目的 制备靶向抗T细胞免疫球蛋白-ITIM结构域蛋白(T cell immune receptor with Ig and ITIM domains,TIGIT)和脊髓灰质炎病毒受体相关免疫球蛋白结构域蛋白(Poliovirus re-ceptor-related immunoglobin domain-containing protein,PVRIG)双特异抗体,探究其体外生物学活性.方法 用PVRIG人源化抗体hP1和TIGIT人源化抗体hT1构建KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV双特异性抗体,将纯化得到KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV抗体进行SDS-PAGE凝胶电泳、热稳定性检测和稳定性分析;采用流式细胞术(Fluorescence activated cell sor-ting,FACS)检测双特异性抗体的结合活性;采用生物干涉膜技术(Bio-layer interferometry,BLI)检测双特异性抗体亲和力;用 Jurkat-NFAT-Luc2-PD1-TIGIT-PVRIG 细胞和 293T-OS8-PVRL2-PDL1细胞中检测双特异性抗体KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV对于TIGIT/PVRIG靶点的阻断作用;采用CMV recall assay法检测IFN-r在上清液中的浓度.结果 SDS-PAGE凝胶电泳结果显示KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV双特异性抗体纯度＞95％;Tm结果为Tm1:66.34,Tm2:80.95.采用SEC-HPLC对双特异性抗体KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV进行稳定性分析,其纯度均＞90％.KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV抗体和PVRIG的人源化抗体hP1与293T-PVRIG cell line 的 EC50 分别为 0.168 70 μg/mL 和 0.038 65 μg/mL,与 293T-cyno-PVRIG cell line 的 EC50 分别为 0.037 14 μg/mL 和 0.031 98 μg/mL,与 Human PVRIG Protein,His Tag的亲和力为 1.74E-10M 和 1.69E-10M.KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV 抗体和 TIGIT 的人源化抗体 hT1 与 293T-PVRIG cell line 的 EC50 分别为 0.070 27 μg/mL 和 0.031 21 μg/mL;与293T-cyno-TIGIT cell line 的 EC50 分别为 0.020 28μg/mL 和 0.028 22 μg/mL;与 Human TIGIT Protein,His Tag 的亲和力为 8.50E-10M 和 8.47E-10M.KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV 抗体具有阻断 PD1/PDL1/TIGIT/PVRIG 相互作用活性,且 KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV 的 EC50为 0.007 μg/mL,优于单独人源化抗体 hT1(EC50为 0.013 μg/mL)和 hP1(EC50为 0.048 μg/mL)的作用.在含 pp65 peptide 条件下 KY-TIGIT-h1gG4M-PVRIG-SCFV 抗体分泌 IFN-r 为 349.72 pg/mL,明显高于其他抗体.结论 KY-TIGIT-hlgG4M-PVRIG-SCFV抗体具有高亲和力和良好的生物学活性,有望开发成为肿瘤免疫治疗的抗体药物.

目的:探讨脊髓灰质炎病毒受体（PVR）对胃癌患者预后的价值。方法:采用生物信息学方法分析PVR mRNA在胃癌组织及癌旁正常组织中的表达及其与预后的关系。回顾性分析73例接受手术治疗的胃癌患者的临床病理资料。采用免疫组化方法检测胃癌组织及癌旁正常组织中PVR的表达水平，分析其与胃癌患者临床病理特征的关系。结果:胃癌组织中PVR mRNA的表达水平高于癌旁正常组织（ P<0.05）。PVR的表达与胃癌患者的临床预后有关，PVR的表达越高，胃癌患者的总生存率（ P=0.011）和无病生存率（ P=0.032）越低。免疫组化染色结果显示，PVR在胃癌组织中高表达，主要表达于细胞质，而在正常胃组织中不表达或低表达。PVR的高表达与肿瘤大小（ P=0.001）和术后3年复发（ P=0.013）相关。 结论:PVR在胃癌组织中过度表达，PVR高表达的胃癌患者预后较差。PVR水平对胃癌患者的预后评估具有重要价值。

T细胞免疫球蛋白和免疫受体抑制性基序(immunoreceptor tyrosine-based inhibitory motif，ITIM)结构域(T cell immunoglobulin and ITIM domain, TIGIT)是脊髓灰质炎病毒受体家族中的一种抑制性受体，高表达于自然杀伤细胞、调节性T细胞和滤泡辅助T细胞，通过与CD226分子竞争性结合CD155及CD112发挥其抑制作用。最新研究显示，TIGIT高表达与移植物抗宿主病(graft-versus-host disease, GVHD)的低发生率密切相关，因此进一步研究TIGIT分子发挥抑制作用的具体机制，对GVHD的免疫治疗具有重大意义。文章介绍了TIGIT分子的结构及抑制功能，并对TIGIT分子在GVHD中作用的最新研究进展进行综述，旨在为TIGIT在GVHD中的应用提供一定的理论依据。

目的 探讨脊髓灰质炎疫苗猴体神经毒力试验毒力返强对神经免疫反应的影响及病理机制.方法 Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗(Vero细胞)的原液(≥7000 lgCCID50/L)以及10-1稀释各型脊髓灰质炎疫苗采用脑内法进行神经毒力试验,观察脊髓灰质炎的病理变化,并利用免疫组织化学法检测脊髓灰质炎病毒受体CD155以及CD4+T淋巴细胞、CD20+B淋巴细胞和CD68+小胶质细胞的分布.结果 发生脊髓灰质炎的猴体出现脊髓炎症细胞浸润,少量神经元变性,脊髓神经元变性坏死、卫星现象、噬神经细胞现象、血管周围炎症细胞袖套状浸润和胶质细胞增生;主要为CD4+T淋巴细胞、CD20+B淋巴细胞和CD68+小胶质细胞大量浸润在血管袖套和增生的胶质结节中;在发生和未发生脊髓灰质炎的猴体中,CD155分布未见明显差别,均表达在神经元和胶质细胞,而血管内皮细胞未见表达.结论 脊髓灰质炎疫苗毒力返强导致典型病毒性脑脊髓炎.

程序性死亡蛋白-1和程序性死亡蛋白配体-1(programmed death-1/programmed death-ligand 1,PD-1/PD-L1)作为一种抑制T细胞活化的调节性免疫检查点分子,在肿瘤的免疫治疗发挥着重要的作用.近年来,越来越多的靶向治疗药物得到研发,但是单一免疫检查点阻断剂并不能很好的抑制肿瘤的发生,肿瘤逃逸现象时有发生,而靶向药物的联合治疗可作为抑制肿瘤发生发展的重要手段之一.属于 1型脊髓灰质炎病毒受体的抑制性受体 T 细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序(immunorecept-or tyrosine-based inhibition motif,ITIM)结构域(T cell immunoglobulin and ITIM domain,TIGIT)是近年靶向药物治疗研究的热点,其与PD-1/PD-L1的联合治疗可减少肿瘤逃逸,更有效地抑制肿瘤的发生.因此,本文就TIGIT和PD-1/PD-L1双重阻断途径在肿瘤免疫治疗中的研究进展进行归纳总结,旨在肿瘤免疫治疗提供一定的理论依据.

肠道病毒属于小核糖核酸病毒科,包括脊髓灰质炎病毒等多种重要人类病原体,已成为全球公共卫生安全的重大威胁之一.固有免疫是机体早期抵御病毒感染的重要防线.不同肠道病毒在进化中已经具备了多种途径躲避免疫识别或诱导固有免疫系统失活.本文重点对肠道病毒调控宿主固有免疫的相关分子机制进行综述,系统整理了肠道病毒逃避干扰素依赖与干扰素非依赖的抗病毒固有免疫防御的分子特征与作用规律,为肠道病毒致病机制的探究和抗病毒药物的研发提供参考.

RIVEM是一款通过球面投射的方式在平面上绘制二十面体病毒衣壳结构的软件工具,因为开发时间较早,目前无法直接识别RCSB PDB数据库中绝大多数肠道病毒的三维结构文件.为此本研究发展了将RCSB PDB坐标体系转换到RIVEM PDB坐标体系的算法,开发了基于RIVEM的人肠道病毒衣壳表面结构绘制流程,并将该流程应用到PSGL-1和SCARB2这两个重要的肠道病毒受体的研究中.结果显示:构建的流程成功的绘制了RCSBPDB数据库中人肠道病毒的衣壳表面结构.与PyMol相比,RIVEM绘制的衣壳表面结构具有信息量更大,更便于研究衣壳与受体和抗体之间的相互作用关系等优点.对于广大非结构生物学专业的病毒学研究者来说,该流程能够促进RIVEM在衣壳与受体、抗体和抗病毒药物的相互作用、抗原表位、结构蛋白变异的监测以及肠道病毒致病机制等研究领域中的应用.该流程也能直接推广到包括脊髓灰质炎病毒、甲肝病毒和口蹄疫病毒在内的其他小RNA病毒的研究中.

目的 探讨调节性T细胞及A20蛋白在自身免疫性肝炎患者中检测的意义及相关性.方法 56例自身免疫性肝炎患者为观察组,另选择同期进行健康体检的健康志愿者50例为对照组,比较2组患者临床生化指标、外周血中Treg细胞的频数变化及其抑制性功能分子CD39、脊髓灰质炎病毒受体(TIGIT)的表达情况、单个核细胞中A20,TNF-α,转录因子蛋白NF-κB mRNA表达水平之间的差异,分析调节性T细胞及A20蛋白与丙氨酸氨基转氨酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转氨酶(AST)、球蛋白及免疫球蛋白水平相关性.结果 对照组患者ALT、AST、ALP、IgG、IgM和IgA水平均显著低于观察组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组外周血中Treg细胞百分比显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组患者TIGIT表达阳性率低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),2组患者CD39表达差异无统计学意义(P>0.05);观察组患者外周血单核细胞A20 mRNA水平、TNF-α、NF-κB mRNA表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);A20蛋白水平与ALT、AST、IgG、IgM、IgA呈正相关(r值分别为:0.621、0.617、0.712、0.651、0.618,P<0.05);调节性T细胞水平与ALT、AST、IgG、IgM、IgA呈负相关(r值分别为:-0.721、-0.718、-0.628、-0.619、-0.622,P<0.05).结论 检测调节性T细胞及A20蛋白表达水平有助于对AIH进行诊断,A20蛋白水平与临床指标呈显著正相关;调节性T细胞水平与临床指标呈显著负相关.

肠道病毒包括脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒和肠道病毒71型等类型,可引起多种严重的肠道外疾病.鉴于肠道病毒感染的巨大危害性,肠道病毒研究,尤其肠道病毒受体研究也受到关注.近年来,肠道病毒的经典受体的新功能和新受体不断被发现,应用重组肠道病毒受体分子预防和治疗肠道病毒感染也取得了一定的进展,现就肠道病毒受体分子的结构、功能、机制及应用等方面进行综述.

目的 评价辽宁省脊灰实验室2015-2018年所用细胞系的质量控制情况,为急性驰缓性麻痹(acute flaccid paraly-sis)病例监测提供可靠的质量保证.方法 以辽宁省脊灰实验室2013年制备的脊灰病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型质量控制(Laborato-ry quality control standard,LQC)株为标准毒株,转脊灰病毒受体的小鼠肺细胞(L20B细胞)和横纹肌肉瘤细胞细胞(RD细胞)由中国疾病预防控制中心脊灰实验室提供.支原体的检测用PCR方法,细胞敏感性检测用标准毒株滴定法.结果辽宁省脊灰实验室2015-2018年使用的L20B和RD细胞系支原体检测均为阴性,两种细胞系的病毒滴度与LQC参考值比较波动幅度均在±0.5 logCCID50/0.1 ml以内.结论 2015-2018年辽宁省脊灰实验室使用的细胞系状态稳定,无支原体污染,对脊灰病毒敏感性良好,为脊灰实验室网络运转和辽宁省AFP病例监测提供了准确、可靠的病毒学依据.