目的:基于对研究组早期测序数据的分析，通过免疫组织化学和苏木精-伊红(HE)染色观察颗粒酶B(GrB)在胃癌组织中的表达。探讨GrB的表达与免疫标志物的相关性。方法:分析2013年1月至2017年12月在机构评审委员会批准的浙江省肿瘤医院确诊的153例胃癌患者的临床和病理资料。使用SPSS 22.0(IBM)和GraphPad Prism 9进行统计和数据分析。生存资料的分析采用Kaplan-Meier法和Log-rank检验。采用免疫组织化学和HE染色方法，检测GrB在胃癌患者肿瘤组织和配对癌旁组织中的表达，并进一步分析GC患者肿瘤组织中GrB表达水平与CD3、CD4、CD8的相关性。结果:153例患者中，男108例，女45例。诊断时的中位年龄为61岁(范围：28~86岁)。胃肿瘤以腺癌为主。Kaplan-Meier生存曲线显示，5年生存率为46.1%。此外，胃癌患者肿瘤组织中GrB高表达的5年生存率分别为51.7%和35.9%。胃癌患者癌旁组织中GrB高表达和低表达率分别为41.4%和49.0%。与癌旁组织比较，肿瘤组织中GrB的表达明显增加，差异有统计学意义( χ2＝19.895， P<0.01)。CD3在GrB高表达组和低表达组的表达差异有统计学意义( Z＝2.622， P<0.01)。CD8在GrB高表达组和低表达组的表达差异有统计学意义( Z＝2.186， P<0.01)。 结论:GrB可能在免疫细胞浸润中发挥重要作用。

目的:探讨香芍颗粒对脑卒中后抑郁（PSD）小鼠行为和内侧前额叶皮质（mPFC）少突胶质细胞前体细胞（OPCs）、少突胶质细胞（OLs）的影响。方法:80只C57BL/6小鼠按照随机数字表法分为假手术组、大脑中动脉闭塞（MCAO）组、PSD+PBS组和PSD+香芍组，每组20只。采用MCAO后轻度慢性不可预见性应激（CUMS）和孤独饲养的方法构建PSD模型。采用激光散斑成像、改良神经严重程度评分（mNSS）和TTC染色评估MCAO模型，采用体质量、糖水偏好实验和悬尾实验评估PSD模型。PSD建模后4组小鼠均灌胃28 d，假手术组、MCAO组、PSD+PBS组给予溶剂（PBS）0.2 mL灌胃，1次/d；PSD+香芍组按照60 mg/kg剂量将香芍颗粒溶于0.2 mL PBS中灌胃，1次/d。采用免疫荧光染色法检测mPFC中OPCs和OLs的数量，采用Western blotting实验检测mPFC中髓鞘碱性蛋白（MBP）和磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶/雷帕霉素靶蛋白（PI3K/AKT/mTOR）通路蛋白的表达。结果:（1）模型验证结果：激光散斑成像实验观察到小鼠在MCAO术前、术中及再灌注后手术侧大脑中动脉供血区脑血流的明显改变；MCAO组、PSD+PBS组、PSD+香芍组小鼠中TTC染色后均观察到典型的红色非梗死区和白色梗死区；MCAO组、PSD+PBS组、PSD+香芍组小鼠mNSS评分均>4分且差异无统计学意义（ P>0.05）；提示MCAO模型构建成功。PSD建模后治疗前，4组小鼠行为学评估结果显示，与假手术组和MCAO组相比，PSD+PBS组和PSD+香芍组小鼠体质量明显下降，糖水偏好度明显降低，悬尾不动时间明显延长，差异均有统计学意义（ P<0.05），提示PSD模型构建成功。（2）治疗后小鼠行为学实验结果：治疗28 d后，4组小鼠体质量、糖水偏好度和悬尾不动时间差异均有统计学意义（ P<0.05）。与PSD+PBS组相比，PSD+香芍组小鼠体质量和糖水偏好度明显上升，悬尾不动时间明显缩短，差异均有统计学意义（ P<0.05）。（3）免疫荧光染色及Western blotting实验结果：4组小鼠mPFC中OPCs（Olig2 +PDGFRa +）数量、增殖性OPCs（Ki-67 +PDGFRa +、EdU +PDGFRa +）数量、OLs（Olig2 +CC1 +）数量，以及MBP蛋白相对表达量、p-PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白相对表达量差异均有统计学意义（ P<0.05）。与PSD+PBS组比较，PSD+香芍组小鼠上述细胞数量以及蛋白相对表达量均明显升高，差异均有统计学意义（ P<0.05）。 结论:香芍颗粒可通过激活mPFC区的PI3K/AKT/mTOR信号通路促进OPCs增殖和OLs成熟，进而发挥治疗PSD的作用。

目的:从脂代谢中的关键蛋白过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)中的常见分型PPARγ/PPARα途径探讨精灵颗粒治疗动脉粥样硬化(AS)合并代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)可能的作用机制.方法:将6周龄SPF级雄性ApoE-/-小鼠随机分为模型组、阳性药物组和精灵颗粒低、高剂量组,每组8只,另取8只相同遗传背景同周龄雄性C57BL/6J小鼠作为空白对照组.ApoE-/-小鼠采用高脂饮食喂养17周建立AS合并MAFLD模型.高脂饲料喂养第6周起阳性药物组和精灵颗粒低、高剂量组每日分别灌胃给予相应剂量的阿托伐他汀钙混悬液或精灵颗粒混悬液,空白对照组与模型组每日灌胃等体积生理盐水,各组均连续灌胃12周.末次给药后12h,称取各组小鼠体质量;眼眶取血,分离血清,检测各组小鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量;处死小鼠,取肝脏,称取肝脏质量,计算肝指数;制作小鼠肝脏冰冻切片,苏木精-伊红(HE)染色观察各组小鼠肝脏病理形态;Western blot法和RT-qPCR法检测各组小鼠肝组织PPARγ、PPARα、胆固醇调节元件结合蛋白-1(SREBP-1)的蛋白及基因表达;RT-qPCR法检测各组小鼠肝组织炎症因子白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α基因表达.结果:模型组小鼠血清TC、TG、LDL-C水平以及肝指数均明显高于空白对照组(P＜0.01),HE染色显示肝脂肪变性明显.精灵颗粒高剂量组、阳性药物组小鼠血清TC、TG、LDL-C水平均明显低于模型组(P＜0.01),精灵颗粒低剂量组小鼠血清TG水平明显低于模型组(P＜0.01);精灵颗粒高剂量对上述指标的改善作用与阳性药物相当(P＞0.05),对TG水平的降低作用明显优于低剂量(P＜0.01).各治疗组小鼠肝指数与模型组比较数值略有下降但差异均无统计学意义(P＞0.05);各治疗组小鼠肝脂肪变减轻,炎性浸润改善.模型组小鼠肝组织PPARγ、SREBP-1蛋白及mRNA表达,IL-1β、TNF-α mRNA表达均明显高于空白对照组(P＜0.05,P＜0.01),PPARα蛋白及mRNA表达均明显低于空白对照组(P＜0.05,P＜0.01).精灵颗粒低、高剂量组小鼠肝组织PPARγ蛋白表达,各给药组小鼠肝组织SREBP-1蛋白、PPARγ mRNA表达,精灵颗粒高剂量组、阳性药物组小鼠肝组织SREBP-1 mRNA表达均明显低于模型组(P＜0.05,P＜0.01);精灵颗粒高剂量组、阳性药物组小鼠肝组织PPARα蛋白及mRNA表达均明显高于模型组(P＜0.05,P＜0.01).各给药组小鼠肝组织IL-1β、TNF-α mRNA表达均明显低于模型组(P＜0.01).精灵颗粒高剂量对上述指标的改善作用普遍与阳性药物相当,且相对于低剂量有一定优势.结论:精灵颗粒可能通过调控PPARγ/PPARα脂代谢途径,下调SREBP-1表达,抑制肝脏脂质蓄积及炎症反应发挥对AS合并MAFLD肝脂肪变的治疗作用.

目的:研究复方熊胆茵陈颗粒对代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)大鼠肠、脑及下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴的影响。方法:SD大鼠50只随机分为正常对照组、模型对照组、复方熊胆茵陈颗粒低剂量组、中剂量和高剂量组，正常对照组给予基础饲料喂养、模型对照组与中药组以高脂饲料喂养，为期6周。造模成功后复方熊胆茵陈颗粒低剂量组、中剂量组、高剂量组予以复方熊胆茵陈颗粒(按原药材计4.73、9.46、18.92 g·kg -1·d -1)灌胃，正常和模型组给予2 ml生理盐水灌胃，共4周。灌胃4周后取材，苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠肝、结肠组织和下丘脑组织病理变化，实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)、免疫组化检测结肠、下丘脑中促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质醇(CORT)的表达。 结果:HE染色结果显示，复方熊胆茵陈颗粒组大鼠肝细胞的脂肪空泡减少、肝索排列整齐、肝小叶清晰可见，较模型对照组明显改善；复方熊胆茵陈颗粒组大鼠结肠壁各层结构基本整齐，黏膜下层炎性细胞浸润减少，较模型对照组明显改善；复方熊胆茵陈颗粒组下丘脑神经细胞水肿减轻、固缩减少。实时荧光定量PCR检测结果显示，与模型对照组比较，中药中、高剂量组结肠组织CRH、ACTH、CORT降低(均 P<0.05)，中药高剂量组下丘脑组织CRH、CORT、ACTH表达降低(均 P<0.05)。免疫组化检测结果显示，复方熊胆茵陈颗粒能降低结肠组织和下丘脑组织中CRH、ACTH、CORT蛋白的表达(均 P<0.05)。 结论:复方熊胆茵陈颗粒能改善MAFLD大鼠肝组织损伤，减轻肠道炎症反应、改善肠黏膜屏障，减轻下丘脑神经细胞肿胀、固缩，减少MAFLD大鼠结肠及下丘脑中CRH、ACTH、CORT的分泌，提示复方熊胆茵陈颗粒治疗MAFLD的作用机制可能与改善HPA轴功能紊乱有关。

目的:采用网络药理学和实验验证的方法探索雷公藤治疗肾癌的作用机制。方法:利用中药系统药理学（TCMSP）数据库与分析平台筛选雷公藤的有效成分，并通过Swiss数据库预测雷公藤的靶点。自DisGeNET、GeneCards和OMIM数据库收集肾癌相关靶点，并通过Venny 2.1.0获得交集靶点。使用STRING数据库和Cytoscape软件绘制蛋白-蛋白相互作用（PPI）网络，并进行基因本体（GO）及京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析。通过Cytoscape软件构建"成分-靶点-通路"网络。诱导肾癌皮下移植瘤模型，将裸鼠随机分为对照组和治疗组，每组5只，治疗组灌胃615 mg/ml雷公藤溶液（将1 845 mg雷公藤颗粒溶于3 ml水）2.46 g/kg，10 μl/次，1次/d，共给药21 d；对照组灌胃等量生理盐水。每5天测量1次肿瘤体积，并采用酶联免疫法检测丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1（AKT1）、信号转导子与转录激活子3（STAT3）、肿瘤坏死因子（TNF）、T肿瘤蛋白p53（TP53）、JUN、丝裂原激活蛋白激酶8（MAPK8）和MAPK14表达情况。结果:筛选出雷公藤有效药物成分28个，潜在靶点117个。识别出13 425个相关疾病靶点，最后获得113个药物和疾病交集靶点。在PPI网络中，AKT1、STAT3、TNF、TP53、JUN、MAPK8和MAPK14是核心靶点。GO分析显示BP主要包括核受体活性、配体激活的转录因子活性、RNA聚合酶特异性DNA结合转录因子结合、核类固醇受体活性、肾上腺素能受体活性等；CC主要包括对激素的反应、细胞对脂质的反应、积极调节细胞迁移、对TNF的反应、炎症反应、细胞对激素刺激的反应、对缺氧的反应、对金属离子的反应等；MF涉及膜筏、膜微区、质膜的外侧、膜侧、质膜筏、突触前膜、小窝、转录调控复合体、突触后膜、突触膜等。KEGG分析显示雷公藤治疗肾癌涉及脂质和动脉粥样硬化、晚期糖基化终末产物-晚期糖基化终末产物受体（AGE-RAGE）、TNF、Toll样受体、磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶B（PI3K-Akt）和MAPK等信号通路。实验验证结果显示雷公藤治疗后肿瘤体积减小（ P<0.05），TP53蛋白表达增加（ P<0.001），AKT1、STAT3、TNF、JUN、MAPK8和MAPK14蛋白表达均降低（均 P<0.001）。 结论:预测了雷公藤治疗肾癌的靶点及信号通路，为进一步研究其保护机制及临床应用提供参考依据。

目的:观察中药利胆合剂中药配方颗粒剂的急性毒性反应，并评价其用药安全性。方法:采用随机数字表法将60只C57BL6/J小鼠分为正常对照组、溶媒组及给药组，每组雌雄各10只。参照《药物单次给药毒性研究技术指导原则》，采用最大给药量（MAD），给药组灌胃利胆合剂复方颗粒剂0.04 mL/g（42.8 g/kg），24 h内给药3次，每次间隔6 h以上；溶媒组灌服等体积纯净水；正常对照组不予任何处理。连续观察14 d，记录各组小鼠外观特征、行为活动、体质量变化及死亡数；第14天摘眼球取血，检测白细胞计数（WBC）、淋巴细胞计数（LYM）、中性粒细胞计数（NEU）、淋巴细胞比例（LYM%）、中性粒细胞比例（NEU%）、红细胞计数（RBC）、血红蛋白（Hb）、血小板计数（PLT）等血常规指标，以及丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、血尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）等生化指标；随后处死小鼠，采用苏木素-伊红（HE）染色观察肝、肾组织病理学改变，并计算心、肝、脾、肺、肾、胸腺等器官指数。结果:小鼠灌服利胆合剂复方颗粒剂进行急性毒性预实验，未获得半数致死量（LD 50），故采用MAD进行急性毒性实验。MAD实验期间3组动物均无死亡，其行为活动正常，肝肾组织病理学检查无明显改变。溶媒组、给药组与正常对照组比较小鼠体质量、血常规和血生化指标、器官指数等差异均无统计学意义（均 P>0.05）。其中正常对照雌雄组、溶媒雌雄组和给药雌雄组的体质量（g）在给药前分别为18.96±1.14、19.65±1.45、19.33±1.30、19.53±1.22、19.28±1.69和19.48±1.28，给药后14 d分别为27.69±0.81、28.19±2.22、27.77±1.00、27.88±1.85、27.92±1.33和28.07±1.93。 结论:利胆合剂复方颗粒剂口服毒性小，结合临床用药观察，能安全用于婴儿。

目的:从"肺与大肠相表里"理论出发,探讨大黄对呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)感染小鼠的治疗效果.方法:42 只Balb/c小鼠随机分为空白对照组、利巴韦林组、大黄低剂量组、大黄中剂量组、大黄高剂量组、病毒对照组,每组各 7 只.除空白对照组外,其余组小鼠通过滴鼻感染RSV造模,灌胃给药3d后通过Western bolt法检测小鼠肺组织中的病毒所带荧光蛋白(RSV-GFP)的表达;q-PCR检测小鼠肺组织病毒基因(RSV-G)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA的表达;苏木精-伊红(HE)染色观察小鼠肺病理学形态变化;冰冻切片观察肺组织病毒荧光情况;病毒空斑法检测小鼠肺匀浆病毒滴度.结果:与病毒对照组小鼠相比,大黄低剂量组小鼠RSV-GFP蛋白表达量降低(P＜0.05),差异有统计学意义;大黄各剂量治疗组的RSV-G、TNF-α mRNA相对表达量均低于病毒对照组小鼠(P＜0.05),差异有统计学意义;病毒对照组小鼠肺组织出现明显病理改变,肺间质增厚,组织毛细血管淤血,肺泡壁炎细胞浸润,各治疗组病理改变均有所减轻,肺泡壁炎细胞浸润减少;大黄低剂量组、利巴韦林组与病毒对照组相比,病毒荧光强度降低;大黄低剂量组、利巴韦林组小鼠肺部病毒滴度也较病毒对照组下降(P＜0.05),差异有统计学意义.结论:大黄免煎颗粒可抑制RSV在小鼠肺组织中复制,降低肺内炎症因子的表达,减轻炎症反应,提高小鼠生存质量.

目的:明确清肾颗粒(QSG)通过微小RNA-4516(miR-4516)/SIAH3/PINK1调节线粒体自噬而减轻大鼠肾纤维化的作用机制.方法:将雄性SD大鼠随机分为3组,包括正常组、模型组和QSG组,每组10只,予QSG水溶液灌胃,每天1次,每次4 mL,连续给药8周.检测各组大鼠血肌酐水平;苏木精-伊红(HE)和Masson染色检测各组大鼠肾脏病理损伤程度;Werstern blot检测各组大鼠肾脏组织中β-actin、PINK1、Parkin、SIAH3、VDAC1、Mfn1、Mfn2、OPA1、LC3B和P62蛋白表达水平;RT-qPCR检测大鼠肾脏组织中SIAH3的mRNA表达水平;透射电镜观察肾脏组织中线粒体损伤情况.制备QSG含药血清,转化生长因子β1(TGF-β1)诱导HK-2细胞纤维化模型,细胞分为:正常对照(NC)组、模型(MC)组、MC+miR-4516 mimics组、MC+miR-4516 NC+QSG组、MC+miR-4516 mimics+QSG组和MC+QSG组.CCK-8法检测各组细胞活力;Western blot检测各组细胞中E-cadherin和α-SMA蛋白表达水平;双萤光素酶报告基因实验验证miR-4516对SIAH3的调节;RT-qPCR检测miR-4516、SIAH3 mRNA和PINK1 mRNA的表达.结果:与模型组比较,QSG干预后大鼠肾组织及HK-2细胞纤维化减轻,SIAH3的mRNA表达水平显著降低(P<0.05),PINK1表达水平显著升高(P<0.05),肾组织自噬活跃,体外结果证实QSG可以提高miR-4516的表达水平,抑制SIAH3的mRNA表达进而促进HK-2细胞中PINK1表达,降低纤维化标志蛋白α-SMA蛋白的表达水平.结论:QSG可通过干预miR-4516水平而靶向调节SIAH3/PINK1轴,增强线粒体自噬,从而延缓大鼠肾纤维化的进展.

该研究通过颈背部注射D-半乳糖(200 mg·kg-1)6周构建卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)小鼠模型,小鼠随机分为正常(N)组、模型(M)组和七味癸宝颗粒组(A组,12.87 g·kg-1),从造模第11天开始,A组在每天造模的基础上用七味癸宝颗粒进行灌胃治疗32 d,M组和N组给予等体积生理盐水,采用代谢组学分析技术探讨七味癸宝颗粒治疗POF的作用机制.结果显示,与N组相比,M组小鼠双侧卵巢湿重降低,血清中LH和FSH水平升高,E2和PROG水平显著降低;服用七味癸宝颗粒治疗后,与M组相比,A组小鼠双侧卵巢湿重明显升高,血清中FSH和LH水平明显降低,E2水平明显升高.代谢组学分析发现N组和M组小鼠之间共鉴定出来55个差异代谢物(与N组相比,有14个上调,41个下调);在M组和A组之间共鉴定出82个差异代谢物(与M组相比,有56个上调,26个下调),其中有5个代谢物变化趋势与Nvs M组一致.在排除这5个代谢物后,着重关注七味癸宝颗粒干预后发生变化的77个代谢物.主要涉及组氨酸代谢,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢,甘油磷脂代谢通路.其中,肌肽、1-甲基-L-组氨酸、咪唑乙酸、胆碱、L-苏氨酸、β-羟基丙酮酸、磷脂酰胆碱和3-磷酸甘油为这3条代谢通路中的主要差异代谢物.所以,七味癸宝颗粒可能通过调节小鼠体内的氨基酸代谢和脂类代谢等对POF小鼠起到治疗作用.

通过大鼠体内实验探讨培土益肺颗粒抑制特发性肺纤维化(IPF)的作用机制.将50只SPF级Wistar雄性大鼠随机分为空白组与造模组,造模组大鼠通过经气管滴注5 mg·kg-1博莱霉素(BLM)法制备IPF大鼠模型后随机分为模型组,吡非尼酮组,培土益肺颗粒高、中、低剂量组.造模24 h后,培土益肺颗粒治疗组和阳性药组分别灌胃给药,模型组以等体积生理盐水灌胃,给药21 d后取材.苏木素-伊红(HE)染色和马松(Masson)染色观察肺组织病理形态变化,蛋白免疫印迹(WB)法检测蛋白激酶B(Akt)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及二者磷酸化蛋白和螯合体1(p62)等蛋白的表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测苄氯素1(Beclin-1)、微管相关蛋白1A/1B轻链3B(LC3B)、p62的mRNA表达,免疫组化法检测Bec-lin-1、LC3B蛋白的表达.结果显示空白组大鼠肺组织结构正常,胶原沉积不明显,模型组大鼠肺组织肺泡间隔增厚,有明显的炎性改变和胶原沉积;与模型组相比,培土益肺颗粒组和吡非尼酮组大鼠肺组织结构明显改善,炎症及胶原沉积明显减轻.与空白组比较,模型组肺组织中p62及其mRNA、p-Akt、p-mTOR蛋白表达显著升高,Beclin-1、LC3B及二者mRNA水平显著降低;与模型组比较,吡非尼酮组和培土益肺颗粒高、中剂量组肺组织中p62及其mRNA、p-Akt、p-mTOR表达显著降低,Beclin-1、LC3B及二者mRNA表达均显著升高.以上说明培土益肺颗粒可以通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路提高肺组织内自噬水平延缓IPF疾病的发展.