目的 探讨生长激素促分泌素受体(GHS-R)的内源性配体Ghrelin对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠的保护作用及分子机制.方法 将48只SPF级健康大鼠随机分为对照组、模型组、治疗组及拮抗组,每组12只,后3组采用注射法将5％牛磺胆酸钠注入胰胆管内复制SAP模型,对照组不注射牛磺胆酸钠,治疗组在造模1 h后给予Ghrelin腹腔注射,拮抗组在造模前30 min给予生长激素释放肽(GHRP-6)腹腔注射、造模后1 h给予Ghrelin腹腔注射;术后2 h,取血检测各组大鼠血清淀粉酶、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF-α)和核因子(NF-κB)表达水平,取各组胰腺组织检测胰腺质量指数、观察各组胰腺病理变化并计算病理评分,检测IL-6、TNF-α、NF-κB的mRNA表达.结果 与对照组比较、模型组胰腺体质量指数升高(P<0.05),与模型组相比、治疗组胰腺质量指数降低(P<0.05),与治疗组相比、拮抗组胰腺质量指数升高(P<0.05);与对照组相比,模型组的大鼠血清淀粉酶、IL-6、TNF-α及NF-κB表达水平明显升高(P<0.01);与模型组相比,治疗组血清淀粉酶、IL-6、TNF-α、NF-κB表达水平明显降低(P<0.01);与治疗组相比,拮抗组血清淀粉酶、IL-6、TNF-α、NF-κB表达水平明显升高(P<0.01);与模型组相比,治疗组的IL-6、TNF-α、NF-κB mRNA的表达量明显降低(P<0.01);与治疗组相比,拮抗组IL-6、TNF-α、NF-κB mRNA的表达量有明显升高(P<0.01);与模型组相比,治疗组胰腺病理评分明显降低(P<0.01).结论 内源性Ghrelin对SAP有一定的保护作用,其机制与抑制炎症因子IL-6、TNF-α、NF-κB的表达有关.

目的 观察运脾开胃方含药血清对人胃窦平滑肌细胞(HGSMCs)内 Ca2+、MLC、p-MLC的干预作用以及与 Ghrelin受体(GHSR)的关系,研究运脾开胃方治疗厌食症的机制.方法 培养 HGSMCs,制备低、中、高浓度的运脾开胃方含药血清;采用激光共聚焦、Western blot法检测运脾开胃方含药血清对 HGSMCs 内 Ca2+、MLC、p-MLC 的影响;阻断 HGSMCs 表面GHSR并干扰细胞内外Ca2+的正常调控,研究运脾开胃方含药血清对 HGSMCs 内 p-MLC的干预机制.结果 低、中、高剂量组运脾开胃方含药血清能在一定时间范围内上调 HGSMCs 内 Ca2+的相对荧光强度(P<0.05~0.01);低、中、高剂量组运脾开胃方含药血清能在10 min时显著上调 HGSMCs内 p-MLC水平(P<0.05~0.01);(D-Lys3)-GHRP-6、Thapsigargin、D-HBSS液能显著抑制高剂量运脾开胃方含药血清在10 min时对 p-MLC的上调作用(P<0.01).结论 运脾开胃方含药血清可能通过激活 GHSR提高细胞内Ca2+水平来促进 MLC磷酸化.

目的:探讨Ghrelin对糖尿病大鼠下丘脑弓状核胃扩张敏感神经元和胃运动的影响.方法:逆行追踪结合免疫组化观察ARC中GHSR-1的表达,细胞外放电记录,观察ghrelin对GD神经元放电活动的影响及电刺激ARC对GD神经元放电活动和胃运动的影响.结果:电生理实验结果表明,在ARC Ghrelin能够能激发GD兴奋性神经元(GD-E)和GD抑制性神经元(GD-Ⅰ).然而,ghrelin可以兴奋更少的GD-E神经元,在正常大鼠中ghrelin对于GD-E的兴奋作用比在DM大鼠中的作用弱.在体胃运动研究表明,在ARC中微量注射ghrelin可以明显的增强胃运动,并且呈现剂量依赖关系.Ghrelin在糖尿病大鼠促胃动力作用低于正常大鼠.Ghrelin诱导的效应可被生长激素促分泌素受体(GHSR)拮抗剂阻断[d-lys-3]-GHRP-6或bim28163.放射免疫法和实时荧光定量PCR数据表明胃血浆ghrelin水平,在ARC ghrelinmRNA的表达水平先上升后下降,糖尿病大鼠(DM)中,在ARC中GHSR-1a mRNA表达保持在一个比较低的水平.结论:ghrelm可以调节GD敏感神经元以及胃运动,通过ARC中ghrelin受体.在糖尿病大鼠中,Ghrelin促进胃运动作用减弱可能与ARC中ghrelin受体表达减少有关.

目的:探究ghrelin、GHRP-6以及胃动素对大鼠胃肠运动的影响.方法:在体实验观察ghrelin、GHRP-6及胃动素对大鼠胃排空及小肠推进的影响,离体实验观察ghrelin、GHRP-6及胃动素对大鼠电场刺激引起胃窦胃底平滑肌舒缩反应的影响,RT-PCR观察ghrelin mRNA在胃的表达.结果:在体研究发现ghrelin及GHRP-6能够促进胃排空及小肠推进,胃动素对胃排空及小肠推进无影响.离体研究发现,ghrelin 1 μM能够抑制胃底平滑肌4-8Hz开电刺激下的舒张反应,并增强胃底平滑肌1-8Hz及胃窦平滑肌4-16Hz断电刺激下的收缩反应;GHRP-6 1 μM能够抑制胃底平滑肌4-8Hz开电刺激下的舒张反应,并增强胃底平滑肌1-2Hz、8-16Hz及胃窦平滑肌4-8Hz断电刺激下的收缩反应;L-NAME增强ghrelin、GHRP-6诱导的胃底和胃窦平滑肌条舒缩作用.大鼠胃窦及胃底分布有ghrelin受体mRNA.结论:ghrelin和GHRP-6能够加快胃排空促进小肠推进,该效应可能是通过迷走神经通路及胆碱能兴奋产生的.

目的:探讨生长激素释放肽(Ghrelin)促进乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的分子机制.方法:乳腺癌细胞MDA-MB-231经Ghrelin、Ghrelin受体(growth hormone secretagogue receptor,GHSR)抑制剂[D-Lys3]-GHRP-6或哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of Rapamycin,mTOR)抑制剂雷帕霉素(Rapa-mycin)处理后,MTT或BrdU实验检测MDA-MB-231细胞的增殖能力;Western blot检测MDA-MB-231细胞GHSR表达及mTOR、p70S6K和S6磷酸化水平.结果:增殖实验结果表明Ghrelin增强MDA-MB-231细胞增殖能力;Western blot检测发现 Ghrelin激活 MDA-MB-231细胞 mTOR、p70S6K和 S6磷酸化,[D-Lys3]-GHRP-6或Rapamycin消除Ghrelin促进MDA-MB-231细胞增殖效应,同时抑制Ghrelin诱导的mTOR、p70S6K和S6磷酸化.结论:Ghrelin通过与GHSR结合激活MDA-MB-231细胞mTOR/p70S6K/S6信号途径促进MDA-MB-231细胞增殖.

目的:探讨海马ghrelin对GD敏感神经元放电和弓状核ghrelin对胃运动的影响.方法:在细胞外记录海马的放电情况,并且检测清醒大鼠的胃运动.通过PCR免疫印迹和免疫荧光组织化学染色等方法来测定GHSR-1a在海马中的表达.用逆行追踪和免疫荧光组织化学染色检测ghrelin神经元的投射情况.Ghrelin况荧光金双标记的神经元以及GHSR-1a的表达分别可以在ARC和海马中观察到.结果:Ghrelin或者ARC电刺激可以兴奋海马区的胃牵张敏感神经元.Ghrelin受体拮抗剂[d-Lys-3]-GHRP-6预处理可以完全或者部分阻断这种兴奋作用.海马注射ghrelin可以显著促进胃运动,并且呈现剂量依赖关系,而且这种作用可以被[d-Lys-3]-GHRP-6所阻断.电刺激ARC能够促进胃运动.然而,预处理时[d-Lys-3]-GHRP-6可以减弱这些作用.电损毁海马可以减弱胃运动的兴奋作用,这个作用通过电刺激ARC产生的.结论:通过海马促进胃运动中ghrelin起着重要的作用.ARC可能参与调节海马对胃动力的影响.

目的:选取世界反兴奋剂机构(WADA)禁用的7种生长激素释放肽(GHRP-1,GHRP-2,GHRP-4,GHRP-5,GHRP-6,Hexarelin和Alexamorelin)和2种生长激素促分泌素(Anamorelin和Ipamorelin)为研究对象,建立人尿中的HPLC-MS/MS检测方法,进行稳定性实验.方法:使用Oasis(R)WCX固相提取小柱(1cc,30rmg)对尿样进行化学前处理,尿样加入内标后离心,取1mL加入小柱,依次用5％ NH4OH和20％ CH3CN清洗后,用含2％甲酸的水/乙腈(1/3)洗脱液洗脱,35℃氮气流下吹干,复溶后进样于LC-MS/MS.使用1290/6470液相色谱质谱仪和Zorbax 300SB-C18色谱柱进行定性分析,流动相采用含0.2％甲酸的水/乙腈体系.结果:检测限根据不同物质分布在0.01～0.5 ng/mL(S/N＞3).回收率分布在40％～76％之间,日内精密度和日间精密度均小于15％,尿中基质无明显干扰.室温,冷藏条件储存和反复冻融对Anamorelin、GHRP-2、GHRP-4和GHRP-5有明显影响.结论:建立了尿中9种生长激素释放肽和生长激素促分泌素的HPLC-MS/MS检测方法,方法简单,特异性、灵敏度均可满足WADA实验室国际标准和技术文件要求.现已应用于我实验室的常规检测.尿样在传送、检测及实验室长期保存过程中应尽量避免反复冻融.

目的:探讨下丘脑室旁核orexin-A对大鼠摄食和胃动力影响及调控机制.方法:采用免疫组化观察下丘脑室旁核 (paraventricular nucleus, PVN) orexin受体表达情况;PVN注射orexin-A观察大鼠摄食、胃运动、胃酸分泌和胃排空的改变.结果:免疫组化实验显示大鼠PVN中存在orexin受体免疫阳性细胞.PVN注射orexin-A后, 大鼠前三小时摄食增加, 6 h和24 h摄食无显著改变.PVN微量注射orexin-A后, 大鼠胃运动幅度和频率增加、胃排空增快并且胃酸分泌增多.[D-Lys-3]-GHRP-6可部分阻断orexin-A对摄食、胃运动、胃排空和胃酸分泌的促进作用, SB334867可完全阻断orexin-A对胃运动、胃排空和胃酸分泌的促进作用.结论:下丘脑室旁核orexin-A可能通过生长激素促泌素GHSR受体信号通路调控大鼠摄食及胃功能.

目的:探讨胃饥饿素(Ghrelin)在糖尿病神经病理性疼痛中的作用及对大鼠脊髓嘌呤受体2X-4/NOD样受体-3(P2X4/NLRP3)表达的影响.方法:健康成年雄性SD大鼠40只,随机分为5组,每组8只:正常+Ghrelin组(NG组)、正常+[D-Lys3]-GHRP-6组(ND组)、糖尿病组(D组)、糖尿病+Ghrelin组(DG组)、糖尿病+Ghrelin+[D-Lys3]-GHRP-6组(DGD组).[D-Lys3]-GHRP-6为Ghrelin特异性抑制剂.NG组腹腔注射Ghrelin 200 μg/kg 6周,ND组腹腔注射[D-Lys3]-GHRP-6 50 mg/kg 6周.腹腔注射1%链脲佐菌素-柠檬酸盐缓冲液60 mg/kg制备大鼠糖尿病模型,造模成功后3 d,腹腔注射Ghrelin 200 μg/kg 6周,DGD组腹腔注射Ghrelin 200 μg/kg+[D-Lys3]-GHRP-6 50 mg/kg 6周.分别于第2,4,6周测定大鼠机械痛阈(MWT)及坐骨神经导速率(MNCV);6周后处死大鼠,尼氏染色观察脊髓病理学变化,电镜观察腓肠神经病理学改变,West-ern blot法检测脊髓Ghrelin、P2X4、NLRP3和IL-1β表达水平.结果:与NG组比较,ND组脊髓Nissl染色和腓肠神经电镜显示细胞结构正常,MWT和MNCV无明显变化,P2X4、NLRP3、IL-1β表达水平差异无统计学意义(P＞0.05);D组脊髓Nissl染色和腓肠神经电镜显示细胞部分受损,MWT、MNCV显著降低;Ghrelin表达降低,P2X4、NLRP3、IL-1β显著升高(P＜0.05).与D组比较,DG组中脊髓Nissl染色和腓肠神经电镜显示细胞结构相对正常,MWT和MNCV明显升高,Ghrelin表达升高,P2X4、NLRP3、IL-1β表达降低(P＜0.05).与DG组比较,DGD组中脊髓Nissl染色和腓肠神经电镜细胞结构破坏严重,MWT和MNCV明显降低,Ghrelin表达降低,P2X4、NLRP3、IL-1β表达升高(P＜0.05).结论:Ghrelin可能通过P2X4/NLRP3通路参与了糖尿病神经病理性疼痛的调控.

目的 观察ghrelin对糖氧剥夺诱导海马神经干细胞损伤的影响,并探讨核受体辅阻遏子1(N-CoR1)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)通路在该影响中的作用.方法 将细胞随机分为正常对照组、损伤模型组、ghrelin治疗组、GHRP组、LY294002组、siRNA空白对照组、N-CoR1 siRNA组.正常对照组在正常糖含量的培养基、正常氧含量混合气体的普通培养箱中培养24 h,其余各组细胞行糖氧剥夺处理,处理后培养条件同正常对照组.siRNA空白对照组、N-CoR1 siRNA组行糖氧剥夺处理前1 h,培养液更换为含等量转染溶剂Lipofectamine2000或N-CoR siRNA脂质体的培养液,持续转染至糖氧剥夺之后的24 h.ghrelin治疗组在糖氧剥夺处理结束后,将培养液更换为含ghrelin的培养基继续培养24 h.GHRP-6组、LY294002组在糖氧剥夺处理结束后,预先给予ghrelin受体拮抗剂D-Lys3-GHRP-6或PI3K抑制剂LY294002处理1 h,再同时给予ghrelin处理,继续培养24 h.收集各组细胞,采用CCK-8法检测海马神经干细胞增殖活力,Western blotting法检测N-CoR1、PI3K、增殖标志蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)及凋亡标志蛋白Bax、Bcl-2.CCK-8实验中ghrelin治疗组ghrelin浓度分别为4、20、100 nmol/L,其余实验中ghrelin浓度均为100 nmol/L.结果 与正常对照组比较,损伤模型组海马神经干细胞增殖活力降低,细胞PCNA表达减少、Bax/Bcl-2增大,N-CoR表达明显增多、PI3K表达减少(P均<0.01);与损伤模型组比较,ghrelin治疗组随ghrelin作用浓度增高细胞增殖活力增高(P均<0.01),细胞PCNA表达增多、Bax/Bcl-2减小,N-CoR表达减少、PI3K表达增多(P均<0.01);与ghrelin治疗组(100 nmol/L)比较,GHRP组、LY29400组神经干细胞增殖活力降低,PCNA表达减少、Bax/Bcl-2增大,N-CoR表达明显增多、PI3K表达减少(P均<0.01).与siRNA空白对照组比较,N-CoR siRNA组神经干细胞增殖活力增高,N-CoR siRNA组PCNA表达增多、Bax/Bcl-2减小,N-CoR siRNA组N-CoR表达减少、PI3K表达增多(P均<0.01).结论 ghrelin可抑制糖氧剥夺诱导的海马神经干细胞损伤,其机制与调节N-CoR/PI3K信号通路有关.