环孢霉素A是一种主要由膨大弯颈霉Tolypocladium inflatum产生的环肽类次级代谢产物,临床上被广泛用作免疫抑制剂,其合成需要特殊底物(4R)-4-[(E)-2-butenyl]-4-methyl-L-threonine(Bmt),但目前相关Bmt的研究很少.基因敲除实验证实Bmt的生物合成需要一个聚酮合酶(polyketosynthase,PKS)基因(simG)参与,并推测其功能为合成 Bmt 的前体化合物羧酸分子 3(R)-hydroxyl-4(R)-methyl-6(E)-octenoic acid(B1).本研究通过在同为虫生真菌的球孢白僵菌 Beauveria bassiana中异源表达simG,以证明该基因的功能.通过克隆获得了较大基因 simG,利用根癌农杆菌 Agrobacterium tumefaciens介导方法将该基因转化到球孢白僵菌中,通过基因检测和半定量RT-PCR筛选出目标基因表达量高的菌株,获得 4株simG高表达菌株.将其发酵培养后,利用LC-MS检测发酵产物,发现在simG高表达菌株中存在与B1分子量相同的产物峰.本研究进一步证明了simG负责化合物B1的合成,是Bmt合成的关键基因.本研究进一步加深了对环孢霉素的生物合成机理的认识,为构建Bmt高产的工程菌株提供理论支撑,有望从解决底物来源角度促进环孢霉素生产效率的提高.

本研究将球孢白僵菌Beauveria bassiana和摩西球囊霉菌Glomus mosseae作为混合菌剂接种于烟草.设置了未施菌(CK)、单施球孢白僵菌(BB)、单施摩西球囊霉菌(GM)和混合施菌(MIX)4 个不同处理,并对田间烟草整个生长周期的农艺性状、叶绿素 SPAD 值、干物质积累和石油醚提取物(PEE)含量进行了测定.结果表明:混合施菌处理能显著提高苗期根系的农艺性状,表现出对根系的促生作用;幼苗的干物质积累也得到显著提升.移栽后,混合施菌处理的植株的最大叶面积、叶片数、茎围和株高相较于未施菌组均得到显著提升,植株叶绿素含量得到显著增加,干物质积累量提高了 1.24-1.32倍.在移栽 60 d后,MIX植株叶绿素含量显著降低,降幅达 20.1%.混合施菌处理显著提高了上部成熟烟叶的PEE含量,其中在B2F和B3F等级烟叶中分别提高了 5.70%和 6.68%.球孢白僵菌和摩西球囊霉的混合应用在烟草不同生长阶段均具有协同增效作用,显著改善了烟草的根系发育,提高了植株的生长势和上部叶PEE的含量.

目的 调查我国熟制坚果与籽类食品中霉菌及其毒素污染状况,掌握该类食品中霉菌及真菌毒素污染风险的关联性.方法 通过采集市售商品,检测霉菌及其毒素,采用内转录间区(ITS)测序法对样品中污染的霉菌进行属鉴定.结果 19.32％(560/2912)的熟制坚果与籽类食品霉菌计数＞25CFU/g.单一、混合坚果超过该限值的比例分别为14.78％(322/2 178)和32.56％(239/734),差异有统计学意义(P＜0.05).单一坚果中核桃超过该限值的比例最高,为 24.10％(47/195),杏仁、巴达木和花生分别为 17.44％(15/86)、16.81％(20/119)和 16.22％(73/450),其余种类均在15％以下.对26份霉菌计数＞25 CFU/g的样品进行真菌毒素检测,1份采自云南的花生检出白僵菌素污染量为16.37 μg/kg.ITS扩增子测序发现熟制坚果与籽类食品中主要污染曲霉属、交链孢霉属、念珠菌属等,和真菌毒素检出有相关性.结论 熟制坚果与籽类食品中霉菌污染较高,检出的霉菌属有产真菌毒素的风险,提示应加强该类食品中污染霉菌的监测、种属鉴定及产毒情况研究,掌握其污染途径和产毒规律,为开展风险评估,采取有效防控措施提供科学依据.

目的 建立大米粉和小麦粉中白僵菌素、恩镰孢菌素A、恩镰孢菌素A1、恩镰孢菌素B、恩镰孢菌素B1的超高效液相色谱-串联质谱分析方法.方法 样品用乙腈-水提取、Oasis Prime HLB固相萃取柱净化,Waters BEH C18色谱柱(2.1 mm× 100 mm,1.8 μm)分离,电喷雾电离正离子模式下多反应监测进行测定,同位素内标法和基质匹配标准曲线外标法定量.结果 白僵菌素和4种恩镰孢菌素在0.1～50.0ng/mL范围内具有良好的线性关系(r＞0.999).大米粉和小麦粉中白僵菌素和4种恩镰孢菌素的平均回收率分别是96.4％～105.4％和99.1％～109.2％,相对标准偏差分别为1.01％～7.42％和1.09％～9.69％(n=6),检出限为0.03 μg/kg,定量限为0.1 μg/kg,基质效应分别为72.7％～99.3％和60.8％～100.4％.面粉中白僵菌素和恩镰孢菌素污染水平高于大米,恩镰孢菌素B在小麦粉和大米粉中的检出率最高,含量分别为0.03～9.57 μg/kg和0.03～0.56 μg/kg,检出率分别为98.5％和36.4％.结论 本方法简单快速、准确性好、灵敏度高,可用于小麦粉和大米粉中白僵菌素和恩镰孢菌素的测定.

[目的]筛选对暗黑鳃金龟Holotrichia parallela幼虫具高毒力的球孢白僵菌Beauveriabassiana菌株,并评价最高毒力菌株分别与印楝素和辛硫磷联合使用的模拟田间防效.[方法]采用浸虫法,通过试虫校正死亡率和致死中时(medium lethal time,LT50)值评价10株球孢白僵菌对暗黑鳃金龟3龄幼虫的毒力,并测定筛选出的Bb14菌株对暗黑鳃金龟1龄和3龄幼虫的致死中浓度(medium lethal concentration,LC50)值.将Bb14菌株孢子悬浮液(1 × 108孢子/mL)分别与印楝素(3 mg/L)和辛硫磷(200 mg/L)联用,通过温室盆栽实验评价其对烟草幼苗上暗黑鳃金龟3龄幼虫的防治效果.[结果]在1×108孢子/mL处理下,供试10株球孢白僵菌以Bb14菌株对暗黑鳃金龟3龄幼虫毒力最高,其导致的17 d累计校正死亡率为76.67％,LT50值为11.14 d.该菌株对暗黑鳃金龟1龄和3龄幼虫的LC50值分别为0.32 × 107和0.68 × 107孢子/mL.盆栽实验中药后25 d时,单独使用Bb14菌株、印楝素和辛硫磷对暗黑鳃金龟3龄幼虫的防效分别为42.86％,64.29％和82.14％,而当Bb14分别与印楝素和辛硫磷联用后,对暗黑鳃金龟3龄幼虫的防效分别达到78.57％和92.86％.[结论]供试10株球孢白僵菌中Bb14菌株对暗黑鳃金龟幼虫的毒力最高,该菌株与印楝素或辛硫磷联用能够提高对暗黑鳃金龟幼虫的防效.

采用常压室温等离子体技术(Atmospheric Room Temperature Plasma,ARTP)对雪白白僵菌FIM-1809 菌株进行诱变,得到一株遗传稳定性较高的突变高产菌FIM-1809-7,其产环孢菌素A能力较初始菌株提高约39%.通过单因素和正交设计试验优化,确定最佳发酵培养基组分及培养条件为:玉米浆粉6%、可溶性淀粉12%、葡萄糖1.2%、蛋白胨2%,pH 5.6,菌种菌龄为 72 h,接种量10%,装液量70 mL/500 mL,发酵时间8d,最终突变菌株产环孢菌素A效价较出发菌种增加了约53%.结果表明,采用ARTP技术结合发酵条件优化能够有效提高雪白白僵菌产环孢菌素A的能力,为该菌株的工业化应用奠定了良好的基础.

为了解目前僵蚕药材的质量现状和养殖情况,笔者于2016—2018年分别收集不同主产地及五大中药材市场共102批僵蚕药材,测定断面丝腺环性状和质量,以明确不同产地与市场僵蚕药材的质量现状,另以2019—2022年的35批僵蚕药材验证修订后的断面丝腺环情况;同时于家蚕4～5龄不同龄期分别接种白僵菌,规范化养殖至僵死,测定其僵死率和质量,明确不同龄期僵蚕药材的差异,探讨2020年版《中国药典》僵蚕感染龄期制定的合理性.结果发现102批僵蚕药材断面丝腺环合格率低,总灰分超标严重,白僵菌素含量差异较大;35批僵蚕断面性状合格率仅为47.49％,若将丝腺环规定为2～4个,合格率提升至73.00％;不同感染龄期的僵蚕僵死率差异较大,质量参差不齐,总体以5龄第1天接种药材得率较高,质量较好.因此结合僵蚕质量及实际生产,对2025年版《中国药典》僵蚕项下提出修订建议,断面性状修订为"有2～4个亮棕色或亮黑色的丝腺环",修订后既能保障药材质量,也体现"辨状论质"的科学性;增订含量测定指标"白僵菌素含量不得少于0.017％",增强僵蚕药材质量可控性;同时将感染龄期修订为"5龄第1天",缩小龄期跨度,更能结合实际生产,保证药材质量.

目的 建立了玉米及其制品和小麦及其制品中白僵菌素(beauvericin,BEA)、恩镰孢菌素A(enniatin A,ENA)、恩镶孢菌素A1(enniatin A1,ENA1)、恩镰孢菌素B(enniatin B,ENB)和恩镰孢菌素B1(enniatin B1,ENB1)的高效液相色谱-串联质谱检测方法.方法 样品经乙腈-水(85∶15,V/V)提取、室温静置、固相萃取柱净化后,以2 mmol/L乙酸铵水-乙腈作为流动相,采用电喷雾电离正离子多反应监测模式进行检测.结果 该方法对玉米及其制品和小麦及其制品中BEA和4种恩镰孢菌素(ENNs)的检出限范围分别为0.01～0.12和0.02 ～0.21 μg/kg,定量限范围分别为0.02～0.44和0.05 ～0.68μg/kg,平均加标回收率范围分别为91.6％ ～149.7％和100.5％～128.2％,基质抑制或增强效应分别为88.0％～101.5％和55.8％～106.5％,且BEA和4种ENNs在所测基质中线性关系和精密度良好,相关系数均＞0.99,相对标准偏差均＜15％.结论 所建立的方法操作简便、灵敏度高、准确性好,可用于玉米及其制品和小麦及其制品中BEA和4种ENNs的测定.

目的 考察3种表面活性剂对僵蛹制备工艺的影响.方法 以活蚕蛹和死蚕蛹为发酵基质,通过接种四川攀枝花当地僵蚕分离的白僵菌孢子,制成僵蛹.研究不同表面活性剂对制备工艺的影响,以草酸铵和白僵菌素含有量为药效指标,按照《中国药典》(2015)第一部僵蚕项下检验项目检验僵蛹,并与市售僵蚕的质量进行比较.结果 与浸泡生理盐水的对照蚕蛹比较,使用20％聚乙二醇400浸泡可以促进白僵菌孢子在蚕蛹表面萌发生长,僵蛹草酸铵含有量提高11％,白僵菌素含有量提高583％.僵蛹中总灰分和酸不溶性灰分高于市售僵蚕,浸出物和黄曲霉毒素总量低于市售僵蚕.结论 该工艺可以有效分离当地白僵菌,使用聚乙二醇400能缩短制备僵蛹时间,减低杂菌污染,显著提高白僵菌素含有量,同时提高草酸铵含有量,使用麸皮作为载体,为僵蛹炮制工艺提供基础.

目的 研究球孢白僵菌CF08株对丽蝇蛹集金小蜂的安全性.方法 采用浸虫法和饲喂法研究球孢白僵菌CF08株对丽蝇蛹集金小蜂成虫的安全性;采用浸渍法研究球孢白僵菌CF08株对丽蝇蛹集金小蜂幼期的安全性.利用SPSS 20.0软件进行统计学分析,组间比较采用单因素方差分析,多重比较采用Duncan法.结果 浸虫法和饲喂法处理后丽蝇蛹集金小蜂雌蜂寿命分别为(11.09±0.15)和(10.92±0.15)d,对照组雌蜂寿命为(10.99±0.19)d,三者间差异无统计学意义(F=0.893,P=0.446);浸虫法和饲喂法雄蜂寿命分别为(5.83±0.09)和(5.88±0.03)d,对照组雄蜂寿命为(5.75±0.09)d,三者间差异亦无统计学意义(F=2.614,P=0.152).被寄生不同时间的棕尾别麻蝇蛹浸渍球孢白僵菌孢子液后,蝇蛹中丽蝇蛹集金小蜂的出蜂率>80％,平均出蜂数为43只/蛹,雌蜂比>90％,羽化出的丽蝇蛹集金小蜂雌雄蜂体长平均为2.0和1.4 mm,与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).羽化出的雌蜂对棕尾别麻蝇蛹的寄生率均>90％,出蜂率>80％,平均出蜂数约为43只/蛹,后代的雌蜂比>90％,与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05).结论 幼期暴露球孢白僵菌CF08株对丽蝇蛹集金小蜂的生长、发育、繁殖和后代品质均无显著影响,两者可联合应用于蝇类的生物防治.