建立普瑞巴林胃滞留缓释片含量测定的高效液相色谱法(HPLC),采用一种特殊的样品前处理方式成功解决了普瑞巴林回收率低的难题.通过比较盐析法和辅料分散法,建立了克服供试品溶液黏稠的前处理方法.两种前处理方法均可用于本品的含量测定,但盐析法简便易行.采用的HPLC条件为Inertsil ODS-3(4.6 mm×0.25 m,5μm)色谱柱,流动相3.4 g/L磷酸二氢钾(氨水调pH至 6.3)-甲醇(85︰15),柱温 30℃,流速 1.0 mL/min,进样量 50μL,检测波长 210 nm.盐析法方法学验证结果显示,制剂中普瑞巴林平均回收率为 99.74%,RSD为 0.43%;精密度试验的RSD为 0.77%;供试品溶液 12h内稳定,色谱系统耐用性良好,辅料不干扰含量检测.本研究建立的测定方法稳定、可靠,适用于普瑞巴林胃滞留缓释片的含量测定.

目的:评估全自动流水线自动检测室内质控（自动质控）的适用性。方法:利用自动质控实施方法评估北京协和医院检验科于2019年1月至2022年7月18个生化项目、5个免疫比浊项目、11个化学发光项目的自动质控稳定性、检测效率和实施成本。具体方法：将生化、免疫比浊以及化学发光项目的质控品存储在流水线冰箱中，由中间体软件控制流水线，按设置时间自动调取质控品上机测定并归档保存。生化项目的质控设置为每日和每周更换质控品2种模式，共同运行3个月，通过比较2种模式质控结果的变异系数（ CV）评估质控品在线存储稳定性。分析自动质控和手动质控结果变异、质控失控率、质控品消耗量、员工工作量、首个样本检测时间和自动质控故障率6个指标，评估自动质控应用效果。 结果:（1）质控品在线存储稳定性：每周更换生化在线质控品模式下，总二氧化碳（TCO 2）高低两水平质控的 CV分别为20.24%和21.82%，大于实验室设定的允许变异；丙氨酸转氨酶（ALT）等其他16个项目变异均小于允许变异。（2）自动和手动质控模式下质控结果变异：每日更换生化在线质控品、每周更换免疫比浊和化学发光在线质控品的模式下，硫酸脱氢表雄酮、雌二醇、卵泡刺激素、促黄体生成素、铁蛋白、叶酸、维生素B 12和睾酮 8个化学发光项目，补体3、C反应蛋白和免疫球蛋白G 3个免疫比浊项目和碱性磷酸酶、葡萄糖、钙、氯、钾、乳酸脱氢酶、钠、尿素、低密度脂蛋白胆固醇和腺苷脱氨酶 10个生化项目的低、高水平质控自动质控检测结果的 CV均低于手动质控结果的 CV。2种质控模式的生化、免疫比浊和化学发光项目的失控率均符合临床常规工作需求。（3）质控品消耗量比较：自动质控与手动质控比较，化学发光质控品每周使用量减少37.5%（由8 ml减至5 ml）；免疫比浊质控品每周使用量减少33.3%（由3 ml减至2 ml）。（4）员工工作量和首个样本进样时间比较：自动质控与手动质控比较，员工每周减少手工操作步骤约156步，每日首个样本检测时间平均提前15 min。自动质控开始运行的前期故障率为54.5%（37/64），后期降至10.2%（13/128）。 结论:通过流水线系统自动检测室内质控结果满足实验室质量指标要求，应用自动质控可提高质控水平，节约成本，减轻工作量、提高工作效率。

患者 女性，71岁，因“检查发现肝内胆管癌1个月余”于2021年8月11日收入我科。患者1个月前检查发现肝内占位，于当地医院行影像学检查提示肝内多发占位伴门静脉右前支癌栓形成。予穿刺活检，病理学检查结果提示胆管癌，外院予以经肝动脉栓塞化疗（transcatheter arterial chemoembolization，TACE）联合替雷利珠单抗免疫治疗。患者既往因心房颤动伴缓慢心室率植入心脏起搏器，5年前患脑梗死，高血压2级（高危），口服缬沙坦氢氯噻嗪片控制可；2型糖尿病，口服二甲双胍控制可；三叉神经痛。无肾脏疾病史，无吸烟、饮酒史，无家族病史。体检：神清，口唇无紫绀，全身浅表淋巴结未及肿大，皮肤巩膜未见黄染。血压116/68 mmHg（1 mm Hg=0.133 kpa）。心律不齐，余心肺体检无特殊。腹平软，全腹无压痛、反跳痛，未及包块。肝脾肋下未及，胆囊未触及，Murphy征阴性，肠鸣音3~5次/min，移动性浊音阴性。双下肢无水肿。实验室检查：白细胞计数3.8×10 9/L，血红蛋白127 g/L，血小板计数124×10 9/L，中性粒细胞百分比57.1%，中性粒细胞绝对值2.2×10 9/L；钾离子3.45 mmol/L，AST 136 U/L，ALT 215 U/L，碱性磷酸酶402 U/L，谷氨酰转肽酶1 104 U/L，白蛋白39.3 g/L，总胆红素12 μmol/L，直接胆红素5 μmol/L，超敏C反应蛋白7.6 mg/L；CA125为68.5 U/ml，癌胚抗原 17.4 μg/L，CA19-9为7 116.3 U/ml，甲胎蛋白1 970 μg/L；凝血酶原时间12.1 s。肝脏CT血管造影检查：肝内胆管癌伴肝内多发转移，累及门静脉右前支（图1）。诊断：（1）肝内胆管癌；（2）门静脉瘤栓（右前分支）；（3）高血压2级（高危）；（4）2型糖尿病；（5）脑梗死史；（6）心房颤动（心脏起搏器置入）；（7）脂肪肝；（8）三叉神经痛；（9）大脑中动脉硬化。

目的 建立HPLC测定富马酸伏诺拉生注射液中有关物质含量的方法.方法 采用YMC-Pack Pro C18 色谱柱(4.6mmX 150 mm,3 μm),流动相 A 为 0.04 mol·L-1 磷酸二氢钾溶液(含0.2％三乙胺,用磷酸调节pH至6.6)-乙腈-异丙醇(92∶4∶4),流动相B为0.04 mol·L-1磷酸二氢钾溶液(含0.2％三乙胺,用磷酸调节pH至6.6)-乙腈(40∶60),采用梯度洗脱,流速1.0mL·min-1,柱温40℃,检测波长220 nm,进样量20μL.结果 杂质H、杂质B、杂质C、杂质F、杂质D、杂质E、杂质J和伏诺拉生的质量浓度分别在0.12～4.99、0.12～4.99、0.12～4.90、0.13～5.01、0.12～4.99、0.13～5.01、0.13～5.01、0.13～5.01 μg·mL-1内与峰面积呈良好线性关系(r＞0.9990);7个杂质的回收率为94.72％～100.67％,其RSD值均小于2.0％;7个杂质和伏诺拉生的定量限为0.12～0.13μg·mL-1,检测限为0.040～0.043 μg·mL-1.结论 经方法学验证,本法专属性强、灵敏度高、准确度高,可用于富马酸伏诺拉生注射液中有关物质的含量测定.

目的 建立评价白蒲黄胶囊质量的超高效液相色谱(UPLC)指纹图谱和化学模式识别方法.方法 色谱柱为Waters Acquity BEH C18 柱(150 mm×2.1 mm,1.7μm),流动相为乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液(梯度洗脱),流速为 0.3 mL/min,柱温为 35℃,切换检测波长 210 nm及 323 nm,进样量为 2μL.建立 2 个厂家 10 批样品的指纹图谱,并进行相似度评价、聚类分析(CA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA),筛选不同批次样品的差异性标志物.结果 方法学考察结果显示,精密度、重复性、稳定性试验结果的RSD均小于 2.0%.10 批样品共标定了 19 个共有峰;通过与对照品比对,指认 7 个成分,分别为盐酸黄柏碱(4 号峰)、绿原酸(6 号峰)、咖啡酸(10 号峰)、菊苣酸(11 号峰)、黄芩苷(13 号峰)、盐酸小檗碱(17 号峰)、白头翁皂苷B4(19 号峰).10 批样品的指纹图谱相似度均不低于 0.978.10 批样品按厂家聚为 2 类;在OPLS-DA模型下,以变量重要性投影值大于 1 筛选出 4 个差异性标志物,分别为白头翁皂苷B4(19号峰)、5号峰、菊苣酸(11号峰)、绿原酸(6号峰).结论 该方法操作简单、结果准确,可客观评价白蒲黄胶囊的质量.

目的 建立高效液相色谱(HPLC)一测多评法同时测定美洲大蠊中尿嘧啶、尿苷、次黄嘌呤、肌苷及鸟苷5种成分的含量.方法 采用Agilent ZORBAX SB-Aq色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);以甲醇-0.01 mol·L-1磷酸二氢钾溶液为流动相,梯度洗脱;流速:1.0 mL·min-1;柱温:20℃;检测波长:260 nm;进样量:10 μL.计算内参物尿苷与其他成分的相对校正因子(fa/b).一测多评法测定 10 批美洲大蠊中 5 种成分含量,并与外标法比较.结果 5 种核苷类在各自范围内线性良好(r＞0.999 5),平均加样回收率 97.0%～100.8%.尿嘧啶、次黄嘌呤、肌苷、鸟苷的 fa/b 分别是 0.908 0、1.005 3、1.969 5、1.303 4.结论 所建立的方法准确稳定,可为美洲大蠊药材及提取物的质量控制提供理论参考.

目的 建立高效液相色谱法测定注射用亚锡甲氧异腈中四(2-甲氧异腈)络铜(I)氟硼酸盐(MIBI)含量的方法.方法 采用 Agilent ZORBAX 300? SCX 色谱柱(4.6mm × 250mm,5μm),以乙腈-20.4g/L 磷酸二氢钾(稀磷酸调 pH 至 4.0)(V∶V=40∶60)为流动相,使用紫外检测器(检测波长为230nm),柱温为20℃,以1.0mL/min的流速进行等度洗脱,运行10min.结果 采用该方法,MIBI在50～200μg/mL浓度范围内线性关系良好(r=0.9992),回收率为92％～105％,RSD为1.31％,耐用性和精密度良好.结论 该方法专属性强、线性范围广、准确度高、稳定性好,可用于注射用亚锡甲氧异腈中MIBI的含量测定,为制定该类药物的质量控制标准提供了技术参考.

目的 建立检测黄连解毒汤中6种主要成分的高效液相色谱(HPLC)方法.方法 采用Zorbax Eclipse Plus C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以0.03 mg·mL-1 磷酸二氢钾-乙腈(V∶V=7∶3)为流动相,等度洗脱,流速为1.0mL·min-1,检测波长为345 nm,柱温为37 ℃,进样量为20 μL,建立检测黄连解毒汤6种主要成分(京尼平苷、小檗碱、黄连碱、药根碱、黄芩苷、巴马汀)的HPLC方法.绘制HPLC检测6种成分的标准曲线,并进行方法学评价(线性、加样回收率、准确度和精密度、稳定性).采用建立的HPLC方法检测黄连解毒汤样本.结果 HPLC检测京尼平苷、小檗碱、黄连碱、药根碱、黄芩苷、巴马汀的线性范围分别为25.00～800.00、32.00～1 024.00、20.00～640.00、20.30～650.00、13.13～420.00、25.00～800.00 μg·mL-1,精密度和准确度均＜2％,加样回收率分别为105.30％、102.88％、103.51％、107.76％、96.29％、99.34％.稳定性实验结果显示,室温放置24 h、反复冻融3次、2～8℃保存1周、-80 ℃冻存1个月,京尼平苷、小檗碱、黄连碱、药根碱、黄芩苷、巴马汀的峰面积相对标准偏差(RSD)均＜2％,检测结果均稳定.采用HPLC检测黄连解毒汤的主要成分,浓度从高到低依次为药根碱(2 799.00 μg·mL-1)、小檗碱(2 358.03 μgmL-1)、京尼平苷(1 793.34 μg·mL-1)、巴马汀(945.30 μg·mL-1)、黄连碱(192.00 μg·mL-1)、黄芩苷(171.00 μg·mL-1).结论 建立的同时检测黄连解毒汤6种主要成分的HPLC方法快速、简便、重复性好、准确度高,可为后续黄连解毒汤的相关研究和临床应用奠定基础.

为了提高褐藻胶降解菌株Cobetia sp.20产褐藻胶裂解酶的能力,利用响应面法优化其发酵产褐藻胶裂解酶的培养基.首先利用单因素法分别对发酵培养基中的不同碳源、碳源添加量、不同氮源、氮源添加量以及氯化钠添加量、磷酸二氢钾添加量、硫酸镁添加量和pH进行探究,研究各因素对产酶的影响.在单因素实验的基础上,通过Plackett-Burman试验确定Cobetia sp.20发酵培养基中影响产酶的主要因素.通过响应面试验建立回归方程.研究结果表明,Cobetia sp.20最优发酵培养基配方为褐藻胶15.00 g/L、硫酸铵7.50 g/L、氯化钠15.00 g/L、硫酸镁0.50 g/L、磷酸二氢钾5.30 g/L、硫酸亚铁0.01 g/L、pH值7.58.优化后酶活为142.79 U/mL,比优化前提高了 26.36％.褐藻胶裂解酶活的提高,为褐藻胶裂解酶的工业化生产提供了参考.

目的 建立测定β-内酰胺类抗生素原料中乙酸残留量的HPLC方法.方法 采用多因素组内设计方法,确定色谱流动相的组成、比例和pH值.参考ICH Q2,从专属性、检出限和定量限、线性、准确度、精密度和耐用性等6个方面对方法进行验证.用所建立的方法对19种β-内酰胺类抗生素原料进行了测定.结果 采用C18色谱柱,流动相:甲醇-0.02 mol/L磷酸二氢钾,梯度洗脱;柱温25 ℃;检测波长220 nm.供试品、溶剂和流动相对乙酸测定没有明显干扰;乙酸的最低检出限约为0.029 μg,最低定量限约0.12 μg;从定量限到限度2倍浓度范围内,方法的线性关系良好,拟合直线方程为少=388866.7186x-177.5720,r2=0.9999;低中高浓度加样回收率平均分别为93％,96％和99％;方法 的重复性和中间精密度分别为2.37％和2.11％;在3根不同C18色谱柱上的耐用性良好.19种β-内酰胺抗生素原料中有3种筛查出残留乙酸.结论 所建方法可以实现对β-内酰胺类抗生素原料中残留乙酸的准确定量,为该类原料的生产过程控制和标准物质研制提供了依据.