Background::Osteopenia has been well documented in adolescent idiopathic scoliosis (AIS). Bone marrow stem cells (BMSCs) are a crucial regulator of bone homeostasis. Our previous study revealed a decreased osteogenic ability of BMSCs in AIS-related osteopenia, but the underlying mechanism of this phenomenon remains unclear.Methods::A total of 22 AIS patients and 18 age-matched controls were recruited for this study. Anthropometry and bone mass were measured in all participants. Bone marrow blood was collected for BMSC isolation and culture. Osteogenic and adipogenic induction were performed to observe the differences in the differentiation of BMSCs between the AIS-related osteopenia group and the control group. Furthermore, a total RNA was extracted from isolated BMSCs to perform RNA sequencing and subsequent analysis.Results::A lower osteogenic capacity and increased adipogenic capacity of BMSCs in AIS-related osteopenia were revealed. Differences in mRNA expression levels between the AIS-related osteopenia group and the control group were identified, including differences in the expression of LRRC17, DCLK1, PCDH7, TSPAN5, NHSL2, and CPT1B. Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes enrichment analyses revealed several biological processes involved in the regulation of autophagy and mitophagy. The Western blotting results of autophagy markers in BMSCs suggested impaired autophagic activity in BMSCs in the AIS-related osteopenia group. Conclusion::Our study revealed that BMSCs from AIS-related osteopenia patients have lower autophagic activity, which may be related to the lower osteogenic capacity and higher adipogenic capacity of BMSCs and consequently lead to the lower bone mass in AIS patients.

目的:探讨双肾上腺素皮质样激酶1(DCLK1)在胰腺癌中促进细胞迁移、侵袭与增殖的分子机制。方法:基于癌症基因组图谱(TCGA)数据库与基因型-组织表达(GTEx)数据库，分析DCLK1与Hippo通路的相关性并采用胰腺癌组织芯片荧光染色进一步证实。细胞水平上，通过细胞爬片免疫荧光染色以及Western blot实验验证DCLK1对Hippo通路下游效应分子yes相关蛋白1(YAP1)是否具有调控作用，实时荧光定量聚合酶链反应分析YAP1结合转录因子TEA-DNA结合蛋白(TEAD)以及下游促恶性行为分子CYR61、EDN1、AREG、CTGF的表达。利用Hippo通路抑制剂Verteporfin处理细胞，采用Transwell实验检测DCLK1过表达细胞的迁移、侵袭能力是否受到抑制，采用实时无标记细胞分析实验检测细胞增殖指数的变化。结果:TCGA和GTEx数据库数据分析显示，胰腺癌组织中DCLK1和YAP1的表达水平高于癌旁正常组织(均 P<0.05)。相关性热图提示，DCLK1与YAP1所在的Hippo通路有关，其中LATS1( r＝0.53)、LATS2( r＝0.34)、MOB1B( r＝0.40)等均与DCLK1表达呈正相关(均 P<0.05)。胰腺癌患者组织芯片经多色荧光染色显示，胰腺癌DCLK1高表达患者伴随YAP1表达上调。胰腺癌AsPC-1与PANC-1细胞中DCLK1呈低表达，过表达DCLK1可促进YAP1进入细胞核。过表达DCLK1上调YAP1结合转录因子TEAD的表达并增加下游促迁移、侵袭、增殖分子mRNA的表达。使用Hippo通路抑制剂Verteporfin则可降低DCLK1高表达介导的细胞迁移、侵袭、增殖能力增加。AsPC-1 DCLK1过表达细胞的迁移数为(68.33±7.09)个，Verteporfin处理后的细胞迁移数为(22.00±4.58)个，差异有统计学意义( P<0.05)。PANC-1对照组细胞的迁移数为(37.00±6.00)个，DCLK1过表达细胞的迁移数为(65.66±8.73)个，Verteporfin处理后两组细胞迁移数为(19.66±3.05)个和(32.33±9.61)个，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。DCLK1过表达胰腺癌细胞侵袭数高于DCLK1对照组细胞以及Verteporfin处理后的DCLK1过表达细胞(均 P<0.05)。实时无标记细胞分析实验证实DCLK1过表达的AsPC-1细胞增殖指数为0.66±0.04，高于AsPC-1对照细胞的增殖指数(0.38±0.01， P<0.05)，高于Verteporfin处理后的DCLK1过表达AsPC1细胞(0.05±0.03， P<0.05)。而PANC-1 DCLK1过表达细胞的增殖指数为0.77±0.04，高于Verteporfin处理后的DCLK1过表达PANC1细胞(0.14±0.05， P<0.05)。 结论:DCLK1与Hippo通路显著相关且通过激活Hippo通路促进胰腺癌细胞迁移、侵袭与增殖。

目的 探讨双肾上腺素皮质样激酶1(DCLK1)对A549细胞增殖、迁移、侵袭等恶性生物学行为的影响,并探究可能涉及的相关分子机制.方法 慢病毒感染法建立稳定表达DCLK1分子的A549细胞系,反转录-聚合酶链技术和蛋白质印记法进行鉴定.CCK-8与平板克隆实验检测过表达DCLK1后细胞增殖能力变化.Transwell实验观察过表达DCLK1对细胞迁移与侵袭能力的影响.癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析DCLK1对肺腺癌细胞的调控富集通路,蛋白质印记法进行验证.结果 DCLK1在A549细胞中过表达可增加细胞的增殖、迁移与侵袭等能力,而抑制FAK/PI3K/AKT/mTOR信号通路可削弱DCLK1对A549细胞的恶性调控.结论 DCLK1通过激活FAK/PI3K/AKT/mTOR信号通路,促进A549细胞的恶性生物学行为.

目的 探究外周血蛋白酪氨酸去磷酸酶3(PTPN3)、双皮质素样激酶1(DCLK1)水平与卵巢癌(OC)患者临床病理特征及预后的关系.方法 选取2018年5月至2019年5月在张家口市第一医院收治的120例疑似OC患者作为研究对象,将60例经手术病理诊断确诊为OC的患者纳入OC组,60例经手术病理诊断确诊为良性的患者纳入良性组;选取同期同一医院体检的60例健康女性纳入对照组.根据OC患者3年随访情况,分为生存组(n=41)和死亡组(n=19).采取酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测所有研究对象外周血PTPN3、DCLK1水平.采用Kaplan-Meier法分析PTPN3、DCLK1水平与患者预后的关系,COX回归分析影响OC患者预后的危险因素.结果 与对照组相比,OC组和良性组外周血PTPN3、DCLK1水平显著升高;与良性组相比,OC组外周血PTPN3、DCLK1水平显著升高(P＜0.05).PTPN3和DCLK1水平与OC患者国际妇产科联盟(FIGO)分期、有无淋巴结转移、分化程度有关(P＜0.05).PTPN3、DCLK1高表达组患者3年内生存率低于低表达组(P＜0.05)o死亡组外周血PTPN3、DCLK1水平显著高于生存组(P＜0.05).多因素COX回归分析结果显示,分化程度、高水平PTPN3及DCLK1是影响OC患者预后的危险因素(P＜0.05).结论 OC患者外周血PTPN3、DCLK 1表达水平显著升高,且与OC患者术后3年的生存状况相关.

目的:探讨肺腺癌组织双皮质素样激酶1(DCLK1)、甘油-3-磷酸脱氢酶2(GPD2)、人线粒体转录终止因子3(hMTERF3)表达与临床病理特征及预后的关系.方法:选择2017年6月至2020年6月新疆医科大学第一附属医院胸外科收治的125例肺腺癌患者,取手术切除的癌组织以及癌旁组织(距离癌组织5 cm以上).采用免疫组化法检测癌组织以及癌旁组织的DCLK1、GPD2、hMTERF3表达.分析DCLK1、GPD2、hMTERF3表达与肺腺癌患者临床病理特征的关系.采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线分析不同DCLK1、GPD2、hMTERF3表达肺腺癌患者3年总生存率(OS)、无进展生存率(PFS).结果:癌组织DCLK1、GPD2、hMTERF3阳性表达率均高于癌旁组织(P＜0.05).低分化,TNM分期ⅢA期,淋巴结转移肺腺癌组织DCLK1、GPD2、hMTERF3阳性表达率高于中高分化、TNM分期Ⅰ、Ⅱ期、无淋巴结转移肺腺癌组织(P＜0.05).DCLK1、GPD2、hMTERF3阳性表达肺腺癌患者3年OS率、3年PFS率低于DCLK1、GPD2、hMTERF3阴性表达肺腺癌患者(P＜0.05).结论:肺腺癌组织中DCLK1、GPD2、hMTERF3阳性表达率升高,且与肺腺癌恶性病理特征和短期不良预后有关.

目的:探讨宫颈癌患者血清微小RNA-195(miR-195)、双皮质素样激酶1(DCLK1)、鳞状细胞癌抗原(SCC-Ag)水平与临床病理特征及预后的相关性.方法:选取宫颈癌患者72例为观察组,同期体检健康女性60例为对照组,比较两组血清miR-195、DCLK1、SCC-Ag表达水平.采用Spearman法分析宫颈癌患者血清miR-195、DCLK1、SCC-Ag与临床病理特征的相关性,随访3年,记录患者生存情况.采用Cox回归模型分析宫颈癌患者预后的影响因素.结果:观察组血清DCLK1、SCC-Ag水平较对照组升高,miR-195水平较对照组下降(均P＜0.05).血清miR-195水平与淋巴结转移、国际妇产科联盟(FIGO)分期、肿瘤分化程度呈负相关,DCLK1水平与FIGO分期、肿瘤分化程度呈正相关,SCC-Ag水平与肿瘤分化程度、肿瘤直径呈正相关(均P＜0.05).miR-195高表达患者3年生存率高于低表达患者,DCLK1、SCC-Ag高表达患者3年生存率低于低表达患者(均P＜0.05).FIGO分期、分化程度、淋巴结转移、肿瘤直径及血清miR-195、DCLK1、SCC-Ag水平是宫颈癌患者预后的独立影响因素(均P＜0.05).结论:宫颈癌患者血清DCLK1、SCC-Ag水平升高,miR-195水平降低,三者与临床病理特征和预后有关,是宫颈癌患者预后的独立影响因素.

目的 分析中晚期宫颈癌患者血清人附睾蛋白4(HE4)、胸苷激酶1(TK1)、双皮质素样激酶1(DCLK1)变化及其与化疗效果的关系.方法 收集2020年1月至2023年1月于郑州大学第一附属医院接受化疗的215例中晚期宫颈癌患者的病历资料,根据纳入患者的化疗效果将其分为良好组和不良组,其中良好组疗效评估结果为完全缓解(CR)与部分缓解(PR),共173例,不良组疗效评估结果为稳定(SD)与进展(PD),共42例.比较两组血清HE4、TK1、DCLK1水平等临床资料,分析中晚期宫颈癌患者血清HE4、TK1、DCLK1水平与化疗效果的关系.结果 良好组临床分期为Ⅱ期比例、高分化比例、无淋巴结转移比例均高于不良组,肿瘤最大直径以及血清HE4、TK1、DCLK1水平均低于不良组,差异均有统计学意义(P<0.05);经logistic多因素分析显示,肿瘤的临床分期达到Ⅳ期、分化程度为中低分化、淋巴结转移以及血清HE4、TK1、DCLK1水平升高均为影响中晚期宫颈癌患者化疗效果的独立因素(P<0.05);经Spearman相关性分析显示,中晚期宫颈癌患者临床分期、淋巴结转移以及血清HE4、TK1、DCLK1水平与其化疗效果成负相关,分化程度与其化疗效果成正相关(P<0.05).结论 中晚期宫颈癌患者临床分期越晚、分化程度越差、临床转移以及HE4、TK1、DCLK1水平越高,越不利于患者的化疗,上述指标对其预后均具有一定预测价值.

目的 检测非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者血清双皮质素样激酶1(dou-blecortin-like kinase 1,DCLK1)和整合素α5(integrin alpha5,ITGA5)水平并讨论二者与临床病理特征及预后的关系.方法 选取2017年6月1日至2020年7月1日在我院收治的116例NSCLC患者(NSCLC组)作为研究对象,收集同期100例健康受试者作为对照组,采用酶联免疫吸附法检测NSCLC组和对照组受试者血清中DCLK1和ITGA5的水平;根据预后情况将患者分为生存组和死亡组,ROC曲线分析血清DCLK1、ITGA5的水平对NSCLC患者3年发生死亡的预测价值,多因素Cox回归分析影响NSCLC患者发生死亡的因素.结果 NSCLC组患者血清DCLK1、ITGA5的水平高于对照组(P＜0.05);不同吸烟史、TNM分期、分化程度、肿瘤直径以及淋巴结转移的NSCLC患者血清DCLK1、ITGA5的水平比较,差异有统计学意义(P＜0.05);死亡组患者血清DCLK1、ITGA5的水平均高于生存组(P＜0.05);血清DCLK1、ITGA5单独及联合预测患者发生死亡的AUC 分别为 0.895(95％CI=0.824～0.944)、0.828(95％CI=0.747～0.892)、0.926(95％CI=0.862～0.966);DCLK1、ITGA5及淋巴结转移是影响NSCLC患者发生死亡的独立危险因素(P＜0.05).结论 NSCLC患者血清DCLK1、ITGA5的水平异常升高,二者的表达水平与NSCLC患者临床病理特征和不良预后有关.

目的:研究双皮质素样激酶1(doublecortin-like kinase 1,DCLK1)对胃癌干细胞生物学特性的作用,初步探讨其可能的作用机制.方法:无血清培养液悬浮培养胃癌干细胞,用DCLK1抑制剂DCLK1-IN-1靶向抑制胃癌干细胞中DCLK1活性.用Western blot法检测胃癌干细胞中DCLK1、干性相关蛋白(SOX2和OCT4)、细胞增殖相关蛋白(cyclin D1和c-MYC)、耐药相关蛋白(ABCG2和TOP2A)、上皮-间充质转化相关蛋白(E-cadherin、vimen-tin和Snail)和PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白表达水平.用CCK-8法测定DCLK1对胃癌干细胞活力及耐药的影响;用甲基纤维素成球法测定DCLK1对胃癌干细胞自我更新的影响.用细胞划痕实验和Transwell实验测定DCLK1对胃癌干细胞迁移和侵袭功能的影响.结果:胃癌干细胞中DCLK1及干性相关蛋白SOX2和OCT4表达明显高于亲本细胞(P＜0.01).DCLK1抑制组胃癌干细胞的增殖、耐药、迁移和侵袭能力明显低于Sphere细胞组(P＜0.01).DCLK1抑制组细胞增殖相关蛋白c-MYC和cyclin D1表达下调,耐药相关蛋白TOP2A和ABCG2表达下调,上皮标志物E-cadherin表达上调,间充质标志物vimentin和Snail表达下调,PI3K/AKT/mTOR相关蛋白表达及其磷酸化水平降低(P＜0.01).结论:DCLK1在胃癌干细胞中高表达,它可能通过调控PI3K/AKT/mTOR信号通路促进胃癌干细胞增殖、耐药、侵袭和迁移.DCLK1可作为靶向胃癌干细胞的潜在靶点.

目的 观察宫颈癌组织Semaphorin3A、Doublecortin样激酶-1(DCLK1)表达变化,探讨其与上皮间质转化的关系及对预后的影响.方法 2019年1月-2022年1月临汾市人民医院行手术治疗的宫颈癌患者100例,取手术切除宫颈癌组织及癌旁组织,采用实时荧光定量PCR法检测Semaphorin3A、DCLK1 mRNA相对表达量.根据Semaphorin3A、DCLK1 mRNA相对表达量均值(0.05、3.25),定义Semaphorin3A mRNA相对表达量≥0.05为高表达、＜0.05为低表达,DCLK1 mRNA相对表达量≥3.25为高表达、＜3.25为低表达.取癌组织及癌旁组织,提取总蛋白,采用ELISA法测定 N-cadherin、E-cadherin 含量.根据 N-cadherin、E-cadherin 含量均值(3.29、3.52 μg/L),定义 N-cadherin 含量≥3.29μg/L为高表达、＜3.29 μg/L为低表达,E-cadherin含量≥3.52 μg/L为高表达、＜3.52 μg/L为低表达.采用Pearson相关法分析癌组织Semaphorin3A、DCLK1 mRNA相对表达量与N-cadherin、E-cadherin含量的相关性.术后随访1年,生存82例为生存组,死亡18例为死亡组,比较2组年龄、肿瘤直径、分化程度、FIGO分期、肿瘤浸润深度、淋巴结转移及癌组织Semaphorin3A、DCLK1、N-cadherin、E-cadherin表达;采用多因素Cox回归分析宫颈癌患者术后1年死亡的危险因素.结果 (1)癌组织Semaphorin3A mRNA相对表达量(0.05±0.02)、E-cadherin含量[(3.52± 0.64)μg/L]均低于癌旁组织[0.32±0.09、(7.28±0.79)μg/L](t=29.286,P＜0.001;t=36.982,P＜0.001),DCLK1 mRNA 相对表达量(3.25±0.15)、N-cadherin 含量[(3.29±0.57)μg/L]均高于癌旁组织[1.54±0.09、(1.38± 0.26)μg/L](t=97.754,P＜0.001;t=30.487,P＜0.001).(2)宫颈癌组织 Semaphorin3A mRNA 相对表达量与N-cadherin含量呈负相关(r=-0.775,P＜0.001),与 E-cadherin 含量呈正相关(r=0.832,P＜0.001);DCLK1 mRNA相对表达量与N-cadherin含量呈正相关(r=0.650,P＜0.001),与E-cadherin含量呈负相关(r=-0.752,P＜0.001).(3)死亡组FIGO分期Ⅱ期(94.44％)、肿瘤浸润深度≥1/2肌层(72.22％)、淋巴结转移(72.22％)、Semaphorin3A低表达(88.89％)、DCLK1 高表达(83.33％)、N-cadherin 高表达(88.89％)、E-cadherin 低表达(88.89％)比率均高于生存组(67.07％、39.02％、34.15％、47.56％、43.90％、45.12％、48.78％)(P＜0.05),年龄、肿瘤直径、分化程度与生存组比较差异均无统计学意义(P＞0.05).(4)FIGO分期Ⅱ期(HR=3.281,95％CI:2.085～5.163,P＜0.001)、肿瘤浸润深度≥1/2 肌层(HR=3.114,95％CI:1.964～4.937,P＜0.001)、淋巴结转移(HR=3.813,95％CI:2.416～6.018,P＜0.001)、Semaphorin3A 低表达(HR=0.280,95％CI:0.183～0.429,P＜0.001)、E-cadherin 低表达(HR=0.260,95％CI:0.166～0.407,P＜0.001)、DCLK1 高表达(HR=4.697,95％CI:3.287～6.713,P＜0.001)、N-cadherin 高表达(HR=4.853,95％CI:3.351～7.028,P＜0.001)是宫颈癌患者术后1年死亡的危险因素.结论 FIGO分期晚、肿瘤浸润深度较深、有淋巴结转移、Semaphorin3A与E-cadherin低表达、DCLK1与N-cadherin高表达的宫颈癌患者术后1年死亡风险增大;宫颈癌组织Semaphorin3A表达降低、DCLK1表达升高可促进上皮间质转化,检测二者在宫颈癌组织的表达对预后有一定预测价值.