目的 动态表征急性脑缺血/再灌注(ischemia/reper-fusion,I/R)后小鼠皮层和海马部位神经细胞的损伤情况.方法 取体质量为25～28 g的雄性C57BL/6J小鼠,线栓法阻断小鼠的大脑中动脉,1 h后进行再灌注,制备急性I/R损伤小鼠模型.实验为Sham组、I/R-6 h组、I/R-24 h组和I/R-72 h组.采用Longa神经功能评分评估各时间点小鼠的神经功能;TTC染色检测脑梗死体积;苏木精-伊红染色观察脑组织病理损伤;尼氏染色检测神经细胞损伤;免疫荧光组织化学染色检测星形胶质细胞和小胶质细胞的活化情况,以及成熟神经元的损伤情况;透射电镜检测海马神经元的线粒体损伤;Western blot检测线粒体分裂-融合相关蛋白p-Drp1/Drp1、Mff、Fis1和OPA1的表达情况.结果 随着脑I/R时间的延长,小鼠的神经功能损伤、脑梗死体积,皮层和海马部位的神经细胞损伤、胶质细胞活化、神经元缺失、线粒体损伤逐渐加重;线粒体分裂相关蛋白表达逐渐增加,而线粒体融合相关蛋白表达逐渐降低.结论 随着脑I/R时间的延长,胶质细胞活化、神经元缺失、线粒体损伤等神经病理损伤逐渐加重,这可能与线粒体动力学失衡有关.

目的:探讨miR-29a调控横纹肌肉瘤(rhabdomyosarcoma，RMS)细胞A-204增殖的作用及分子机制。方法:人RMS细胞系A-204购自中国医学科学院细胞库。依据转染的DNA将细胞分为对照组、miR-29a组、E2F7组和miR-29a+E2F7组。采用CCK-8实验检测RMS细胞系A-204细胞的增殖活性，生物信息学方法预测miR-29a的潜在靶点，通过荧光素酶报告基因实验验证其靶向作用，反转录实时荧光定量PCR(reverse transcription-real time quantitative PCR，RT-qPCR)实验及蛋白质免疫印迹实验检测靶点分子E2F7的表达，流式细胞术检测细胞周期，细胞体外克隆形成实验检测细胞生长活性。结果:在RMS细胞系A-204细胞中，与对照组相比，miR-29a组的A-204细胞在转染后的48 h和72 h细胞增殖活性显著下降，差异具有统计学意义[(1.97±0.15)比(1.69±0.11)、(4.69±0.32)比(2.73±0.28)， t＝3.70、7.98， P值均<0.05)]。荧光素酶报告基因实验检测结果表明，与对照组相比，miR-29a组的E2F7荧光素酶活性显著下降，差异具有统计学意义[(44.90±5.62)比(11.67±4.55)， t＝7.96， P<0.05]。RT-qPCR及Western blot检测结果显示，与对照组相比，miR-29a组E2F7 mRNA及蛋白表达水平显著下调，差异具有统计学意义[(0.95±0.04)比(0.59±0.07)，(1.04±0.06)比(0.28±0.02)， t＝7.73、16.89， P值均<0.05]；流式细胞染色结果显示，与对照组相比，E2F7组细胞G1期细胞比例显著下降，G2/M期比例显著升高，差异具有统计学意义[%：(82.60±2.75)比(70.83±1.99)、(18.54±0.73)比(12.66±0.37)， t＝6.00、12.44， P值均<0.05]；细胞克隆形成实验结果表明，与对照组相比，E2F7组细胞克隆数显著下降，差异具有统计学意义[个：(59.70±3.90)比(68.80±4.30)， t＝3.01, P<0.05]。与miR-29a组相比，miR-29a+E2F7组A-204克隆形成数明显增加，G1期细胞比例显著升高，G2/M期细胞比例显著下降，组间差异具有统计学意义[(32.70±4.20)比(54.70±6.20)，(79.59±1.58)%比(90.12±2.34)%、(12.34±0.52)%比(5.59±0.28)%， t＝5.09、6.46、19.80， P值均<0.05]。 结论:mi R-29a可以通过下调E2F7的表达阻断RMS细胞有丝分裂，抑制细胞增殖。

极体是卵母细胞减数分裂的副产物，含有和卵细胞相对应的遗传物质，对极体进行遗传学检测可以推测出相应卵细胞的染色体和基因状态。极体活检具有对胚胎损伤小、伦理上易被接受等特点，是一种安全、有效的胚胎植入前遗传学检测（preimplantation genetic testing，PGT）取材方法。极体分析主要用于母源单基因遗传病、染色体非整倍体和染色体结构重排的PGT，在女方新发变异、家系成员缺失或生殖腺嵌合的单基因病检测、线粒体遗传病的阻断和高龄女性的染色体非整倍体筛查方面具有优势。与囊胚期检测相比，极体检测能够避免囊胚培养失败造成的胚胎浪费，提高胚胎利用率，可能对卵巢功能不全的女性更有利。此外，极体检测将检测时间前移，能够实现新鲜胚胎移植。本文对极体活检在PGT中的研究进行整理和归纳，旨在揭示其临床应用价值。

目的:观察微小RNA(microRNA，miR)-195调控结直肠癌中Notch通路配体Delta样配体4(Dll4)表达，探讨其作用靶点，明确miR-195通过Notch通路抗结直肠癌的分子机制。方法:收集北京大学人民医院胃肠外科2010年11月至2011年2月56例行结直肠癌根治术切除的标本，3、应用芯片技术筛选6例结直肠肿瘤组织和正常肠黏膜组织中micro-RNA的表达差异，用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-195在组织中相对表达量，应用固定化蛋白质印迹法(Western blot)检测56例结直肠癌组织及其邻近正常肠黏膜中Notch通路中Dll4蛋白表达；采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-195与Dll4 3’端非编码区(3’UTR)区的相互作用及活性，采用基因过表达miR-195(40 pmol/L)处理结肠癌细胞系SW480，运用流式细胞仪观察其对细胞凋亡的影响，Western blot检测通路相关蛋白Dll4、锯齿状蛋白1(Jagged1)、Notch受体胞内段(NICD)、细胞周期蛋白(Cyclin) D1、转录因子发状分裂相关增强子1(HES1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、核因子-κB(NF-κB)的表达。组间比较采用方差分析(ANOVA)，独立样本 t检验比较蛋白表达量差异，统计学方法分别采用独立样本 t检验、配对样本 t检验及单因素方差分析。 结果:结直肠癌组织中miR-195表达水平明显低于正常肠黏膜，而Dll4蛋白表达水平高于正常肠黏膜，分别为正常肠黏膜的0.34倍(0.341±0.008)及1.92倍(1.922±0.003) ( t＝3.116、2.374， P<0.05)，差异均有统计学意义，体外转入miR-195后，Dll4荧光素酶活性低于对照组(0.442±0.010、1.010±0.002， t＝4.305， P<0.01)，差异有统计学意义，miR-195和γ-分泌酶抑制剂(DAPT)都可阻断Notch1通路，抑制SW480细胞的增殖(3.1%比17.3%， t＝4.232， P<0.01)，差异有统计学意义，诱导其凋亡(13.7%比48.3%， t＝8.355， P<0.01)，两者具有协同作用( t＝7.474， P<0.01)，差异有统计学意义。同时Notch通路相关蛋白NICD、Hes-1随作用时间延长而表达下降。 结论:结直肠癌中miR-195及Dll4呈拮抗性表达，与其病理学特征密切相关，Dll4为miR-195调控的下游靶基因，miR-195通过负性调控Dll4/Notch信号通路抗结直肠癌。

目的:根据扫描显微镜搭配玻片扫描软件(Metafer 4)，在松弛素B(CB)阻断微核法试验中识别和鉴定微核，建立 60Co γ射线照射剂量与人外周血淋巴细胞微核率的剂量-效应曲线。 方法:采集4名健康人(2男2女)肘静脉血样品，用0、0.25、0.5、1、2、3、4和5 Gy 60Co γ射线(剂量率0.74 Gy/min)离体照射，胞质分裂阻断微核法培养、收获和制备标本玻片，人工智能彩色识别分析系统分析并记录双核细胞和微核数。应用CABAS软件拟合基于微核率的剂量-效应曲线。2份照射后的盲样进行生物剂量估算验证。 结果:在0～5 Gy剂量范围内，拟合的微核剂量-效应曲线符合二次多项式模型，回归方程为 y＝0.032 1 D2＋0.023 7 D＋0.012 7( R2＝0.998， D为剂量)。用拟合曲线对验证样本的剂量估算结果与实际照射剂量基本接近。 结论:成功建立基于人工智能识别微核的剂量-效应曲线，为估算辐射生物剂量提供了可行方法。

目的:基于Notch信号通路探讨补肺益肾方（BYF）抑制香烟烟雾提取物（CSE）诱导气道上皮细胞黏液高分泌的机制。方法:体外培养人气道上皮细胞株16HBE，取对数生长期细胞用于实验。①干预条件筛选实验：将16HBE细胞分组，分别采用噻唑蓝（MTT）比色法和酶联免疫吸附试验（ELISA）检测不同浓度CSE（2.5%、5%、10%、20%、40%）、不同浓度BYF含药血清（5%、10%、20%、40%）及不同浓度Notch信号通路阻断剂DAPT（5、10、20、40 μmol/L）对细胞活性与分泌黏蛋白5AC（MUC5AC）水平的影响，并设空白对照组，筛选出制备CSE诱导细胞黏液高分泌模型及BYF、DAPT干预的最佳条件。②干预实验：将16HBE细胞分为4组。空白对照组不给予任何处理；CSE模型组采用10% CSE诱导16HBE细胞24 h制备黏液高分泌模型；CSE+BYF组和CSE+DAPT组在加入10% CSE的同时分别给予10% BYF或20 μmol/L DAPT干预24 h。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）检测细胞中MUC5AC、Notch3和多毛分裂增强子1（HES1）的mRNA表达；采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测细胞中Notch3和HES1的蛋白表达。结果:①干预条件筛选实验结果：与空白对照组比较，10% CSE诱导24 h是既不影响细胞活性又可增加MUC5AC分泌的制备细胞黏液高分泌模型的最佳条件；而10% BYF和20 μmol/L DAPT为最佳干预条件。②干预实验结果：与空白对照组比较，CSE模型组细胞中MUC5AC、Notch3、HES1的mRNA表达及Notch3、HES1的蛋白表达均显著升高，说明CSE可能通过促进Notch3、HES1信号活化，诱导16HBE细胞分泌黏蛋白；与CSE模型组比较，BYF和DAPT均可显著下调细胞中MUC5AC、Notch3、HES1的mRNA及蛋白表达〔MUC5AC mRNA（2 -ΔΔCT）：1.03±0.13、0.96±0.05比1.35±0.07，Notch3 mRNA（2 -ΔΔCT）：1.10±0.14、1.10±0.02比1.31±0.15，HES1 mRNA（2 -ΔΔCT）：1.26±0.10、1.14±0.15比1.45±0.08，Notch3蛋白（Notch3/GAPDH）：0.10±0.03、0.16±0.03比0.31±0.09，HES1蛋白（HES1/GAPDH）：0.37±0.06、0.34±0.08比0.50±0.05，均 P<0.05〕。 结论:BYF可抑制CSE诱导的16HBE细胞黏液高分泌，其机制与抑制Notch信号通路活化有关。

目的 对放射工作人员的微核率进行分析,为长期接受低水平电离辐射的放射工作人员提供更加准确的职业健康监护依据.方法 放射组为在岗期间接触射线的353名放射工作人员,对照组为上岗前尚未接触射线的41名放射工作人员.采用胞质分裂阻断微核法测定微核率.结果 放射组平均微核率明显高于对照组平均微核率(t=-2.95,P＜0.05).放射组中,随着年龄的增加,微核率逐渐增加,差异具有统计学意义(F=8.36,P＜0.05).10～年和30～年工龄组人员微核率明显高于＜10年工龄组人员的微核率(x2=-44.79,-60.47,P＜0.05).女性微核率明显高于男性微核率(t=3.93,P＜0.05);放射诊断学组和探伤组的微核率明显高于对照组(t=3.51,3.65,P＜0.05).结论 微核率在长期接触低水平电离辐射的放射工作人员中有所增加,有必要进一步加强对放射工作人员特别是最大的辐射暴露工作者群体医务人员的职业健康监护和辐射防护教育.

目的 探讨参桃软肝方抗肝癌的作用及机制.方法 四甲基噻唑蓝(Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测参桃软肝方对人肝癌细胞HepG2活性及胞内磷脂酰肌醇激酶/蛋白激酶B/丝裂原活化蛋白激酶(Phosphatidylinositol-3-kinase/Protein Kinase B/mitogen-activated protein kinase,PI3K/Akt/MAPK)抑制剂:LY294002、Atk抑制剂(Akt inhibitor,Akti)、分裂原活化抑制剂(MEK inhibitor,MEKi)、c-Jun氨基末端蛋白激酶抑制剂(c-Jun N-terminal protein kainse inhibitor,JNKi)、凋亡抑制剂(Z-VAD)、自噬抑制剂(Wortmanin)、铁死亡抑制剂(Ferrostatin-1)、细胞坏死抑制剂(Necrostatin-1)对参桃软肝方抑制人肝癌细胞HepG2活性的影响;乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)法检测参桃软肝方对人肝癌细胞HepG2的毒性作用;实时荧光定量(Real-time PCR)检测参桃软肝方对人肝癌细胞HepG2焦亡标志物白介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)的影响;蛋白质印迹法(Western blot)检测参桃软肝方对人肝癌细胞HepG2中Akt/ERK信号通路关键蛋白Akt、ERK、P-ERK蛋白表达的影响,凋亡信号通路关键蛋白半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶(Caspase 3)、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl2)、Bcl2-Associated X的蛋白质(Bax),细胞焦亡标志物卵裂半胱天冬酶1(Cleavaged Caspase-1)蛋白表达的影响.结果 参桃软肝方及醇提上清和沉淀都能有效抑制人肝癌细胞HepG2的活性(P<0.05),LY294002、Wortmanin、Akti、MEKi、JNKi、Z-VAD、Ferrostatin-1、Necrostatin-1对参桃软肝方、醇提上清和沉淀抑制人肝癌细胞HepG2活性没有显著的影响;参桃软肝方促进人肝癌细胞HepG2中LDH的释放,引起细胞毒性;参桃软肝方抑制人肝癌细胞HepG2焦亡标志物IL-1β和Cleavaged Caspase-1的表达;参桃软肝方降低人肝癌细胞HepG2中Akt的蛋白表达,升高Caspase3蛋白表达量.结论 参桃软肝方具有抑制肝癌细胞活性、抗肝癌的作用,其作用机制可能与自噬、坏死性凋亡等程序性死亡方式及PI3K/Akt/MAPK信号传导无关;能抑制Akt的表达和促进Caspase3表达有关.同时,能降低焦亡标志物IL-1β和Cleavaged Caspase-1表达,很可能通过阻断细胞焦亡过程起作用.参桃软肝方抗肝癌活性优于总提物醇提上清和沉淀,醇提上清和沉淀很可能存在协同抗肝癌的作用.

目的 探讨有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPKs)是否介导缺血后大鼠星形胶质细胞水通道蛋白4(AQP4)的表达.方法分离培养新生Sprague-Dawley大鼠脑星形胶质细胞.第2代细胞分成对照组、氧糖剥夺(OGD)组和阻断组.后两组复制OGD 5 h后复氧模型,12 h后阻断组分别换入含U0126(1 μmol/L和10 μmol/L,U1组和U10组)、SP600125(1 μmol/L和10 μmol/L,SP1组和SP10组)和SB203580(1 μmol/L和10 μmol/L,SB1组和SB10组)的培养液.复氧后0.5 h、1 h、1.5 h、2 h、3 h、4 h、8 h和12 h检测OGD组细胞体积,复氧后0.5 h、1 h、1.5 h、8 h和12 h Western blotting法检测OGD组AQP4表达;复氧后24 h,检测各组乳酸脱氢酶(LDH)活性,Western blotting法检测各组AQP4,磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)、c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)和p38 MAPK(p-p38 MAPK)表达.结果 复氧后1.5 h、2 h、3 h和4 h时,OGD组细胞体积较对照组显著增大(P<0.001),OGD组AQP4水平较对照组显著升高(P<0.001),并在复氧后1.5 h达到峰值.OGD组p-ERK、p-JNK和p-p38 MAPK、AQP4水平较对照组显著增加(P<0.001),阻断组p-ERK、p-JNK和p-p38 MAPK较OGD组显著下降(P<0.001),SB10组AQP4较OGD组显著下降(P<0.001).除SP1组、SB1组外,各干预组LDH活性较OGD组显著下降(P<0.01),SB10组最低(P<0.001).结论 MAPK信号通路,特别是p38 MAPK可介导大鼠星形胶质细胞AQP4蛋白表达,加重细胞坏死.

目的 利用正常人源肝细胞(HepaRG)和高内涵技术检测肝毒性标志物,并结合微核试验和单细胞凝胶电泳试验建立体外细胞毒性和遗传毒性的快速筛选平台.方法 选取适当的荧光探针Hoechst33342、DCFH-DA、Fluo4-AM、MitoTracker(R) Red CMX Ros联合高内涵技术研究不同大黄蒽醌类单体(AQs)对HepaRG细胞活性氧簇(ROS)、胞内Ca2+含量及线粒体膜完整性等肝毒性标志物的影响,并开展高内涵法胞质分裂阻断法微核试验和高通量彗星电泳试验,综合评价AQs致肝细胞毒性及染色体、DNA损伤情况.结果 与对照组比较,HepaRG细胞经25.0 μg/mL大黄素、12.5和25.0μg/mL芦荟大黄素、50和25.0 μg/mL大黄酚处理24h后,胞内ROS含量显著增多;12.5和25.0 μg/mL芦荟大黄素和50.0μg/mL大黄酸可引起胞内Ca2+含量显著增多;大黄素25.0 μg/mL、芦荟大黄素25.0 μg/mL、大黄酚50.0和25.0 μg/mL、大黄酸50.0和25.0 μg/mL组导致线粒体明显损伤(P＜0.05、0.01).与对照组比较,25.0 μg/mL大黄素诱导微核率、尾DNA含量和彗星尾距(OTM)数值均显著升高(P＜0.05、0.01);50.0 μg/mL大黄酚给药72 h后微核率显著升高(P＜0.01).结论 AQs的研究结果与现有文献报道基本相符.本研究成功建立肝细胞毒性和遗传毒性的联合快速筛选模型,有助于药物研发早期的毒性筛选.