应激反应是指动物在受到不利刺激时,为维持正常状态所采取的适应性机制,主要表现为下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA轴)被激活并分泌应激激素,鸟类的主要应激激素是皮质酮.人工繁育在朱鹮(Nipponia nippon)的保护过程中发挥了重要的作用,雏鸟期是朱鹮生长发育的关键时期,研究笼养朱鹮雏鸟应激激素随日龄的变化有助于提升饲养管理水平,并为野外应激生理研究与朱鹮保护提供指导和借鉴.本研究通过采集23～34日龄朱鹮雏鸟的血液样本,来探究朱鹮雏鸟的应激反应随日龄增长的变化模式.为进一步了解朱鹮雏鸟应激反应的发育特点,本研究将雏鸟期分为雏鸟期前期(日龄23～28 d)和雏鸟期后期(日龄29～34 d),并采集了朱鹮成鸟的血液样本.研究结果显示,朱鹮雏鸟的血浆基础水平皮质酮和日龄无显著相关性(R=0.340,P＞0.05),血浆应激皮质酮水平和日龄呈显著正相关(R=0.492,P＜0.05).朱鹮雏鸟的血浆基础皮质酮水平在雏鸟期前期和后期没有显著差异(P＞0.05),但两个时期均显著低于成鸟水平(P＜0.01).朱鹮雏鸟前期的血浆应激皮质酮水平显著低于雏鸟后期(P＜0.05),与成鸟相比,雏鸟前期与成鸟差异极显著(P＜0.01),雏鸟后期与成鸟差异显著(P＜0.05).本研究还发现朱鹮雏鸟的血浆基础皮质酮水平及应激皮质酮水平随日龄增长的变化模式在性别间无显著差异.建议在朱鹮雏鸟的饲养管理和野生种群保护工作中,在雏鸟23日龄后尽量减少人为干扰;在朱鹮雏鸟的野外应激生理研究中,应选择23～34日龄个体.

目的:探讨母源性氟西汀暴露对雌性子代大鼠下丘脑垂体肾上腺(hypothalamic pituitary adrenal，HPA)轴及学习记忆功能的影响。方法:孕鼠用随机数字表法分为处理组和对照组，分别于孕11～20 d给予10 mg/kg的氟西汀和等量的生理盐水。取两组的雌仔鼠各10只，于出生后12周分别行旷场实验、电迷宫实验和物体识别实验，测血浆促肾上腺皮质激素(adrenocorticotrophic hormone，ACTH)和皮质酮(corticosterone，CORT)浓度。然后给予21 d不可预见性慢性应激(Unpredictable chronic stress，UCS)，并再次做上述实验。最后处死大鼠，取下丘脑组织，测定促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin releasing hormone，CRH)和精氨酸加压素(arginine vasopressin，AVP)的mRNA表达。采用SPSS 19.0进行描述和 t检验。 结果:UCS前，两组大鼠的各检测指标均差异无统计学意义(均 P>0.05)。UCS后，两组大鼠的水平运动、垂直运动较处理前均明显减少，且处理组大鼠的水平运动[(37.2±7.2)次，(50.8±8.5)次， t＝4.73， P<0.01]和垂直运动[(10.6±2.0)次，(15.2±5.1)次， t＝2.93， P<0.05]均低于对照组；两组大鼠的正确反应次数均明显减少，总反应时间明显延长；且处理组大鼠的正确反应次数明显少于对照组[(3.4±1.3)次，(4.5±0.9)次， t＝2.36， P<0.05]；处理组大鼠的物体辨别指数显著下降，且低于对照组[(0.11±0.04)，(0.16±0.05)， t＝2.28， P<0.05]。UCS前后，处理组大鼠的ACTH变化率[(61.13±26.08)%，(29.83±12.73)%， t＝3.67， P<0.01]和CORT变化率[(105.71±18.39)%，(74.15±39.24)%， t＝2.34， P<0.05]均明显高于对照组，且下丘脑CRH的mRNA表达明显高于对照组( t＝4.15， P<0.01)。 结论:未发现孕期氟西汀暴露对雌性子代大鼠HPA轴及学习记忆功能有明显的损害，但加重了慢性应激情况下HPA轴及学习记忆功能受损的易感性。

目的:了解枸杞多糖（LBP）对经历孕期慢性应激的母鼠及其子代肠道菌群的改善作用，为改善应激对肠道的影响提供新思路。方法:于2019年7至10月，选择24只SPF级雌性SD成年大鼠，分为对照组、应激组、应激+LBP组，每组8只。建立孕期慢性不可预知温和刺激模型（21 d），并于应激第8天行40 mg/kg LBP溶液灌胃干预。分别在应激前1天和第1、7、14、21天取母鼠内眦静脉血，测定皮质醇并计算皮质酮浓度。收集应激结束后母鼠和出生后20 d子鼠的新鲜粪便，运用Illumina Miseq测序技术、Alpha多样性、群落组成等分析肠道菌群的多样性与结构变化。结果:在应激第7、14天，应激组和应激+LBP组母鼠血浆皮质酮浓度水平高于对照组（ P<0.05）。母鼠Alpha多样性中应激组Ace指数低于对照组（ P<0.05）；肠道菌群结构分析显示，在种水平下，应激+LBP组毛螺菌科、乳杆菌占比高于应激组和对照组；在目水平下，应激+LBP组梭菌目占比高于应激组、低于对照组，而乳杆菌目占比高于应激组和对照组。子鼠组Alpha多样性中应激+LBP子鼠组Shannon指数、Ace指数和Chao指数均高于应激子鼠组（ P<0.05）；肠道菌群结构在种水平下，应激+LBP子鼠组乳杆菌占比高于对照子鼠组和应激子鼠组，应激+LBP子鼠组毛螺菌科和瘤胃菌科占比高于应激子鼠组；在目水平下，应激+LBP子鼠组拟杆菌目占比低于应激子鼠组，应激+LBP子鼠组梭菌目占比高于应激子鼠组和对照子鼠组。 结论:LBP的干预可能改善孕期应激对母鼠及子代肠道菌群多样性、丰富度和菌群结构的改变，从而维持肠道菌群的平衡。

目的:观察孕期慢性应激雌鼠及子代肠道菌群的变化，探索肠道菌群在孕期慢性应激中发挥的作用。方法:于2019年11月，选择SPF级健康成年SD大鼠，16只雌鼠随机分为对照组和模型组，每组8只；12只雄鼠随机分为对照交配组（4只）和模型交配组（8只）。建立孕期慢性不可预知温和应激（CUMS）模型，雌鼠在应激前1天和应激第1、7、14、21天进行眼内眦静脉采血，利用放射免疫法测定血浆皮质酮含量；应激完成后，收集雌鼠新鲜粪便待测。两组子鼠在出生后20 d（PND20）收集新鲜粪便待测，分为对照子鼠组和模型子鼠组样品。采用Illumina Miseq测序技术，测定大鼠粪便中微生物16S rRNA V3-V4区序列，并对群落结构和多样性进行分析。结果:模型组雌鼠在应激第7、14天血浆皮质酮含量均高于同期对照组雌鼠（ P<0.05）；与对照组比较，模型组Sobs指数、Chao指数、Ace指数、Shannon指数均降低（ P<0.05）；对照组所特有的物种丰度（OTU）数目为130种，模型组91种；对照组雌鼠厚壁菌门的相对丰度（64.87%）高于模型组（50.83%），而拟杆菌门的相对丰度（31.72%）低于模型组（46.35%）；对照子鼠组Sobs指数、Chao指数、Ace指数、Shannon指数和Simpson指数均高于模型子鼠组（ P<0.05）；模型子鼠组所特有的OTU数目为75种，对照子鼠组93种；对照子鼠组厚壁菌门相对丰度（60.24%）高于模型子鼠组（52.95%）。 结论:孕期慢性应激不仅会引起雌鼠肠道菌群紊乱，而且可能会导致宫内环境改变，进而对子代肠道菌群的群落多样性产生影响。

目的:探究孕期慢性应激对子代雌性大鼠抑郁行为及海马组织印记基因胰岛素样生长因子-2 (insulin-like growth factor-2，IGF-2)/长链非编码RNA(lncRNA)H19甲基化的影响。方法:32只SPF级雌性SD大鼠按照随机数字表法分为模型组和对照组，模型组大鼠采用慢性不可预知性温和应激(chronic unpredictable mild stress model，CUMS)方法建立抑郁模型，对照组正常饲养。应激刺激第7天时，雌雄鼠合笼交配。在应激刺激前1 d和应激刺激第1、7、14、21、28天对两组母鼠行内眦静脉采血，测定血浆皮质酮浓度；在雌性仔鼠出生后第28天和出生后第42天时，每组随机抽取8只，行内眦静脉采血后测定血浆皮质酮浓度；在出生后第42天时，分别通过糖水偏爱实验、悬尾实验和强迫游泳实验测定两组雌性仔鼠的抑郁样行为。采用RT-PCR和Western blot法检测仔鼠海马组织中IGF-2/H19及相关转移酶表达情况。利用Methyl Target技术，对IGF-2差异性甲基化区域(differentially methylated region，DMR)片段2的19个CpG位点，H19印记控制区(imprinting control region，ICR)片段1中8个CpG位点和H19-ICR片段2的15个CpG位点，同时捕获测序，计算每个CpG位点甲基化水平。采用SPSS 26.0，采用重复测量方差分析、 t检验和非参数检验对相关数据进行统计分析。 结果:(1)重复测量方差分析结果显示，母鼠血浆皮质酮的时间与组别的交互效应不显著( F＝2.997， P＝0.066)，时间主效应显著( F＝4.44， P＝0.010)，组别主效应显著( F＝41.40， P＝0.001)。组间因素的单独效应分析，在应激第14、21、28天，模型组母鼠血浆皮质酮浓度均高于对照组母鼠(均 P<0.001)。(2)在糖水偏爱实验中，模型组雌性仔鼠的液体总消耗[11.10(10.38，11.58)mL，13.55(12.00，15.77)mL， Z＝－3.055， P＝0.002]、1%蔗糖水消耗[(5.50±1.30)mL，(8.56±2.04)mL， t＝－3.582， P＝0.003]及1%蔗糖偏爱百分比[(51.35±8.69)%，(62.11±8.05)%， t＝－2.576， P＝0.022]均低于对照组。(3)模型组雌性仔鼠悬尾实验中静止持续时间[(126.95±39.89)s，(54.30±25.00)s， t＝4.375， P＝0.001]和强迫游泳实验中持续不动时间[(7.97±6.66)s，(1.85±2.12)s， t＝2.478， P＝0.037]均长于对照组。(4)模型组雌性仔鼠海马组织IGF-2 mRNA[(0.46±0.24)，(1.00±0.00)， t＝3.821， P＝ 0.019]、H19 mRNA[(0.60±0.25)，(1.00±0.00)， t＝3.574， P＝0.007]表达均低于对照组；模型组雌性仔鼠IGF-2蛋白相对表达低于对照组[(0.77±0.04)，(1.00±0.00)； t＝9.876， P＝0.01)；CCTC结合因子(CCTC-binding factor，CTCF)的mRNA[(1.29±0.12)，(1.00±0.00)， t＝－4.850， P＝0.003]和蛋白相对表达水平[(1.90±0.28)，(1.00±0.00)， t＝－5.513， P＝0.005]均高于对照组。(5)模型组雌性仔鼠海马组织IGF-2 DMR区域3个CpG位点甲基化水平均低于对照组( t＝－3.21，－3.00，－3.34，均 P<0.05)，分别位于chr1215831028、chr1215831055和chr1215831205；IGF-2 DMR片段甲基化水平低于对照组( t＝－3.453， P＝0.048)；模型组雌性仔鼠甲基转移酶DNMT3A mRNA( t＝5.102， P＝0.002)、DNMT3A( t＝10.213， P<0.001)和DNMT3B( t＝4.169， P＝0.014)蛋白相对表达水平均低于对照组。 结论:孕期慢性应激致雌性仔鼠出现抑郁、绝望状态，其机制可能与甲基化转移酶表达降低引起印记基因IGF-2 DMR甲基化水平降低有关。

目的:研究大鼠孕期慢性应激致子代学习记忆能力损伤相关的差异蛋白及信号通路，探讨可能的作用机制。方法:于2019年7至10月，选择80~90日龄SPF级未曾受孕的雌性SD大鼠16只，体重（200±20）g；90~100日龄SPF级雄性SD大鼠12只，体重（220±20）g。适应性饲养1周后随机分组，雌鼠分为对照组和模型组（各8只）；雄鼠分为对照交配组（8只）和模型交配组（4只），正常饲养。建立慢性不可预知温和应激（CUMS）模型，连续刺激21 d。应激前1天，第1、7、14、21天对雌鼠进行内眦静脉取血，测定皮质酮含量。利用Morris水迷宫实验检测子鼠的空间学习记忆能力，通过苏木素-伊红和尼氏染色观察子鼠海马组织形态学变化，采用同位素标记相对和绝对定量（iTRAQ）技术对子鼠海马组织进行蛋白质组学相关分析。结果:与对照组比较，模型组雌鼠血浆皮质酮含量明显增高（ F=7.717， P<0.05），模型建立成功。与对照子鼠组比较，模型子鼠组逃避潜伏期延长、游泳平均速度降低、跨越平台次数减少、目标象限游程缩短（ P<0.05）。模型子鼠组海马组织结构中细胞形态不规则，神经元数量少，尼氏体分布不均匀、体积小、数量少。子鼠组共筛选出5 065个蛋白，差异蛋白共26个（ P<0.05），其中上调和下调分别为19、7个。差异蛋白主要参与23种生物学过程、14种细胞组分和9种分子功能。京都基因和基因组百科全书（KEGG）富集分析显示，共富集到57条通路，其中8条信号通路明显富集（ P<0.05），可能参与子代学习记忆能力损伤的信号通路有5条，包括神经活性配体-受体相互作用、cGMP-PKG信号通路、黏附连接、FoxO信号通路和Notch信号通路，主要有酪氨酸蛋白激酶受体、α2A肾上腺素能受体、cGMP依赖性蛋白激酶等差异蛋白可能参与损伤过程。 结论:孕期慢性应激可能导致子代学习记忆能力损伤，蛋白质组学方法所富集的信号通路和筛选的关键差异蛋白可能在损伤过程中起重要作用。

目的:探讨姜黄素对慢性束缚应激抑郁模型大鼠心功能障碍的影响.方法:将32只重(200±20)g的6周龄雄性Wister大鼠分为对照组、模型组、低剂量姜黄素组和高剂量姜黄素组,每组8只.模型组和给药组大鼠每天随机时段给予慢性束缚应激5 h,对照组大鼠正常条件饲养;在每天的应激结束后,低、高剂量姜黄素组大鼠分别给予100和200 mg/kg的姜黄素灌胃,对照组和模型组大鼠则给予等体积的生理盐水.上述实验操作均连续28 d.实验期间每周称量一次体重;在第14和28天进行蔗糖偏好实验和测量血清皮质酮含量来评价大鼠的抑郁状况;HE和Masson染色法观察心肌组织学变化;超声心动图检查各组大鼠心脏功能;RT-qPCR检测炎症因子和纤维化因子的mRNA表达;Western blot检测相关蛋白的表达.结果:与对照组相比,模型组大鼠体重增长显著减缓(P<0.05),蔗糖偏好率显著降低(P<0.01),血浆皮质酮水平显著升高(P<0.01);HE染色结果显示,与对照组相比,模型组大鼠心肌细胞肥大;Masson染色发现,模型组大鼠心脏纤维化显著高于对照组(P<0.01);免疫组化结果也表明,I型胶原阳性表达显著增加(P<0.01);RT-qPCR结果显示,与对照组相比,模型组大鼠心肌组织中炎症因子(肿瘤坏死因子α、白细胞介素6和白细胞介素1β)和纤维化因子(α-平滑肌肌动蛋白、I型胶原和Ⅲ型胶原)表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01);Western blot结果显示,与对照组相比,模型组大鼠心肌组织中c-Jun氨基末端激酶(JNK)蛋白的磷酸化水平显著升高(P<0.01).与模型组相比,低、高剂量姜黄素均可逆转上述指标.结论:姜黄素能抑制慢性束缚应激大鼠的心脏炎症和纤维化,其机制可能是通过抑制JNK信号通路实现的.

目的:通过血浆代谢组学研究三七皂苷R1(notoginsenside R1,NGR1)治疗神经炎症的分子作用机制.方法:采用腹腔注射 0.83 mg?kg-1 脂多糖(LPS)构建小鼠神经炎症模型,应用NGR1(30 mg?kg-1)进行给药治疗,眼眶静脉丛取血并分离血浆.在使用苏木素-伊红(HE)染色法检测小鼠脑组织损伤情况、采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)技术检测神经炎症相关指标及酶联免疫吸附反应(ELISA)技术分析血清炎症因子变化的基础上,应用液相色谱-质谱法(LC-MS)对各组小鼠血浆样品进行代谢组学分析,通过人类代谢组数据库(HMDB)、京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库进行差异内源代谢物的鉴定,并应用MetaboAnalyst和Metscape数据库进一步分析差异内源代谢物的关键代谢途径,最后通过qRT-PCR检测调控关键代谢途径基因表达水平的变化.结果:NGR1 能够明显改善小鼠脑组织神经损伤,明显降低中枢神经炎症因子离子化钙结合适配分子 1(Iba-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6 的mRNA水平,显著提高转化生长因子-β(TGF-β)的mRNA水平,显著降低血清炎症因子IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平.此外,代谢组学发现模型组与给药组之间小鼠血浆中皮质酮、吲哚丙酮酸、泛酸、12S-羟基 5Z,8Z,10E,14Z-二十碳四烯酸、PC(18:3(9Z,12Z,15Z)/16:1(9Z))等 22 个差异内源代谢物发生明显变化,主要涉及甘油磷脂代谢、亚油酸代谢及类固醇激素生物合成等代谢通路.qRT-PCR结果显示,给药后能显著逆转关键代谢途径中 2A型磷脂酶A2(PLA2G2A)、1B型磷脂酶A2(PLA2G1B)、12A型磷脂酶A2(PLA2G12A)、醛酮还原酶 1D1(AKR1D1)、羟基类固醇 11β脱氢酶 1(HSD11B1)、羟基类固醇 11β脱氢酶 2(HSD11B2)mRNA表达水平.结论:NGR1 对LPS诱导的神经炎症具有治疗作用,并可能通过调控皮质酮等关键代谢物及甘油磷脂代谢、亚油酸代谢及类固醇激素生物合成等关键途径发挥抗神经炎症的作用,将为深入研究NGR1 抗神经炎症的作用机制提供参考.

目的 建立可溯源的干血片样本19种类固醇激素液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)标准曲线.方法 收集乙二胺四乙酸抗凝新鲜全血,用0.9%NaCl溶液清洗血细胞,将清洗后的血细胞和无类固醇激素的血浆按0.55∶0.45比例混合,制备模拟全血.根据拟制备标准曲线浓度添加不同量类固醇激素至模拟全血样本中,制备不同浓度的类固醇激素标准曲线干血片.采用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测各标准曲线干血片类固醇激素含量,分析其线性范围,并对类固醇激素标准曲线干血片进行性能验证.结果 类固醇激素标准曲线干血片中孕烯醇酮、孕酮、可的松、脱氢表雄酮的线性范围为0.25～100 ng/mL,11-脱氧皮质酮、21-脱氧皮质醇、18-羟皮质醇、11-酮睾酮的线性范围为0.05～20 ng/mL,皮质酮、11-羟睾酮的线性范围为0.025～10 ng/mL,17-羟孕酮、18-羟皮质酮、11-脱氧皮质醇、雄烯二酮、11-羟雄烯二酮、睾酮的线性范围为0.1～40 ng/mL,皮质醇的线性范围为1.5～600 ng/mL,17-羟孕烯醇酮的线性范围为0.2～80 ng/mL,硫酸脱氢表雄酮的线性范围为25～10 000 ng/mL;相关系数(r2)≥0.997.结论 建立的干血片样本类固醇激素标准曲线具有良好的线性,可实现相关项目测量结果的溯源.

目的 观察逆灸对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)伴抑郁大鼠血浆心房利钠肽(atrial natriuretic peptide,ANP)及皮质酮(corticosterone,CORT)水平的影响,探讨逆灸防治AD认知障碍伴抑郁的可能作用机制.方法 将雄性SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组和逆灸组,每组 9 只.采用双侧海马注射β淀粉样蛋白25-35(amyloid β25-35,Aβ25-35)的方法复制AD大鼠模型.逆灸组大鼠取"百会""肝俞""肾俞"穴施以逆灸.糖水偏好实验评估大鼠情绪状态,Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力,电镜观察海马超微结构,ELISA法检测大鼠血浆ANP、CORT浓度.结果 与假手术组比较,模型组大鼠糖水偏好指数明显下降(P<0.01),逃避潜伏期显著延长(P<0.01),平台停留时间与平台穿越次数显著减少(P<0.01);海马神经元细胞损伤明显,胞浆基质溶解,空化;血浆ANP浓度明显降低(P<0.01),CORT浓度显著提高(P<0.01).与模型组比较,逆灸组大鼠糖水偏好指数明显升高(P<0.01),逃避潜伏期明显缩短(P<0.01),平台停留时间与穿越平台次数明显增加(P<0.05,P<0.01);海马神经元细胞基本正常,突触结构清晰;血浆ANP浓度升高(P<0.01),CORT浓度降低(P<0.01).结论 逆灸可以有效减缓AD大鼠抑郁样行为的发生发展,上调大鼠血浆ANP表达、降低CORT水平.调节下丘脑-垂体-肾上腺轴功能可能是其防治阿尔茨海默病引发的抑郁样行为的重要机制之一.