目的:分析小鼠肾缺血-再灌注损伤环状RNA（circRNA）及Hippo信号分子YAP的表达变化，初步探讨circRNA对肾缺血-再灌注损伤的作用。方法:构建小鼠肾缺血-再灌注损伤模型，检测血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)及肾组织病理改变判断模型成功。应用Illumina HiSeq 2500系统进行高通量双端测序建立显著差异表达circRNA表达谱。实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)验证测序结果及检测相关基因。采用基因功能（GO）分析、通路（KEGG）分析等方法探讨差异表达circRNA参与肾IR损伤的生物功能及作用的主要信号通路。采用蛋白印迹实验检测主要信号分子的表达情况。结果:缺血组和对照组间差异显著的circRNA 21个( P < 0.05, FC> 2)，其中10个表达上调，11个表达下调。随机（随机数字法）选取circRNA.1100和cⅡrcRNA.1122进行验证，结果显示肾IR 1d二者的相对表达倍数分别为（0.23±0.016）和（0.36±0.12），相比于对照组均显著降低（ P<0.05），与测序数据趋势一致。circRNA.1100在IR 2 d和3 d的肾组织中表达依然显著下调，相对表达倍数分别为（0.24±0.08）和（0.34±0.03）（ P<0.05）。circRNA.1100母基因Cpeb3在肾IR 1 d、2 d及3 d的相对表达倍数分别为（0.047±0.022）、（0.098±0.027）和（0.185±0.055），与对照组比较显著下调。生物学功能和通路分析显示差异表达circRNA显著富集在细胞周期、分裂、生长、凋亡、死亡等生物过程及Hippo信号通路。肾IR1d后Hippo通路效应分子YAP蛋白明显上调，持续至IR第3天。 结论:circRNA参与了肾IR损伤的生理病理过程，差异表达的circRNA及Hippo信号通路可能在肾IR损伤的发生发展中起关键作用。

三基序蛋白21(tripartite -motif protein 21，TRIM21)是一种存在于细胞胞质内的泛素连接酶，也是一类胞内抗体受体或者感应器，成为抵御病毒入侵的固有免疫防线。对于在细胞外已经逃逸了中和抗体作用，并被非中和抗体吸附而通过细胞膜侵入细胞内的病毒，TRIM21可以通过与病毒-抗体复合物中的抗体Fc段结合，发挥阻止病毒复制和诱导细胞免疫的抗病毒作用。TRIM21的降解病毒颗粒与激活免疫信号的双重效应功能，受自身的泛素化和磷酸化的严格调控。此外，TRIM21还能够与补体系统协同发挥作用。文章对TRIM21细胞内抗病毒和激活免疫功能的机制，病毒载体介导的基因治疗、抗体工程和TRIM-AWAY技术进行综述。

目的:探讨人表皮生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor 2，HER2)蛋白的哪种结构域更适合激发赫赛汀抗体依赖的细胞介导的细胞毒性(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity，ADCC)效应。方法:真核表达五种包含HER2胞外段不同结构域的蛋白，即HER2-Fc、HER2-His、T23-561-Fc、T276-T652-Fc、T276-T652-His。通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE)对蛋白相对分子质量及纯度进行检测。酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)检测这些蛋白与赫赛汀的结合能力。自然杀伤(natural killer，NK)细胞活化实验比较这五种蛋白增强赫塞汀ADCC效应的能力差异。结果:成功获得纯度较高的蛋白。ELISA结果显示HER2-Fc，HER2-His和T276-T652-His都表现出较好的结合能力，T276-T652-Fc结合较差，T23-561-Fc则完全不结合。此外，HER2-Fc、HER2-His、T276-T652-Fc、T276-T652-His、T23-561-Fc的EC50值分别为0.16、0.17、0.16、0.15、1.12。NK细胞活化实验结果显示HER2-Fc和T276-T652-His能显著增强赫赛汀刺激NK细胞脱颗粒和分泌干扰素-γ(interferon-γ，IFN-γ)的效应，HER2-Fc组CD107a表达量最高可达61.50%，IFN-γ的分泌可达38.10%。T276-T652-His组CD107a的表达最高可达63.00%，IFN-γ的分泌可达43.10%，与HER2-Fc作用相当。该效应呈浓度梯度依赖性，蛋白低浓度0.5 μg/mL时，赫赛汀的ADCC效应降低，且组间差异有统计学意义( t值分别为4.21、4.24、6.51、3.17、3.44、3.05、3.34、2.82、8.55、11.52、4.50、2.96、5.58、6.03、3.77、4.42， P值均<0.05)。 结论:验证了T276-T652-His具有增强赫赛汀ADCC功能的作用，且与HER2-Fc相当，为后续将HER2蛋白用于肿瘤免疫治疗研究打下了基础。

目的采用静息态功能磁共振成像(resting-state functional magnetic resonance imaging,rs-fMRI)技术及独立成分分析(independent component analysis,ICA)方法探讨急性缺血性脑卒中(acute ischemic stroke,AIS)患者即刻感觉运动网络(sensory motor network,SMN)及默认网络(default mode network,DMN)变化.材料与方法纳入27例AIS患者和27例健康对照(health controls,HC),评估每位受试者相关临床量表并采集基线rs-fMRI数据,对AIS组进行电针刺激治疗后即刻进行磁共振扫描,采集相关rs-fMRI数据.运用ICA方法提取出SMN及DMN网络成分.比较患者与健康对照者的功能连接变化,以及针刺前后的功能连接变化;将变化值与临床量表评分变化值进行相关性分析;再将差异脑区作为种子点,计算其与全脑的功能连接(functional connectivity,FC).结果针刺前,AIS组左侧前额叶相对于HC组功能连接增加(P<0.001),左侧顶下小叶(Z=4.38,P<0.001)、右侧后扣带回(Z=4.87,P<0.001)功能连接减低;左侧顶下小叶(P<0.001)、左侧后扣带回(P<0.001)、左侧额叶(P<0.001)FC值增加,部分小脑区域FC值增加(P<0.001).针刺后,AIS组右侧前额叶功能连接明显增加(P<0.001),针刺前后差值与Fugl-Meyer运动功能评分(Fugl-Meyer Assessment,FMA)差值呈强正相关(r=0.842,P<0.001);AIS组右侧丘脑(Z=4.38,P<0.001)及左额叶(P<0.001)FC值显著增加.结论AIS患者存在边缘系统(后扣带回、海马)-丘脑-皮层(顶下小叶-额叶)神经环路脑功能活动异常;电针治疗可即刻调节AIS患者的脑自发活动,涉及运动完成相关脑区,可能是电针治疗AIS的脑功能潜在靶点脑区.

目的 探讨焦虑障碍患者及高危人群脑电特征,为军队征兵心理选拔及多质融合理论提供客观支持.方法 招募焦虑障碍患者(焦虑障碍组,n=38)、焦虑障碍高危者(焦虑高危组,n=39)及健康人(正常组,n=38)并收集其脑电数据,使用eeglab软件对3组被试的多质融合指标[功率谱密度(PSD)、时频幅值、功能连接)进行分析,考察PSD、加权相位延迟指数(wPLI)能否用作评估焦虑障碍的脑异常指标;采用Python 2.0 Scikit-Learn包的支持向量机与K近邻分类器对3组被试进行二分类.结果 在δ、θ和α低频频段,3组被试PSD差异显著.PSD在δ频段组间主效应差异有统计学意义(F=97.55,P＜0.001),焦虑障碍组(6.16±0.61)＞焦虑高危组(5.22±0.73)＞正常组(3.36±0.06);PSD在θ频段组间主效应差异有统计学意义(F=65.87,P＜0.001),焦虑障碍组(2.25±0.07)＞焦虑高危组(2.23±0.08)＞正常组(1.34±0.39);PSD在α频段组间主效应差异有统计学意义(F=178.73,P＜0.001),焦虑障碍组(2.02±0.45)＞焦虑高危组(1.94±0.57)＞正常组(0.98±0.02).在βl、β2及γ高频频段,焦虑高危组前额叶(FP1、FP2)和颞叶(T3、T4)区PSD有上升波动.在β1频段焦虑障碍组与正常组的wPLI分别在TP7-FC3电极对(t=2.45,P＜0.05)与T5-FC3电极对(t=-3.01,P＜0.05)的差异有统计学意义.结合行为学、频域、时频和功能连接4种特征筛选指标应用于机器学习,多质融合指标较单纯行为学指标识别焦虑高危者与正常人的准确率从75.00％提高到82.61％.结论 利用机器学习对脑电指标进行分类,结合多质融合理论可作为提高区分焦虑障碍人群的潜在特征,在未来征兵心理选拔与临床评估中具有前瞻性意义.

目的:探讨鼠李糖(rhamnose,Rha)修饰对曲妥珠单抗(trastuzumab,Tra)Fc效应功能的影响.方法:将二硫键还原的Tra分子与含交联剂的Rha衍生物分子偶联,构建Tra-Rha偶联物.使用聚丙烯酰胺凝胶电泳、免疫印迹和高效液相分子排阻色谱对偶联物进行表征,并通过流式细胞术评估偶联物的HER2抗原亲和水平,免疫荧光和流式细胞术评估偶联物的抗Rha抗体募集能力.最后,通过在体外检测偶联物介导的补体依赖的细胞毒作用(complement-dependent cytotoxicity,CDC)和抗体依赖细胞介导的吞噬作用(antibody-dependent cell-mediated phagocytosis,ADCP),评估其Fc效应功能的增强水平.结果:成功构建了一款Tra-Rha偶联物.亲和实验和抗体募集实验表明Tra-Rha偶联物保留了良好的HER2抗原结合能力,并能将高水平抗Rha抗体选择性募集至靶细胞表面.CDC实验显示,Tra-Rha偶联物可介导显著的CDC效应对HER2阳性的SKBR3和SKOV3细胞进行杀伤,最高杀伤率分别为75％和70％,而相同条件下未修饰Rha的Tra则不能介导CDC.ADCP实验则显示,在SKBR3和SKOV3细胞中,Tra-Rha介导的ADCP水平较Tra分别提高了 2.3倍和1.2倍.结论:Rha修饰可作为一种经济高效的策略,用于同时增强Tra的多种Fc效应功能,进而改善Tra的治疗指数.

目的 探索用多模态MRI观察在健康中老年人群中肾功能、脑功能连接(FC)及认知功能之间的相关性.方法 对49名认知正常的健康中老年参与者进行静息态高分辨率MRI扫描和标准化神经心理学评估;基于体素水平行FC分析;采集外周静脉血,检测血清肾功能指标.采用相关性分析和中介分析观察认知功能、肾功能及脑FC的关系.结果 健康老年人的左侧海马和右侧中央前回的FC值与血尿素浓度呈负相关;左侧海马和左侧眶部额中回、右侧楔前叶、右侧眶部额下回、右侧岛盖部额下回、左侧额中回、右侧顶下回的FC值,右侧海马旁回和左侧额中回、双侧眶部额下回、右侧枕上回、左侧距状裂周围皮层、右侧顶下缘角回、左侧楔前叶、左侧中央前回、双侧颞上回的FC值与尿酸呈负相关(r=-0.546～-0.724,P均＜0.05).左侧海马和左侧眶部额中回的FC值与词语流畅性测验(VFT)呈负相关(r=-0.388,P=0.008).中介分析发现左侧海马和左侧眶部额中回的FC可部分介导尿酸对VFT的效应,中介效应值0.0265[95％CI(0.0062,0.0581)].结论 在健康中老年人中肾功能水平与认知功能及脑FC间存在一定的相关性.

目的 探讨微小RNA(microRNA,miRNA)中的miR-221-3p靶向DNA损伤诱导转录本4(DNA-damage-inducible transcript 4,DDIT4)对镉诱导小鼠睾丸间质细胞凋亡的影响和机制.方法 小鼠睾丸间质细胞(mouse testicular stromal cells,TM3)经不同浓度的镉(0、10、20、30和40 μmol/L)染毒后,使用CCK-8检测细胞活性.提取镉染毒TM3细胞的总RNA,以差异倍数(fold change,FC)＞1.2,P＜0.05作为标准筛选显著差异表达miRNA.TM3细胞分为空白对照组、阴性对照组、镉染毒组(CdCl2,20 μmol/L)和镉染毒+miR-221-3p模拟物组,其中对镉染毒+miR-221-3p模拟物组,先将miR-221-3p模拟物转染进TM3细胞,再联合镉染毒24 h.Hoechst染色检测细胞形态,流式细胞仪分析细胞凋亡率,实时荧光定量PCR和Western blot免疫印迹法检测DDIT4表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证miR-221-3p与DDIT4的结合,生物信息学分析DDIT4的功能及与细胞凋亡的关联,过表达miR-221-3p后观察B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,BAX)的表达水平.结果 镉染毒可降低TM3细胞活性且存在剂量-效应关系.细胞形态学发现,与对照组相比,镉染毒组细胞皱缩、细胞核浓染,凋亡率升至19.66％±0.45％(P＜0.01);与镉染毒组相比,镉染毒+miR-221-3p模拟物组正常形态细胞增多,凋亡率降至13.76％±0.37％(P＜0.05).镉染毒组miR-221-3p表达水平下调(P＜0.01),DDIT4表达水平上调(P＜0.05).生物信息学分析和双荧光素酶报告分析发现DDIT4为miR-221-3p的靶基因之一.与镉染毒组相比,镉染毒+miR-221-3p模拟物组DDIT4表达水平下调(P＜0.05),Bcl-2/BAX比值由0.54±0.03增加为0.71±0.04.结论 miR-221-3p通过靶向DDIT4进而抑制镉诱导的TM3细胞凋亡.

抗体是生物体内应对外来物质入侵时产生的主要保护物质,是保护生物体的重要分子.对抗体的Fc段进行改造可有效延长抗体的半衰期,大大减少给药剂量;Fc段介导的抗体效应子的功能也可以根据疾病特殊性进行上调或下调,实现治疗效果最大化.同时,仅有Fc片段的抗体,也可具备结合抗原的能力,通过缩小抗体分子的大小,可大大减少抗体分子量大的限制,为抗体药物的开发提供了新的方向.此外,除抗肿瘤作用外,抗体分子在抗感染领域也发挥了重要的作用.对抗感染中和抗体Fc区进行工程改造,可有效促进保护性的细胞免疫效应,增强抗病毒活性并延长半衰期.本文总结了抗体Fc结构域的功能特性及优化策略,并介绍Fc结构域优化改造所介导的生物学效应及在临床治疗中的应用与发展.

目的:观察2型糖尿病(T2DM)伴认知灵活性减退患者的静息态功能连接(FC)特征改变及其与认知灵活性的相关性.方法:回顾性分析24例T2DM伴认知灵活性减退的患者(T2DM+CD)、34例不伴认知灵活性减退的T2DM患者(T2DM-CD)以及31例健康对照(HC).分别对三组受试者使用威斯康辛卡片分类测试(WCST)、斯特鲁普色词测验(Stroop)评估认知灵活性及功能磁共振(fMRI)扫描,观察三组受试者认知灵活性差异、双侧(L.and R.)纹状体(ST)与背外侧前额叶皮质(dlPFC)之间FC的差异,然后分析了认知灵活性与ST-dlPFC通路FC之间的相关,最后进一步分析了 T2DM患病状态和认知灵活性对FC改变的交互效应.结果:与T2DM-CD患者及HC相比,T2DM+CD患者WCST总应答数、错误应答数、持续应答数以及用时明显增多,而正确应答数明显减少;Stroop中T2DM+CD患者的正确数、字色矛盾正确数以及字色无关正确数均低于HC.T2DM+CD 患者 L.ST-L.dlPFC、R.ST-L.dlPFC、R.ST-R.dlPFC 之间的 FC 减低,R.ST-R.dlPFC 之间的 FC 减低与认知灵活性量表评分相关,且T2DM患病状态和认知灵活性对FC的改变存在交互效应.结论:ST-dlPFC之间的FC减低是T2DM特异性认知灵活性受损的神经机制.