目的:探讨甲状腺乳头状癌组织真核细胞起始因子4B（eIF4B）和真核细胞起始因子5A（eIF5A）的表达及二者体外对细胞增殖的调控作用。方法:回顾性分析2020年1月至2021年10月在运城市中心医院行手术根治的61例甲状腺乳头状癌患者的临床资料。均取术后留存的肿瘤组织和距肿瘤边缘>1 cm的癌旁正常甲状腺组织，应用免疫组织化学法检测各组织eIF4B、eIF5A及增殖细胞核抗原（PCNA）的表达，分析eIF4B、eIF5A表达与患者临床病理特征的关系及eIF4B、eIF5A、PCNA三者间关系。选择甲状腺癌细胞株SW1736、正常甲状腺细胞株HT-ori3，应用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测eIF4B、eIF5A mRNA的表达。分别合成eIF4B、eIF5A的小干扰RNA（siRNA），构建干扰质粒，并转染SW1736细胞，分别为siRNA-eIF4B组、siRNA-eIF5A组，另建立空载质粒转染组和未经转染干预的空白对照组；应用CCK-8法检测细胞增殖活性，应用qRT-PCR法检测PCNA mRNA的表达。结果:甲状腺乳头状癌组织中eIF4B、eIF5A阳性率均高于癌旁正常甲状腺组织[65.57%（40/61）比29.51%（18/61），57.38%（35/61）比9.84%（6/61），均 P<0.001]；不同肿瘤长径[>3 cm比≤3 cm：88.89%（16/18）比55.81%（24/43），77.78%（14/18）比48.84%（21/43），均 P<0.05]、有无淋巴结转移[有比无：85.00%（17/20）比56.10%（23/41），80.00%（16/20）比46.34%（19/41），均 P<0.05]和不同结节数[多个比单个：86.67%（13/15）比58.70%（27/46），86.67%（13/15）比47.83%（22/46），均 P<0.05]患者eIF4B和eIF5A阳性率差异均有统计学意义，不同年龄、性别患者间eIF4B和eIF5A阳性率差异均无统计学意义（均 P>0.05）。甲状腺乳头状癌中eIF4B评分和PCNA阳性细胞比例（ r=0.66， P=0.032）、eIF5A评分和PCNA阳性细胞比例（ r=0.62， P=0.024）、eIF4B评分和eIF5A评分（ r=0.63， P=0.021）均具有正相关性。甲状腺癌SW1736细胞中eIF4B mRNA、eIF5A mRNA的表达量均高于正常甲状腺HT-ori3细胞（均 P<0.05）。siRNA-eIF4B组、siRNA-eIF5A组SW1736细胞增殖活性、PCNA mRNA的表达量均低于空载体转染组和空白对照组（均 P<0.05）。 结论:eIF4B和eIF5A在甲状腺乳头状癌中表达升高，可能参与肿瘤的发生与发展。eIF4B和eIF5A的作用可能与促进肿瘤细胞的增殖有关。

目的:探究真核翻译起始因子2α(eIF2α)在结直肠腺癌中的表达及对细胞增殖的作用。方法:收集2016年1月至2017年12月在华北理工大学附属医院行结直肠腺癌手术治疗的患者64例，留取肿瘤及癌旁正常黏膜组织，免疫组织化学法检测eIF2α和增殖细胞核抗原(PCNA)。选择结肠癌SW480、HCT15、SW620和正常结肠NCM460细胞株，转染siRNA-eIF2α建立SW480细胞株的si-eIF2α组，建立空载体转染组和空白对照组，Western blot法检测eIF2α和PCNA，CCK-8法检测细胞增殖活性。符合正态分布的计量资料比较行 t检验、方差分析，率的比较行 χ2检验，并应用相关回归分析。 结果:结直肠腺癌组织中eIF2α阳性率高于正常黏膜组织[56.3%(36/64)比21.9%(14/64)， χ2＝15.885， P<0.05]。浸润浆膜及以外组eIF2α阳性率高于浸润未及浆膜组[33.3%(5/15)比63.3%(31/49)， χ2＝4.181， P<0.05]。eIF2α在不同TNM分期[16.7%(2/12)比64.0%(16/25)比64.0%(16/25)比100.0%(2/2)， χ2＝10.416， P<0.05]中阳性率差异有统计学意义。eIF2α与PCNA正相关( r＝0.698， P<0.05)。结肠癌细胞株SW480、HCT15和SW620中eIF2α均高于NCM460(1.30±0.13比1.13±0.16比1.18±0.21比0.88±0.19， F＝5.802， P<0.05)。si-eIF2α组中PCNA表达低于空载体转染组和空白对照组(0.88±0.16比1.32±0.18比1.34±0.14， F＝5.221， P<0.05)。si-eIF2α组细胞增殖活性低于空白对照组和空载体转染组( P<0.05)。 结论:eIF2α在结直肠腺癌组织中高表达，能促进肿瘤细胞增殖。

目的:从在体和细胞水平评价蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)途径内质网应激与右美托咪定减轻小鼠脑缺血再灌注损伤的关系。方法:在体实验　健康清洁级雄性小鼠20只，体重20～30 g，6～8周龄，采用随机数字表法将小鼠分为4组( n＝5)：假手术组(S组)、假手术+右美托咪定组(SD组)、脑缺血再灌注组(IR组)和脑缺血再灌注+右美托咪定组(IRD组)。采用改良二血管阻断联合低血压法制备脑缺血再灌注损伤模型。IRD组于缺血10 min时、SD组于相应时点腹腔注射右美托咪定25 μg/kg。再灌注1 h时采用改良神经系统损伤程度法进行行为学评分，随后处死大鼠，取脑组织，采用Western blot法测定内质网应激蛋白：免疫球蛋白重链结合蛋白(BIP)、真核起始因子2α(EIF-2α)、p-EIF-2α、PERK、p-PERK的表达。细胞实验　选取标准小鼠海马神经元细胞系，采用随机数字表法分为4组( n＝12)：对照组(C组)、糖氧剥夺/复氧复糖组(OGD/R组)、糖氧剥夺/复氧复糖+右美托咪定组(OGD/R+D组)、糖氧剥夺/复氧复糖+PERK途径抑制剂ISRIB组(OGD/R+ISRIB组)。糖氧剥夺/复氧复糖模型的制备：使用低糖培养基在94%N 2-5%CO 2-1%O 2混合气体孵育6 h，然后复氧复糖。于糖氧剥夺前30 min，OGD/R+D组加入终浓度5 mmol/L的右美托咪定，OGD/R+ISRIB组中加入终浓度10 mmol/L的ISRIB。复氧复糖12 h时，采用CCK-8法检测细胞存活率，复氧复糖24 h时，采用Western blot法测定内质网应激蛋白的表达。 结果:在体实验　与S组比较，IR组行为学评分升高，脑组织BIP、p-EIF-2α、p-PERK表达上调( P<0.05)。与IR组比较，IRD组行为学评分降低，脑组织BIP、p-EIF-2α、p-PERK表达下调( P<0.05)。细胞实验　与C组比较，OGD/R组BIP、p-EIF-2α、PERK与p-PERK表达上调，细胞存活率下降( P<0.05)；与OGD/R组比较，OGD/R+D组、OGD/R+ISRIB组BIP、p-EIF-2α与p-PERK表达下调，细胞存活率升高( P<0.05)；与OGD/R+ISRIB组比较，OGD/R+D组PERK表达下调( P<0.05)，其余指标差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:右美托咪定减轻小鼠脑缺血再灌注损伤的机制可能与抑制PERK途径内质网应激有关。

目的:探讨真核翻译起始因子5A2(EIF5A2)和蛋白质精氨酸甲基转移酶5(PRMT5)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织的表达水平，以及两者与NSCLC临床病理特征之间的关系。方法:收集诸城市人民医院2015年1月至2020年7月病理检查确诊的106例NSCLC患者癌组织以及癌旁组织标本，采用免疫组织化学法检测EIF5A2和PRMT5水平，结合临床资料行 χ2检验统计学分析。 结果:NSCLC癌组织中EIF5A2阳性表达率76.42%(81/106)，明显高于癌旁组织EIF5A2阳性表达率16.98%(18/106)，差异有统计学意义( χ2＝75.215， P<0.01)。NSCLC癌组织中PRMT5阳性表达率84.91%(90/106)，明显高于癌旁组织PRMT5阳性表达率20.75%(22/106)，两者差异有统计学意义( χ2＝87.526， P<0.01)。EIF5A2表达水平与NSCLC淋巴结转移、TNM分期(TNM stage)明显相关( χ2＝4.825、7.620， P<0.05)，PRMT5表达水平与NSCLC淋巴结转移、组织学分化程度、TNM分期明显相关( χ2＝6.845、6.108、6.508， P<0.05)。 结论:EIF5A2和PRMT5在NSCLC癌组织中呈高表达，EIF5A2和PRMT5有助于评估NSCLC生物学行为和预后。

目的:探讨内质网应激蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/真核翻译起始因子2α(eIF2α)通路在草酸钙诱导的肾小管上皮细胞损伤中的作用机制。方法:将人肾小管上皮细胞(HK-2)分为对照组、草酸钙组和草酸钙+4-苯基丁酸组。草酸钙组和草酸钙+4-苯基丁酸组在培养基中加入终浓度为5 mmol/L的草酸钙诱导细胞损伤模型，草酸钙+4-苯基丁酸组在培养基中另加入终浓度为2 mmol/L的4-苯基丁酸。通过CCK-8法、流式细胞术和DCFH-DA荧光探针检测细胞活力、凋亡和细胞内活性氧(ROS)水平，并分析细胞内PERK/eIF2α通路中蛋白以及Caspase12和Caspase3表达水平。结果:草酸钙组的OD值(0.42±0.05)低于对照组(0.71±0.08)，草酸钙+4-苯基丁酸组的OD值(0.65±0.07)高于草酸钙组(均 P<0.05)。草酸钙组的细胞凋亡率、ROS水平、PERK和eIF2α蛋白水平、Caspase12、Caspase3 mRNA和蛋白水平高于对照组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。草酸钙+4-苯基丁酸组的细胞凋亡率、ROS水平、PERK和eIF2α蛋白水平、Caspase12、Caspase3的mRNA和蛋白水平低于草酸钙组，差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:在草酸钙诱导的肾小管上皮细胞损伤中使用4-苯基丁酸抑制内质网应激可抑制PERK/eIF2α通路并缓解细胞凋亡。

目的 研究泽泻汤对高脂血症急性胰腺炎(hyperlipidemia acute pancreatitis,HLAP)的防治作用及机制.方法 雄性C57BL/6J小鼠以高脂饮食喂养,ig泽泻汤干预8周后,ip雨蛙素(50μg/kg)制备HLAP模型.采用试剂盒检测小鼠血清中三酰甘油(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)水平及淀粉酶(amylase,AMY)、脂肪酶(lipase,LPS)、总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)活性;采用油红O染色观察肝脏组织脂质蓄积情况,苏木素-伊红(HE)染色观察肝脏、胰腺组织病理学变化;采用Western blotting检测胰腺组织中血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、核因子 E2 相关基因(nuclear factor erythroid-2-related factor2,Nrf2)、免疫球蛋白重链结合蛋白(binding immunoglobulin protein,BIP)、真核翻译起始因子 2α(eukaryotic translation initiation factor 2α,eIF2α)、p-eIF2α、Bcl-2 相互作用蛋白(Bcl-2 interacting coiled-coil protein-1,Beclin-1)、自噬蛋白 5(autophagy-related protein 5,ATG5)、自噬蛋白 12(autophagy-related protein 12,ATG12)、微管相关蛋白 1 轻链 3-Ⅱ/Ⅰ(microtubule-associated protein light chain 3-Ⅱ/Ⅰ,LC3-Ⅱ/Ⅰ)及溶酶体相关膜蛋白 1(lysosomal associated membrane protein 1,LAMP-1)表达.采用棕榈酸(200mmol/L)和雨蛙素(10nmol/L)处理胰腺腺泡AR42J细胞构建HLAP细胞模型,给予泽泻汤干预后,采用试剂盒检测细胞培养上清液中LPS、T-SOD活性;采用DCFH-DA荧光探针、线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)荧光探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)及MMP水平;采用透射电镜观察细胞超微结构及自噬变化;采用Western blotting 检测细胞中 HO-1、Nrf2、Kelch 样环氧氯丙烷相关蛋白 1(kelch-like ECH-associatedprotein 1,Keap1)、BIP、eIF2α、p-eIF2α、Beclin-1、ATG5、LC3-Ⅱ/Ⅰ和LAMP-1表达.结果 与模型组比较,泽泻汤能够降低小鼠血清中TC、TG水平及AMY、LPS活性(P＜0.05、0.01、0.001),抑制肝脏组织中的脂滴蓄积,减轻肝脏及胰腺组织病理损伤,同时上调血清及胰腺腺泡细胞中SOD、CAT活性(P＜0.05、0.01),下调ROS水平(P＜0.001),上调胰腺组织及细胞中HO-1、Nrf2、LAMP1表达(P＜0.05、0.01、0.001),下调 Keap1、BIP、eIF2α、p-eIF2α、Beclin-1、ATG5、ATG12 及 LC3-Ⅱ/Ⅰ 表达(P＜0.05、0.01、0.001).结论 泽泻汤可以防治HLAP,其作用机制可能与抑制内质网应激诱导的过度自噬、恢复自噬通量有关.

基于内质网应激(ERS)诱导的细胞凋亡探究骨松强骨方(GSQG)减轻去卵巢小鼠骨丢失的作用与机制.小鼠卵巢摘除(OVX)骨质疏松造模完成后,根据随机数字法,将 60 只小鼠随机分为 6 组:假手术组,模型组,骨松强骨方低(GSQG-L)、中(GSQG-M)、高剂量(GSQG-H)组,雌二醇(E2)组,每组10 只;切除双侧卵巢构建模型.术后1 个月开始灌胃给药,连续给药3 个月.酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定血清中骨形成指标骨钙素(OCN)、Ⅰ型胶原氨基端前肽(PINP)和骨吸收指标Ⅰ型胶原交联羧基端肽(CTX)、抗酒石酸酸性磷酸酶 5b(TRAcP-5b)的水平,使用Micro-CT观察股骨远端骨微结构的改变,HE染色观察骨组织形态,RT-qPCR检测胫骨干成骨相关基因Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、碱性磷酸酶(ALP)、Runt相关转录因子 2(Runx2)、骨唾液酸糖蛋白(BSP)、OCN以及破骨相关基因抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、活化T细胞核因子(NFATc1)和组织蛋白酶K(CATK)mRNA的表达,TUNEL染色、免疫组化检测骨细胞凋亡情况,蛋白免疫印迹法检测胫骨近端骨组织ERS相关蛋白葡萄糖调节蛋白 78(Grp78)、蛋白激酶RNA样内质网激酶(PERK)、磷酸化PERK(p-PERK)、真核翻译起始因子 2α(eIF2α)、磷酸化eIF2α(p-eIF2α)、肌醇需求酶1α(IRE1α)、磷酸化IRE1α(p-IRE1α)、激活转录因子6(ATF6)的表达.结果显示,GSQG对去卵巢小鼠血清中OCN、PINP、TRAcP-5b、CTX骨代谢生化指标有明显改善,Micro-CT显示GSQG-H组股骨远端骨微结构明显优于其他组.与模型组比较,HE染色结果显示,GSQG-L组、GSQG-M组、GSQG-H组骨小梁明显变宽,数目增多,网状结构得到了一定程度的恢复,排列仍然整齐,部分间隙轻微增大;TUNEL阳性细胞显著减少(P<0.05,P<0.01);凋亡细胞相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、凋亡因子Bcl-2关联X蛋白(Bax)蛋白表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01),Bcl-2 蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01);成骨相关基因Col-Ⅰ、ALP、Runx2、BSP和OCN mRNA表达显著升高(P<0.01),破骨相关基因TRAP、NFATc1 和CATK mRNA表达显著减少(P<0.05,P<0.01);ERS相关蛋白Grp78、p-PERK、p-eIF2、p-IRE1α、ATF6 表达显著降低(P<0.05,P<0.01),各给药组中以GSQG-H组最为显著.综上研究表明,GSQG能够通过抑制去卵巢小鼠胫骨近端骨组织Grp78/PERK/eIF2α/IRE1α/ATF6 信号通路,抑制骨细胞凋亡,从而有效减少去卵巢小鼠骨丢失.

目的:筛选泛素结合酶E2S(UBE2S)互作蛋白并构建肝细胞癌(HCC)基于UBE2S互作蛋白的预后模型(UIPM),分析 UIPM 评估 HCC患者预后的价值.方法:采用免疫共沉淀(Co-IP)技术筛选与Flag-UBE2S结合的蛋白复合体,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blotting法验证后,采用液相色谱-质谱联用仪(LC-MS)分析鉴定UBE2S互作蛋白,并对互作蛋白进行基因本体论(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析.采用R软件survival包筛选癌症基因组图谱(TGGA)中HCC预后相关蛋白与UBE2S互作蛋白取交集,通过LASSO回归分析从交集蛋白中获取关键蛋白构建UIPM,并建立预后模型风险评分公式,按照风险评分的中位值将TGGA中HCC患者分为高风险组和低风险组,通过受试者工作特征曲线(ROC)评估UIPM的预测准确性,并采用国际癌症基因组联盟(ICGC)数据库对UIPM预测准确性进行再次验证.采用单因素和多因素Cox回归分析评估UIPM风险评分是否为HCC的预后独立危险因素,并进一步构建列线图模型.结果:Co-IP联合LC-MS分析得到 97个UBE2S互作蛋白.GO功能和KEGG信号通路富集分析,互作蛋白主要与半胱氨酸型内肽酶活性、氧化应激和细胞死亡有密切关联.TCGA筛选出5 163个HCC预后相关蛋白,与UBE2S互作蛋白取交集,获得40个预后相关互作蛋白,LASSO回归分析得到 7个关键蛋白,包括UBE2S、热休克蛋白家族A成员 8(HSPA8)、异质性胞核核糖核蛋白H1(HNRNPH1)、含TCP1伴侣蛋白亚基3(CCT3)、真核翻译起始因子 2亚基 1(EIF2S1)、活化蛋白C激酶 1受体(RACK1)和肌动蛋白相关蛋白2/3复合体亚基 4(ARPC4),并构建了UIPM,高和低风险组HCC患者生存率存比较差异有统计学意义(P<0.05).ROC曲线,UIPM预测HCC患者 1、2和 3年UIPM风险评分的ROC曲线下面积(AUC)值均大于0.7,表明预测模型准确度较高.ICGC数据库数据也证实UIPM预测准确度较高.单因素和多因素Cox回归分析,UIPM风险评分是HCC患者的独立预后危险因素(P<0.05).列线图预测HCC患者生存率与实际生存率之间有较好的一致性.结论:97个互作蛋白与UBE2S相互作用,可能通过氧化应激和铁死亡相关通路的失调促进HCC发生发展.UIPM风险评分是HCC预后的独立危险因素,可以用于预测HCC患者预后.而UBE2S、HSPA8、HNRNPH1、CCT3、EIF2S1、RACK1和ARPC4有望成为HCC新的生物标志物和治疗靶点.

目的 探讨低浓度氟化钠对人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)成骨/成牙本质分化的影响.方法 本研究已通过单位伦理委员会审查批准.原代培养hDPCs,采用MTT法检测不同浓度氟化钠对hDPCs增殖的影响;选取合适浓度的氟化钠加入成骨/成牙本质分化诱导培养液中,对hDPCs进行体外诱导,通过茜素红染色检测hDPCs成骨/成牙本质分化能力的变化,RT-qPCR检测分化相关基因的mRNA表达;同时通过RT-qPCR和Western blot检测hDPCs成骨/成牙本质分化过程中内质网应激相关基因的表达.结果 低浓度氟化钠(0.1 mmol/L)在体外可刺激hDPCs增殖,高浓度氟化钠(5～10 mmol/L)可抑制hDPCs增殖(P＜0.05).选取0.1 mmol/L氟化钠体外混合成骨/成牙本质分化诱导培养后hDPCs的茜素红染色增加,成骨/成牙本质分化相关基因牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)和骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)mRNA表达水平升高(P＜0.05).同时在此过程中RT-qPCR检测出mRNA水平hDPCs内质网应激相关基因:剪切x盒结合蛋白1(splicing x-box binding protein-1,sXBP1)、葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)以及活化转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)表达升高(P＜0.05);Western blot检测出氟化钠混合成骨/成牙本质分化培养后细胞磷酸化真核起始因子-2α(phosphorylated eukary-otic initiation factor-2α,p-eIF2α)、磷酸化蛋白激酶样内质网激酶(phosphorylated the RNA-activated protein kinase-like ER-resident kinase,p-PERK)和ATF4蛋白表达增加(P＜0.05).结论 低剂量氟化钠促进人牙髓细胞的成骨/成牙本质分化并伴有内质网应激水平的升高.

目的 探讨真核翻译起始因子4G1(EIF4G1)在子宫内膜癌(EC)组织中的表达,以及对EC细胞増殖、侵袭、迁移和凋亡的影响.方法 首先采用实时定量PCR和免疫组化检测20例EC患者中肿瘤组织以及对应癌旁正常组织中EIF4G1 mRNA相对表达量和EIF4G1蛋白的阳性表达率.然后体外构建人EC细胞系Ishikawa中EIF4G1过表达质粒和对照质粒(pCMV6)、低表达质粒和对照质粒(PLKO.1),Lipofectamine?2000转染试剂转染,Western blot法筛选EIF4G1蛋白稳定表达的细胞系,实验分为5组:空白对照组、过表达组、过表达对照组、低表达组和低表达对照组.MTT法检测细胞增殖率,Tran-swell 法检测细胞侵袭数目,划痕实验检测细胞迁移距离,TUNEL 法检测细胞凋亡率.结果 与癌旁正常组织相比,肿瘤组织中EIF4G1 mRNA相对表达量及其蛋白的阳性表达率均增加(P＜0.05).与空白对照组相比,过表达组EIF4G1蛋白表达增加,而低表达组EIF4G1蛋白表达降低(均P＜0.05).与空白对照组和过表达对照组相比,过表达组细胞增殖率明显升高,细胞侵袭数目和迁移距离增加,凋亡率下降(均P＜0.05);与空白对照组和低表达对照组相比,低表达组增殖率明显降低,细胞侵袭数目和迁移距离下降,凋亡率升高(均P＜0.05).结论 EIF4G1可能作为促癌基因参与EC的发生,并调控细胞的恶性生物学行为,EIF4G1有望成为EC的靶向干预位点.