目的:制备由聚乳酸－羟基乙酸共聚物(PLGA)包载全氟戊烷(PFP)与化疗药替莫唑胺(TMZ)的液气相变型纳米粒(TMZ/PFP/PLGA NPs)，联合低强度聚焦超声(LIFU)辐照，探讨其体外超声显影能力及对人胶质瘤细胞的体外干预效果。方法:采用复乳法制备TMZ/PFP/PLGA NPs，检测其基本理化性质及药物包载能力，观察纳米粒体外超声显影效果；CCK-8法检测纳米粒的体外细胞毒性及与LIFU协同干预对胶质瘤细胞存活率的影响；Western blot检测协同干预后细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2、bax及caspase-3的表达水平变化。结果:在透射电镜下，TMZ/PFP/PLGA NPs呈形态规则的类圆形核壳结构，粒径(137.9±63.31) nm，对TMZ的包封率为(83.01±5.57)%，载药量(3.19±0.22)%；纳米粒与U251细胞共孵育24 h后细胞存活率仍可保持在70%以上，在同时施加LIFU辐照的协同作用下，可使细胞凋亡加速，细胞存活率明显下降；Western blot检测结果显示，协同干预可明显下调细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2的表达，同时明显上调bax蛋白与caspase-3蛋白的表达(均 P<0.05)。 结论:TMZ/PFP/PLGA NPs本身具有良好的基本理化性质，在高效包载化疗药物替莫唑胺的同时，具有较低的体外细胞毒性，在LIFU辐照下的协同干预可明显加速U251胶质瘤细胞凋亡，具有良好的应用前景。

目的:研制一种乳腺癌细胞膜(CCM)包被的载血卟啉单甲醚(HMME)仿生纳米分子探针，观察其体外靶向同源乳腺癌细胞的能力，并探讨其体外增强光声显像及声动力治疗(SDT)乳腺癌的效果。方法:通过化学裂解及反复冻融法提取乳腺癌4T1细胞膜，然后以双乳化法联合挤压法制备CCM包被的载HMME的聚乳酸-羟基乙酸共聚物仿生纳米粒作为分子探针(CHP-NPs)。检测纳米粒的基本表征；体外观察纳米粒对同源乳腺癌细胞的靶向能力及增强光声显像的效果；以单线态氧荧光探针(SOSG)验证纳米粒产生活性氧(ROS)的性能，并以CCK8细胞毒性实验评估其对乳腺癌细胞的SDT效果。结果:所制备的CHP-NPs大小均一，形态规则呈球形"核壳结构"，粒径为(275.23±8.25)nm，表面电位为(-18.43±0.45)mV;激光共聚焦显微镜下观察到CHP-NPs能靶向同源4T1细胞；体外光声显像实验显示，纳米粒光声信号随其浓度的升高而增强；经SOSG探针检测，CHP-NPs在超声辐照下可产生ROS；单独CHP-NPs与4T1细胞共同孵育，不应用超声辐照时，对细胞存活率无明显影响，其浓度为0.6 mg/ml时细胞存活率仍达95%；经超声辐照时，CCK8实验显示该CHP-NPs对乳腺癌细胞具有显著的SDT效果。结论:成功制备出乳腺癌细胞膜仿生纳米分子探针，该探针具有良好的靶向同源肿瘤的能力，并可显著增强肿瘤光声显像及SDT效果。

目的:探讨靶向肝癌干细胞的紫杉醇纳米粒的制备及其对肝癌HepG2细胞（CD133阳性亚群占8%）和Huh-7细胞（CD133阳性亚群占65%）的效果。方法:应用单乳溶媒挥发法制备聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物装载的紫杉醇纳米粒，采用1-乙基-3-（3-二甲基氨丙基）-碳化二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺（EDC/NHS）交联法制备由抗CD133抗体修饰的紫杉醇纳米粒，即靶向纳米粒。检测纳米粒的表征及理化特性（包封率和载药率、粒度分布、形态、体外释放）。将肝癌Huh-7和HepG2细胞与紫杉醇纳米粒或靶向纳米粒共培养，应用流式细胞术分析肝癌细胞对纳米粒的摄取和累积，并检测CD133阳性细胞比例，应用平板克隆形成实验分析细胞存活情况。结果:扫描电镜检测显示，靶向纳米粒的粒径为（429.26±41.53）nm，Zeta电位为-11.2 mV，具有球形形态和较高的包封率[（87.53±5.90）%]。流式细胞术检测显示，37 ℃时，Huh-7细胞靶向纳米粒组的荧光强度较紫杉醇纳米粒组荧光强度高（13 397±720比6 898±604），差异有统计学意义（ P<0.05）；37 ℃时，HepG2细胞紫杉醇纳米粒和靶向纳米粒组间荧光强度差异无统计学意义（7 899±343比8 432±516， P>0.05）。Huh-7细胞靶向纳米粒组CD133阳性细胞比例较紫杉醇纳米粒组低[（15.7±2.6）%比（54.9±7.4）%]，差异有统计学意义（ t=7.31， P=0.008）；HepG2细胞两组间差异无统计学意义（ P>0.05）。平板克隆形成实验结果显示，靶向纳米粒作用后，各时间点Huh-7细胞存活率低于紫杉醇纳米粒作用后，差异有统计学意义（ F=5.56， P=0.009）；紫杉醇纳米粒和靶向纳米粒作用后，HepG2细胞存活率差异无统计学意义（ F=1.19， P=0.142）。 结论:制备的靶向肝癌干细胞的纳米粒对肝癌Huh-7细胞有良好抑制作用。

目的 优化冬凌草甲素(oridonin,ORI)聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly(lactic-co-glycolic acid)]纳米粒处方(ORI-PLGA-NPs),并进行大鼠体内药动学研究.方法 以包封率和粒径为指标,采用Box-Behnken法优化ORI-PLGA-NPs处方;HPLC法测定冬凌草甲素在大鼠体内的血药浓度,采用PKSolver软件拟合出药物的药动学参数特征.结果 ORI-PLGA-NPs最佳处方为:PLGA用量476.1 mg,水相/油相7.5∶1,泊洛沙姆188(P188)质量浓度0.85％,此时包封率92.9％,粒径184.2 nm.大鼠单剂量静脉注射ORI-PLGA-NPs符合二室模型,分布半衰期为(0.29±0.03)h;消除半衰期为(15.17±4.26)h;血药浓度曲线下面积为(9.84±1.35)μg·h/mL,清除率为1.24 L/(kg·h).结论 响应面分析法可用于ORI-PLGA-NPs处方研究,ORI-PLGA-NPs能延长ORI体内循环时间.

目的 探讨复方黄黛片有效成分硫化砷、靛玉红和丹参酮联合装载纳米粒的制备及肝癌HepG2和Huh-7细胞的治疗作用.方法 应用单乳溶媒挥发法,制备聚乳酸-聚羟基乙酸共聚物联合装载硫化砷、靛玉红和丹参酮纳米粒.氢化物发生原子吸收分光光度法和高效液相色谱法分析纳米粒中药物的载药率、包封率和模拟体外释药,利用扫描电镜观察纳米粒的形态,采用粒度分析仪检测纳米粒粒径.荧光显微镜观察HepG2和Huh-7细胞吞噬摄取纳米粒,采用MTT测定法检验细胞活力,细胞存活分析检测细胞克隆形成能力.结果 联合载药纳米粒呈球形,粒径为(115.09±36.71)nm,多分散指数0.131.硫化砷、靛玉红和丹参酮的载药率和包封率分别为(5.17±1.26)％、(1.03±0.45)％、(1.72±0.67)％和(16.15±4.7)％、(76.74±6.8)％、(83.09±9.4)％.硫化砷、靛玉红和丹参酮模拟体外释药曲线早期呈爆发释放,随后为缓慢持续释放.荧光显微镜结果可见肝癌细胞对纳米粒的吞噬摄取,MTT检测显示药物单体和联合载药纳米粒作用后细胞活力较对照降低,联合载药纳米较药物单体粒作用显著,细胞存活分析结果也进一步证实上述结果.结论 复方黄黛片有效成分硫化砷、靛玉红和丹参酮联合装载纳米粒显示出明确的肝癌治疗效果,这为中药的临床给药提供了新的剂型.

目的 制备叶酸修饰的红细胞膜伪装的载青蒿素(ART)多功能靶向仿生纳米粒,并应用光声成像(PAI)评价其联合低强度聚焦超声(LIFU)治疗小鼠乳腺癌的价值.方法 选用聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)作为纳米粒的载体材料,以全氟己烷(PFH)、Fe3O4、ART 作为纳米粒的内核,再以红细胞膜(EM)包覆该纳米粒,最后EM表面经叶酸(FA)修饰为靶向分子,制备多功能靶向仿生纳米粒(PFH/ART@PLGA/Fe3O4-eFA).激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察纳米粒的FA连靶率.应用PAI观察纳米粒在小鼠乳腺癌组织内的靶向聚集程度.电感耦合等离子体发射光谱(ICP)检测纳米粒在血液中的代谢情况.纳米粒联合LIFU协同治疗肿瘤,并记录肿瘤大小变化.结果 LSCM分析显示纳米粒mander重叠系数为 83.7%.PAI结果显示合成的PFH/ART@PLGA/Fe3O4-eFA纳米粒在体外及体内均有良好的光学成像效果.PFH/ART@PLGA/Fe3O4-eFA组小鼠乳腺癌组织内光声信号强度显著高于PFH/ART@PLGA/Fe3O4 组.ICP结果显示PFH/ART@PLGA/Fe3O4-eFA组血液中Fe2+浓度显著高于PFH/ART@PLGA/Fe3O4 组;PFH/ART@PLGA/Fe3O4-eFA组小鼠肝脏及脾脏内的Fe2+显著低于PFH/ART@PLGA/Fe3O4 组;且PFH/ART@PLGA/Fe3O4-eFA组小鼠乳腺癌组织内的Fe2+显著高于PFH/ART@PLGA/Fe3O4 组.体内治疗结果显示,PFH/ART@PLGA/Fe3O4-eFA组小鼠乳腺癌体积显著小于其他各组.结论 本研究成功制备包封PFH、Fe3O4、ART的多功能靶向仿生纳米粒,具有良好的体内外光声成像效果,初步证实可用于小鼠乳腺癌的靶向诊断,联合LIFU可以协同治疗小鼠乳腺癌.

目的 制备叶酸修饰的克班宁聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸共聚物纳米粒(folic acid modified crebanine polyethylene glycol-polylactic acid hydroxyacetic acid copolymer nanoparticles,FA-Cre@PEG-PLGA NPs),并考察其体外释放及抗肿瘤活性.方法 以克班宁为模型药,用PEG-PLGA共聚物、叶酸等为材料,通过超声乳化-溶剂挥发法制备FA-Cre@PEG-PLGA NPs,采用激光粒度仪、透射电子显微镜和荧光显微镜对FA-Cre@PEG-PLGA NPs的粒径、ξ电位及形态进行表征,紫外光谱法测定并计算克班宁的包封率和载药量,比较FA-Cre@PEG-PLGA NPs和克班宁原料药72 h的体外释放规律,通过溶血实验考察二者生物学特性,CCK-8实验考察两者对正常肝L02细胞存活率的影响及对肝癌Bel-7402细胞体外增殖抑制作用.细胞划痕法考察纳米粒和原料药对肝癌Bel-7402细胞迁移能力的影响.荧光显微镜观察纳米粒在不同时间点对肝癌Bel-7402细胞的摄取情况.结果 FA-Cre@PEG-PLGA NPs 的平均粒径为(247.67+2.49)nm,多分散指数(polydispersity index,PDI)为0.139±0.027,ξ电位为(-9.40±0.54)mV,透射电子显微镜下呈圆球状核壳结构,荧光显微镜下观察纳米粒,其气化后明场呈蓝色光点、暗场呈红色光点.FA-Cre@PEG-PLGA NPs中克班宁的包封率为83.78％,载药量为67.78％.FA-Cre@PEG-PLGA NPs与克班宁原料药体外释放均符合Ritger-Peppas模型;安全性评价结果显示,FA-Cre@PEG-PLGA NPs相比于克班宁原料药在50～300 μg/mL内具有良好的生物相容性.FA-Cre@PEG-PLGA NPs对人正常肝L02细胞毒性较低,相比于克班宁原料药有一定的安全性.体外增殖抑制结果显示,两者对Bel-7402肿瘤细胞的增殖抑制率均呈现出剂量依赖性和时间依赖性,且FA-Cre@PEG-PLGA NPs联合超声辐照后对Bel-7402肝癌细胞具有更强的杀伤作用.细胞划痕实验表明,克班宁原料药、FA-Cre@PEG-PLGA NPs对Bel-7402肿瘤细胞迁移均有抑制作用,呈剂量依赖性,且纳米粒联合超声抑制细胞迁移效果更显著.细胞摄取实验表明,相同时间下超声联合纳米粒能有效增强肿瘤细胞的摄取.结论 成功制得FA-Cre@PEG-PLGA NPs,而且体外具有良好的缓释效果和抑瘤作用,为FA-Cre@PEG-PLGA NPs应用于肝癌的治疗研究提供实验依据.

目的 优化牛血清白蛋白修饰紫檀芪聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA]纳米粒(bovine serum albumin-modified pterostilbene PLGA nanoparticles,BSA-Pte-PLGA-NPs)处方,进行体外及体内评价.方法 纳米沉淀法制备BSA-Pte-PLGA-NPs,以包封率、载药量和粒径大小为评价指标,单因素结合Box-Behnken效应面设计法筛选BSA-Pte-PLGA-NPs最优处方.采用乳糖作为冻干保护剂将BSA-Pte-PLGA-NPs制备成冻干粉,并进行表征.SD大鼠分为紫檀茋原料药组、物理混合物组和BSA-Pte-PLGA-NPs组,按40 mg/kg(以紫檀芪计)剂量ig给药,测定血药浓度,计算主要药动学参数及相对生物利用度.结果 BSA-Pte-PLGA-NPs最佳处方为BSA质量浓度为19.0 mg/mL、载药比为8.8∶1、水相与有机相体积比为 8∶1.BSA-Pte-PLGA-NPs 包封率为(86.69±1.81)％,载药量为(9.02±0.37)％,粒径为(176.10±8.12)nm.紫檀芪在BSA-Pte-PLGA-NPs冻干粉中以无定型形式存在.BSA-Pte-PLGA-NPs在pH 1.2或pH 7.4磷酸盐缓冲液中体外释药过程均与Weibull模型拟合度最高.药动学结果显示,BSA-Pte-PLGA-NPs达峰时间(tmax)延后至(2.11±0.60)h,半衰期(t1/2)延长至(4.82±0.89)h,相对口服吸收生物利用度提高至3.24倍.结论 BSA-Pte-PLGA-NPs可显著促进紫檀芪口服吸收,值得进一步研究.

目的 粉防己碱(tetrandrine,TET)最近被证明是治疗骨质疏松症的药物.但是,它很难溶于水,只可溶于某些有机溶剂,因此,其临床应用受到限制.然而,当 TET 被聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly(lactic-co-glycolic)acid,PLGA]纳米粒包覆之后,可以解决其水溶性不足问题.所以,拟制备载 TET 的PLGA 纳米粒,并构建去势骨质疏松小鼠模型,研究 TET-PLGA 纳米粒(PLGA@TET NPs)对骨质疏松小鼠的治疗作用.方法 采用纳米沉淀法制备 PLGA@TET NPs,考察其包封率、载药量及粒径.采用双侧卵巢切除法构建骨质疏松症小鼠模型,12 周龄 C57BL/6 雌性小鼠随机分为 4 组(每组 8 只):假手术组、单纯卵巢切除组、去卵巢 + TET 组、去卵巢 + PLGA@TET NPs 组.各治疗组尾静脉分别注射含同等剂量 TET 的 100 μl 磷酸盐缓冲液(phosphate buffer solution,PBS),单纯卵巢切除组和假手术组尾静脉注射 100 μl 的 PBS,每周一次,连续 8 周.Micro-CT 检测骨小梁体积百分数(percent trabecular bone volume/per tissue volume,BV/TV),骨小梁数量(trabecular number,Tb.N)及骨小梁分离度(trabecular separation,Tb.Sp),以评价小鼠骨质疏松程度.用 HE 染色观察肝、肾组织损伤情况.抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色检测破骨细胞活性.结果 纳米沉淀法制备的 PLGA@TET NPs 粒径约为 236 nm,呈规则的球形.TET 的包封率和载药量分别为(85.34±0.12)%及(7.86±0.01)%.此外,Micro-CT 结果显示,与单纯卵巢切除组相比,去卵巢 + TET 组及去卵巢 + PLGA@TET NPs 组的 BV/TV 及 Tb.N 均增加(P<0.01),而 Tb.Sp 降低(P<0.01);并且去卵巢 + TET 组及去卵巢 + PLGA@TET NPs 组的 Tb.N 差异有统计学意义(P<0.05).HE 染色结果显示,各组织切片肝肾未见明显损害,说明纳米粒没有明显毒性.TRAP 染色结果显示,单纯卵巢切除组破骨细胞活性增加,去卵巢 + TET 组,去卵巢 + PLGA@TET NPs 组破骨细胞活性降低,并且纳米粒组和 TET 组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 制备的 PLGA@TET NPs 粒径较均一,包封率及载药量高.动物实验结果显示 PLGA@TET NPs 治疗组和游离 TET 组均可治疗骨质疏松症,但 PLGA@TET NPs 治疗组较游离的TET 组可以更好的预防或治疗骨质疏松症.

基于巨噬细胞与动脉粥样硬化病灶之间的天然亲和性,本文拟构建一种新型的巨噬细胞膜包裹聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)纳米粒(macrophage-membrane-coated PLGA nanoparticles,MPLNPs)仿生递药系统,并对其靶向动脉粥样硬化病灶的功能进行初步评价.采用沉淀法制备PLGA纳米粒(PLGANPs)及纳米膜挤压法制备MPLNPs,对其形态、粒径及携带功能蛋白进行表征;进一步通过体外细胞模型摄取和动物模型体内荧光成像考察其靶向性.结果表明,MPLNPs呈球形,具有明显的核/壳结构,平均粒径为(167±6.12) nm,表面保留了整合素α4β1 (integrin α4β1,α4β1);用脂多糖(LPS)诱导建立的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤模型及用ApoE-/-(载脂蛋白E敲除)小鼠建立的动脉粥样硬化模型血管损伤处均高表达血管细胞黏附分子-1 (VCAM-1)受体,制备的MPLNPs能有效识别VCAM-1受体并呈现出良好的体内外靶向性.本研究探索制备的细胞膜仿生纳米载体,有望为动脉粥样硬化及相关疾病治疗提供新思路.