目的:探究异氟醚通过激活蛋白激酶样内质网激酶（protein kinase-like endoplasmic reticulum kinase, PERK）/真核翻译起始因子2α（eukaryotic translation initiation factor 2α, eIF2α）通路诱导神经元凋亡和内质网应激（endoplasmic reticulum stress, ERS）在围手术期神经认知障碍（perioperative neurocognitive disorders, PND）中的作用机制。方法:30只雄性SD大鼠按随机数字表法分为3组（每组10只）：对照组、异氟醚组和PERK抑制剂组（GSK组）。异氟醚组和GSK组大鼠放置于麻醉箱，通过吸入2%异氟醚4 h建立PND模型，GSK组大鼠在吸入异氟醚6 h前使用PERK抑制剂GSK2606414（150 mg/kg）灌胃；对照组大鼠进行同样处理，但不吸入异氟醚，给予等量生理盐水灌胃。吸入异氟醚4 h后进行水迷宫试验，记录逃避潜伏期、穿越平台次数和目标象限停留时间，分析大鼠神经功能。水迷宫实验结束后处死大鼠取海马组织，TUNEL染色检测海马组织神经元细胞凋亡率，Western blot法检测海马组织PERK、eIF2α磷酸化水平及78 kDa葡糖调节蛋白（78 kDa glucose-regulated protein, GRP78）、C/EBP同源蛋白（C/EBP homologous protein, CHOP）水平，免疫组化染色检测海马组织B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2, Bcl-2）、B淋巴细胞瘤-2-Associated X（B-cell lymphoma-2-Associated X, Bax）水平。结果:异氟醚组逃避潜伏期长于GSK组及对照组（ P<0.05），穿越平台次数和目标象限停留时间少于GSK组及对照组（ P<0.05）。异氟醚组海马组织神经元细胞凋亡率高于GSK组及对照组（ P<0.05），PERK、eIF2α磷酸化水平高于GSK组及对照组（ P<0.05），GRP78、CHOP水平高于GSK组及对照组（ P<0.05），Bax水平高于GSK组及对照组，Bcl-2水平低于GSK组及对照组（ P<0.05）。 结论:异氟醚可能通过激活PERK/eIF2α通路和ERS引起海马组织神经元细胞凋亡，抑制PERK/eIF2α通路的激活可通过抑制ERS缓解海马组织神经元细胞凋亡从而对PND模型大鼠的神经功能起到保护作用。

目的:探讨甲状腺乳头状癌组织真核细胞起始因子4B（eIF4B）和真核细胞起始因子5A（eIF5A）的表达及二者体外对细胞增殖的调控作用。方法:回顾性分析2020年1月至2021年10月在运城市中心医院行手术根治的61例甲状腺乳头状癌患者的临床资料。均取术后留存的肿瘤组织和距肿瘤边缘>1 cm的癌旁正常甲状腺组织，应用免疫组织化学法检测各组织eIF4B、eIF5A及增殖细胞核抗原（PCNA）的表达，分析eIF4B、eIF5A表达与患者临床病理特征的关系及eIF4B、eIF5A、PCNA三者间关系。选择甲状腺癌细胞株SW1736、正常甲状腺细胞株HT-ori3，应用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测eIF4B、eIF5A mRNA的表达。分别合成eIF4B、eIF5A的小干扰RNA（siRNA），构建干扰质粒，并转染SW1736细胞，分别为siRNA-eIF4B组、siRNA-eIF5A组，另建立空载质粒转染组和未经转染干预的空白对照组；应用CCK-8法检测细胞增殖活性，应用qRT-PCR法检测PCNA mRNA的表达。结果:甲状腺乳头状癌组织中eIF4B、eIF5A阳性率均高于癌旁正常甲状腺组织[65.57%（40/61）比29.51%（18/61），57.38%（35/61）比9.84%（6/61），均 P<0.001]；不同肿瘤长径[>3 cm比≤3 cm：88.89%（16/18）比55.81%（24/43），77.78%（14/18）比48.84%（21/43），均 P<0.05]、有无淋巴结转移[有比无：85.00%（17/20）比56.10%（23/41），80.00%（16/20）比46.34%（19/41），均 P<0.05]和不同结节数[多个比单个：86.67%（13/15）比58.70%（27/46），86.67%（13/15）比47.83%（22/46），均 P<0.05]患者eIF4B和eIF5A阳性率差异均有统计学意义，不同年龄、性别患者间eIF4B和eIF5A阳性率差异均无统计学意义（均 P>0.05）。甲状腺乳头状癌中eIF4B评分和PCNA阳性细胞比例（ r=0.66， P=0.032）、eIF5A评分和PCNA阳性细胞比例（ r=0.62， P=0.024）、eIF4B评分和eIF5A评分（ r=0.63， P=0.021）均具有正相关性。甲状腺癌SW1736细胞中eIF4B mRNA、eIF5A mRNA的表达量均高于正常甲状腺HT-ori3细胞（均 P<0.05）。siRNA-eIF4B组、siRNA-eIF5A组SW1736细胞增殖活性、PCNA mRNA的表达量均低于空载体转染组和空白对照组（均 P<0.05）。 结论:eIF4B和eIF5A在甲状腺乳头状癌中表达升高，可能参与肿瘤的发生与发展。eIF4B和eIF5A的作用可能与促进肿瘤细胞的增殖有关。

目的:探讨7-酮基胆固醇（7-KC）对胰岛β细胞凋亡的影响及其可能分子机制。方法:用0、0.25、2.5和25 μmol/L浓度的7-KC孵育INS-1细胞24 h，应用Western blotting法筛选出引起INS-1细胞凋亡的浓度。再将INS-1细胞分为对照组、25 μmol/L 7-KC组、25 μmol/L 7-KC+1 mmol/L 4-苯基丁酸（4-PBA）组以及1 mmol/L 4-PBA组。应用Western blotting、流式细胞仪、免疫荧光、电镜和免疫共沉淀技术，检测细胞内质网应激标志蛋白［肌醇需求酶1α（IRE-1α）、蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）、转录激活因子4（ATF4）、磷酸化α亚基的真核起始因子2（p-eIF-2α）、α亚基的真核起始因子2（eIF-2α）、转录因子C/EBP同源蛋白（CHOP）、磷酸化IRE-1α（p-IRE-1α）、磷酸化PERK（p-PERK）和转录激活因子6（ATF6）］、凋亡蛋白［B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）和切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（cleaved-Caspase 3）］、内质网形态和内质网应激相互作用蛋白［葡萄糖调节蛋白78（GRP78）］表达水平，验证内质网应激在7-KC损害β细胞功能中的作用。两组间比较采用 t检验，多组间比较采用方差分析，组内两两比较采用Bonferroni多重比较法。 结果:随着7-KC浓度的增加，cleaved-Caspase 3相对表达量呈剂量依赖性增加，并且在25 μmol/L 7-KC时能显著增加cleaved-Caspase 3的水平（ P<0.01）。与对照组相比，25 μmol/L 7-KC组可引起内质网扩张和囊泡化，诱导内质网应激感受蛋白p-PERK、p-IRE-1α、ATF6及下游效应蛋白p-eIF-1α、ATF4、CHOP的表达。与25 μmol/L 7-KC组比较，25 μmol/L 7-KC+1 mmol/L 4-PBA组的内质网应激标志蛋白表达下降，同时凋亡蛋白表达减少（ P<0.05）。免疫共沉淀结果显示，25 μmol/L 7-KC组可抑制分子伴侣GRP78和PERK的结合，促进PERK自体磷酸化激活内质网应激。 结论:7-KC通过抑制细胞中GRP78与PERK结合来激活内质网应激，促进胰岛β细胞凋亡的发生。

目的:探讨慢性乙型肝炎(慢性乙肝)患者肝组织中真核细胞翻译启始因子2α(p-elF2α)及活化转录因子4(ATF4)的表达水平及其与肝纤维化间的关系。方法:纳入2016年1月至2019年1月淮安市第四人民医院共158例慢性乙肝患者穿刺活检肝组织标本。免疫组织化学染色分别评估不同肝纤维化分期间p-elF2α、ATF4的表达水平差异，并用Spearman秩相关分析其相关性。结果:肝脏标本病理结果提示纤维化各分期分别为S0期19例，S1期29例，S2期42例，S3期35例，S4期33例。免疫组化结果显示纤维化组的p-eIF2α及ATF4水平显著高于正常对照组( P<0.001)，不同纤维化程度分期之间的p-eIF2α及ATF4水平差异有统计学意义( P<0.01)。慢性乙肝患者肝纤维化等级与肝组织中p-eIF2α及ATF4染色得分间呈正相关( r＝0.473，0.422， P<0.05)。 结论:慢性乙肝患者肝组织的纤维化程度与p-eIF2α及ATF4表达呈正相关，p-eIF2α-ATF4通路激活可能参与慢性乙肝纤维化过程。

目的:研究二甲双胍干预对噪声性听力损失（NIHL）的保护作用及其差异蛋白质组学表达谱。方法:于2021年1月，将39只Wistar雄性大鼠随机分为对照组、噪声暴露组、二甲双胍+噪声暴露组，每组13只。噪声暴露组和二甲双胍+噪声暴露组大鼠连续暴露在声压级120 dB（A）、中心频率8 kHz的倍频程噪声下4 h；二甲双胍+噪声暴露组大鼠从噪声暴露前3 d开始给予200 mg/kg/d二甲双胍干预，共7 d。采用听性脑干反应（ABR）测试各组大鼠右耳噪声暴露前、噪声暴露后1、4、7 d的听力阈值变化情况，采用串联质谱标签（TMT）定量蛋白组学鉴定并分析各组大鼠内耳差异表达蛋白质，并用冰冻切片进行免疫荧光染色验证。结果:在噪声暴露后1、4、7 d，噪声暴露组和二甲双胍+噪声暴露组大鼠右耳短声ABR阈值明显高于对照组，二甲双胍+噪声暴露组大鼠右耳短声ABR阈值明显低于噪声暴露组（ P<0.05）。与噪声暴露组比较，二甲双胍+噪声暴露组大鼠差异表达上调蛋白1 035个，差异表达下调蛋白1 145个；GO富集分析显示，显著差异表达蛋白主要涉及结合、分子功能调节、信号转导等功能；KEGG通路富集分析发现，差异表达蛋白显著富集的通路包括磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B（PI3K-Akt）信号通路、焦点黏附、糖尿病性心肌病、分裂体、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路等。免疫荧光实验显示，与噪声暴露组比较，二甲双胍+噪声暴露组胰岛素样生长因子1受体（IGF1R）荧光强度增加，真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白1（eIF4EBP1）荧光强度减弱。 结论:噪声暴露可导致大鼠听力阈值升高，二甲双胍可通过多条通路和生物学过程改善噪声引起的听力阈值异常。

探讨人参皂苷Rg,(GRg1)对脓毒症急性肺损伤(SALI)的干预疗效与作用机制.采用盲肠结扎穿孔术(CLP)建立SALI小鼠模型,随机分组给予GRg1干预,记录存活与体质量变化情况,小鼠无创肺功能检测系统检测肺功能,苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织损伤情况,酶联免疫吸附实验(ELISA)、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测炎症因子含量与表达,流式细胞术、TUNEL染色等检测凋亡情况,蛋白质印迹(Western blot)、qRT-PCR检测凋亡相关分子胱天蛋白酶3(caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)与内质网应激相关分子蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、真核翻译起始因子2α激酶(eIF2α)、活化转录因子4(ATF4)、C/EBP同源蛋白(CHOP)的活化表达情况.此外,利用脂多糖(LPS)体外诱导小鼠肺泡上皮细胞损伤模型,给予内质网应激激动剂衣霉素(TUN)验证GRg1的作用机制.结果显示,与模型组相比,GRg1干预可提高CLP小鼠生存时间,减缓其体质量下降,改善其受损的肺功能指标.同时,与模型组相比,GRg1给药组小鼠肺组织病理损伤评分降低,肺组织湿干比和肺泡灌洗液蛋白含量降低,血清白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平及肺组织中上述细胞因子的mRNA表达下降,肺泡上皮细胞凋亡比例明显下降,caspase-3、Bax表达下调,Bcl-2表达上调,PERK、eIF2α、ATF4、CHOP活化及表达下调.体外结果显示联合TUN后,GRg1降低凋亡细胞比例、下调凋亡相关蛋白表达的作用被抑制.综上,GRg1可减少肺泡上皮细胞凋亡,抑制肺部炎症渗出,减轻肺损伤,改善肺功能,可能与PERK/eIF2α/ATF4/CHOP 通路相关.

目的 检测乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)对人血管生成因子bFGF基因转录的激活作用并确定其作用于bFGF基因启动子的区域,分析HBx激活bFGF基因转录可能的分子机制,为揭示HBx促进肝癌发生的分子机制及发现新的治疗靶点.方法 运用高保真DNA聚合酶从人肝癌HepG2 细胞cDNA文库中扩增出bFGF基因启动子DNA序列;从含完整HBV DNA序列的表达载体中扩增HBx编码序列并克隆入真核表达载体pCDNA3-FLAG中,将HBx表达载体转染人肝癌HepG2 细胞中,裂解细胞进行蛋白SDS-PAGE电泳,Western blot检测HBx蛋白的表达;将HBx表达载体和含bFGF基因启动子不同区段的荧光素酶报告载体共转染肝癌HepG2 和SMMC-7721 细胞,检测HBx对bFGF基因启动子转录活性的影响;运用Western blot检测在肝癌细胞中HBx过表达对ERK磷酸化的影响.结果 成功克隆了HBx并使其在肝癌细胞中得到表达;成功克隆了bFGF基因启动子 2.2 kb、1.4 kb、720 bp和 360 bp的区段;在肝癌细胞SMMC-7721 和HepG2 细胞中HBx的表达能升高bFGF基因启动子的活性,且对上述4 个区段的活性均增加约5 倍;HBx以剂量依赖的方式增强bFGF基因启动子的活性;HBx高表达在肝癌HepG2 细胞中不能升高ERK1/2 的磷酸化水平.结论 HBx能够激活bFGF基因启动子的活性,这种激活作用位于HBx启动子转录起始位点上游 360 bp片段内,HBx促进bFGF基因转录不依赖于ERK1/2的磷酸化作用,提示HBx可能通过其它信号通路作用于bFGF基因的转录过程.

目的 探讨转录激活因子Myb(C-myb)、真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白-1(4E-BP1)蛋白在NK/T细胞淋巴瘤中的表达及与预后的关系.方法 回顾性选取2017年12月至2019年12月在秦皇岛市第一医院治疗的NK/T细胞淋巴瘤患者34例作为观察组,同时选取腺样体肥大组织30例作为对照组.采用免疫组织化学法检测C-myb、4E-BP1表达,比较两组患者C-myb、4E-BP1表达情况,分析观察组C-myb、4E-BP1表达与临床病理关系.采用Spearman秩相关分析C-myb和4E-BP1表达相关性.随访患者总体生存时间,分析C-myb、4E-BP1表达与预后的关系.结果 观察组C-myb和4E-BP1阳性表达率分别为55.88％和61.76％,明显高于对照组(10.00％、6.67％),差异均有统计学意义(P＜0.05).临床分期Ⅲ～Ⅳ患者C-myb阳性表达率为91.67％,明显高于Ⅰ～Ⅱ患者(36.36％),差异有统计学意义(P＜0.05);不同性别、年龄、原发部位、B症状、国际预后指数(IPI)指数及淋巴结侵犯患者C-myb阳性表达率比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).IPI指数≤2分患者4E-BP1阳性表达率为76.00％,明显高于IPI指数＞2分患者(22.22％),差异有统计学意义(P＜0.05);不同性别、年龄、原发部位、B症状、临床分期及淋巴结侵犯患者4E-BP1阳性表达率比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);C-myb和4E-BP1表达呈正相关(rs=0.642,P＜0.05);C-myb阳性表达和阴性表达患者中位总生存时间比较,差异无统计学意义(P＞0.05);4E-BP1阳性表达患者中位总生存时间为24个月(95％CI:21.15～26.85),明显短于4E-BP1阴性表达患者的33个月(95％CI:32.20～33.80),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 NK/T细胞淋巴瘤中C-myb和4E-BP1蛋白表达上调,与临床分期、IPI指数有一定关系,其中4E-BP1表达与患者预后可能有一定联系.

目的:研究蛋白激酶C β Ⅱ(protein kinase C β Ⅱ,PKCβⅡ)上调Snail和Twist蛋白表达介导上皮-间充质转化的分子机制.方法:采用[35S]-甲硫氨酸掺入实验和核糖体分离实验观察PKCβⅡ对Snail和Twist mRNA翻译的影响.敲减真核翻译起始因子4E(eukaryotic translation initiation factor 4E,eIF4E)通过核糖体分离实验、Western blot及RT-qPCR观察对PKCβⅡ调控Snail和Twist表达的影响.利用Western blot观察PKCβⅡ对调控eIF4E活性的相关信号通路的影响.利用Western blot观察应用丝裂原活化蛋白激酶相互作用激酶1(mitogen-activated protein kinase-interacting kinase 1,MNK1)抑制剂或雷帕霉素对PKCβⅡ调控Snail和Twist蛋白表达的影响.利用Transwell实验观察敲减eIF4E对PKCβⅡ调控肝癌细胞侵袭的影响.结果:[35S]-甲硫氨酸掺入实验和核糖体分离实验表明,相比β-actin,PKCβⅡ显著上调Snail和Twist mRNA的翻译(P<0.01).敲减eIF4E抑制PKCβⅡ介导的Snail和Twist mRNA翻译和蛋白表达的上调(P<0.01),但对Snail和Twist的转录没有影响.高表达PKCβⅡ激活细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)/MNK1及蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)/eIF4E结合蛋白1(eIF4E-binding protein 1,4E-BP1)通路上调eIF4E的活性(P<0.01).应用MNK1抑制剂或雷帕霉素可抑制PKCβⅡ介导的Snail和Twist蛋白表达上调(P<0.01).敲减eIF4E抑制PKCβⅡ介导的肝癌细胞侵袭能力的增强(P<0.01).结论:PKCβⅡ通过激活ERK/MNK1通路和AKT/mTOR/4E-BP1通路上调eIF4E的活性,优先促进Snail和Twist mRNA的翻译,介导上皮-间充质转化,从而促进肝细胞癌的转移.这提示PKCβⅡ作为肝细胞癌治疗靶点的潜力.

目的 初步阐明miR-139在肝细胞癌(HCC)发展过程中的作用及其介导的信号通路.方法 通过CCK-8实验验证miR-139对HCC增殖的影响;运用TargetScan、MiRanda、Clip-seq和miRDB四组数据库对miR-139下游可能存在的通路进行预测,结合文献回顾,寻找出miR-139在HCC中可能存在的靶点.Western blot法验证靶点受miR-139调节的情况,双荧光素酶报告基因分析验证miR-139与靶点的相关性.结果 通过CCK-8实验证明,miR-139具有抑制肝癌细胞增殖的作用;利用4个数据库交叉比对和文献回顾,筛选得到5个感兴趣的潜在基因,包括细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂(ICK)、B细胞异位基因3(BTG3)、含CUB和LCCL结构域盘状蛋白2(DCBLD2)、真核起始因子4F(EIF4G2)和核不均一核糖核蛋白F(HNRNPE).Western blot实验和双荧光素报告分析发现miR-139在肝细胞肝癌中具有直接抑制BTG3基因表达的作用.结论 miR-139可以直接调控BTG3基因的表达,影响肝癌细胞增殖.