目的:探究低剂量柳氮磺吡啶（SAS）对结直肠癌细胞的放疗增敏作用。方法:CCK-8检测不同浓度SAS对结直肠癌细胞的增殖抑制作用，采用凋亡、自噬等抑制剂联合SAS处理结直肠癌细胞，CCK-8法比较细胞活力。采用锥虫蓝染色、平板克隆形成、细胞生长曲线等实验评价低浓度SAS联合放疗对结直肠癌细胞的体外放疗增敏作用。通过检测细胞内脂质过氧化物、铁死亡蛋白标志物（GPX4、PTGS2）等，探究低浓度SAS联合放疗对细胞铁死亡的促进作用。利用小鼠皮下移植瘤模型，明确SAS的体内放疗增敏效应。结果:高浓度SAS可诱导结直肠癌细胞凋亡与铁死亡。低浓度SAS增强结直肠癌细胞放疗敏感性，该效应可被铁死亡抑制剂（Fer-1）阻断。低浓度SAS联合放疗显著增加细胞内脂质过氧化物含量与PTGS2表达，降低GPX4表达。皮下移植瘤模型中SAS亦显示显著的放疗增敏效应。结论:低浓度SAS通过铁死亡途径增强结直肠癌细胞放疗敏感性。

目的:比较发热伴血小板减少综合征（SFTS）与恙虫病两种疾病患者病程中免疫损伤的差异。方法:采用前瞻性病例对照研究，选择2014年10月至2017年6月安徽医科大学第一附属医院收治的31例SFTS患者和16例恙虫病患者，另外以10例健康体检者作为对照。用流式细胞仪检测患者外周血CD4 +、CD8 + T淋巴细胞计数以及CD3 + T淋巴细胞、自然杀伤细胞（NK细胞）、B淋巴细胞及浆细胞的比例；同时用Luminex液相芯片平台技术检测外周血34个细胞因子水平。比较两组患者间淋巴细胞及细胞因子的差异。 结果:SFTS患者外周血CD3 + T淋巴细胞比例、CD4 +及CD8 + T淋巴细胞计数明显低于恙虫病患者（ t值分别为4.860、9.411和5.030，均 P<0.01），NK细胞及B淋巴细胞比例明显高于恙虫病患者（ t值分别为2.344和5.896，均 P<0.05）。SFTS患者病程中外周血浆细胞比例为（7.7±1.2）%，危重患者最高可达30%，都表现为λ单克隆型细胞群；而恙虫病患者外周血中未检测到浆细胞。检测34个细胞因子水平发现，SFTS与恙虫病患者白细胞介素- 1受体抗体（IL-1RA）、白细胞介素（IL-6、IL-15、IL-10、IL-8）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、γ -干扰素（IFN-γ）、粒细胞集落刺激因子（G-CSF）、嗜酸粒细胞趋化因子（Eotaxin）、IFN -γ诱导蛋白10（IP-10）、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）、巨噬细胞炎症蛋白（MIP-1α、MIP-1β）、血小板源生长因子（PDGF-AA、PDGF-AB/BB）及受激活调节正常T细胞表达和分泌因子（RANTES）表达均异常，其中SFTS患者IL-1RA、IL-6、IL-15、IL-10、TNF-α、IFN-γ、G-CSF、Eotaxin、IL-8、IP-10、MCP-1和MIP-1α水平明显高于恙虫病患者（ Z值分别为2.312、2.447、3.660、5.444、1.965、2.402、2.402、2.997、3.525、2.481、3.817和2.211，均 P<0.05），PDGF-AA、PDGF-AB/BB和RANTES分泌水平明显低于恙虫病患者（ Z值分别为3.728、2.514和2.649，均 P<0.05）。相关性分析发现，RANTES、PDGF-AA和PDGF-AB/BB水平均与SFTS、恙虫病患者血小板水平呈明显正相关（SFTS： r值分别为0.223、0.365、0.330，恙虫病： r值分别为0.263、0.632、0.407，均 P<0.05）。在SFTS患者中，与存活组（21例）比较，死亡组（10例）CD3 + T淋巴细胞比例、CD4 + T淋巴细胞计数明显降低，浆细胞比例明显升高（ t值分别为3.980、3.314和26.692，均 P<0.01），IL-1RA、IL-6、IL-15、IL-10、TNF-α、IFN-γ、G-CSF、Eotaxin、IL-8、IP-10、MCP-1、MIP-1α和MIP-1β明显升高，PDGF-AA、PDGF-AB/BB和RANTES明显降低（ Z值分别为3.930、4.014、2.832、3.592、2.958、3.508、2.578、3.254、4.270、3.465、2.663、3.085、3.107、3.639、3.043和3.825，均 P<0.05）。 结论:SFTS患者较恙虫病患者免疫功能受损更严重；SFTS患者过强的体液免疫及T淋巴细胞凋亡程度与死亡发生密切相关。病程中检测CD4细胞、浆细胞及IL-6、IL-10为代表的促炎和抗炎细胞因子对SFTS与恙虫病的鉴别及病情评估有重要临床意义。

目的:探讨微小RNA（miR）-23a是否通过靶向10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源（PTEN）基因抑制腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）信号通路诱导的心肌细胞肥大。方法:将大鼠心肌细胞株H9c2细胞置于DMEM高糖培养基中，于37 ℃ 5% CO 2培养箱中培养，作为正常组。稳定培养48 h后，采用10 nmol/L血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）刺激H9c2细胞构建细胞肥大模型，为AngⅡ组。将H9c2细胞接种于培养板中，置于37 ℃培养箱中培养，待细胞生长汇合度约70%时，使用不同试剂转染细胞，转染24 h后以10 nmol/L AngⅡ干预细胞。其中，转染miR-23a抑制剂的细胞为AngⅡ+anti-miR组，转染miR-23a抑制剂阴性对照者为AngⅡ+NC组，共转染miR-23a抑制剂和PTEN小干扰RNA（siRNA）者为AngⅡ+anti-miR+si-PTEN组，共转染miR-23a抑制剂和PTEN siRNA阴性对照者为Ang Ⅱ+anti-miR+si-NC组。采用Image J软件测定单细胞表面积，通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测细胞中心肌肥厚标志基因α-肌动蛋白1（ACTA1）和β-肌球蛋白重链（β-MHC）基因mRNA和miR-23a的表达水平，Western blot检测细胞中PTEN蛋白和AMPK信号通路相关蛋白表达水平。为验证miR-23a是否靶向作用于PTEN基因，进行双荧光素酶报告基因实验。构建野生型pGL-WT-PTEN和突变型pGL-MUT-PTEN的荧光素酶报告基因载体重组质粒，测序正常后备用。H9c2细胞接种到24孔细胞培养板中，置37 ℃培养箱培养过夜，将miR-23a模拟物或miR-23a模拟物阴性对照与野生型或突变型报告基因重组质粒共转染细胞。转染48 h后测定萤火虫荧光素酶活性和海肾荧光素酶活性，以二者比值作为相对荧光素酶活性。 结果:AngⅡ组的细胞表面积、ACTA1和β-MHC mRNA及miR-23a的表达水平明显高于正常组，而PTEN及p-AMPK蛋白表达水平明显低于正常组（ P均<0.05）。双荧光素酶报告基因实验结果显示，miR-23a模拟物与野生型报告基因重组质粒共转染细胞的相对荧光素酶活性比miR-23a模拟物阴性对照共转染者低（ P<0.05），PTEN是miR-23a的靶基因。与AngⅡ组和AngⅡ+NC组比较，AngⅡ+anti-miR组细胞中miR-23a、ACTA1和β-MHC mRNA的表达水平更低，细胞表面积更小，PTEN和p-AMPK蛋白表达水平更高（ P均<0.05）。与AngⅡ+anti-miR组比较，AngⅡ+anti-miR+si-PTEN组细胞表面积较大，ACTA1和β-MHC mRNA的表达水平较高，PTEN和p-AMPK蛋白表达水平较低（ P均<0.05）。 结论:抑制miR-23a能够减轻AngⅡ诱导的心肌细胞肥大，其作用机制可能与miR-23a靶向PTEN抑制AMPK信号通路有关。

目的:探讨虫草素对脂多糖（LPS）诱导的大鼠肾小管上皮细胞损伤的保护作用及机制。方法:取大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E，以1×10 5/mL接种于细胞培养板，并将传至第3代的细胞分为正常对照组（Ctrl组）、LPS组（1 mg/L的LPS刺激细胞）、10 μmol/L和20 μmol/L虫草素干预组（LPS+C 10组、LPS+C 20组）。采用细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒（CCK-8）检测细胞活性；2'，7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯（DCFH-DA）染色法检测细胞内活性氧（ROS）水平；用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测炎症相关因子细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）、白细胞介素-1β（IL-1β）以及核转录因子-κB（NF-κB）的蛋白表达。 结果:与Ctrl组比较，LPS可明显抑制NRK-52E细胞活性，增加细胞内ROS含量，上调ICAM-1、VCAM-1、IL-1β以及NF-κB的蛋白表达。与LPS组比较，经10 μmol/L或20 μmol/L虫草素处理后，NRK-52E细胞活性明显升高（以Ctrl组为1：0.717±0.017、0.916±0.036比0.554±0.046），细胞内ROS水平明显降低（以Ctrl组为1：1.527±0.165、1.098±0.168比2.543±0.127），同时ICAM-1、VCAM-1、IL-1β及NF-κB的蛋白表达均明显下调〔以Ctrl组为1：ICAM-1/GAPDH为2.364±0.097、1.561±0.074比3.101±0.121，VCAM-1/GAPDH为2.866±0.135、1.920±0.098比4.170±0.119，IL-1β/GAPDH为2.358±0.107、1.563±0.179比3.301±0.210，磷酸化NF-κB p65（NF-κB p-p65）/GAPDH为2.559±0.166、1.596±0.148比3.183±0.098〕，差异均有统计学意义（均 P<0.05）；且与LPS+C 10组比较，LPS+C 20组细胞活性更为显著（0.916±0.036比0.717±0.017， P<0.01），ICAM-1、VCAM-1、IL-1β及NF-κB蛋白表达下调更加明显（ICAM-1/GAPDH：1.561±0.074比2.364±0.097，VCAM-1/GAPDH：1.920±0.098比2.866±0.135，IL-1β/GAPDH：1.563±0.179比2.358±0.107，NF-κB p-p65/GAPDH：1.596±0.148比2.559±0.166，均 P<0.05）。 结论:虫草素可显著增加LPS诱导肾小管上皮细胞损伤的细胞活性，降低细胞内ROS水平，抑制细胞炎症，其抑制炎症作用可能与NF-κB通路相关。

目的:构建粪肠球菌（Efs）为载体的多房棘球绦虫（Em）重组Efs-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗，并探讨其抗原性。方法:采用电穿孔法将重组质粒pGEX-EmⅡ/3-Em14-3-3转化Efs ATCC47077株，构建重组Efs-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗，抽提质粒进行PCR扩增鉴定；经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达后用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和免疫印迹法对表达产物进行分析和鉴定，并使用薄层扫描技术分析表达蛋白在菌体总蛋白中所占比例。结果:以重组Efs菌抽提的质粒为模板，PCR可扩增出大小约2 554 bp的EmⅡ/3-Em14-3-3融合基因片段。SDS-PAGE显示，表达产物为相对分子质量约119 × 10 3的重组蛋白；IPTG诱导培养5 h，目的蛋白的表达量较高，约占菌体总蛋白的9%。免疫印迹法检测结果显示，重组蛋白能被泡球蚴感染的鼠血清识别。 结论:成功构建了Em重组Efs-EmⅡ/3-Em14-3-3疫苗，表达的融合蛋白具有特异的抗原性。

目的 探讨常春藤皂苷元(HDG)对胶质母细胞瘤(GBM)细胞增殖、迁移和凋亡的影响及机制.方法 人GBM细胞株U87、U251和人脑胶质细胞株(HEB)为研究对象,以HDG 0μmol/L(或0 mg/kg)为对照组,实验组分别给予不同浓度HDG;噻唑蓝法(MTT)、EdU染色及细胞平板克隆检测HDG对GBM细胞增殖的影响;锥虫蓝染色检测HDG对GBM细胞死亡的影响;细胞划痕、Transwell实验检测HDG对GBM细胞迁移和侵袭的影响;Annexin V-FITC、JC-10染色及Western blot检测细胞凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2-Associated X的蛋白质Bax、肿瘤蛋白p53、胱天蛋白酶3(cleaved-caspase-3),分析HDG对GBM细胞凋亡的影响;BALB/C小鼠肿瘤异种移植实验分析HDG对GBM体内荷瘤的影响.结果 与对照组(HDG 0μmol/L)比较,HDG对U87、U251细胞的增殖、迁移和侵袭有显著抑制作用,且与HDG剂量呈依赖关系;锥虫蓝染色结果显示HDG导致GBM细胞的死亡数量明显增多;HDG明显诱导U87、U251细胞的线粒体膜电位下降、凋亡细胞数量增加以及凋亡相关蛋白Bax、p53、cleaved-caspase3的表达上调和Bcl-2的表达下调;HDG显著抑制BALB/C小鼠皮下GBM的大小、GBM细胞Ki67的阳性率并导致GBM细胞大量死亡;HDG对人HEB细胞以及荷瘤小鼠肝脏无明显毒性作用.结论 HDG对GBM细胞的增殖、迁移和侵袭有显著抑制作用且诱导其凋亡,HDG诱导GBM细胞凋亡的机制可能通过介导线粒体损伤及调控p53、Bcl-2/Bax表达.

目的 构建粪肠球菌(Efs)为载体的日本血吸虫(Sj)重组Efs-Sj14-3-3疫苗,并研究其表达效率.方法 制备重组质粒pGEX-Sj14-3-3和粪肠球菌ATCC47077株感受态.采用电穿孔技术将重组质粒pGEX-Sj14-3-3转化粪肠球菌ATCC47077株,构建重组Efs-Sj14-3-3疫苗.抽提质粒进行PCR扩增鉴定;经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达后用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫印迹对表达产物进行分析和鉴定.结果 以从重组Efs-Sj14-3-3抽提的质粒为模板进行PCR,可扩增出约399 bp的Sj14-3-3基因片段,SDS-PAGE显示表达产物为40×103Mr的融合蛋白,表达蛋白约占菌体总蛋白的18％;免疫印迹表明融合蛋白能被日本血吸虫感染的患者血清识别.结论 成功构建了日本血吸虫重组Efs-Sj14-3-3疫苗,表达的融合蛋白具有特异的抗原性.

目的 探讨不同浓度葡萄糖溶液对白纹伊蚊和淡色库蚊的蚊幼存活率,以及诱蚊、诱卵效果的影响,为基于糖饵剂的灭蚊技术研发提供支持.方法 取白瓷碗分别加入100 mL 3%、5%、8%、10%和15%的葡萄糖溶液,每碗投放10只白纹伊蚊或淡色库蚊Ⅳ龄蚊幼,第2、4、6、24、48、72 h观察蚊幼存活情况.饲养笼内投放饱血白纹伊蚊和淡色库蚊雌蚊各50只,四角各放置盛有5%、8%和15%葡萄糖溶液的产卵杯各1个,观察72h总产卵数.在模拟房内投放饱血和饥饿白纹伊蚊、淡色库蚊雌蚊各100只,盛有5%和8%浓度葡萄糖溶液和粘虫板制成的黑色简易灭蚊桶各1个,观察6 d后成蚊数和蚊卵数.以上试验均重复3次,以去氯自来水为对照.结果 随着葡萄糖溶液浓度增加,白纹伊蚊和淡色库蚊蚊幼的72h矫正死亡率升高,高于5%的葡萄糖溶液不适宜蚊幼存活.诱卵结果显示,随着葡萄糖溶液浓度增加,对白蚊伊蚊诱卵效果下降;5%和8%葡萄糖溶液组诱卵效果相似,白纹伊蚊卵平均数分别为686.67枚和682.33枚,淡色库蚊卵筏平均数分别为3.00块和2.33块.模拟房内,对照组、5%和8%葡萄糖溶液组诱捕成蚊平均数分别为93.33、105.00和130.33只,8%葡萄糖溶液组诱蚊效果强于对照组(F=3.283,P=0.030);白纹伊蚊蚊卵平均数(蚊卵数+蚊幼数)分别为70.33、55.33和63.00只,差异有统计学意义(H=6.761,P=0.034).结论 5%及以上浓度的葡萄糖溶液可有效抑制白纹伊蚊和淡色库蚊蚊幼存活,且具备较好的诱蚊效果及一定的诱卵效果.

目的 探索溴虫氟苯双酰胺对成蝇的杀灭效果,以期指导该药在卫生害虫防治领域的应用.方法 采用滞留喷洒、空间喷雾和蝇饵诱杀的方式分别进行试验.结果 滞留喷洒试验中,50 和 500 mg a.i./m2 溴虫氟苯双酰胺待测板面与成蝇接触时长 2h分别导致 15.00%和 16.67%的死亡率,5 000 mg a.i./m2施药板面接触试虫1h导致35.00%的死亡率,均没有达到国家标准要求;空间喷雾试验中,10 mg a.i./m3溴虫氟苯双酰胺在测试时间未发现击倒试虫,100 mg a.i./m3溴虫氟苯双酰胺 1h成蝇击倒率仅为 2.22%,1 000 mg a.i./m3溴虫氟苯双酰胺 20 min和 1h成蝇击倒率分别为 3.33%和 16.67%,均没有达到国家标准要求;饵剂试验中,施药 24 h,0.02%浓度组的死亡率达到 91.33%,0.1%和 0.5%浓度组死亡率均达到 100%.结论 溴虫氟苯双酰胺具有较高的胃毒效果,可以用于饵剂产品研发,在公共卫生害虫防治中具有较广阔的应用前景.

目的 初步探究微小隐孢子虫微线体蛋白(MIC)糖蛋白900(GP900)829～1 099aa片段(GP900829～1099)通过核因子-κB(NF-κB)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路对小鼠巨噬细胞(RAW264.7细胞)的免疫调节作用.方法 从NCBI数据库中获取微小隐孢子虫GP900829～1099氨基酸序列进行生物信息学分析.以微小隐孢子虫卵囊cDNA为模板,PCR扩增gp900829～1099基因片段,构建pET-32a-gp900829～1099重组质粒并转化至BL21感受态细胞中诱导表达.纯化、超滤浓缩重组蛋白并去除内毒素.采用0.16、0.80、4.00、20.00、100.00、500.00 μg/ml的GP900829～1099重组蛋白刺激RAW264.7细胞24 h后,CCK-8法检测其对RAW264.7细胞活力的调节作用.以0.16、0.80、4.00 μg/ml的GP900829～1099重组蛋白刺激RAW264.7细胞,以PBS为对照组,脂多糖(1 μg/ml)为阳性对照,24 h后流式细胞术检测CD86表达量,qPCR检测RAW264.7细胞中IL-6和TNF-α mRNA的相对转录水平,ELISA检测RAW264.7细胞培养上清中IL-6、TNF-α的表达水平.采用蛋白质免疫印迹分析NF-κB和MAPK信号通路中P65蛋白和细胞外调节蛋白激酶(ERK)蛋白磷酸化水平.结果 GP900829～1099蛋白二级结构中β转角占比9.23％,无规则卷曲占比64.58％,且含有较丰富的T、B细胞抗原表位.表达的GP900829～1099重组蛋白的相对分子质量约为49000.CCK-8结果显示,GP900829～1099对细胞没有毒性作用,后续实验采用0.16、0.80和4.00 μg/ml作为作用浓度.流式细胞术结果显示,CD86+的阳性表达率分别为(13.500±0.815)％、(18.670±0.657)％、(20.470±1.271)％,后两者均高于对照组的(14.500±0.872)％(t=3.818、3.872,P＜0.05).qPCR结果显示,0.16、0.80和 4.00 μg/ml组 RAW264.7 细胞的 IL-6 mRNA 相对转录水平分别为 1.409±0.050、2.052±0.098 和 3.284± 0.097,均高于对照组的 1.010±0.096(t=3.700、7.595、16.700,均P＜0.05);TNF-α mRNA相对转录水平分别为1.077±0.034、1.440±0.021 和2.378±0.037,后两者均高于对照组 1.000±0.025(t=13.380、30.850,均P＜0.05).ELISA检测结果显示,RAW264.7细胞培养上清中,0.16、0.80和4.00 μg/ml组IL-6的表达水平分别为(535.400± 17.230)、(572.800±8.286)、(555.600±23.940)mg/L,均高于对照组的(454.400±18.630)mg/L(t=3.193、5.809、3.339,P＜0.05);TNF-α细胞因子的表达水平分别为(351.800±12.270)、(386.400±10.250)、(489.800± 10.540)mg/L,后两者均高于对照组的(324.200±11.070)mg/L(t=4.125、10.830,P＜0.05).蛋白质免疫印迹结果显示,0.16、0.80和4.00 μg/ml组RAW264.7细胞p-P65、p-ERK蛋白的相对表达水平分别为2.294±0.254、1.714± 0.205、1.877±0.309,1.522±0.054、1.760±0.066、1.582±0.027,均高于对照组的 1.0±0.0(t=5.100、3.489、2.836,9.737、11.450、21.900,均P＜0.05).结论 不同浓度GP900829-～1099重组蛋白刺激巨噬细胞后,通过激活NF-κB和MAPK信号通路诱导巨噬细胞活化,通过促进TNF-α和IL-6 mRNA的转录参与巨噬细胞的免疫调节.