目的:探讨三棱、莪术提取物对骨关节炎大鼠软骨细胞损伤以及NADPH氧化酶2（NOX2）/活性氧（ROS）/核因子-κB（NF-κB）信号通路的影响。方法:将50只大鼠随机分为假手术组、模型组及三棱、莪术提取物低、中、高剂量组，每组10只。除假手术组外，构建膝关节炎软组织损伤的大鼠模型，建模后第2天开始给药，三棱、莪术提取物低、中、高剂量组大鼠灌胃三棱、莪术提取物5、10、20 g/kg，假手术组和模型组大鼠灌胃等量0.9%氯化钠溶液，每天1次，连续灌胃给药20 d。观察各组大鼠膝关节行为学、骨代谢指标、血清超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）水平、炎性因子以及膝关节组织中NOX2和NF-κB蛋白表达水平。结果:与模型组比较，三棱、莪术提取物低、中、高剂量组小鼠行为异常评分、软骨寡聚基质蛋白（COMP）、MDA、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、NOX2和NF-κB水平均逐渐降低（均 P<0.05），蛋白聚糖、SOD、GSH和白细胞介素-10（IL-10）水平均逐渐升高（均 P<0.05），且具有剂量相关性。 结论:三棱、莪术提取物可有效改善大鼠骨关节炎软骨损伤，可能与抑制NOX2/ROS/NF-κB信号通路活性有关。

目的:通过生物信息学对先天性小耳畸形基因调控网络进行分析。方法:采用安捷伦全基因组外显子微阵列芯片鉴定2017年5月至2018年8月中国医学科学院整形外科医院收治的3例先天性小耳畸形伴健侧耳较普通人明显增大者的小耳残耳软骨与健侧耳软骨的表达谱，获取差异表达基因，通过聚类分析，使用DAVID数据库对差异表达基因进行基因本体论与生物学信号通路富集分析。运用STRING数据库，Cytoscape软件及插件对差异基因进行蛋白质互作分析，利用GeneCards数据库对相关基因功能进行注释。结果:通过对数据筛选、排除，共获得差异基因124个，其中下调93个，上调31个。差异基因主要涉及细胞外基质构成，对应力刺激反应，骨骼及软骨形成等方面，信号通路主要涉及磷脂酰肌醇3/蛋白激酶(PI3K-Akt)信号通路等。构建差异基因蛋白互作网络，发现EYA转录辅激活因子和磷酸酶1(EYA1)，Ⅱ型胶原蛋白α1链(COL2A1)，软骨寡聚基质蛋白(COMP)等可能在先天性小耳畸形软骨病变发生中起重要作用。结论:通过对先天性小耳畸形病例基因进行生物信息学挖掘，有助于了解疾病的病因学，为先天性小耳畸形的预防提供新的基因靶点。

目的:探讨冠心病(CAD)患者血浆致动脉硬化指数(AIP)及炎症因子水平与冠状动脉钙化积分的相关性，并评价其对冠状动脉钙化(CAC)的辅助诊断价值。方法:回顾性连续选入2019年6月至2020年6月就诊于保定市第一中心医院，经冠状动脉CT血管造影(CTA)及冠状动脉造影诊断的CAD患者241例，依据冠状动脉CTA是否存在钙化分为CAC组63例、非CAC组178例。收集患者临床资料，采用酶联免疫吸附法检测血清炎症因子水平。分析CAC积分与AIP及炎症因子水平的相关性，并评价AIP及炎症因子对CAD患者CAC形成的诊断价值。结果:CAC组患者的AIP及血清骨保护素(OPG)、清软骨寡聚基质蛋白(COMP)水平高于非CAC组，而血清成纤维细胞生长因子21(FGF21)水平低于非CAC组，差异均有统计学意义(均 P<0.01)。相关性分析发现，CAD患者的CAC积分与AIP及OPG、COMP水平呈正相关( r＝0.581、0.451、0.326， P<0.05)，与FGF21水平呈负相关( r＝－0.294， P<0.05)。ROC曲线分析显示，AIP、OPG、COMP及FGF21对CAD患者CAC形成具有诊断价值(均 P<0.05)。AIP>0.387、OPG>5.150 ng/ml、FGF21≤136.35 pg/ml、COMP>733.16 ng/ml是CAD患者CAC形成的独立危险因素(均 P<0.05)。 结论:AIP升高、炎症因子水平改变可作为辅助诊断CAD患者CAC形成的标志物。

目的·通过研究高糖环境下肾小球足细胞中软骨寡聚基质蛋白(cartilage oligomeric matrix protein,COMP)与自噬的关系,进一步阐明在高糖环境下足细胞受损的可能机制.方法·从GENE EXPRESSION OMNIBUS(GEO)数据库下载基因表达数据集GSE104948,使用GEO2R筛选差异表达基因(differentially expressed gene,DEG),并对筛选出来的DEG进行富集分析.将加权基因共表达网络分析(Weighted Gene Co-Expression Network Analysis,WGCNA)与STRING数据库构建 DEG的蛋白互作网络(protein protein interaction network,PPI)获得的相关性最高的关键基因(hub gene)取交集,并再次进行富集分析.体外培养条件永生性小鼠足细胞株,待其分化完全后,采用高糖刺激,Western blotting检测足细胞COMP、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、微管相关蛋白1A/1B-轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain3,LC3/MAP1LC3)等蛋白的表达.进一步通过抑制COMP的shRNA慢病毒载体感染足细胞以抑制COMP表达,并通过嘌呤霉素筛选稳定株,经Western blotting检测稳定株COMP、mTOR、LC3的表达,以观察COMP对自噬的影响.结果·共筛选出362个DEG进行后续分析.在这些DEG中,284个基因上调,78个基因下调.基因本体论(Gene Onotology,GO)术语分析结果显示,糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)数据集中的DEG主要富集于细胞表面受体信号通路、受体结合等.主要富集的京都基因和基因组数据库(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路包括细胞因子?细胞因子受体相互作用、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/AKT)信号通路等.WGCNA和PPI两部分hub基因取交集,验证了64个hub基因,再次用KEGG注释hub基因,发现大部分hub基因富集在"细胞外基质(extracellular matrix,ECM)?受体相互作用"和"PI3K/AKT信号通路".在64个hub基因中,COMP呈显著高表达(logFC>2),而PI3K/AKT/mTOR信号通路是经典的自噬通路,提示COMP可能通过该通路影响细胞自噬.Western blotting结果显示,与甘露醇对照组、低糖组比较,高糖刺激下足细胞COMP表达明显升高.与对照组相比,高糖组LC3-Ⅱ的水平明显降低,表明高糖环境下足细胞的自噬启动受到了抑制.与阴性对照相比,敲低COMP的小鼠肾足细胞LC3-Ⅱ水平明显升高,mTOR随着COMP水平的降低也有所下降,表明抑制COMP有助于足细胞的自噬恢复.结论·DN患者的COMP高表达,高度富集于ECM受体和PI3K/AKT信号通路.高糖环境下小鼠肾足细胞自噬受到抑制,高糖诱导的足细胞COMP高表达可能是自噬抑制的关键因素,抑制COMP有助于小鼠肾足细胞的自噬恢复.

目的:观察益肾养血蠲痹方治疗膝骨关节炎的疗效及对患者膝关节功能和血清生长调节致癌基因-α(GRO-α)、骨保护素(OPG)、软骨寡聚基质蛋白(COMP)的影响.方法:前瞻性选取2021 年12 月—2023 年1 月收治的膝骨关节炎患者128 例,采用随机数字表法分为西医组和方剂组.西医组给予西药治疗,方剂组给予益肾养血蠲痹方联合西药治疗.记录两组中医证候积分、视觉模拟(VAS)评分、西安大略和麦克马斯特大学(WOMAC)评分及血清氧化应激因子、GRO-α、OPG、COMP、血沉(ESR)水平变化,并统计两组总有效率.结果:方剂组的总有效率为93.74%(60/64),高于西医组的81.25%(52/64),差异有统计学意义(P<0.05).治疗后,两组中医证候积分、VAS评分、WOMAC评分较治疗前下降(P<0.05),方剂组中医证候积分、VAS评分、WOMAC评分低于西医组(P<0.01).治疗后,两组OPG、超氧化物歧化酶(SOD)水平较治疗前上升(P<0.05),GRO-α、COMP、ESR、丙二醛(MDA)水平较治疗前下降(P<0.05),方剂组OPG、SOD水平高于西医组(P<0.01),GRO-α、COMP、ESR、MDA水平低于西医组(P<0.05,P<0.01).结论:益肾养血蠲痹方可有效治疗膝骨关节炎,通过调节氧化应激因子、GRO-α、OPG、COMP等因子的表达,改善膝关节功能,减轻疼痛,提高疗效.

背景:牙源干细胞在再生医学与组织工程等领域的研究不断深入,为牙相关组织修复及全身疾病治疗带来了希望.但目前对不同年龄区间牙源干细胞生物学特性上的差异缺少系统的分析.目的:探讨脐血源血小板裂解液培养人乳牙、恒牙牙髓干细胞的生物学特性,为人血小板裂解液代替胎牛血清提供可靠依据.方法:取出乳牙、少年恒牙及成年恒牙牙髓组织,在含体积分数为10%胎牛血清或5%,10%,15%人血小板裂解液的DMEM/F-12培养基中培养,采用细胞计数法检测4组细胞增殖情况,选取最佳人血小板裂解液浓度进行后续实验.在最佳人血小板裂解液浓度条件下,体外培养乳牙、少年恒牙及成年恒牙牙髓干细胞,显微镜下观察细胞生长状态,流式细胞术检测细胞表面特异性抗原,细胞计数法和CCK-8法检测细胞增殖能力,三系分化实验观察细胞体外分化能力.结果与结论:①10%人血小板裂解液组的细胞增殖速率最高;②各组牙髓组织块周围均有梭形成纤维状细胞生长并扩增,乳牙与少年恒牙细胞形态无明显差异;与同代次乳牙和少年恒牙细胞相比,成年恒牙细胞体积偏大;③流式细胞术检测结果显示乳牙、少年恒牙及成年恒牙牙髓干细胞均符合间充质来源干细胞的表型特征;④成年恒牙牙髓干细胞增殖能力明显低于乳牙及少年恒牙牙髓干细胞(P<0.01);⑤成年恒牙牙髓干细胞中成骨相关基因碱性磷酸酶、骨形态发生蛋白2 mRNA表达,成脂相关基因脂蛋白脂肪酶、过氧化物酶体增殖物激活受体γ2 mRNA表达,成软骨相关基因Ⅱ型胶原α1、软骨寡聚基质蛋白mRNA表达均显著低于乳牙及少年恒牙牙髓干细胞(P<0.01);⑥结果表明,人乳牙与少年恒牙牙髓干细胞相较于成年恒牙牙髓干细胞具有更强的增殖能力与多向分化潜能,更适用于临床研究和疾病治疗.

背景:传统蒙医临床应用蒙药额尔敦-乌日勒治疗骨关节炎的疗效肯定,但其治疗作用及相关机制尚不明确.目的:观察蒙药额尔敦-乌日勒对大鼠骨关节炎的修复过程,分析其作用机制.方法:将30只8周龄SD大鼠,采用单侧膝关节腔内注射碘乙酸钠溶液建立骨关节炎模型.造模 2周后,采用随机数字表法将大鼠分为3组:对照组(6只)灌胃给予生理盐水,低、高剂量组(各12只)分别灌胃给予蒙药额尔敦-乌日勒1.4,2 g,3次/d.连续给药2,4周后,取大鼠血液样本、关节软骨及关节周围骨质,检测软骨代谢标志物(软骨寡聚基质蛋白、蛋白聚糖)、骨代谢标志物(骨碱性磷酸酶、硫酸盐角蛋白)、炎性标志物(白细胞介素6、肿瘤坏死因子α)、脂代谢标志物(总胆固醇、三酰甘油)等相关因子的变化,同时进行病理组织学观察.结果与结论:①给药2,4周后的qRT-PCR检测结果显示,与对照组比较,低、高剂量组大鼠膝关节软骨组织中寡聚基质蛋白、蛋白聚糖及关节周围骨质中骨碱性磷酸酶、硫酸盐角蛋白的mRNA表达均显著降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001),其中以高剂量组降低更显著;②给药2,4周后,与对照组比较,低、高剂量组大鼠血清肿瘤坏死因子α、白细胞介素6水平降低(P<0.01,P<0.001),总胆固醇、三酰甘油水平升高(P<0.05,P<0.01,P<0.001),其中以高剂量组改善更显著;③苏木精-伊红染色显示,对照组大鼠膝关节软骨组织表层有较大缺损区,组织结构不明,炎症细胞浸润严重;低剂量组给药2周后大鼠膝关节软骨表面粗糙,细胞排列紊乱,软骨结构改善不明显,给药4周后大鼠膝关节软骨炎性细胞减少,结构有所恢复;高剂量组给药2周后大鼠膝关节软骨组织结构较清晰,炎症明显减轻,给药4周后大鼠膝关节软骨组织结构更清晰;④结果表明,蒙药额尔敦-乌日勒有较好的抗炎及改善软骨代谢等功效,对大鼠骨关节炎有明显的改善作用.

膝骨关节炎(KOA)是一种包含关节软骨、滑膜、软骨下骨以及关节周围韧带肌肉等组织结构发生病理性改变的退行性全关节疾病.KOA的发病与关节软骨的代谢失衡及细胞因子的启动有关,特别是白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的高表达.其出现于KOA的多条致病信号通路中,调控KOA的细胞内活动,在软骨细胞破坏、细胞外基质减少、软骨重塑异常、软骨下骨化和滑膜炎症等病理过程中扮演重要的角色.低强度脉冲超声(LIPUS)作为一种无创安全的物理治疗手段,其本质上是一种强度较低的机械能,通过其空化效应等物理刺激可以使其效应细胞产生一系列理化反应.LIPUS在KOA的临床应用中疗效确切,可通过调节IL-1β和TNF-α等炎症相关信号通路的活性而达到消炎止痛、促进软骨修复的作用.其治疗机制包括:① LIPUS可通过增强滑膜中巨噬细胞的自噬途径及抑制核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体通路使巨噬细胞产生IL-1β减少,减轻炎症反应;也可通过经典无翅型MMTV整合位点家族蛋白(Wnt)/β-连环蛋白信号通路作用于滑膜中的成纤维细胞从而抑制滑膜纤维化.② LIPUS通过抑制IL-1β诱导的核因子活化B细胞κ轻链增强子(NF-κB)信号通路及调控丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路来促进软骨细胞生成细胞外基质,调节软骨细胞代谢,保护软骨.③ LIPUS 通过激活细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路促进间充质干细胞增殖分化,也可通过整合素-雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路来促进间充质干细胞产生转化生长因子β1(TGF-β1)以促进软骨形成.最新研究还发现LIPUS通过自噬途径促进间充质干细胞的迁移和外泌体释放来修复软骨,为未来LIPUS的联合治疗方向提供新思路.通过对LIPUS作用于KOA炎症相关信号通路的研究进展进行综述,为LIPUS的临床研究及联合治疗方案提供理论依据.

目的:通过对新西兰兔腰椎管狭窄动物模型BBB评分,血清软骨寡聚基质蛋白(COMP)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子(TNF-α)和关节突及椎板病理形态学观察,探讨腰痹汤治疗腰椎管狭窄症的作用机制.方法:取3月龄清洁级新西兰兔48只,体质量(2.80±0.75)kg,按体质量分层随机分组的方法将新西兰大兔分为空白组(A组)、模型组(B组)、实验药物组(C组)及阳性药物对照组(D组),每组12只,采用椎板间开窗、自体骨回填和加压缝合的方式制作腰椎管狭窄症动物模型.于术后2,4,8及12周采用BBB运动功能评分法进行行为学观察,各组各时间点分别处死1,1,4及6只新西兰兔,并取L4和L5左侧关节突关节,L5椎板行病理学观察.术后8周确认手术成功,A组和B组给予蒸馏水灌胃,C组和D组分别给予腰痹颗粒、丹鹿通督片混悬液灌胃,于术后8周和12周分别取兔耳缘血,观察用药前后血清COMP,IL-1β和TNF-α浓度变化.结果:BBB评分显示,各时间点A组差异均无统计学意义(P＞0.05),B,C及D3组于术后2,4及8周呈逐渐下降趋势,3组各时间点组间差异无统计学意义(P＞0.05),但与A组相比,3组各时间点组间差异有统计学意义(P＜0.05);术后12周,除B组外,C组和D组较术后8周均有提高,差异有统计学意义(P＜0.05),但组间差异无统计学意义(P＞0.05);关节突关节和椎板病理切片显示,术后2,4及8周,B,C及D3组显示关节突软骨不平整,伴有缺损和溃疡面,大量软骨细胞坏死,胶原纤维增生明显,椎板骨小梁破坏,椎板与硬膜囊粘连,伴有大量炎症细胞浸润;术后12周,C组和D组可见较多新生的骨小梁形成且成骨活跃,炎症细胞浸润减少;血清学示,术后8周,B,C及D3组血清COMP,IL-1β及TNF-α浓度均高于A组,差异有统计学意义(P＜0.05),但组间差异无统计学意义(P＞0.05);术后12周与术后8周相比,除B组差异无统计学意义(P＞0.05),C组和D组血清COMP,IL-1β及TNF-α浓度均有降低,差异有统计学意义(P＜0.05),组间比较C组COMP浓度低于D组,差异有统计学意义(P＜0.05),而IL-1β和TNF-α浓度则差异无统计学意义(P＞0.05).结论:通过降低血清中COMP的浓度,从而改善关节突软骨功能,抑制IL-1β及TNF-α炎性表达可能是腰痹汤治疗腰椎管狭窄症的机制之一.

目的 探讨阿仑膦酸钠在强直性脊柱炎(AS)治疗中对骨及软骨代谢指标的影响.方法 选取AS患者63例,应用随机数字表法分为观察组32例和对照组31例,两组均进行常规治疗,给予来氟米特联合非甾体类抗炎药物(双氯芬酸钠、美洛昔康等)以及钙剂.观察组在对照组治疗基础上加用阿仑膦酸钠.观察并分析两组患者治疗前后血清软骨寡聚基质蛋白(COMP)、骨特异性碱性磷酸酶(BALP)、抗酒石酸酸性磷酸酶异构体5b(TRACP-5b)、骨桥蛋白(OPN)的含量及炎性指标C-反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率(ESR)情况.结果 两组治疗前后各项指标差异无统计学意义(P＞0.05);治疗后观察组COMP(4.29±1.41) μg·L-1、TRACP-5b(38.26±13.47) ng·L-1、OPN(26.90±11.07) μg·L-1水平明显低于治疗前COMP(7.48±3.20) μg·L-1、TRACP-5b(49.10±14.10) ng·L-1、0PN(35.51±13.63) μg · L-1(P＜0.05),且治疗后观察组低于对照组COMP(6.91 ±2.81) μg· L-1、TRACP-5b(44.80±10.50) ng·L-1、OPN(32.90±11.69) μg·L-1 (P ＜0.05);治疗前两组CRP、ESR差异无统计学意义(P＞0.05),治疗后两组CRP、ESR均较治疗前明显降低(P＜0.05),观察组CRP(6.10±1.42) mg·L-1、ESR(41.42±15.86) mm·h-1较对照组[(25.24±10.68) mg· L-1(50.23±16.35) mm·h-1]降低更明显(P＜0.05).结论 阿仑膦酸钠在AS治疗中,能够抑制患者骨吸收和软骨破坏,使AS患者的骨及软骨代谢异常得以改善,在病情控制中起到一定作用,且安全性高.