目的:探讨CXCR4特异性拮抗剂AMD3100影响癫痫发作的分子机制。方法:(1)动物实验：36只成年雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组、癫痫组和AMD3100处理组，每组12只。癫痫组大鼠腹腔注射戊四氮(PTZ)构建癫痫模型，剂量为40 mg/kg；AMD3100处理组大鼠侧脑室注射5 μL(5 mg/mL) AMD3100 20 min后腹腔注射同等剂量PTZ；对照组大鼠腹腔注射等量生理盐水。采用Racine分级评估各组大鼠癫痫发作等级并记录其癫痫发作潜伏期，采用脑电图(EEG)记录各组大鼠脑神经元异常放电情况，采用ELISA试剂盒检测各组大鼠海马组织 γ-氨基丁酸(GABA)含量。应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测各组大鼠海马组织神经元γ-氨基丁酸A受体α1亚单位( GABAAR α1) mRNA水平。(2)细胞实验：另取SD大鼠鼠婴(1日龄)培养原代海马神经元，培养7 d后将细胞分为对照组、癫痫组和AMD3100处理组。癫痫组神经元采用无镁外液诱导的方法构建癫痫细胞模型；AMD3100处理组神经元在含有10 nmol/L AMD3100的无镁外液中培养3 h，随后换为Neurobasal继续培养；对照组采用Neurobasal培养基常规培养。采用全细胞膜片钳技术检测各组神经元灌流AMD3100(10 nmol/L)后自发性抑制性突触后电流(sIPSC)。 结果:(1)动物实验：AMD3100处理组大鼠发作潜伏期较癫痫组大鼠明显缩短[分别为(663.30±74.84) s、(164.40±17.20) s]，差异有统计学意义( t=6.490， P<0.001)；AMD3100处理组大鼠4级以上发作次数较癫痫组大鼠明显减少[分别为(3.75±0.39)次、(9.00±0.73)次]，差异有统计学意义( t=4.680， P<0.001)。ELISA实验结果显示，3组大鼠GABA含量差异有统计学意义( F=17.850， P<0.001)，其中癫痫组明显低于对照组，AMD3100处理组大鼠明显高于癫痫组，差异均有统计学意义( P<0.05)。qRT-PCR实验结果显示，3组大鼠 GABAAR α1 mRNA含量差异有统计学意义( F=14.400， P<0.001)，其中癫痫组明显低于对照组，AMD3100处理组大鼠明显高于癫痫组，差异均有统计学意义( P<0.05)。EEG结果显示，与癫痫组大鼠比较，AMD3100处理组大鼠放电频率有所降低。3组大鼠EEG功率差异无统计学意义( F=3.220， P=0.062)，但与癫痫组、对照组大鼠比较，AMD3100处理组大鼠EEG功率有所降低。(2)细胞实验：膜片钳技术检测结果显示，3组神经元sIPSCs的频率和波幅差异均有统计学意义( F=13.670， P<0.001； F=10.920， P<0.001)。与对照组、癫痫组比较，AMD3100处理组神经元sIPSCs的频率和波幅均显著增加，差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:CXCR4拮抗剂AMD3100可通过增强抑制性神经传递降低癫痫发作频率。

Background::Electroacupuncture (EA) has been shown to attenuate airway inflammation in asthmatic mice; however, the underlying mechanism is not fully understood. Studies have shown that EA can significantly increase the inhibitory neurotransmitter γ-aminobutyric acid (GABA) content in mice, and can also increase the expression level of GABA type A receptor (GABAAR). Furthermore, activating GABAAR may relieve inflammation in asthma by suppressing toll-like receptor 4 (TLR4)/myeloid differentiation factor 88 (MyD88)/nuclear factor-kappa B (NF-κB) signaling pathway. Therefore, this study aimed to investigate the role of GABAergic system and TLR4/MyD88/NF-κB signaling pathway in asthmatic mice treated with EA.Methods::A mouse model of asthma was established, and a series of methods including Western blot and histological staining assessment were employed to detect the level of GABA, and expressions of GABAAR and TLR4/MyD88/NF-κB in lung tissue. In addition, GABAAR antagonist was used to further validate the role and mechanism of GABAergic system in mediating the therapeutic effect of EA in asthma.Results::The mouse model of asthma was established successfully, and EA was verified to alleviate airway inflammation in asthmatic mice. The release of GABA and the expression of GABAAR were significantly increased in asthmatic mice treated with EA compared with untreated asthmatic mice ( P < 0.01), and the TLR4/MyD88/NF-κB signaling pathway was down-regulated. Moreover, inhibition of GABAAR attenuated the beneficial effects of EA in asthma, including the regulation of airway resistance and inflammation, as well as the inhibitory effects on TLR4/MyD88/NF-κB signaling pathway. Conclusion::Our findings suggest that GABAergic system may be involved in mediating the therapeutic effect of EA in asthma, possibly by suppressing the TLR4/MyD88/NF-κB signaling pathway.

目的:探讨羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A，HSYA)对慢性束缚应激模型小鼠抑郁样行为及海马γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid，GABA)A型受体(type A GABA receptor，GABAAR)表达的影响。方法:将健康雄性SPF级C57BL/6C小鼠按照随机数字表法分为对照组、HSYA组、模型组、模型+HSYA组、模型+氟西汀组，每组12只。采用慢性束缚应激方法建立抑郁小鼠模型，HSYA组和模型+HSYA组小鼠腹腔注射给予HSYA(20 mg/kg)，模型+氟西汀组小鼠腹腔注射氟西汀(10 mg/kg)，对照组和模型组小鼠给予等体积0.9%氯化钠溶液，1次/d，连续给药14 d。采用强迫游泳实验和悬尾实验评价动物的抑郁样行为，Western blot检测小鼠海马组织内GABAAR不同亚型的蛋白表达水平。采用SPSS 19.0和GraphPad Prism 8.0软件分析数据和制图，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用Tukey-HSD检验。结果:(1)在行为学实验中，5组小鼠在强迫游泳实验中的漂浮不动时间和悬尾实验中的悬尾不动时间均差异有统计学意义( F＝21.59，20.81，均 P<0.05)。模型组小鼠漂浮不动时间[(143.91±9.97)s]和悬尾不动时间[(107.00±6.54)s]均高于对照组[(52.92±6.70)s，(43.50±5.96)s，均 P<0.05]。模型+HSYA组小鼠的游泳漂浮不动时间[(26.17±7.69)s]和悬尾不动时间[(20.17±7.89)s]与模型+氟西汀组[ (61.60±16.22)s, (34.14±10.74)s]相比均差异无统计学意义(均 P>0.05)，但两组的游泳漂浮时间和悬尾不动时间均低于模型组(均 P<0.05)。(2)Western blot结果显示，4组小鼠海马组织内GABAAR亚型GABAARβ1和GABAARβ2的蛋白表达水平均差异有统计学意义( F＝12.21，11.40，均 P<0.05)。模型组小鼠海马组织内GABAARβ1(45.60±10.76)和GABAARβ2(46.27±4.82)的蛋白表达水平均低于对照组[GABAARβ1(100.00±3.44)，GABAARβ2(100.00±3.26)，均 P<0.05]。与模型组相比，模型+HSYA组GABAARβ1(79.91±5.00)和GABAARβ2(79.08±5.53)蛋白表达水平均较高(均 P<0.05)。此外，4组小鼠海马组织内GABAARα1和GABAARγ1蛋白表达均差异无统计学意义( F＝0.23，0.10，均 P>0.05)。 结论:HSYA能有效缓解抑郁模型小鼠的抑郁样行为，这可能与其上调海马组织GABAARβ1和GABAARβ2的表达有关。

Background::Mounting evidence, consistent with our previous study, showed that γ-aminobutyric acid type A receptor (GABAAR) played an indispensable role in airway inflammation and mucus hypersecretion in asthma. Monocyte chemotactic protein-inducing protein 1 (MCPIP1) was a key negative regulator of inflammation. Recent studies showed that inflammation was largely suppressed by enhanced MCPIP1 expression in many inflammatory diseases. However, the role and potential mechanism of MCPIP1 in airway inflammation and mucus hypersecretion in asthma were still not well studied. This study was to explore the role of MCPIP1 in asthmatic airway inflammation and mucus hypersecretion in both mice and BEAS-2B cells, and its potential mechanism.Methods::In vivo, mice were sensitized and challenged by ovalbumin (OVA) to induce asthma. Airway inflammation and mucus secretion were analyzed. In vitro, BEAS-2B cells were chosen. Interleukin (IL)-13 was used to stimulate inflammation and mucus hypersecretion in cells. MCPIP1 Lentiviral vector (LA-MCPIP1) and plasmid-MCPIP1 were used to up-regulate MCPIP1 in lung and cells, respectively. MCP-1, thymic stromal lymphopoietin (TSLP), mucin 5AC (MUC5AC), MCPIP1, and GABAARβ2 expressions were measured in both lung and BEAS-2B cells. Immunofluorescence staining was performed to observe the expression of GABAARβ2 in cells. Results::MCPIP1 was up-regulated by LA-MCPIP1 ( P < 0.001) and plasmid-MCPIP1 ( P < 0.001) in lung and cells, respectively. OVA-induced airway inflammation and mucus hypersecretion, OVA-enhanced MCP-1, TSLP, MUC5AC, and GABAARβ2 expressions, and OVA-reduced MCPIP1 were significantly blunted by LA-MCPIP1 in mice (all P < 0.001). IL-13-enhanced MCP-1, TSLP, MUC5AC, and GABAARβ2 expressions, and IL-13-reduced MCPIP1 were markedly abrogated by plasmid-MCPIP1 in BEAS-2B cells (all P < 0.001). Conclusion::The results of this study suggested that OVA and IL-13-induced airway inflammation and mucus hypersecretion were negatively regulated by MCPIP1 in both lung and BEAS-2B cells, involving GABAAR signaling pathway.

目的 利用小鼠两瓶自由选择模型评价突触外γ-氨基丁酸A型受体(GABAAR)激动剂加波沙朵的精神依赖性,并与突触内GABAAR变构调节剂咪达唑仑比较.方法 ①C57BL/6J雄性小鼠分别ig给予溶剂、咪达唑仑(59.0,73.7,92.2,115.2,144.0和180.0 mg·kg-1)或加波沙朵(8.4,10.5,13.1,16.4,20.5,25.6和32.0 mg·kg-1)后进行翻正反射行为观察,通过翻正反射消失量效曲线计算两药的半数有效量(ED50).②在两瓶自由选择模型上评价加波沙朵或咪达唑仑是否诱导小鼠产生偏好行为.小鼠分为正常对照、加波沙朵或咪达唑仑组.在两瓶自由选择实验的适应期(第1～3天)测试瓶和溶剂对照瓶均装入饮用水,训练期(第4～5天)两瓶均更换为4%蔗糖溶液,测试期(第6～15天)测试瓶分别装入含溶剂、加波沙朵(3.9×10-6 mol·L-1)或咪达唑仑(1.4×10-5 mol·L-1)的蔗糖溶液,溶剂对照瓶分别装入含相应溶剂的蔗糖溶液,置于饲养笼两侧.小鼠自由选择两瓶饮用,分别记录测试瓶和溶剂对照瓶每日饮用量,计算每日总饮用量、测试期内药液累计饮用量、相对饮用量和测试期内累计相对饮用量,并每日记录小鼠体重.结果 ①咪达唑仑和加波沙朵均剂量依赖性地增加小鼠翻正反射消失率,ED50分别为咪达唑仑105.3 mg·kg-1(95%Cl:96.4～115.2 mg·kg-1,R2=0.9796)、加波沙朵13.7 mg·kg-1(95%Cl:12.6～15.0 mg·kg-1,R2=0.9773).②与正常对照组相比,加波沙朵组和咪达唑仑组每日总饮用量无显著变化;咪达唑仑组在测试期第11～15天测试瓶每日饮用量较同组溶剂对照瓶显著增加(P<0.05),测试期内加波沙朵组测试瓶每日饮用量也显著升高(P<0.01).与正常对照组比较,咪达唑仑组和加波沙朵组测试瓶累计饮用量无统计学差异;加波沙朵组第9天的每日相对饮用量显著增加(P<0.05),测试期累计相对饮用量也显著增高(P<0.01).各组小鼠体重变化无显著性差异.结论 在两瓶自由选择模型上,咪达唑仑和加波沙朵均诱导小鼠产生饮用偏好,提示加波沙朵可能也存在精神依赖潜能.

目的 研究五味子主要成分(Sc)的抗癫痫作用及分子机制.方法 以小鼠为研究对象,构建戊四唑(PTZ)及士的宁(STR)诱导的全面性强直阵挛发作(GTCS)癫痫模型,观察ip给予Sc 10,30和60 mg·kg-1 对GTCS的潜伏期、发生率及死亡率的影响;采用全细胞膜片钳技术研究Sc对海马神经元及重组细胞上γ-氨基丁酸A型受体(GAB-AAR)及甘氨酸受体(GlyR)电流的影响,并结合点突变实验探究Sc与GABAAR及GlyR作用的分子机制.结果 与对照组相比,Sc 30和60 mg·kg-1均显著延长PTZ及STR诱导的GTCS的潜伏期,并降低其发生率和死亡率;Sc剂量依赖性地增强神经元及重组细胞上的GABAAR和GlyR电流,并逆转PTZ及STR对受体功能的抑制;发现Sc与GABAAR和GlyR相互作用的关键氨基酸位点.结论 Sc具有抗癫痫作用,其机制可能与增强GABAAR和GlyR功能有关.

目的:探究大鼠双侧颈总动脉永久性结扎(BCCAO)后,γ氨基丁酸A型受体α5亚单位(GABAAR α5)在海马区域表达的时空变化.方法:将成年雄性SD大鼠50只随机分为假手术组(n=20)、模型组(n=30).采用双侧颈总动脉结扎建立血管性痴呆大鼠模型,在手术后3、7、28天采用免疫印迹检测整体海马中GABAAR α5蛋白的表达,用间接免疫荧光法分析大鼠海马CA1、CA3和DG区域空间表达变化.结果:术后3天,模型组相比GABAAR α5表达水平假手术组下调(P＜0.05),而术后28天GABAAR α5表达水平相术后3天明显回升(P＜0.05).模型组术后3天CA1区域GABAAR α5表达水平相比假手术组有所下调,术后28天以上指标较术后3天显著上调(P＜0.05),但两组CA3和DG区域GABAAR α5表达水平比较差异并无统计学意义(P＞0.05).结论:BCCAO可引起海马区域GABAAR α5表达的下调,并在术后各个时间点呈现时空变化.

目的 评价异氟醚∕丙泊酚不同配伍对大鼠海马神经元缺氧损伤时 GABAA受体(GABAAR)α1亚基稳态的影响.方法 原代培养Wistar 大鼠胎鼠海马神经元,采用随机数字表法将神经元分为6组(n=60):正常对照组(C组)、缺氧组(H组)、异氟醚组(I组)、丙泊酚组(P 组)、异氟醚∕丙泊酚不同配伍组(IP1组和IP2组).H组缺氧6 h;I组和P组缺氧6 h后分别经1.9%异氟醚和22.4 μmol∕L丙泊酚孵育3 h;IP1组和IP2组缺氧6 h后分别经1.0%异氟醚+6.7 μmol∕L丙泊酚、1.4%异氟醚+3.4 μmol∕L丙泊酚孵育3 h;随后更换正常培养基培养.培养24 h时采用CCK-8法检测细胞活力,采用qPCR法检测GABAAR α1亚基mRNA的表达,采用Western blot法检测胞膜GABAAR α1亚基的表达,采用免疫沉淀和Western blot法检测GABAAR α1亚基内质网相关降解(ERAD)水平,采用免疫荧光检测CCAAT∕增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的表达.结果 与C组比较,其余5组神经元活力降低,GABAAR α1亚基mRNA和胞膜GABAAR α1亚基表达下调,CHOP 表达上调, GABAAR α1亚基ERAD水平升高(P<0.05).与 H 组比较,I 组、P 组和 IP2组神经元活力降低, GABAAR α1亚基mRNA和胞膜GABAAR α1亚基表达下调,CHOP表达上调,GABAAR α1亚基ERAD水平升高(P<0.05),IP1组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);与I组或P组比较,IP1组和IP2组神经元活力升高,GABAAR α1亚基mRNA和胞膜 GABAAR α1亚基表达上调,CHOP 表达下调, GABAAR α1亚基ERAD水平降低(P<0.05).与IP1组比较,IP2组神经元活力降低,GABAAR α1亚基mRNA和胞膜GABAAR α1亚基表达下调,CHOP表达上调,GABAAR α1亚基ERAD水平升高(P<0.05).结论 1.0%异氟醚+6.7 μmol∕L丙泊酚配伍时不加重缺氧诱导的大鼠海马神经元GABAAR α1亚基稳态破坏.

目的;探讨五味子乙素(SchB)对ICR小鼠的抗焦虑作用,并阐明其相关机制.方法:ICR小鼠分为空白对照组(灌胃给予双蒸水)、2.5 mg·kg-1SchB组、5.0 mg·kg-1 SchB组和10.0 mg· kg-1SchB组(灌胃给予相应剂量SchB).各组小鼠连续灌胃给药7d后,进行十字迷宫及零迷宫实验;实验结束后,取空白对照组及SchB 10 mg·kg-1组小鼠外周血及脑组织.采用酶联免疫吸附试验检测小鼠外周血和脑组织中γ氨基丁酸(GABA)及谷氨酸(Glu)水平,计算GABA/Glu比值;采用Western blotting法检测小鼠脑组织中GABAA受体α1亚单位(GABAARα1)与GABAA受体γ2亚单位(GABAARγ2)的表达水平.结果:与空白对照组比较,5.0和10.0mg·kg-1SchB组小鼠在高架十字迷宫中进入开臂的次数百分率明显增加(P＜0.05或P＜0.01),开臂滞留时间百分率明显增加(P＜0.05或P＜0.01),在高架零迷宫中进入开臂次数百分率明显增加(P＜0.01),开臂探头次数百分率明显增加(P＜0.01).与空白对照组比较,10.0 mg·kg-1SchB组小鼠外周血及脑组织中GABA水平明显增加(P＜0.01),Glu水平明显降低(P＜0.01),GABA/Glu的比值明显升高(P＜0.01),脑组织中GABAA Rα1和GABAA Rγ2表达水平明显升高(P＜0.01).结论:SchB对小鼠具有抗焦虑作用,该作用可能与调节外周血和脑组织中GABA和Glu水平及脑组织中GABAARα1和GABAARγ2表达水平有关.

目的 评价γ-氨基丁酸(GABA)预先给药对机械通气所致人肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤的影响.方法 人肺泡Ⅱ型上皮细胞株A549细胞,以0.2×106/ml接种培养板中,每孔2.5 ml,采用随机数字表法,将培养孔分为三组:正常对照组(C组)、机械通气性牵张组(P组)和GABA预先给药组(G组).C组常规培养;P组给予20％应变率的机械牵张6h,牵张频率0.3 Hz,载入波形为正弦波;G组机械牵张前30 min时给予50 μmol/L GABA.采用甲基噻唑蓝法测定细胞活力,采用比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)含量,计算LDH释放率;采用免疫荧光法观察纤维状肌动蛋白(F-actin)重构情况;采用Western blot法测定RhoA激酶1(ROCK1)与γ-氨基丁酸A型受体(GABAA受体)的相对含量.结果 与C组比较,P组和G组细胞活力明显降低,LDH释放率明显升高,ROCK1的相对含量明显上调,GABAA受体的相对含量明显下调(P＜0.05).与P组比较,G组细胞活力明显升高,LDH释放率明显降低,ROCK1的相对含量明显下调,GABAA受体的相对含量明显上调(P＜0.05).G组Factin重构程度轻于P组,而重于C组.结论 GABA预先给药可减轻机械通气性牵张致人肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤,其机制可能与GABAA受体的激活有关.