目的:探讨瞬时受体电位阳离子通道亚家族C成员3(TRPC3)对氧诱导视网膜病变(OIR)小鼠视网膜和人视网膜血管内皮细胞(HREC)生物学行为的调控作用。方法:选取健康SPF级7日龄C57BL/6小鼠32只，采用随机数字表法分为对照组和OIR组，每组16只，其中对照组不做特殊处理，OIR组小鼠诱导OIR模型。出生后第17天(PN17)采用视网膜铺片免疫荧光染色验证模型构建是否成功。将体外培养HREC分为正常对照组、转染试剂组和si-TRPC3组，其中正常对照组不做特殊处理，转染试剂组和si-TRPC3组分别采用转染试剂和转染试剂＋si-TRPC3转染。采用实时荧光定量PCR法检测TRPC3 mRNA相对表达量；采用Western blot法检测TRPC3、转录因子NF-E2相关因子(Nrf2)和超氧化物歧化酶(SOD)蛋白相对表达量。另将HREC分为正常对照组、血管内皮生长因子(VEGF)组、si-TRPC3组和Pyr3(TRPC3通道抑制剂)组，分别用完全培养基、含有20 ng/ml VEGF重组蛋白的培养基、含有20 ng/ml VEGF重组蛋白的培养基(si-TRPC3转染72 h)和含有20 ng/ml VEGF重组蛋白＋1 μmol/L Pyr3的培养基培养48 h，采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测HREC增生能力；分别采用细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞横向和纵向迁移能力。结果:PN17时OIR组小鼠视网膜出现病理性新生血管团簇强荧光染色。OIR组小鼠视网膜TRPC3 mRNA和蛋白相对表达量分别为2.057±0.244和1.517±0.290，明显高于对照组的0.983±0.033和0.874±0.052，差异均有统计学意义( t＝6.165、3.094，均 P<0.05)。si-TRPC3组TRPC3 mRNA和蛋白相对表达量明显低于正常对照组和转染试剂组，Nrf2和SOD蛋白相对表达量明显高于正常对照组和转染试剂组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。CCK-8实验结果显示，VEGF组细胞吸光度( A)值明显高于正常对照组，si-TRPC3组和Pyr3组细胞 A值明显低于VEGF组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。细胞划痕实验结果显示，VEGF组细胞横向迁移率高于正常对照组，si-TRPC3组和Pyr3组细胞横向迁移率低于VEGF组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。Transwell实验结果显示，VEGF组染色细胞数明显多于正常对照组，si-TRPC3组和Pyr3组染色细胞数明显少于VEGF组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:OIR模型小鼠视网膜中TRPC3表达水平升高，下调TRPC3可抑制HREC增生和迁移能力，其机制与Nrf2氧化应激通路激活有关。

目的:观察白细胞介素-35(IL-35)对效应T细胞内高迁移率族蛋白B1(HMGB1)分布的影响，进一步探索其机制。方法:分离、培养并活化雄性C57BL/6小鼠脾脏中CD4 + T淋巴细胞，0.025% digitonin处理3 min后固定，FAC Scan流式细胞仪检测细胞质HMGB1的表达及IL-35的影响；进一步以1 μmol/L EX527及1 μmol/L SRT1720调节细胞内HMGB1的分布，观察细胞内LC3-Ⅱ和Beclin 1变化；最后应用蛋白质印迹法(Western blot)检测T细胞内信号转导及转录激活因子(STAT1)-鼠双微体基因2 (MDM2)-p53信号转导通路的变化。符合正态性分布数据进行进行Student’s t检验，不符合正态分布数据进行独立样本非参数检验。 结果:活化效应性T细胞内，HMGB1含量[(58.02±12.77)%]高于对照组[(6.03±2.35)%， t＝9.809， P<0.01]，50 ng/ml重组IL-35处理组细胞质HMGB1[(28.50±10.66)%]低于anti-CD3/CD28组( t＝4.418， P<0.01)；SRT1720抑制细胞质LC3Ⅱ和Beclin 1的表达，与EX527作用相反；活化效应性T细胞中，IL-35促进STAT1磷酸化，抑制细胞质MDM2表达，进而降低p53降解，增加细胞核及细胞质p53。 结论:对STAT1-MDM2-p53信号转导通路的干预可能是IL-35影响高迁移率族蛋白B1分布进而干扰效应T细胞自噬的重要机制之一。

目的:探讨原发免疫性血小板减少症（ITP）患者外周血中高迁移率族蛋白B1（HMGB1）对Th17/Treg平衡的影响。方法:收集大同市第五人民医院2017年7月至2018年4月初诊的ITP患者30例作为病例组，另取同期30名健康体检者作为对照组。应用流式细胞术检测Th17和Treg细胞比例，应用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定外周血中HMGB1、白细胞介素17（IL-17）和转化生长因子β（TGF-β）的浓度。分选外周血单个核细胞（PBMC）进行体外培养，经重组人HMGB1（rhHMGB1）处理后，应用实时荧光定量聚合酶链反应检测胞内Treg细胞转录因子叉头状螺旋转录因子3（Foxp3）和Th17细胞转录因子孤核受体γt（RORγt）mRNA表达的变化。比较两组Treg细胞转录因子外周血中各指标的差异，分析HMGB1和Th17/Treg平衡间的关系。结果:与健康对照组相比，ITP患者外周血中Th17细胞比例及HMGB1、IL-17表达水平增高（均 P<0.01），而Treg细胞比例和TGF-β水平降低（均 P<0.01）。Th17细胞比例和IL-17与HMGB1表达水平均呈正相关（均 P<0.01）；Treg细胞比例和TGF-β水平与HMGB1表达水平均呈负相关（均 P<0.01）。体外实验中，PBMC经rhHMGB1刺激后，胞内RORγt mRNA表达较阴性对照组增高（1.50±0.24比0.93±0.22， t=9.612， P<0.01），而Foxp3 mRNA表达较阴性对照组降低（0.72±0.19比1.08±0.18， t=7.387， P<0.01）。 结论:ITP患者外周血中高水平的HMGB1诱导Th17/Treg失衡，加剧炎症反应，可能是原发ITP的重要病因。

目的:探讨高迁移率族蛋白B1（high-mobility group box 1, HMGB1）对呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus, RSV）感染的THP-1单核细胞中核苷酸结合域样受体蛋白3（nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3, NLRP3）炎症小体活化的影响。方法:常规培养THP-1细胞用于RSV病毒的感染实验，将培养的THP-1单核细胞分为4组：未感染RSV组、RSV感染组、RSV感染+人重组HMGB1（rHMGB1）组、RSV感染+甘草素组，RSV感染6 h后继续培养48 h，提取4组细胞总蛋白，Western blot法检测4组THP-1单核细胞的NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing CARD, ASC）、胱天蛋白酶-1（cysteine aspartate specific protease-1, caspase-1）、IL-1β水平。结果:RSV感染组NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β水平高于未感染RSV组（ P<0.05）；RSV感染+rHMGB1组THP-1单核细胞NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β水平高于RSV感染组（ P<0.05）；RSV感染+甘草素组NLRP3、ASC、caspase-1、IL-1β水平低于RSV感染+rHMGB1组（ P<0.05）。 结论:HMGB1可通过促进RSV感染的THP1单核细胞中NLRP3炎症小体的活化进而促进IL-1β的表达而致炎。

目的:探讨高迁移率族蛋白B1（HMGB1）在脂多糖（LPS）诱导的急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征（ALI/ARDS）中的作用及可能的发病机制。方法:①体内实验：将24只SPF级野生C57BL/6雄性小鼠随机分为正常对照组、ALI/ARDS模型组、丙酮酸乙酯（EP）治疗组和EP对照组，每组6只。采用腹腔注射20 mg/kg LPS制备ALI/ARDS模型，正常对照组和EP对照组小鼠腹腔注射等量生理盐水；之后EP治疗组和EP对照组小鼠分别腹腔注射40 mg/kg HMGB1抑制剂EP。6 h后处死小鼠取肺组织，采用免疫荧光技术检测小鼠肺组织硫酸乙酰肝素（HS）、多配体蛋白聚糖-1（SDC-1）、乙酰肝素酶（HPA）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达。取小鼠眼眶血，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清HMGB1含量。②体外实验：将人脐静脉内皮细胞（HUVECs）随机分为正常对照组、HUVECs损伤组（1 mg/L LPS处理6 h）、HMGB1组（1 μmol/L重组HMGB1处理6 h）、HMGB1+EP组（重组HMGB1处理1 h后加入1 μmol/L EP处理6 h）、LPS+EP组（LPS处理1 h后加入1 μmol/L EP处理6 h）和EP组（1 μmol/L EP处理6 h）。采用免疫荧光技术检测内皮细胞HS、SDC-1、HPA和MMP-9的表达。结果:①体内实验：光镜下显示，LPS制模后肺泡间隔增厚，肺泡间隙有大量炎症细胞浸润。与ALI/ARDS模型组相比，EP治疗组小鼠肺组织HS和SDC-1表达量均明显升高〔HS（荧光强度）：0.80±0.20比0.53±0.02，SDC-1（荧光强度）：0.72±0.02比0.51±0.01，均 P<0.05〕，HPA和MMP-9表达量均明显降低〔HPA（荧光强度）：2.36±0.05比3.00±0.04，MMP-9（荧光强度）：2.55±0.13比3.26±0.05，均 P<0.05〕；EP对照组上述指标表达量均无明显变化。与ALI/ARDS模型组相比，EP治疗组血清HMGB1含量明显降低（μg/L：131.88±16.67比341.13±22.47， P<0.05）；EP对照组无明显变化。②体外实验：与HMGB1组相比，HMGB1+EP组内皮细胞HS和SDC-1表达量均明显升高〔HS（荧光强度）：0.83±0.07比0.56±0.03，SDC-1（荧光强度）：0.80±0.01比0.61±0.01，均 P<0.05〕，HPA和MMP-9表达量均明显降低〔HPA（荧光强度）：1.30±0.02比2.29±0.05，MMP-9（荧光强度）：1.55±0.04比2.50±0.06，均 P<0.05〕；EP组HS、SDC-1、HPA和MMP-9表达量均无明显变化。 结论:HMGB1参与LPS所致内皮细胞多糖包被的损伤，导致肺通透性增加，抑制HMGB1可减轻肺损伤。

目的:探讨河南省汉族人群中高迁移率蛋白A2( HMGA2)基因的单核苷酸多态性(SNP)与青春期前特发性矮小(ISS)患儿及重组人生长激素(rhGH)疗效之间的关系，为个体化治疗提供理论依据。 方法:选取2017年7月至2019年9月在郑州大学第三附属医院儿童内分泌诊疗中心诊断并经rhGH规范干预治疗至少1年的青春期前ISS患儿120例(ISS组)，另选取同期体检的120例身高在正常范围的同年龄、同性别健康儿童作为对照。收集其外周血，利用分子生物学技术测定SNP位点rs1042725和rs7968682的多态性分布，分析不同基因型ISS组患儿治疗前后及对照组儿童年生长速率、身高标准差积分(HtSDS)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的变化。结果:1．ISS组及对照组儿童 HMGA2基因rs1042725位点携带CC和CT等位基因的儿童治疗前生长速率均高于TT等位基因组[(4.33±0.64) cm/年，(3.95±0.45) cm/年；(6.35±0.41) cm/年，(6.12±0.32) cm/年比(3.76±0.52) cm/年，(5.96±0.42) cm/年]，差异均具有统计学意义(均 P<0.05)。2.ISS患儿 HMGA2基因rs7968682位点GT基因型治疗后年龄及骨龄HtSDS增长值均高于TT基因型[(0.74±0.30) cm/年比(0.63±0.24) cm/年，(0.16±0.05) cm/年比(0.14±0.05) cm/年]，差异均具有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:河南省汉族人群 HMGA2基因SNP位点(rs1042725)的多态性与ISS的程度可能具有相关性，而SNP位点(rs7968682)的多态性与rhGH的疗效可能有关。

目的:探讨高迁移率族蛋白1（HMGB1）-核因子κB（NF-κB）信号通路对人肝癌细胞自噬和化疗敏感性的影响及可能机制。方法:体外培养肝癌细胞BEL-7402，分为对照组（不作任何处理的BEL-7402细胞）、多柔比星组、重组人HMGB1+多柔比星组、抗HMGB1中和抗体+多柔比星组、吡咯烷二硫氨基甲酸酯+多柔比星组以及3-甲基腺嘌呤+多柔比星组。四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖抑制率；蛋白质印迹法检测HMGB1及NF-κB亚单位p-p65蛋白表达，同时检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ和凋亡相关蛋白bcl-2蛋白的表达；酶标法检测Caspase-9、Caspase-3活性。结果:对照组、多柔比星组、重组人HMGB1+多柔比星组、抗HMGB1中和抗体+多柔比星组、吡咯烷二硫氨基甲酸酯+多柔比星组及3-甲基腺嘌呤+多柔比星组细胞增殖抑制率分别为（1.31±0.16）%、（47.80±6.30）%、（31.60±5.68）%、（67.20±6.83）%、（66.60±6.27）%、（68.60±11.19）%，差异有统计学意义（ F=75.91， P<0.01），提示多柔比星对BEL-7402细胞有增殖抑制作用，重组人HMGB1预处理后，多柔比星对BEL-7402细胞的增殖抑制作用出现减弱；HMGB1表达水平分别为1.17±0.11、1.37±0.15、1.43±0.15、0.70±0.09、1.27±0.12、1.29±0.18，差异有统计学意义（ F=18.70， P<0.01），提示多柔比星作用BEL-7402细胞可使HMGB1高表达，抗HMGB1中和抗体能阻断或减弱这一作用；采用抗HMGB1中和抗体、吡咯烷二硫氨基甲酸酯及3-甲基腺嘌呤预处理细胞后，多柔比星对BEL-7402细胞的增殖抑制作用增强。与对照组相比，多柔比星组、重组人HMGB1+多柔比星组、3-甲基腺嘌呤+多柔比星组p-p65蛋白表达均增加（均 P<0.05）；重组人HMGB1+多柔比星组、抗HMGB1中和抗体+多柔比星组、吡咯烷二硫氨基甲酸酯+多柔比星组p-p65蛋白表达均低于多柔比星组（均 P<0.05）。与对照组相比，多柔比星组、抗HMGB1中和抗体+多柔比星组、吡咯烷二硫氨基甲酸酯+多柔比星组及3-甲基腺嘌呤+多柔比星组bcl-2蛋白表达减少（均 P<0.05），Caspase-9、Caspase-3活性增强（均 P<0.05）；加入重组人HMGB1预处理后，细胞中bcl-2蛋白表达较单用多柔比星作用时增加（ P<0.05），Caspase-9、Caspase-3活性减弱（均 P<0.05）。对照组、多柔比星组、重组人HMGB1+多柔比星组、抗HMGB1中和抗体+多柔比星组、吡咯烷二硫氨基甲酸酯+多柔比星组及3-甲基腺嘌呤+多柔比星组自噬相关蛋白Beclin-1的表达水平分别为0.77±0.12、0.92±0.07、1.29±0.10、0.51±0.03、0.49±0.06、0.42±0.05，差异有统计学意义（ F=97.01， P<0.01）。LC3Ⅱ表达水平分别为0.24±0.04、0.39±0.04、0.49±0.07、0.23±0.05、0.20±0.06、0.20±0.05，差异有统计学意义（ F=26.98， P<0.01）。 结论:HMGB1-NF-κB信号通路活化可降低肝癌BEL-7402细胞对多柔比星的化疗敏感性，其机制可能与调控自噬进而下调多柔比星对肝癌细胞的凋亡诱导作用有关。

目的:利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建稳定敲除高迁移率族蛋白A2（high mobility group protein AT-Hook-2，HMGA2）基因的人甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1细胞模型。方法:重组pLV[2gRNA]- EGFP:T2A:Puro- U6>{hHMGA2 [gRNA#A1]*}- U6>{hHMGA2 [gRNA#A2]*}慢病毒质粒载体的构建：设计靶向HMGA2基因的Dual-gRNA序列，将合成的Dual-gRNA片段克隆到pLV [2gRNA]- EGFP：T2A:Puro-U6载体中，提取单克隆进行测序验证。成功构建的重组质粒载体进行慢病毒包装，并感染TPC-1细胞，利用嘌呤霉素进行筛选获得HMGA2敲除的单克隆，进行PCR及测序验证，实时荧光定量qPCR检测细胞中HMGA2 mRNA的敲除效率。结果:经测序验证，成功构建了靶向HMGA2基因的pLV [2gRNA]- EGFP：T2A:Puro-U6>{hHMGA2 [gRNA#A1]*}-U6> {hHMGA2 [gRNA#A2]*}质粒。挑取单克隆进行PCR鉴定及基因测序，成功获得了HMGA2完全敲除的TPC-1细胞。经实时荧光定量qPCR检测HMGA2敲除的TPC-1细胞，未表达HMGA2 mRNA。结论:利用CRISPR/Cas9基因编辑技术能成功构建稳定敲除HMGA2基因的人甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1细胞模型。

目的 探讨普鲁卡因(PCA)调节高迁移率族蛋白1-晚期糖基化终末产物受体(HMGB1-RAGE)信号通路对脑缺血/再灌注(CI/R)大鼠的神经保护作用.方法 采用线栓法制备CI/R大鼠模型,缺血处理2 h,再灌注24 h.将大鼠随机分为假手术组,模型组(CI/R组),普鲁卡因低、中、高剂量组(PCA-L组、PCA-M组、PCA-H组),普鲁卡因高剂量+HMGB1重组蛋白组(PCA-H+HMGB1组),各组n=10.对大鼠进行神经功能评分,苏木精-伊红染色法观察大鼠脑组织海马CA1区组织病理变化,Tunel染色法检测大鼠脑组织海马CA1区神经元凋亡,酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠脑组织中TNF-α、IL-1β水平;免疫组化法检测大鼠脑组织NGF表达;Western blot法检测大鼠脑组织中HMGB1、RAGE表达.结果 与假手术组比较,CI/R组脑组织损伤严重,神经功能评分、神经元凋亡率、IL-1β及TNF-α水平、NGF表达、HMGB1及RAGE表达均显著升高(均P＜0.05);与CI/R组比较,PCA-L组、PCA-M组、PCA-H组大鼠脑组织损伤相对减轻,神经功能评分、神经元凋亡率、IL-1β及TNF-α水平、HMGB1及RAGE表达均呈显著降低,NGF表达显著升高,呈剂量依赖效应(P＜0.05);与PCA-H组比较,PCA-H+HMGB1组大鼠脑组织损伤加重,神经功能评分、神经元凋亡率、IL-1β及TNF-α水平、HMGB1及RAGE表达均显著升高,NGF表达显著降低(均P＜0.05).结论 普鲁卡因对CI/R大鼠的神经具有一定的保护作用,其机制可能与抑制HMGB1-RAGE信号通路激活相关.

目的 探究蓝萼甲素(GLA)对阿尔茨海默病(AD)大鼠神经炎症及高迁移率族蛋白B1-晚期糖基化终末产物受体(HMGB1-RAGE)信号通路的影响.方法 通过在脑室注射Aβ1-42溶液建立AD大鼠模型,并将大鼠随机分为假手术组、模型组、多奈哌齐组、GLA低剂量组、GLA高剂量组、GLA高+HMGB1组,每组15只.Morris水迷宫实验检测大鼠学习和记忆能力;HE染色检测海马组织病理形态学变化;ELISA检测海马组织中TNF-α、IL-6、IL-1β的含量;免疫荧光检测小胶质细胞标记蛋白Iba-1和星形胶质细胞标记蛋白GFAP的表达;Western blotting检测海马组织中HMGB1-RAGE通路相关蛋白的表达.结果 与假手术组相比,模型组大鼠逃避潜伏期、TNF-α、IL-6、IL-1β的含量、Iba-1和GFAP蛋白阳性表达面积及HMGB1、RAGE、TLR4、p-NF-κB p65/NF-κB p65表达均升高(P<0.05),停留目标象限时间、穿越平台次数减少(P<0.05);与模型组相比,GLA低、高剂量组大鼠逃避潜伏期、TNF-α、IL-6、IL-1β的含量、Iba-1和GFAP蛋白阳性表达面积及HMGB1、RAGE、TLR4、p-NF-κB p65/NF-κB p65表达均降低(P<0.05),停留目标象限时间、穿越平台次数增多(P<0.05),且GLA高剂量组和多奈哌齐组差异无统计学意义(P?0.05);进一步使用HMGB1重组蛋白进行回补实验,发现GLA对神经炎症的抑制作用被逆转,且RAGE水平升高(P<0.05).结论 GLA可能通过抑制HMGB1-RAGE信号通路减轻AD大鼠的神经炎症.