.50、67.28，均 P<0.001)。 结论:MASP1在肝癌组织中低表达，并且与肝癌患者的不良预后及肿瘤血管侵袭的发生显著相关，其可能通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路影响肝癌细胞的增殖和迁移能力，提示 MASP1有望成为治疗肝癌的关键基因。

目的 检测肝细胞肝癌患者血浆中甘露糖结合凝集素(MBL)、MBL相关丝氨酸蛋白酶-2(MASP-2)的表达水平,探讨其与肝细胞肝癌发生发展的相关性.方法 用酶联免疫吸附测定方法检测64例肝细胞肝癌患者及30例健康人血浆中MBL及MASP-2的表达水平,并用统计学方法分析患者血浆中MBL及MASP-2的浓度与各临床指标的相关性.结果 肝细胞肝癌患者血浆中MBL和MASP-2的浓度均显著高于健康人群(P=0.014、0.002),MBL/MASP-2比值在健康人群与肝细胞肝癌患者中的差异无统计学意义,此外,患者血浆中MBL与MASP-2并无相关性.在肝细胞肝癌患者中,血浆MBL水平与肿瘤的血管侵犯(r=0.253,P=0.047)和总胆红素水平(r=0.283,P=0.024)呈正相关;血浆中MASP-2水平与肝细胞肝癌的TNM分期呈正相关(r=0.276,P=0.027),而与血浆白蛋白呈负相关(r=0.-0.317,P=0.015).经ROC曲线分析,MBL和MASP-2曲线下面积分别为0.665(P=0.010)和0.694(P=0.003),对肝细胞肝癌诊断的敏感性分别为50%和89.1%.结论 补体凝集素途径的关键分子MBL、MASP-2与肝细胞肝癌患者的炎症状态和疾病进展相关,参与了肝癌的发生与发展.

甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶3(MASP3)是补体凝集素途径的酶成分之一,由MASP1/3基因编码.既往资料证实,MASP3不参与凝集素途径活化,对补体蛋白C3、C4以及C2均无酶切活性,而近期研究表明MASP3是参与补体D因子活化的关键酶,进而可能是联系补体凝集素途径和旁路途径活化的重要成分.此外,人们通过动物疾病模型研究发现MASP3可能作为补体旁路途径异常相关疾病的新治疗靶点,从而为相关疾病提供新的治疗思路.本文旨在对MASP3的编码基因、蛋白结构、生物学功能以及其在旁路途径功能异常相关疾病模型中的研究进展进行综述.

目的 研究人甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2(MASP-2)在大肠癌患者外周血中的变化及组织中的表达,为临床诊断和治疗提供参考.方法 采用酶联免疫吸附法检测MASP-2含量并结合临床资料进行分析,免疫组织化学法检测癌组织和癌旁组织的表达情况.结果 癌症组患者血清MASP-2浓度低于对照组(P<0.05),低分化人群MASP-2浓度高于高-中分化人群(P<0.05).癌症组不同年龄、性别、TNM分期、淋巴结转移及癌症类型患者MASP-2比较无差异(P>0.05).癌症组患者MASP-2阳性率高于对照组患者(P<0.05).结论 MASP-2在早期大肠癌患者外周血中的浓度发生了变化,同时MASP-2在肿瘤组织中高表达,可能在其肿瘤的发生发展中起到一定作用.

目的:探讨甘露糖结合凝集素(MBL)途径相关蛋白甘露糖结合丝氨酸蛋白酶-2(MASP2)、MASP3在C3肾小球病(C3G)患者血清中的表达及其在C3G发病中的作用.方法:回顾性分析15例C3G患者(14例C3肾小球肾炎和1例致密物沉积病)的临床资料,用ELISA测定肾活检当天血清MASP2、MASP3水平,分析MASP2、MASP3与临床及病理指标的关系.10名健康志愿者为对照.结果:C3G患者血清MASP2、MASP3水平均高于对照组(P<0.05).血清MASP2、MASP3水平与肾小球滤过率及血清补体C3水平均无关(P>0.05),血清MASP3水平与24 h尿蛋白定量呈正相关(r=0.563,P=0.036).C3荧光强度高或有基底膜内电子致密物沉积的C3G患者血清MASP2水平较低(P<0.05).结论:C3G患者尿蛋白量随着血清MASP3的升高而升高,提示MBL途径可能参与该病的发生发展;MASP2水平的异常降低可能与C3G病理损伤程度加重有关.

目的:通过生物信息学方法对甘露糖结合凝集素2(MBL2)蛋白与甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶(MASPs)家族蛋白质的相互作用进行全面预测分析.方法:使用同源建模(Swiss-model)和折叠识别(Phyre2)分别来构建MBL2蛋白与MASPs家族蛋白质的结构,使用STRING数据库及ZDOCK3.02预测分析MBL2与MASP1、MASP2两个蛋白质的相互作用情况.结果:MBL2与MASP1和MASP2均存在直接相互作用,并且和COLEC11、COLEC10、FCN2、C4B等构成相互作用网络.MBL2与MASP1结合位点和MASP2的结合位点高度重叠.MBL2参与结合MASP1的残基,大部分(77％)也参与了与MASP2的结合,表明MBL2是通过同一个区域,分别与MASPs家族的蛋白质相互作用.结论:MBL2与MASPs家族蛋白质之间作用密切,从而可能在补体系统激活及机体免疫防御等方面发挥重要的作用.

目的:研究血清甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2、3(MASP2、MASP3)在IgA肾病(IgAN)患者血清中的表达及其在IgAN发病中的作用.方法:收集我院2016年9月至2017年3月首次经肾活检确诊的143例IgAN患者作为病例组,同期在我院体检科的60例健康体检者作为对照组.用ELISA方法测定血清MASP2、MASP3浓度,分析血清MASP2、MASP3浓度与各临床指标、牛津病理评分、IgA/C3免疫荧光沉积强度以及预后的关系.结果:(1)IgAN组与对照组血清MASP2浓度无统计学差异(Z=-0.347,P=0.729),IgAN组血清MASP3浓度高于对照组(Z=-3.8,P<0.001).(2)与血清中等浓度MASP2(224.22,2540.50 ng/ml)的IgAN患者相比,血清低浓度MASP2(<224.22 ng/ml)患者肉眼血尿发生率更高(χ2=9.892,P=0.002),而血清高浓度MASP2(>2540.50 ng/ml)患者有更严重的蛋白尿(Z=-2.64,P=0.008)和更高的新月体评分(χ2=5.165,P=0.023).(3)与血清低中量浓度MASP3(≤2512.83 ng/ml)的IgAN患者相比,血清高浓度MASP3(>2512.83 ng/ml)患者有更严重的蛋白尿(Z=-4.526,P<0.001),且系膜增生比例、毛细血管内增生比例、肾小管萎缩/间质纤维化比例、新月体比例较高(χ2=8.955,P=0.003;χ2=4.484,P=0.034;χ2=9.853,P=0.002;χ2=9.516,P=0.002).(4)IgA荧光强度弱阳性组血清MASP2浓度高于强阳性组(Z=-2.546,P=0.011),不同C3荧光强度血清MASP2、MASP3浓度间差异均无统计学意义(P>0.05).(5)Kaplan-Meier生存曲线显示血清MASP2低浓度组和高浓度组患者肾脏生存率明显低于中等浓度组(P<0.05).血清高MASP3浓度组患者肾脏生存率明显低于低中量浓度组(P<0.05).结论:(1)血清中过高或过低浓度的MASP2在IgAN的发展中均起作用,MASP2可能在IgAN中具有多重作用机制.(2)血清中高浓度的MASP3可能促进了IgAN的进展.

目的 通过检测血清中人甘露糖醇结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶(MASP)-2在非小细胞肺癌(NSCLC)患者中的浓度水平,分析其作为NSCLC辅助诊断指标的临床价值.方法 应用酶联免疫法和流式荧光法检测61名健康人、46例肺部良性疾病患者和139例NSCLC患者血清中MASP-2和细胞角蛋白19片段(Cyfra21-1)的浓度水平,分析联合检测血清MASP-2和Cyfra21-1在NSCLC辅助诊断中的临床意义.结果 NSCLC患者血清中MASP-2的浓度水平明显高于肺部良性疾病患者和健康人,差异有显著统计学意义(Z=2.942,P<0.01);联合检测MASP-2和Cyfra21-1在NSCLC中的灵敏度为64.0％,显著高于单一肿瘤标志物的阳性率(χ2=7.714,P<0.01);血清MASP-2在Ⅰ期和Ⅱ期NSCLC中检测的灵敏度为38.5％,显著高于Cyfra21-1(χ2=6.212,P<0.05).结论 血清 MASP-2 在 NSCLC 的辅助诊断中具有较好的临床应用价值,联合MASP-2和Cyfra21-1可以提高NSCLC检测的灵敏度.

为了探讨牦牛适应高海拔低氧环境的基因表达特征与规律,对在高海拔(3 560 m)和低海拔(478 m)地区饲育4个月的2.5 ～3岁健康雄性麦洼牦牛肺组织进行转录组测序.转录组测序采用Illumina高通量测序平台(HiSeqTM2500/4000)进行,并以qRT-PCR验证差异表达基因的表达量.结果 显示,高海拔组牦牛肺脏转录组平均每个测序样本得到约5.76亿条Clean Reads,低海拔组牦牛得到约6.10亿条Clean Reads,比对到参考基因组上的Reads数分别占91.74％和91.28％以上,共发现了2 047个新转录本.低海拔组与高海拔组牦牛肺脏组织之间共有199个差异表达基因,其中含89个差异上调表达基因和110个差异下调表达基因.所得差异表达基因富集在297个GO条目和146个KEGG通路中,包含62个低氧适应相关的GO条目和35个低氧适应相关代谢通路.其中低氧适应相关GO条目在生物过程、细胞组成和分子功能三种类别中占比最多的分别为细胞粘附、蛋白复合物和钙离子结合.低氧适应相关KEGG通路中占比最多的为肿瘤坏死因子(TNF)信号通路,其次为低氧诱导因子1(HIF-1)信号通路.qRT-PCR验证结果显示,Ⅱ类人类白细胞抗原α链(HLA-DOA、HLA-DRA)、补体因子(C2)和甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶1(MASP1)基因的表达量变化与转录组测序结果相符.本研究为全局和深入理解牦牛肺组织转录本表达对高海拔低氧的响应提供了有价值的切入点.

目的 应用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术联合液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术筛选造影剂致急性肾损伤(CI-AKI)老年患者早期诊断的尿液生物标记物.方法 收集48例行经皮冠状动脉介入(PCI)术的老年患者一般资料,并将发生CI-AKI的患者纳入CI-AKI组(6例),同期从未发生CI-AKI的病例中按照1:1比例选取患者纳入对照组(6例).收集两组患者术后6 h尿液,并同时监测术前及术后24、48 h血肌酐水平.应用iTRAQ技术联合LC-MS/MS技术筛选出CI-AKI患者PCI术前后的相关差异蛋白,并进行生物信息学分析.结果 两组患者在各时间点血肌酐水平比较,差异有统计学意义(F=6.591,P=0.015);CI-AKI组患者术后48 h的血肌酐水平较同组术前显著升高,且与对照组患者术后48 h比较亦显著升高[(133±41)、(94±34)、(81±32)μmol/L,P均<0.05].与PCI术前相比,CI-AKI患者术后6 h共鉴定出差异蛋白151个,与CI-AKI相关的主要差异蛋白为血管紧张素原、人甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2、免疫球蛋白G2重链、血清载脂蛋白A1、人过氧化物还原酶5,主要参与补体和凝血级联反应、肾素-血管紧张素系统通路等.结论 iTRAQ技术能早期筛选出行PCI术后老年患者发生CI-AKI的潜在生物标志物,为临床早期诊断CI-AKI提供分子依据.