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骨形成蛋白4对人视网膜微血管内皮细胞糖酵解水平的影响
编辑人员丨5天前
目的:观察骨形成蛋白4 (BMP4)对人视网膜微血管内皮细胞(hRMEC)中糖酵解水平的影响。方法:实验研究。将体外培养的hRMEC分为正常组、4-羟基壬烯醛(HNE)组(4-HNE组)、4-HNE+BMP4处理组(BMP4组)。4-HNE组细胞培养基中加入10 μmmol/L 4-HNE;BMP4组细胞培养基中加入10 μmmol/L 4-HNE刺激6 h后,再加入100 ng/ml重组人BMP4。采用流式细胞仪检测各组细胞内活性氧(ROS)水平;噻唑蓝比色法检测4-HNE对细胞生存力的影响;细胞划痕实验、Transwell小室法测定4-HNE对细胞迁移能力的影响。采用实时定量聚合酶链反应、蛋白免疫印迹法检测正常组、4-HNE组细胞中BMP4、SMAD同源物9 (SMAD9) mRNA、蛋白相对表达量。采用Seahorse XFe96细胞能量代谢分析仪测定正常组、4-HNE组、BMP4组细胞内糖酵解代谢水平。组间比较采用单因素方差分析。结果:正常组、4-HNE组、BMP4组hRMEC内ROS水平分别为21±1、815±5、810±7。与正常组比较,4-HNE组、BMP4组ROS水平显著升高,差异有统计学意义( F=53.40、50.30, P<0.001)。正常组、4-HNE组细胞生存力分别为1.05±0.05、1.28±0.05;迁移率分别为(0.148±0.005)%、(0.376±0.015)%;穿过小孔的细胞数分别为(109.0± 9.6)、(318.0±6.4)个。与正常组比较,4-HNE组细胞生存力、细胞迁移率、穿过小孔细胞数量明显提高,差异均有统计学意义( F=54.35、52.84、84.35, P<0.05)。4-HEN组细胞中BMP4、SMAD9 mRNA相对表达量分别为1.680±0.039、1.760±0.011;与正常组比较,差异有统计学意义( F=53.66、83.54, P<0.05 )。正常组、4-HEN组细胞中BMP4、SMAD9蛋白相对表达量分别为0.620±0.045、0.860±0.190和0.166±0.049、0.309±0.038;与正常组比较,差异有统计学意义( F=24.87、53.84, P<0.05 )。正常组、4-HNE组、BMP4组细胞内糖酵解、糖酵解能力、糖酵解储备水平分别为1.21±0.12、2.84±0.24、1.78±0.36,2.59± 0.11、5.34±0.32、2.78±0.45和2.64±0.13、5.20±0.28、2.66±0.33;与正常组比较,差异均有统计学意义(4-HNE组: F=86.34、69.75、58.45, P<0.001;BMP4组: F=56.87、59.35、58.35, P<0.05)。4-HNE组、BMP4组细胞内糖酵解、糖酵解能力、糖酵解储备水平比较,差异均无统计学意义( F=48.32、56.33、55.01, P>0.05)。 结论:BMP4通过糖酵解诱导hRMEC的增生和迁移。
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编辑人员丨5天前
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BMP-2、BMP-7在非肌层浸润性膀胱癌患者癌组织中的表达及临床预后意义
编辑人员丨5天前
目的:探讨重组人骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、重组人骨形态发生蛋白-7(BMP-7)在非肌层浸润性膀胱癌患者癌组织中的表达及临床预后意义。方法:选取2016年1月至2018年1月在本院接受经尿道切除术治疗的118例非肌层浸润性膀胱癌患者为研究对象,采用免疫组化法测定膀胱癌组织(膀胱癌组)及癌旁组织(癌旁组)中BMP-2、BMP-7蛋白的表达水平。采用 χ2检验分析BMP-2、BMP-7蛋白表达水平与非肌层浸润性膀胱癌患者的临床病理特征关系,采用多因素Cox回归分析探讨影响非肌层浸润性膀胱癌患者预后的危险因素。 结果:膀胱癌组的BMP-2、BMP-7蛋白阳性表达率低于癌旁组(均 P<0.05)。BMP-2、BMP-7蛋白表达与年龄、性别均无明显相关性(均 P>0.05),与肿瘤最大径、TNM分期、浸润深度、病理级别、淋巴结转移、复发有明显相关性(均 P<0.05),且肿瘤最大径≥5 cm、TNM分期越高、浸润深度越深、病理级别越高、有淋巴结转移、有复发患者的BMP-2、BMP-7阳性表达率较低(均 P<0.05)。BMP-2、BMP-7阳性的膀胱癌患者的5年生存率明显高于BMP-2、BMP-7的阴性患者[75.0%(30/40) vs. 41.0%(32/78)、77.8%(28/36) vs. 41.5%(34/82),均 P<0.05]。肿瘤最大径≥5 cm、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴血管浸润、病理级别高、有复发、BMP-2阴性、BMP-7阴性的膀胱癌患者的5年生存率均显著缩短(均 P<0.05)。Cox回归分析显示:TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、病理级别高、BMP-2阴性、BMP-7阴性是影响膀胱癌患者预后的独立危险因素(均 P<0.05)。 结论:非肌层浸润性膀胱癌患者的癌组织中BMP-2、BMP-7蛋白表达降低,二者与非肌层浸润性膀胱癌的进展程度呈负相关,BMP-2、BMP-7阴性表达是非肌层浸润性膀胱癌预后不良的危险影响因素。
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编辑人员丨5天前
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伴JAK3基因突变的普通变异型免疫缺陷病1例
编辑人员丨5天前
患者,男,20岁,因"反复瘀斑3个月"于2020年10月就诊于我院。患者于入院前3个月无明显诱因出现皮肤多处瘀斑,可自行消退,未在意。此后反复发作,2个月前就诊于外院,血常规:WBC 8.41×10 9/L,HGB 162 g/L,PLT 5×10 9/L,免疫球蛋白IgG 4.57 g/L(正常参考值7~16 g/L),IgA 0.38 g/L(正常参考值0.7~4.0 g/L),IgM 0.36 g/L(正常参考值0.4~2.3 g/L),完善骨髓穿刺等检查诊断"免疫性血小板减少症",给予重组人促血小板生成素(TPO)15 000 U/d联合艾曲泊帕25 mg/d口服,2周后血小板计数升至160×10 9/L,此后以艾曲泊帕25 mg/d维持治疗。2020年10月瘀斑再发而入住我院。起病以来无发热,否认肝病史和特殊家族史。入院后复查血常规:WBC 7.05×10 9/L,HGB 157 g/L,PLT 6×10 9/L。网织血小板31%,球蛋白20.2 g/L,IgG 5.15 g/L,IgA 0.54 g/L,IgM 0.38 g/L,肝炎病毒学、甲状腺功能、风湿免疫相关抗体、淋巴细胞亚群、调节性T细胞(Treg)比例均无异常。流式细胞术检测血浆T细胞相关细胞因子(IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、INF-γ和IL-17A)浓度无异常。肺CT和腹部彩超无异常。骨髓细胞形态学检查:增生活跃,粒系、红系、淋巴系形态和比例未见异常,全片见巨核细胞1515个,颗粒巨核细胞为主,未见产板巨核细胞,提示巨核细胞成熟障碍。染色体核型46,XY[4]。追问病史,患者自幼体弱,10岁前几乎每月均发生"感冒或发热",患者近3年多次血生化检查示球蛋白14~18 g/L(正常参考值20~40 g/L)。患者父母均无免疫球蛋白和血常规异常。
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编辑人员丨5天前
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肾衰营养胶囊对肾性骨病模型大鼠肾功能和骨代谢的改善作用及其对BMP-7/Smads信号通路的影响
编辑人员丨2024/7/27
目的:探讨肾衰营养胶囊对肾性骨病模型大鼠的改善作用及其对骨形态发生蛋白(BMP)-7/Smads信号通路的影响,阐明肾性骨病模型大鼠肾功能和骨代谢与肾性骨病的关系.方法:选取50只SPF级SD大鼠,随机选取10只大鼠作为对照组,另外40只大鼠建立肾性骨病模型.将30只造模成功大鼠分为模型组、阳性对照组和肾衰营养胶囊组,每组各10只.对照组和模型组大鼠采用生理盐水灌胃,阳性对照组大鼠给予0.01 mg·kg-1骨化三醇灌服,肾衰营养胶囊组大鼠给予1.2 g·kg-1肾衰营养胶囊灌服,均灌胃12周.采用HE染色观察各组大鼠股骨组织病理形态表现,全自动生化分析仪和化学发光法检测各组大鼠血清中肾功能和钙磷代谢指标,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组大鼠股骨组织中BMP-7和Smad1/5/8 mRNA表达水平,Western blotting法检测各组大鼠股骨组织中BMP-7、磷酸化BMP-7(p-BMP-7)、Smad1/5/8和磷酸化Smad1/5/8(p-Smad1/5/8)蛋白表达水平.结果:HE染色,对照组大鼠骨小梁排列正常,成骨细胞和类骨质面积未发生改变;模型组大鼠骨小梁宽度和平均类骨质面积增加,成骨细胞数量减少;阳性对照组和肾衰营养胶囊组大鼠骨小梁宽度及平均类骨质面积减小,成骨细胞数量增加.与对照组比较,模型组大鼠血尿素氮(BUN)和血肌酐(Scr)水平均升高(P<0.05);与模型组比较,阳性对照组和肾衰营养胶囊组大鼠BUN及Scr水平均降低(P<0.05);与阳性对照组比较,肾衰营养胶囊组大鼠BUN和Scr水平均降低(P<0.05).与对照组比较,模型组大鼠血清中钙离子(Ca2+)水平降低(P<0.05),磷离子(P3-)、甲状旁腺激素(PTH)和碱性磷酸酶(ALP)水平均升高(P<0.05);与模型组比较,阳性对照组和肾衰营养胶囊组大鼠血清中Ca2+水平升高(P<0.05),P3-、PTH和ALP水平均降低(P<0.05);与阳性对照组比较,肾衰营养胶囊组大鼠血清中Ca2+水平升高(P<0.05),P3-、PTH和ALP水平均降低(P<0.05).RT-qPCR法,与对照组比较,模型组大鼠股骨组织中BMP-7 和Smad1/5/8 mRNA表达水平降低(P<0.05);与模型组比较,阳性对照药组和肾衰营养胶囊组大鼠股骨组织中BMP-7及Smad1/5/8 mRNA表达水平升高(P<0.05);与阳性对照组比较,肾衰营养胶囊组大鼠股骨组织中BMP-7和Smad1/5/8 mRNA表达水平升高(P<0.05).Western blotting法,与对照组比较,模型组大鼠股骨组织中BMP-7、p-BMP-7、Smad1/5/8和p-Smad1/5/8蛋白表达水平均降低(P<0.05);与模型组比较,阳性对照组和肾衰营养胶囊组大鼠股骨组织中BMP-7、p-BMP-7、Smad1/5/8 和p-Smad1/5/8蛋白表达水平均升高(P<0.05);与阳性对照组比较,肾衰营养胶囊组大鼠股骨组织中BMP-7、p-BMP-7、Smad1/5/8和p-Smad1/5/8蛋白表达水平均升高(P<0.05).结论:肾衰营养胶囊可改善肾性骨病模型大鼠的肾功能和钙磷代谢紊乱,促进骨髓基质细胞增殖,改善骨代谢情况,其机制可能与激活BMP-7/Smads信号通路有关.
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编辑人员丨2024/7/27
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卵巢低反应人群IVF-ET中采取拮抗剂方案与PPOS方案的疗效比较
编辑人员丨2024/6/22
目的 探讨拮抗剂方案与高孕激素促排卵(PPOS)方案在卵巢低反应人群体外受精-胚胎移植(IVF-ET)中的应用效果.方法 选择该院2018年1月至2022年7月就诊的卵巢低反应患者128例为研究对象,根据促排卵方案不同分为拮抗剂组和PPOS组,每组64例.比较两组重组人绒毛膜促性腺素(HCG)注射日性激素水平[孕酮(P)、卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E2)、促黄体生成素(LH)]、卵泡周围血流参数[搏动指数(PI)、收缩期最大血流速度(PSV)、阻力指数(RI)、动脉收缩期峰值流速/舒张末期血流速度(S/D)]、血清生长分化因子-9(GDF-9)、骨形态发生蛋白-15(BMP-15)及促排卵情况、胚胎质量、妊娠结局.结果 PPOS组HCG注射日血清E2、BMP-15水平及PSV、优势卵泡数、可移植胚胎数、获卵数、成熟卵数、优质胚胎数、两原核(2PN)受精数、临床妊娠率、活产率大于或高于拮抗剂组,LH水平、周期取消率、流产率低于拮抗剂组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 在卵巢低反应人群IVF-ET中,与拮抗剂方案相比,PPOS方案可通过调节性激素水平,改善卵泡周围血流参数及BMP-15水平,提升促排卵效果,改善胚胎质量及妊娠结局.
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编辑人员丨2024/6/22
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骨形态发生蛋白5对肝癌细胞生物学行为的影响及机制
编辑人员丨2024/5/11
目的 探究骨形态发生蛋白5(BMP5)对人肝癌细胞生物学行为的影响及机制.方法 将正常人肝细胞系L02与人肝癌细胞系Hep3B、Huh7置于37℃、5%CO2细胞培养箱中培养,采用RT-qPCR法检测正常人肝细胞系L02与人肝癌细胞系Hep3B、Huh7中BMP5 mRNA表达.将肝癌细胞系Hep3B、Huh7分为对照(NC)组及低、中、高剂量组,低、中、高剂量组分别用1、10、100 ng/mL浓度的重组人骨形态发生蛋白5(rh-BMP5)处理细胞,通过CCK-8法检测细胞增殖,Annexin-V/PI流式细胞术检测细胞凋亡,划痕实验检测细胞迁移,Western blotting法检测增殖细胞核抗原PCNA和SMAD通路关键蛋白及其磷酸化(SMAD3、p-SMAD3)表达.结果 与正常肝细胞系L02相比,BMP5在肝癌细胞系Hep3B、Huh7中表达升高(P均<0.05).与NC组相比,中、高剂量组rh-BMP5可促进Hep3B、Huh7细胞增殖和PCNA表达上调(P均<0.05),高剂量组100 ng/mL的rh-BMP5处理肝癌细胞24及48 h细胞凋亡率降低、迁移率增高(P均<0.05).高剂量组与NC组相比,p-SMAD3表达升高(P<0.05).结论 BMP5在肝癌细胞系中高表达,可能通过增强SMAD3活化促进肝癌细胞Hep3B、Huh7的增殖、迁移并抑制凋亡.
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编辑人员丨2024/5/11
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胶原结合域-骨形态发生蛋白2-胶原软骨支架制备及其成软骨诱导
编辑人员丨2024/1/6
背景:天然骨形态发生蛋白2在体内弥散和降解速度较快,降低了局部浓度和治疗效果,单纯将骨形态发生蛋白2与组织工程支架复合后不能在体内长期停留,无法达到良好的缓控释效果.目的:制备并检测胶原结合域-骨形态发生蛋白2-胶原软骨支架的生物性能及成软骨诱导效果.方法:提取SD大鼠鼠尾胶原,采用真空冷冻干燥及化学交联法制备胶原软骨支架.通过快速克隆C112-同源重组法构建表达胶原结合域-骨形态发生蛋白2质粒,通过基因工程构建并导入大肠杆菌,分离纯化胶原结合域-骨形态发生蛋白2.将天然骨形态发生蛋白2与胶原结合域-骨形态发生蛋白2分别与胶原软骨支架结合,检测支架中骨形态发生蛋白2释放水平,采用CCK-8法及F-Actin染色法检测胶原结合域-骨形态发生蛋白2-胶原软骨支架的生物相容性;将骨髓间充质干细胞分别种植在两种胶原软骨支架上进行成软骨诱导,检测其成软骨诱导活性.结果与结论:①胶原结合域-骨形态发生蛋白2与胶原软骨支架的结合率高于天然骨形态发生蛋白2(P<0.05);体外浸泡于PBS中7 d,胶原结合域-骨形态发生蛋白2-胶原软骨支架中骨形态发生蛋白2的释放量小于天然骨形态发生蛋白2-胶原软骨支架(P<0.05);CCK-8实验及F-Actin染色结果显示,胶原结合域-骨形态发生蛋白2-胶原软骨支架无明显细胞毒性,具有良好的生物相容性;②成软骨诱导14 d后的ELISA检测显示,胶原结合域-骨形态发生蛋白2-胶原软骨支架组聚集蛋白聚糖、Ⅱ型胶原蛋白A1的表达均高于天然骨形态发生蛋白2-胶原软骨支架组(P<0.05);扫描电镜下可见,两组支架孔隙内壁上均可见较多骨髓间充质干细胞贴附生长,细胞形态及大小一致,排列紧密,未出现细胞碎裂或形态异常;③结果表明,胶原结构域-骨形态发生蛋白2-胶原软骨支架具有良好的生物性能及成软骨诱导活性.
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编辑人员丨2024/1/6
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自体髂骨混合rhBMP-2植骨联合内侧支撑钢板与空心钉内固定治疗中青年陈旧性股骨颈骨折
编辑人员丨2023/12/9
目的 观察自体髂骨混合重组人骨形态发生蛋白-2(Recombinant human bone morphogenetic protein-2,rhBMP-2)植骨联合内侧支撑钢板与空心钉内固定治疗中青年陈旧性股骨颈骨折的临床疗效.方法 回顾性分析自2018-01-2020-06诊治的13例中青年陈旧性股骨颈骨折,髋关节前侧入路显露骨折端彻底清除瘢痕组织及硬化骨,于股骨粗隆下外侧呈倒三角形置入3枚空心钉,取自体髂骨混合rhBMP-2于骨折断端填充植骨;将塑形后的3.5 mm重建钢板置于股骨颈前内侧,并置入螺钉固定.结果 13例术后均获得随访,随访时间为16~37个月,平均21.5 个月.所有患者均未出现切口感染、下肢深静脉血栓形成、股外侧皮神经损伤、骨折不愈合、内固定失效等并发症.骨折愈合时间为5~9个月,平均6.4个月.末次随访时髋关节功能Harris评分为79~95分,平均91.8分;优7例,良5例,可1例.1例术后13个月出现股骨颈短缩畸形(短缩长度<2 cm),末次随访时髋关节功能Harris评分为84分,尚未明显影响日常生活.1 例术后11个月出现股骨头缺血性坏死(ARCO分期为Ⅲ期),对症治疗后股骨头坏死未进一步发展,末次随访时髋关节功能Harris评分为79分.结论 采用自体髂骨混合rhBMP-2填充植骨联合内侧支撑钢板与空心钉内固定治疗中青年陈旧性股骨颈骨折可以获得良好的临床疗效,术后骨折愈合良好,骨折不愈合与股骨头缺血性坏死发生率明显降低.
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编辑人员丨2023/12/9
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TiO2纳米管表面聚合物辅助沉积Ta2O5涂层对MC3T3-E1细胞生物学活性的影响
编辑人员丨2023/8/26
目的 探讨TiO2纳米管表面聚合物辅助沉积五氧化二钽(Ta2O5)涂层对小鼠成骨前体细胞MC3T3-E1生物学活性的影响.方法 制备出Ta/TiO2纳米管(Ta/NT组)、Ta2O5/纯钛(Ta2O5/PT组)及Ta2O5/TiO2纳米管(Ta2O5/NT组)3组样本,其中后2组的Ta2O5涂层通过聚合物辅助沉积法制备.对3组样品进行表征检测:扫描电镜(SEM)观察表面形貌,X射线光电子能谱(XPS)分析表面元素组成,X射线衍射(XRD)检测表面化合物.选用MC3T3-E1细胞探讨3组样品对细胞生物学活性影响;荧光显微镜观察细胞骨架和细胞核的黏附;CCK-8法测定细胞活性;检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性;茜素红染色后半定量分析钙沉积;Real-time PCR检测成骨标志基因重组人骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、ALP、骨钙蛋白(OCN)和骨桥蛋白(OPN)的基因表达.结果 SEM图像显示Ta2O5/NT组表面可见TiO2纳米管基底表面覆盖片状、带状交联的微-纳米级Ta2O5涂层结构;XRD显示Ta2O5/NT组的TiO2纳米管呈现微量的脱矿钛及金红石晶体结构;与Ta/NT组比,Ta2O5/NT组和Ta2O5/PT组黏附细胞核密度较高,细胞骨架块状、丝状结构相对较大,交联、团簇状较多,细胞骨架张力较大,具有较高的细胞活力;茜素红染色样本半定量分析显示Ta2O5/NT组、Ta/NT组、Ta2O5/PT组钙沉积量依次降低(P<0.01);Ta2O5/NT组、Ta/NT组和Ta2O5/PT组7d和14d的ALP活性、钙沉积量和ALP、OCN、OPN mRNA含量依次降低,14 d Ta2O5/NT组的BMP-2 mRNA含量在3组中最高(P<0.05).结论Ta2O5/TiO2纳米管复合涂层可促进MC3T3-E1细胞黏附、细胞活性、ALP活性、矿化及成骨相关基因的表达,有利于其生物学活性的发挥.
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编辑人员丨2023/8/26
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超声评估重组人骨形态发生蛋白2(rhBMP-2)人工骨血管化的实验研究
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨超声在不同人工骨血管化中的应用价值.方法 对15只新西兰兔分别行经典双前肢桡骨大段骨缺损模型造模,左肢植入重组人骨形态发生蛋白2(rhBM P-2)珊瑚羟基磷灰石人工骨(CHA),右肢植入CHA,分别于3d、7d、11d、15d、30d及45d,对双侧CHA的4个等分点分别行常规超声及超声造影,结合时间强度曲线测量以上部位的基础强度(BI)、峰值强度(PI)、增强强度(ΔSI)、BI/PI及达峰时间(T T P),分析结果与病理进行对照.结果 相同时间内rhBM P-2组血管化程度比普通组强,前者血管化时间比后者提前,两组各 ΔSI与时间均呈显著正相关(r=0.938,0.890;P=0.000),T T P与时间均呈显著负相关(BI/PI:r=-0.798,-0.899;P=0.000;T T P:r=-0.874,-0.868,P=0.000).两种CHA四个观察点间对比,各值差异均无统计学意义,表明各观察点间血管化程度无明显差别.结论 常规超声对移植骨的结构显示清晰,超声造影能较好地显示两种CHA早期血流灌注情况,准确评估rhBMP-2应用前后CHA微血管生长的区别,二者结合有望成为临床移植骨血管化评估的新手段.
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编辑人员丨2023/8/6
