目的:分析红花素的分子特性，筛选并鉴定红花素抗脓毒症的潜在靶点。方法:通过中药系统药理学分析平台（TCMSP）分析红花素的药理参数和分子特性。采用SwissTargetprediction服务器（提供化合物靶点预测的网站）和通过化学蛋白质相互作用分析来预测化学成分靶向蛋白的服务器（DRAR-CPI）筛选红花素抗脓毒症的潜在靶点，并与人类孟德尔遗传病数据库（OMIM）、毒性与基因比较数据库（CTD）和药物靶点数据库（TTD）中已发布的抗脓毒症相关疾病靶点进行匹配，筛选出红花素的抗脓毒症靶点，进一步通过分子对接服务器鉴定红花素抗脓毒症的潜在靶点。结果:红花素的口服生物利用度为41.15%，药物相似度为0.24，可旋转键数为1，表明红花素口服吸收较好，具有良好的成药性。通过SwissTargetprediction和DRAR-CPI服务器共筛选到115个潜在靶点；从OMIM、CTD和TTD 3个数据库中共获得149个疾病靶点；将两个服务器筛选出的115个红花素靶向蛋白与疾病靶向蛋白进行匹配，发现既是分子靶点又是疾病靶点的蛋白有10个，分别为凝血因子Ⅸ（F9）、腺苷A1受体（ADORA1）、一氧化氮合酶2（NOS2）、丝裂素活化蛋白激酶1（MAPK1）、组织蛋白酶G（CTSG）、中性粒细胞弹性蛋白酶（ELANE）、蛋白C（PROC）、脂钙蛋白2（LCN2）、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）和前列腺素内过氧化物酶２（PTGS2）。经分子对接服务器鉴定显示，红花素具有与上述10个靶向蛋白结合的能力，为红花素抗脓毒症的潜在靶点；红花素可通过与靶向蛋白的关键氨基酸残基发生交互作用，从而发挥相应的药效。结论:红花素能够通过调节CTSG、ELANE和LCN2抑制脓毒症组织和器官损伤，通过调控ADORA1、PTGS2、NOS2和MAPK1减轻炎症，通过调控PROC和F9抑制凝血并减轻脓毒症炎症反应，通过调节G6PD改善氧化应激而减少脓毒症的发生，最终预防和治疗脓毒症。

目的:基于专家意见,通过数据挖掘的方式,分析疗效确切的中成药治疗继发性痛经的用药规律.方法:筛选2017版医保目录、2015版《中华人民共和国药典》中治疗痛经的药物,合并同一方剂不同剂型中成药,运用德尔菲法,对妇科专家以问卷调查的形式筛选出最常用、最推荐的治疗继发性痛经的中成药,并通过中医传承辅助平台探究治疗继发性痛经的中成药处方的用药规律、核心组合及关联规则,基于无监督的熵层次聚类推演出新方.结果:共筛选出中成药处方25个,涉及中药75味,常用药物为延胡索、当归、香附、川芎、白芍、丹参、五灵脂、红花、肉桂、熟地黄;主要归肝、脾经;通过关联规则得出常用药对以延胡索、当归、川芎相互组合为主;进一步聚类分析得到潜在核心组合8个,新处方4首.结论:临床常用治疗继发性痛经中成药处方用药以活血化瘀药为主,兼补血、温阳、益气,标本兼治,聚类分析得出的潜在药物组合和新方具有一定理论价值及代表性,可为临床探索及实验研究提供参考.

以内蒙古红花尔基樟子松林国家级自然保护区樟子松人工林为研究对象,采用实测法对樟子松不同龄级人工林碳密度、碳储量及其分配特征进行了研究.结果表明:(1)樟子松人工林碳储量随林龄增加而增加.(2)樟子松人工林各碳层储量变化规律为:地下>地上,土壤层>植被层>枯落物层.(3)樟子松人工林各碳层储量中土壤层碳储量占比最大,且 0-30 cm土层碳储量占比在 76.97%—80.18%之间,呈表层聚集现象.(4)乔木层碳储量主要集中在树干,表现为碳净积累特征.未来通过采用合理的人工抚育及科学管理措施,维持和增加土壤碳收入,充分利用其生长特性,对于维持生态系统碳平衡起着极其重要的作用.

[目的]探究丹参-川芎-红花(丹川红,DCH)及主要吸收成分阿魏酸(FA)对颅脑损伤(TBI)模型大鼠抑郁-心脏损伤的治疗作用及多病发生机制研究.[方法]SD大鼠TBI造模,造模苏醒后给药,24 h后取材.分为空白(Sham)组,模型(Vehicle)组,FA(2 mg/kg)组、DCH(10 g/kg)组.用高尔基染色法检测海马神经元的树突棘密度和树突长度,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测海马、心脏及血清中即刻早期基因(c-Fos)和胃饥饿素(Ghrelin)、心脏内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)、血清五羟色胺(5-HT)和炎性因子白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β);蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马、心脏的脑源性神经营养因子(BDNF),心脏损伤指标肌酸激酶同工酶(CK-MB)和心肌凋亡指标半胺氨酸-天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3).[结果]TBI后大鼠海马神经元树突棘密度和长度均下降,治疗后有所恢复;血清炎性因子应激后明显上升,治疗后下降;5-HT应激后显著下降,治疗后上升.应激后显著下降的心脏eNOS水平治疗后升高,显著上升的心脏损伤指标CK-MB和Caspase3水平治疗后下降.c-Fos、Ghrelin在大鼠血清、海马、心脏中具有一致性的表达特征,前者在应激后表达量增高,给药后下降;后者在应激后表达量下降,给药后上升.BDNF在心脑中表现为应激后下降,给药后上升.[结论]TBI后大鼠具有抑郁-心脏损伤的多病表现,DCH和FA均发挥抗抑郁-心脏保护的作用,可能通过调节Ghrelin-BDNF/c-Fos这一共享途径对TBI后抑郁-心脏损伤共病发挥治疗作用.

目的 采用3、6、9月龄APP/PS1转基因小鼠作为实验动物模型,明确红花黄色素(safflower yellow,SY)对不同疾病时期APP/PS1小鼠学习记忆能力的影响,探究SY抗阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)的作用机制.方法 行为学实验观察SY对不同月龄APP/PS1小鼠学习记忆的影响;ELISA研究SY对不同月龄小鼠皮层炎症因子表达的影响,并采用Western blot检测小鼠小胶质细胞活化标志蛋白,进一步分析其作用机制.结果 SY提高了3、6、9月龄小鼠的学习记忆能力;降低脑组织中IL-6的含量,提高TGF-β1的含量;诱导各月龄小鼠脑组织中精氨酸酶-1(arginase-1,Arg-1)和髓样细胞触发受体 2(triggering receptor expressed on myeloid cells 2,TREM2)的蛋白表达水平,同时下调诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、Toll 样受体4(Toll-like receptors,TLR4)以及核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)的蛋白表达水平.结论 与3、9月龄小鼠相比,SY对6月龄APP/PS1小鼠的学习记忆能力改善效果最佳.SY通过诱导APP/PS1转基因小鼠脑组织中TREM2的表达,抑制TLR4/NF-KB通路激活,促进小胶质细胞表型向抗炎型转变,减轻慢性神经炎症反应,改善各月龄APP/PS1小鼠的学习记忆能力.

目的:以网络药理学系统分析红花平疣颗粒治疗扁平疣的主要活性成分、潜在治疗靶点及作用机制，并以此为基础建立红花平疣颗粒的质量控制指标。方法:借助中药系统药理数据库和分析平台(TCMSP)数据库、SwissTargetPrediction数据库、中医药证候关联数据库(SymMap数据库)，筛选出红花平疣颗粒的主要活性成分及其作用靶点；借助人类基因综合数据库(Genecards数据库)、人类孟德尔遗传数据库(OMIM数据库)检索出扁平疣的相关靶点；借助蛋白质-蛋白质相互作用数据库(STRING数据库)构建潜在靶点的蛋白质互作网络(PPI)图，并利用Cytoscape 3.7.2软件构建“红花平疣颗粒-活性成分-作用靶点”网络图；借助基因功能注释分析数据库Matascape进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析，并利用Cytoscape软件构建“活性成分-核心靶点-信号通路”网络图；最后采用高效液相色谱(HPLC)法对红花平疣颗粒中主要指标成分羟基红花黄色素A进行含量测定。结果:通过网络药理学筛选出157个活性成分，94个核心靶点。此外，红花平疣颗粒可能通过调控白细胞介素-17(IL-17)和缺氧诱导因子1(HIF-1)等信号通路发挥治疗扁平疣的作用。HPLC结果显示，羟基红花黄色素A在6~120?mg/L范围内线性关系良好(r=0.9996)，精密度、重复性、稳定性试验的相对标准偏差(RSD)值均<3%，平均回收率为96.17%~101.85%，RSD为2.19%(n=6)，其平均含量为0.0576?mg/g。结论:通过网络药理学初步探讨红花平疣颗粒治疗扁平疣的作用机制，并对筛选出来的质控指标成分羟基红花黄色素A进行了定量研究，该研究为红花平疣颗粒治疗扁平疣的药效学及质量标准提升研究提供一定的依据。

目的:探究藏红花素通过调控dickkopf WNT 信号通路抑制因子 3(Dickkopf3,DKK3)对Aβ25-35 诱导神经细胞损伤的保护作用及机制.方法:Aβ25-35 诱导小鼠海马神经细胞系HT22 细胞模拟细胞损伤,CCK8 增殖实验检测藏红花素最佳干预浓度.qPCR 检测 DKK3 沉默质粒(DKK3 siRNA)以及DKK3 过表达质粒(DKK3-OE)的DKK3 mRNA表达,随后进行细胞转染.细胞分为正常组、Aβ25-35组、Aβ25-35 +藏红花素组(1.0 μmol/L)、Aβ25-35 + DKK3 siRNA 组、Aβ25-35 + siRNA 对照组、DKK3-OE组、空白质粒对照组、DKK3-OE +藏红花素组(1.0 μmol/L)组.采用流式细胞数检测细胞凋亡,Tubulin β染色观察细胞神经突触形态,Western blot检测细胞Aβ、DKK3、β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β、Caspase-3、Bax、Bcl-2 蛋白表达.结果:0.5～2.0 μmol/L藏红花素可显著上调HT22 细胞活力(P<0.05).与正常组相比,Aβ25-35 组和DKK3-OE组细胞凋亡显著增加,突触长度、分支数显著减少,Aβ、DKK3、p-GSK-3β/GSK-3β、Caspase-3、Bax蛋白表达显著升高,β-catenin、Bcl-2 蛋白蛋白表达显著降低(P<0.01).与DKK3-OE组相比,藏红花素干预则能逆转以上结果.与Aβ25-35 组相比,Aβ25-35 +藏红花素组和Aβ25-35 + DKK3 siRNA组细胞的凋亡显著降低,突触长度、分支数显著增加,Aβ、DKK3、p-GSK-3β/GSK-3β、Caspase-3、Bax蛋白表达显著降低,β-catenin、Bcl-2 蛋白蛋白表达显著升高(P<0.05).结论:藏红花素对Aβ25-35 诱导神经细胞损伤具有保护作用,其作用与通过抑制DKK3 调控GSK-3β/β-catenin信号通路表达有关.

红花作为传统的活血化瘀中药,具有抗肿瘤、抗炎、免疫调节等药理活性.黄酮糖苷是红花植物的主要生物活性组分,糖基转移酶作为活性糖苷化合物生物合成的下游后修饰酶,具有重要的研究意义.该研究基于红花转录组数据分析,挖掘到一条糖基转移酶基因CtUGT49,对其进行了系统的生物信息学分析和酶学性质考察.该基因开放阅读框(ORF)长度为1 416 bp,编码 471 个氨基酸残基,相对分子质量约为 52 kDa.系统进化分析表明,该糖基转移酶属于UGT73 家族.体外酶促结果显示,CtUGT49 可催化柚皮素查尔酮生成樱桃苷和南酸枣苷;催化根皮素生成的主产物为根皮苷和三叶苷,并且具有良好的底物宽泛性.通过蛋白异源表达与纯化得到较为纯净的重组蛋白CtUGT49 后,进行CtUGT49 催化柚皮素查尔酮的酶学性质考察.结果显示,CtUGT49 催化反应的最适pH为7.0,最适温度为37℃,反应8 h后,底物转化率达到最高.采用米氏方程计算CtUGT49 的酶活常数Km=209.90 μmol·L-1,kcat =48.36 s-1.该研究发现的新颖糖基转移酶CtUGT49 对于丰富糖基化工具酶库具有重要意义,且能为进一步解析红花黄酮糖苷的糖基化过程奠定基础.

目的 采用网络药理学和分子对接技术研究黄芩治疗糖尿病脑病的作用机制.方法 通过TCMSP数据库检索黄芩主要活性成分和作用靶点,通过OMIM、GeneCards、TTD及DrugBank等数据库筛选糖尿病和阿尔茨海默病的主要靶点,构建活性成分-靶点网络;利用STRING 11.0进行蛋白质互作分析,构建PPI网络以筛选重要靶点;运用Metascape库对关键交集靶点进行GO和KEGG富集分析;利用Cytoscape 3.7.2将分析得到的重要靶点和通路构建药物成分-疾病靶点-通路网络;进一步对关键活性成分和核心靶点进行分子对接验证.结果 筛选出黄芩重要活性成分有汉黄芩素、黄芩素、金合欢素、降穿心莲黄酮等,PPI网络中关键交集靶点61个,核心靶点有AKT1、IL-6、MAPK14、TNF、PRKCA、VEGFA等.GO富集分析得到细胞组成101条,分子功能76条,生物过程1413条;KEGG通路富集分析得到258条,主要涉及AGE-RAGE信号介导的糖尿病并发症通路、IL-17、MAPK、TNF、PI3K-Akt信号通路、胰岛素抵抗通路等.分子对接结果可知,汉黄芩素、金合欢素、黄芩素、红花素、二氢奥洛昔林、黄芩黄酮Ⅱ、5,7,2,5-四羟基-8,6-二甲氧基黄酮、降穿心莲黄酮等活性成分与核心靶点VEGFA、AKT1、TNF、MAPK14、IL-6结合较好.结论 黄芩可以通过多成分、多靶点、多通路改善糖尿病脑病.

黄酮类化合物特别是查尔酮类如羟基红花黄色素A、红花红色素等是红花的主要药效成分,研究红花黄酮类的生物合成途径,对于定向调控红花的品质具有重要意义.作为调控黄酮类成分合成的入口酶,查尔酮合酶(CHS)在黄酮类化合物的合成过程中起着重要作用.但到目前为止,CHS在红花黄酮类化合物生物合成过程中的作用尚不十分清楚.茉莉酸甲酯JA/MeJA作为植物信号调节物质可以激活植物体内CHS基因表达.本研究在前期阐明红花的1个CHS基因CtCHS1功能的基础上,作为延续性工作,继续对红花中的其他CHS基因CtCHS2和CtCHS4进行研究.应用MeJA刺激花冠,分别于刺激后0、3、6、12h不同时间点采用qRT-PCR法分析CtCHS2和CtCHS4的相对表达量,采用UHPLC/Q-TOF-MS技术分析红花中次生代谢产物的变化.结果表明,CtCHS4的表达量响应MeJA的诱导在3、6h均明显升高,而CtCHS2的表达量则在诱导后表现出降低的趋势;同时,MeJA诱导后,芦丁、羟基红花黄色素A、D-苯丙氨酸、山柰酚-3-O-β-芸香糖苷、红花红色素的积累量明显提高,特别是羟基红花黄色素A的积累量在诱导后3、6、12h均显著性的提高(P≤0.05或0.01),而对山柰酚、山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素、槲皮素-3-β-D-葡糖苷的积累量的影响则不明显.Pearson相关分析结果表明,羟基红花黄色素A、红花红色素的积累量与CtCHS4的表达量均呈显著性正相关(r≥0.8).提示CtCHS4可能是形成羟基红花黄色素A和红花红色素的关键基因,在红花查尔酮类成分的积累中起着重要作用.CtCHS4-pMAL-C5X重组质粒在BL21 (DE3) PlyS原核表达宿主菌中成功表达出CtCHS4活性蛋白,在体外催化底物香豆酰辅酶A和丙二酰辅酶A生成了产物柚皮素.本研究结果进一步完善了红花中CHS基因的功能,为最终阐明红花查尔酮类化合物生物合成途径的关键基因积累了资料.