目的:探讨单采血小板体外储存过程中其微小RNA(miRNA)的表达水平。方法:选择2022年3月至2023年5月成都市血液中心采集的15份单采血小板为研究对象。15份单采血小板采集自15例健康状况良好，符合《血站技术操作规程》(2019版)采集要求的单采血小板献血者。血小板捐献者的中位年龄为30岁(22，40岁)；男性捐献者为8例，女性为7例。将单采血小板置于恒温震荡保存箱中，温度(22±2)℃，振荡频率60 Hz条件下储存，分别于储存第1天(采集当天)、第5天和第7天的上午10点留取血小板标本3～5 mL。应用血细胞分析仪检测血小板常规指标，实验室pH计测定血小板pH值，流式细胞术(FCM)测定血小板CD62P表达水平，实时荧光定量PCR法测定miRNA-126、-145、-150、-197、-223的相对表达水平。血小板标本存储1、5、7 d时各项指标比较采用重复测量方差分析；采用Spearman相关性分析血小板miRNA表达水平与储存时间的相关性。本研究遵循的程序符合成都市血液中心伦理委员会要求[批准文号：伦审(研)2020年第04号]，并且于血小板捐献前与所有捐献者签署《献血者知情同意书》。结果:①随着储存时间延长，本组15份单采血小板标本的血小板压积(PCT)增大[储存1、5、7 d时分别为(0.68±0.21)%、(0.89±0.13)%、(0.99±0.17)%]，大血小板比例(P-LCR)上升[储存1、5、7 d时分别为(20.5±6.0)%、(26.0±3.4)%、(30.4±2.8)%]；pH值下降[储存1、5、7 d时分别为(7.2±0.1)、(7.1±0.2)、(7.0±0.2)]，并且差异均有统计学意义( F＝5.60， P＝0.007； F＝9.12， P＝0.001； F＝5.44， P＝0.004)；其余指标分别比较，差异均无统计学意义(均 P>0.05)。②单采血小板标本储存1、5、7 d时，其CD62P表达水平分别为(6.3±2.9)%、(22.0±7.3)%和(38.4±12.1)%。随着储存时间延长，血小板标本的CD62P表达水平升高，并且差异均有统计学意义( F＝36.16， P<0.001)。③本组血小板标本随着储存时间的延长，其miRNA-126、-150、-197相对表达水平增加，而miRNA-145和-223相对表达水平下降；并且差异均有统计学意义( F＝88.58、32.64、33.59、35.42、22.91，均 P<0.001)。④本组单采血小板标本的储存时间与其miRNA-126、-150和-197的表达水平呈正相关( r＝0.811、0.812、0.856，均 P<0.001)，而与miRNA-145和-223的表达水平呈负相关( r＝－0.720、－0.767，均 P<0.001)。 结论:单采血小板在体外储存过程中，其miRNA-126、-145、-150、-197和-223表达水平发生明显变化，尤其是miRNA197。

目的 研究添加不同浓度红景天苷(salidroside,Sal)对血小板体外保存期间形态、代谢及活化等影响.方法 将血液成分分离机采集的每份单采血小板均分为5袋,空白对照组(A组)不做任何添加,另外4袋中分别加入不同浓度的Sal溶液,终浓度为 5 μmol/L(B 组)、25 μmol/L(C 组)、40 μmol/L(D 组)和 50 μmol/L(E 组),(22±2)℃ 振荡保存,分别在保存的第1、3、5、7、10、14天抽样,进行血小板参数检测、血气生化检测、血栓弹力图试验、流式细胞术检测和sCD40L浓度检测.结果 各组单采血小板的血小板计数随保存时间延长无明显变化(P＞0.05),平均血小板体积(MPV)在保存前10 d内无显著变化,14 d时均显著增大(P＜0.05),血小板体积分布宽度(PDW)随保存时间延长均有不同程度的变化(P＜0.05);在相同保存时间,各组之间单采血小板计数、MPV、PDW值比较无明显差异.各组单采血小板保存7 d内的pH值明显降低(P＜0.05),LAC值不断升高(P＜0.05),保存14 d的GLU值明显降低(P＜0.05).保存10天内,各组单采血小板的TEG MA值无明显差异,第14天明显低于第1、3、5、7、10天(P＜0.05).保存期间各组单采血小板CD62P表达率不断升高,均在第10天达峰值(P＜0.05),第14天下降(P＞0.05);在保存第5天和第7天,各实验组与A组相比CD62P表达率均有显著差异(P＜0.05).在保存前期,各组血小板sCD40L浓度逐渐升高,第5天达峰值,随后逐渐降低,第14天达最低值,与第3天、第5天相比有显著差异(P＜0.05);在相同保存时间,各组间sCD40L表达率无明显差异(P＞0.05).结论 在单采血小板中添加Sal并不影响血小板正常功能,但可以明显抑制血小板活化,可能有助于减轻血小板储存损伤.

血小板在止血、炎症、肿瘤转移、伤口愈合及防御反应中起到了重要作用,然而其常规保存需要特定温度且保存时间一般为5～7d,同时,血小板储存损伤和细菌滋生会影响其保存时间及保存质量.此外,常规输注后会产生非溶血性发热、过敏、循环超负荷及输血相关急性肺损伤等严重不良反应.这些都限制了血小板制品在临床中的应用.但是,与血小板保存相关的添加剂可以降低它们发生的可能性.因此,我们就近年来血小板保存相关添加剂的研究现状,以及改善血小板储存损伤、提高血小板保存特性等方面进行了综述.

目的 探讨正常机采血小板储存过程中伴随储存时间延长长链非编码RNA(lncRNA)小核仁RNA宿主基因9(SNHG9)的表达变化及意义.方法 收集符合临床血小板输注治疗标准的正常机采血小板32份,保存于专用(22±2)℃恒温振荡保存箱内,在不同储存时间(1、3、5、7、9 d)通过外观、血小板计数、红细胞残留量计数、白细胞残余量计数、pH值及细菌培养检测血小板质量;用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测SNHG9在同一机采血小板样本不同储存时间的表达量,分析其对血小板储存损伤(PSL)的影响及意义.结果 在第1、3、5、7、9天SNHG9表达量伴随储存时间延长逐渐增高,数据总体存在统计学差异(H=93.073,P＜0.001),差异有统计学意义(P＜0.05).进一步对不同天数之间SNHG9表达量进行两两多重比较,第1天与第3天校正后的P值是0.144,差异无统计学意义(P＞0.05):第1天和第5天,第1天和第7天,第1天和第9天校正后的P值均小于0.001,差异有统计学意义(P＜0.05);第3天和第5天(P=0.031),第3天和第7天,第3天和第9天(P＜0.001)校正后差异有统计学意义.结论 用于临床治疗的正常机采血小板伴随储存时间延长,第5、7、9天样本中SNHG9表达量比第1天明显增高,SNHG9对血小板储存条件敏感,有可能成为PSL潜在的生物学标记物.

目的 探讨一氧化氮(NO)供体S-亚硝基谷胱甘肽(GSNO)对储存期内机采血小板细胞凋亡的影响.方法 6份机采血小板,每份分装到2个血小板保存袋,随机分到实验组和对照组,实验组加入GSNO(终浓度为100μmol/L),对照组加入无菌生理盐水.于(22±2)℃震荡保存,分别于第1、3、5、7天取血小板进行扫描电镜观察,采用流式细胞仪检测血小板凋亡情况,采用蛋白免疫印迹法检测凋亡相关蛋白表达.结果 实验组血小板NO含量高于对照组(P<0.05).血小板扫描电镜图显示,实验组血小板显微形态在外形、 减少聚集等方面均优于对照组.在血小板保存过程中,乳酸含量不断累积(P<0.05),葡萄糖含量不断消耗(P<0.05),PS膜外翻的血小板数量不断增加(P<0.05);且实验组血小板乳酸、 葡萄糖含量和PS膜外翻阳性率均低于对照组(P<0.05);凋亡相关蛋白Bax、Bcl-xL和Bak表达水平均未随保存时间延长而发生显著变化(P>0.05),两组上述三种蛋白表达水平差异均无统计学意义(P>0.05).结论 在血小板保存过程中加入NO供体GSNO,可在一定程度上抑制血小板细胞凋亡,减少血小板贮存损伤.

目的 优化冻干血小板保护液,减少冻干过程对血小板的损害,有效保护其功能.方法 采用3因素3水平的正交设计法,对血小板膜保护剂、血小板激活抑制剂、蛋白质类保护剂的3类成分组成的保护液进行优选.检测血小板最大聚集率、血小板活化标志PAC-1、CD62P的阳性表达率和血小板回收率,通过比较其差异,筛选出本实验的最优冻干血小板保护液.以优化保护液对血小板处理后进行冻干,并以此为实验组,与新鲜血小板和原保护液处理后冻干血小板进行比较验证,验证指标与优选指标相同,比较3者4项指标之间的差异.结果 正交设计试验结果显示:血小板最大聚集率组间最高(74.33±24.01)％,血小板活化标志PAC-1和CD62P低于9组平均水平,血小板回收率高于9组平均水平.以主要体现血小板功能的血小板最大聚集率为优先指标,结合其余3项检测指标进行综合分析,在原保护液的基础上,筛选出添加了2％ DMSO、第2信使调节剂、2 mmol/L维生素B6,75％的PPP保护液组为最优组合.验证实验结果显示,优化保护液组血小板最大聚集率(76.12±6.02)％,与原保护液组相比,差异有统计学意义(P＜0.05),与新鲜血小板组相比,差异没有统计学意义(P＞0.05).最优保护液组血小板激活标志PAC-1和CD62P阳性表达率分别为(3.23±0.49)％和(36.83±8.21)％,2者与原保护液组、新鲜血小板组相比,差异无统计学意义(P＞0.05);最优保护液组冻干血小板复水化后血小板回收率为(85.90±2.24)％,与原保护液组相比,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 本实验优化的血小板保护液优于原保护液,明显提高了冻干血小板复水化后最大聚集率,能更好地保护血小板的功能,但对血小板冻干过程的保存损害问题没有得到更好的改善,有待下一步深入研究.

血小板运输时要求维持20℃～24℃恒温保存和不断振荡,而青海地处高原,具有海拔高低温缺氧,路途遥远,自然环境恶劣等特点,在这种客观条件下,血小板长途运输时对运输设备就会要求更高,因为血小板温度过低时会发生聚集,一旦发生聚集,将无法还原,导致血小板失去活性,而且在运输过程中要防止剧烈震荡,避免血小板损伤,给患者输注时达不到一定的效果,失去了输注的意义.所以普通的血液运输箱在青海高原地区尤其是长途运输时无法达到血小板运输的冷链要求.本文通过对格尔木市中心血站采用车载式血小板恒温振荡保存箱运输血小板2年的温度记录进行分析,说明车载式血小板恒温振荡保存箱在高原地区汽车长途运输血小板可以确保质量,现报告如下.

近年来从全血中分离采集的手工浓缩血小板应用越来越得到临床的重视,成为外科、儿科、骨科等患者血小板输注的一个重要来源.由于浓缩血小板分离于全血,具备量少,分装简便等特点,可根据临床需要量制备相应的规格制品,有利于充分利用血液资源.在欧美国家及中国香港红十字会输血服务中心,手工制备的血小板始终占临床血小板用量的大多数.

目的 探讨机采血小板储存损伤与血小板输注临床疗效的关系.方法 检测64份机采血小板的血小板聚集功能和p-选择素,对56例血液病患者给予64治疗量机采血小板输注,输注后24h进行外周血血小板计数,根据血小板增高指数(CCI)、血小板回收率(PPR)和出血好转情况判定输注效果,分析血小板储存损伤对其影响的相关性.结果 64治疗量机采血小板输注后,40例输注有效的CCI值为(16.0±5.5),24例无效的CCI值为(3.4±1.0);输注血小板最大聚集率在有效期内第2天～第5天的平均值±标准差(Mean％±SD％)、最小值(min％)～最大值(max％)为48.1±4.7(41.1～56.2)、38.1±3.5 (31.2～43.1)、17.4±2.4 (14.5～20.9)、9.6±3.3(5.8～19.9);血浆可溶性P-选择素在有效期内第2天～第5天含量(Mean±SD) ng/mL为(11.4±5.8)、(28.9±7.5)、(55.5±8.4)、(89.2±5.6) ng/mL;血小板聚集功能与血小板输注疗效呈正相关(r=0.892,P＜0.01),血浆可溶性P-选择素浓度与血小板输注疗效呈负相关(r=-0.836,P＜0.01),均有统计学意义.结论 机采血小板保存期内的血小板损伤会影响血小板输注无效的发生率,医疗机构可结合临床输注效果制定血小板功能标准和规范,提升本地区的输血水平.

肝缺血再灌注损伤可发生在肝切除术后,其会使术后残余肝脏不能维持足够的功能[1-2].肝缺血再灌注损伤也可以发生在供肝的保存,移植和血容量减少等过程中[3-4].肝缺血再灌注损伤随着在再灌注过程中的血流恢复,肝脏经历了急性炎症反应导致进一步的损伤.库普弗细胞(Kupffer cell)和多形核细胞被激活,血小板浸润灌注的组织,同时由于大量细胞因子产生,补体激活,血小板激活因子以及内皮细胞黏附分子的积聚,一氧化氮(NO)水平局部失衡导致进一步的肝脏结构和功能的障碍,最终产生了自由基和组织抗氧化能力的缺失[5-8].其最终结果是肝细胞和肝血窦内皮细胞的坏死和凋亡.