目的:评价乳杆菌源性细胞外囊泡(Lac-EVs)对脂多糖(LPS)诱导小胶质细胞活化的影响及蛋白质组学分析。方法:取生长状态较好的小鼠BV2小胶质细胞，采用随机数字表法分为3组( n＝12)：对照组(C组)、LPS组(L组)和LPS＋Lac-EVs组(L＋E组)。C组正常培养；L组LPS(终浓度1 μg/ml)孵育24 h；L＋E组于LPS处理后24 h加入Lac-EVs(终浓度2.5 μg/ml)孵育24 h。随后采用免疫荧光染色法检测CD86和CD206的表达。取L组和L＋E组细胞沉淀，采用蛋白质组学方法筛选两组差异表达蛋白。对鉴定得到的差异表达蛋白进行生物信息学分析并采用RT-qPCR和Western blot法对载脂蛋白1(Apoa1)和G蛋白偶联受体激酶相互作用蛋白2(Git2)两个差异表达蛋白进行验证。 结果:与C组相比，L组CD86表达上调，CD206表达下调( P<0.05)；与L组相比，L＋E组CD86表达下调，CD206表达上调( P<0.05)。采用蛋白质组学法筛选出125个差异表达蛋白(FC＝2.0， P<0.05)，其中66个蛋白表达上调，59个蛋白表达下调，其中Apoa1和Git2表达上调并且排名较前。GO分析结果表明，这些差异表达蛋白主要参与内皮细胞增殖、SDNA损伤检查以及脂蛋白运输等生物过程。KEGG分析结果表明，PPAR信号通路、内吞作用、代谢途径、MAPK信号通路等存在差异。Western blot法和RT-qPCR法测定上述差异蛋白的表达趋势与蛋白质组学结果一致。 结论:Lac-EVs可抑制LPS诱导小胶质细胞向M1型极化，其机制可能与上调的差异表达蛋白Apoa1和Git2有关。

目的:通过体外研究探索肠道菌群代谢产物丁酸钠对脂肪变性HepG2细胞增殖与凋亡的影响机制。方法:采用人源性肝细胞系HepG2、游离脂肪酸(FFA；油酸与棕榈酸浓度比为2∶1)建立体外脂肪变性肝细胞模型。设置正常对照组、模型组、丁酸钠不同浓度(1、2、5、10、20、50 mmol/L)干预组，使用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测丁酸钠对脂肪变性HepG2细胞增殖的抑制作用；设置正常对照组、模型组和丁酸钠5 mmol/L干预(丁酸钠干预)组，采用流式细胞术检测各组凋亡细胞比例；设置正常对照组、模型组和丁酸钠1、2、5、10 mmol/L干预组、空白小干扰RNA(siRNA)干扰组、G蛋白偶联受体(GPR)43干扰组、GPR109a干扰组、 GPR43/ GPR109 a双敲组，采用蛋白质印迹法检测各组转染前后的磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)蛋白质水平变化。统计学方法采用单因素方差分析、SNK- q检验和logistic回归分析。 结果:CCK-8检测结果提示丁酸钠对脂肪变性HepG2细胞增殖的抑制作用有剂量、时间依赖性。流式细胞术检测结果显示，丁酸钠干预组的细胞凋亡比例高于模型组和正常对照组[(3.400±0.100)%比(1.800±0.400)%、(1.067±0.451)%]，差异均有统计学意义( t＝6.721、8.705， P均<0.01)；模型组凋亡细胞比例与正常对照组比较差异无统计学意义( P>0.05)。转染前，模型组的p-AKT、p-mTOR蛋白质水平均高于正常对照组(2.300±0.058比1.000±0.012、2.160±0.125比1.000±0.052)，差异均有统计学意义( t＝22.080、8.575， P均<0.05)；丁酸钠1、2、5、10 mmol/L干预组的p-AKT和p-mTOR蛋白质水平均低于模型组(1.530±0.085、1.407±0.096、1.032±0.035、1.036±0.099比2.300±0.058，1.483±0.073、1.297±0.048、1.067±0.035、0.970±0.072比2.160±0.125)，差异均有统计学意义( t＝7.491、7.997、19.790、11.020，4.683、6.445、8.424、8.245， P均<0.05)。转染后，GPR43干扰组、GPR109a干扰组和 GPR43/ GPR109 a双敲组的p-AKT、p-mTOR蛋白质水平均高于空白siRNA干扰组和丁酸钠5 mmol/L干预组(1.474±0.045、1.471±0.058、2.067±0.120比1.158±0.030和1.139±0.031，1.850±0.082、1.683±0.058、2.160±0.091比1.469±0.037和1.490±0.116)，差异均有统计学意义( tp-AKT＝5.807、4.816、7.322，6.109、5.080、7.463； tp-mTOR＝4.235、3.113、7.044，2.542、1.497、4.562； P均<0.05)。 结论:丁酸钠对脂肪变性HepG2细胞增殖和凋亡的影响与GPR43/GPR109a-p-AKT-mTOR信号通路有关。

目的:探讨G蛋白耦联受体55（G protein-coupled receptor 55，GPR55）拮抗剂CID16020046在小鼠肾脏纤维化中的作用，为肾脏纤维化治疗提供新的方法和思路。方法:（1）在体外大鼠肾脏成纤维细胞（NRK-49F）中分别过表达GPR55和使用GPR55拮抗剂CID16020046，同时使用转化生长因子β1（TGF-β1）刺激，观察纤维化相关因子和炎性因子的表达。（2）体内构建单侧输尿管梗阻（unilateral ureteral obstruction，UUO）小鼠肾脏纤维化模型，将8周龄雄性C57BL/6J小鼠（20～25 g）按照随机数字表法随机分为3组：假手术组（Sham组， n=6）、造模组（UUO组， n=7）、造模+CID16020046药物组（UUO+CID组， n=8），UUO+CID组在造模前1 d、造模当日和术后每日均腹腔注射药物CID16020046（10 mg/kg），每日1次，Sham组和UUO组均腹腔注射对应剂量的0.9%生理盐水。UUO术后7 d处死小鼠取材，检测其肾功能指标、肝脏转氨酶、心肌标志物，Western印迹和实时荧光定量PCR检测肾脏纤维化相关因子和炎性因子的表达，免疫组化、天狼猩红染色、Masson三色染色检测肾组织的病理改变。 结果:（1）使用TGF-β1刺激NRK-49F细胞后，GPR55 mRNA和蛋白表达量均明显增加（均 P<0.05）；TGF-β1组和TGF-β1+GPR55过表达质粒组纤维化相关因子纤连蛋白、Ⅰ型胶原蛋白（Collagen Ⅰ）和炎性因子白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α mRNA表达的差异均无统计学意义（均 P>0.05）；与TGF-β1组比较，TGF-β1+CID组纤维化相关因子α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、波形蛋白（Vimentin）蛋白及Collagen Ⅰ、α-SMA mRNA表达均较低（均 P<0.05）。（2）与Sham组比较，UUO组GPR55 mRNA和蛋白表达均较高（均 P<0.05）。与UUO组比较，UUO+CID组血清肌酐较低（ P<0.05），两组血尿素氮、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶同工酶的差异均无统计学意义（均 P>0.05）。与UUO组比较，UUO+CID组肾组织纤维化相关因子纤连蛋白、Collagen Ⅰ、Vimentin蛋白及纤连蛋白、Collagen Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白、α-SMA mRNA表达均较低，肾小管扩张和间质胶原纤维沉积程度显著较轻（均 P<0.05）。 结论:CID16020046可降低UUO小鼠血清肌酐，保护肾功能，同时可降低肾脏成纤维细胞和小鼠肾组织纤维化相关因子表达，减轻肾脏纤维化。

β2-肾上腺素受体(β2-AR)激动药作为治疗支气管哮喘(以下简称"哮喘")的一线药物,在临床中广泛应用,然而长期使用可导致β2-AR脱敏,降低其临床疗效,致使部分哮喘患者症状控制欠佳.β2-AR激动药引起β2-AR脱敏的机制主要包括慢速脱敏(与气道黏膜β2-AR密度减小有关)和快速脱敏(与刺激性G蛋白脱偶联机制有关).环磷酸腺苷(cAMP)-蛋白激酶A和cAMP-cAMP激活的交换蛋白信号通路与β2-AR脱敏过程关系密切.糖皮质激素、过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动药、ASM-024、中药单药及成方等与β2-AR激动药联合使用时能改善β2-AR的敏感性,从而更好地控制哮喘症状.

目的:通过生信分析筛选脓毒症相关性脑病(sepsis associated encephalopathy,SAE)中小胶质细胞介导神经炎症的核心基因,并通过体外细胞学实验验证.方法:从基因表达综合数据库(gene expression omnibus,GEO)中获取脓毒症患者外周血全转录组测序数据集GSE65682以及体外脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导小胶质细胞活化模型基因芯片数据集GSE103156.采用加权基因共表达网络分析(weighted gene co-expression network analysis,WGCNA)筛选GSE65682数据集中与脓毒症临床诊断显著相关的模块,与GSE103156数据集中LPS处理前后小胶质细胞的差异表达基因(differentially expressed gene,DEG)相交,利用基因本体论(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)对DEG进行功能富集分析.采用STRING构建蛋白质-蛋白质相互作用网络、Cytoscape以及Lasso回归分析筛选核心基因.构建LPS诱导BV2小胶质细胞活化体外细胞模型,采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)检测基因表达;采用慢病毒载体法过表达组蛋白去乙酰化酶9(histone deacetylase 9,HDAC9),Western blot检测炎症相关分子表达.结果:WGCNA分析得到GSE65682数据集中与脓毒症临床诊断相关的9个模块、共332个基因,通过Limma分析得到GSE103156数据集中LPS刺激前后小胶质细胞的1 272个DEGs,二者取交集后得到18个交集基因,进一步采用Lasso回归分析筛选得到4个枢纽基因分别为七跨膜G蛋白偶联受体183(G protein-coupled receptor 183,GPR183)、HDAC9、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸激酶(nicotinamide adenine dinucleotide kinase,NADK)、富含亮氨酸重复蛋白 25(leucine rich repeat containing 25,LRRC25).RT-qPCR结果证实在LPS刺激的小胶质细胞炎性活化模型中,Gpr183和Hdac9基因的mRNA表达下调、Lrrc25表达上调,而Nafk表达无明显变化;Western blot显示过表达HDAC9可促进LPS诱导小胶质细胞促炎因子白介素(interleukin,IL)-1β、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)的表达、促进JAK1-STAT3磷酸化.结论:本研究利用生物信息学筛选得到SAE中小胶质细胞介导神经炎症的4个关键基因,并初步证实HDAC9对于小胶质细胞具有促炎活性,为SAE的机制研究提供了新的思路和数据.

目的 全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)对异丙肾上腺素(isoprenaline,ISO)诱导下大鼠心肌纤维化和心肌重构的影响及作用机制.方法 将大鼠按随机数表法分为4组:对照组、ISO组、ATRA+ISO 组、4-PBA(4-苯基丁酸,4-phenylbutyric acid)+ISO 组,每组 10 只;ATRA+ISO 组和 4-PBA+ISO组预先分别通过腹腔注射ATRA与4-PBA,然后再通过背部皮下注射ISO进行诱导.心脏超声检测各组大鼠左心室舒张末期内径(left ventricular internal diameter in diastole,LVIDd)、左心室收缩末期内径(left ventricular internal diameter in systole,LVIDs)、左心室的射血分数(ejection fraction,EF)及短轴缩短率(fractional shortening,FS),称量各组大鼠体重、全心质量及左心室质量,计算全心质量指数(heart mass index,HMI)与左心室质量指数(left ventricle mass index,LVMI).ELISA测定各组大鼠血清N端B型利钠肽原(N terminal pro B type natriuretic peptide,NT-proBNP)含量.HE 染色和 Masson 染色观察各组大鼠心肌组织病理学变化与胶原纤维化程度.蛋白质印迹检测心肌组织中G蛋白偶联受体78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、C/EBP 同源蛋白(C/EBP homology protein,CHOP)、蛋白激酶 R 样内质网激酶(pro-tein kinase R-like ER kinase,PERK)、磷酸化真核翻译起始因子 2α(phosphorylated eukaryotic translation initi-ation factor 2α,p-eIF2α)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、胶原蛋白Collagen-Ⅰ及Collagen-Ⅲ的蛋白表达.结果 与对照组比较,ISO 组大鼠 EF 和 FS 显著降低(P＜0.05),LVIDd、LVIDs、HMI 及 LVMI 显著升高(P＜0.05),血清 NT-proBNP含量显著增加(P＜0.05),心肌组织病理损伤明显,胶原纤维面积显著增加(P＜0.05),心肌组织中 GRP78、CHOP、PERK、p-eIF2α、TGF-β1、α-SMA、Collagen-Ⅰ 及 Collagen-Ⅲ蛋白表达均显著上调(P＜0.05);与 ISO 组比较,ATRA+ISO 组和 4-PBA+ISO 组的大鼠 EF 和 FS 显著升高(P＜0.05),LVIDd、LVIDs、HMI及LVMI显著降低(P＜0.05),血清NT-proBNP含量显著减少(P＜0.05),心肌组织损伤程度明显减轻,胶原纤维面积显著减小(P＜0.05),心肌组织中GRP78、CHOP、PERK、p-eIF2α、TGF-β1、α-SMA、Collagen-Ⅰ及Collagen-Ⅲ蛋白表达均显著下调(P＜0.05).结论 ATRA能够减轻ISO诱导的大鼠心肌损伤及其纤维化,抑制心肌重构,改善心功能,该作用与其抑制内质网应激反应有关.

胃癌干细胞(GCSC)在胃癌的发生、发展、侵袭、转移中发挥了重要的作用,因此探索灵敏度高、特异性强的GCSC表面标志物极其重要.本文阐述了常用及最新的GCSC标志物,其中CD44+GCSC是最早发现具有启动肿瘤生长、维持肿瘤自我更新能力的独特亚群,是目前研究较为成熟的标志物之一.重复含G蛋白偶联受体5同样具有明确的细胞干性,但其作为GCSC标志物不是特异的,而CD133+细胞是否具有细胞干性,还需进一步探索其机制.SOX2、醛脱氢酶及其同工酶、NME/NM23核苷二磷酸激酶2具有干细胞潜能,为GCSC表面标志物提供了更多的可能及选择.

目的 利用Cre-loxP基因敲除技术建立肝星状细胞特异性G蛋白偶联受体激酶2(G protein-coupled receptor ki-nase 2,GRK2)基因敲除小鼠模型,为研究GRK2在肝星状细胞中的生物学功能提供动物模型基础.方法 将loxP标记的Grk2基因小鼠(Grk2fl/fl)和Lrat-Cre工具鼠进行多次繁殖,建立肝星状细胞特异性Grk2基因敲除(Grk2△HSC)小鼠模型.观察和分析小鼠的生长繁殖情况;通过PCR反应鉴定flox和Cre基因型;免疫荧光双染检测肝星状细胞中GRK2表达;Western blot检测小鼠肝星状细胞及肺、脾、肾脏、心脏组织中GRK2蛋白表达;HE染色观察肝脏及肺、脾、心脏、肾脏组织学形态.结果 成功鉴定Grk2△HSC小鼠基因型;两组小鼠体质量、繁殖能力无明显差异;免疫荧光双染及Western blot结果表明,Grk2△HSC小鼠的肝星状细胞中GRK2蛋白水平明显低于对照组小鼠,Grk2△HSC 小鼠肺、脾、肾脏和心脏组织中GRK2蛋白表达与对照组相比无明显变化;HE染色结果显示,Grk2△HSC小鼠肝脏及主要组织结构与Grk2fl/fl相比差异无显著性,可用于后续研究.结论 本研究应用Cre-loxP技术成功构建了肝星状细胞特异性Grk2基因敲除小鼠,为进一步研究GRK2在肝脏中的作用提供了优良工具.

短链脂肪酸(SCFA)作为肠道菌群的重要代谢产物,广泛参与机体免疫反应,以及糖、脂代谢调节等重要生理过程,并且作为中间介质影响2型糖尿病(T2DM)的发展.为更系统、全面地了解运动对肠道菌群SCFA的影响及其改善T2DM的可能机制,本文通过检索总结分析相关文献,就不同运动方式对T2DM机体肠道菌群或SCFA的影响效果,以及运动促进SCFA进而调节糖代谢的可能机制进行系统梳理与分析.结果发现:(1)运动可通过改变肠道菌群构成比,增加产SCFA菌群促进SCFA产生,其中涉及的运动干预呈现多元化,包括有氧运动、抗阻运动、有氧联合抗阻运动和高强度间歇运动等,证实了运动在辅助治疗T2DM方面具有潜在应用价值.(2)运动增进SCFA释放由此改善T2DM的机制可能涉及多条分子信号通路,SCFA能激活腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)信号通路抑制肝脏糖异生,另一方面,SCFA与G蛋白偶联受体(GPCR)(GPR41/GPR43)结合促进胰高血糖素样肽-1(GLP-1)和肠道肽YY(PYY)释放,同时通过抑制组蛋白去乙酰化酶(HDAC)活性增加胰岛素受体底物1(IRS1)表达,激活下游的磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)信号通路,加速肌肉和脂肪对糖的摄取与利用.关于运动对产SCFA菌群与SCFA的具体影响效果,以及运动促进SCFA释放并以此调控糖代谢的作用机制有待后续研究进一步明确.

[目的]采用网络药理学与生物信息预测分析并结合体内与分子实验验证百合抗焦虑抗抑郁的作用机制.[方法]采用中药系统药理学数据库与分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP)检索百合抗焦虑抗抑郁的潜在活性成分;通过治疗靶点数据库(Therapeutic Target Database,TTD)检索活性成分抗焦虑抗抑郁的潜在作用靶标,构建成分与靶标网络;采用REACTOME与g:Profiler软件进行基因本体(gene ontology,GO)分析,京都基因和基因组数据库(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)、REAC 和 WikiPathways 代谢通路(WikiPathways,WP)富集分析.以行为绝望抑郁悬尾和强迫游泳实验评价百合水提液抗抑郁活性,以酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测ICR小鼠海马内神经递质含量,以实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time polymerase chain reaction,Real-time PCR)分析抑郁小鼠脑内抑郁相关基因表达水平.[结果]百合通过β-谷甾醇、3-去甲基秋水仙碱与26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-3β,26-二羟基胆甾烷-16,22-二氧基-3-0-α-L-鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷等5个潜在活性成分,可通过调控hsa-miR-203和hsa-miR-206等miRNAs与特异性蛋白 1(specificity protein 1,SP1)、RE1沉默转录因子(RE1 silencing transcription factor,REST)和CCCTC 结合因子(CCCTC-binding factor,CTCF)等转录因子的表达,进而共同调控蛋白激酶C epsilon型(protein kinase C epsilon,PRKCE)、γ-氨基丁酸 B 型受体亚基 2(gamma-aminobutyric acid type B receptor subunit 2,GABBR2)、γ-氨基丁酸 A 型受体亚基 p2(gamma-aminobutyric acid type A receptor subunit beta 2,GABRB2)和溶质载体家族6 成员 4(solute carrier family 6 member 4,SLC6A4)等基因的表达,可能最终影响了 γ-氨基丁酸通路、5-羟色胺通路、G蛋白偶联受体通路和单胺氧化酶通路等,增加抑郁小鼠脑内神经递质含量,发挥抗焦虑抗抑郁作用.[结论]采用网络药理学、生物信息预测以及实验验证百合抗焦虑抗抑郁的活性成分、潜在靶标和信号通路,为百合抗焦虑抗抑郁研究提供参考.