目的:探讨骨碎补总黄酮(TFRD)对幼兔激素性股骨头缺血坏死病程及凋亡相关蛋白表达的影响及其可能机制。方法:动物实验研究。选用2月龄健康新西兰白兔110只，按随机数字表法分为对照组(10只)、模型组(50只)、TFRD组(50只)。模型组及TFRD组行双侧臀肌交替注射醋酸泼尼松龙注射液(7.5 mg/kg)，每周2次，对照组同部位同频次注射等体积生理盐水(0.3 mL/kg)；TFRD组于第1次注射醋酸泼尼松龙开始每天灌服TFRD溶液(35 mg/kg)，对照组及模型组每日灌服等体积生理盐水6 mL，连续8周。根据是否发病将模型组分为模型发病组及模型未发病组；将TFRD组分为TFRD发病组及TFRD未发病组。造模结束后，取双侧股骨头行病理学检查；酶联免疫吸附实验(ELISA)测定各组股骨头组织中磷酸化蛋白酪氨酸激酶2(P-JAK2)、磷酸化信号转导与转录激活因子3(P-STAT3)、细胞因子信号传导抑制蛋白3(SOCS3)及凋亡相关因子表达情况；实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)、信号转导与转录激活因子3(STAT3)、SOCS3相对表达情况。结果:模型组坏死发生率22.86%(8/35)；TFRD组坏死发生率15.79%(6/38)。微型计算机断层扫描技术示：与模型发病组比较，TFRD发病组骨体积分数和骨小梁厚度较高，骨小梁分离度较低，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。病理染色示：TFRD未发病组较其他实验组骨小梁形态更完整、骨小梁周围可见成骨细胞、空骨陷窝更少，病理变化得到明显改善。ELISA显示：与模型发病组比较，TFRD发病组P-JAK2、P-STAT3、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)相关X蛋白、半胱氨酸蛋白酶3表达均下降，Bcl-2表达增高，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。qPCR示：与模型发病组比较，TFRD发病组JAK2、STAT3、SOCS3表达下调，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:TFRD可以经JAK2/STAT3/SOCS3通路抑制幼兔激素性股骨头缺血坏死骨组织中促凋亡因子表达，减缓幼兔激素性股骨头缺血坏死病程。

目的:探讨柚皮素调节酪氨酸蛋白激酶2（janus kinase 2，JAK2）/信号转导与转MCP-1录激活因子3（signal transducer and activator of transcription 3，STAT3）/细胞因子信号转导抑制因子-1（suppressor of cytokine signaling 1，SOCS1）信号通路对糖尿病视网膜病变（diabetes retinopathy，DR）大鼠的治疗作用。方法:构建DR大鼠模型，并随机分为DR组、柚皮素组、激活剂组、柚皮素+激活剂组，以正常大鼠为对照组，各组按照相应分组干预后，检测大鼠血糖、糖化血红蛋白；分离视网膜组织，检测白细胞介素（interleukin-6，IL）-6、IL-1 β、谷胱甘肽（glutathione，GSH）、过氧化氢酶（catalase，CAT），检测大鼠病理变化及血视网膜血管屏障通透性，并对视网膜组织黏附因子（vascular cell adhesion molecule 1，VCAM-1）、抗血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）mRNA及JAK2/STAT3/SOCS1通路相关蛋白进行检测。 结果:对照组血糖为（5.16±0.53）mmoL、糖化血红蛋白为（4.26±0.45）%、IL-6为（63.11±6.35）pg/mL、IL-1 β为（23.11±2.38）pg/mL、伊文思蓝（EB）含量为（4.72±0.49）ng/mg、VCAM-1为1.02±0.11、VEGF mRNA表达为0.93±0.10、p-JAK2/JAK2为（0.24±0.03）、p-STAT3/STAT3为（0.19±0.02）、GSH为（17.62±1.81）nmoL/mg、CAT为（11.68±1.19）IU/mg、SOCS1为1.44±0.16，DR组血糖为（18.85±1.89）mmoL、糖化血红蛋白为（11.62±1.18）%、IL-6为（89.17±8.99）pg/mL、IL-1 β为（52.11±5.28）pg/mL、EB含量为（10.24±1.08）ng/mg、VCAM-1为1.56±0.16、VEGF mRNA表达为1.61±0.18、p-JAK2/JAK2为0.55±0.06、p-STAT3/STAT3表达为0.47±0.05，均较对照组降低（ P<0.05）；DR组GSH为（8.27±0.88）nmoL/mg）、CAT为（6.85±0.71）IU/mg、SOCS1为0.86±0.09，均较对照组增加（ P<0.05）。柚皮素组血糖为（13.11±1.34）mmoL、糖化血红蛋白为（7.36±0.76）%、IL-6为（67.08±6.75）pg/mL、IL-1 β为（31.61±3.22）pg/mL、EB含量为（6.15±0.63）ng/mg、VCAM-1为1.15±0.12、VEGF mRNA表达为1.17±0.12、p-JAK2/JAK2为0.29±0.03、p-STAT3/STAT3为0.21±0.03，均较DR组降低（ P<0.05），GSH为（15.22±1.59）nmoL/mg、CAT为（10.95±1.11）IU/mg、SOCS1表达为1.37±0.15，均较DR组升高（ P<0.05）；激活剂逆转了柚皮素对DR大鼠的保护作用。 结论:柚皮素调节JAK2/STAT3/SOCS1信号通路可改善DR大鼠损伤。

目的:探讨微小RNA（miRNA，miR）-155在砷致肝损伤大鼠辅助性T细胞17（Th17）/调节性T细胞（Treg）稳态失衡中的作用。方法:选取32只健康清洁级Wistar大鼠（体质量为80 ~ 100 g），采用随机数字表法分为对照和低、中、高砷剂量组，每组8只，雌雄各半。对照组给予去离子水灌胃，低、中、高砷剂量组按体质量分别给予2.5、5.0、10.0 mg/kg亚砷酸钠溶液灌胃，每周灌胃6 d，持续饲养4个月。实验终期采集大鼠外周血及肝组织样本，采用流式细胞术检测大鼠外周血淋巴细胞中Th17及Treg亚群比例，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血浆中Th17、Treg主要效应因子白细胞介素（IL）-17、IL-10含量；实时荧光定量PCR检测血浆miR-155水平及肝组织细胞因子信号转导抑制蛋白1（SOCS1）、Janus激酶3（JAK3）、信号转导和转录激活因子5（STAT5）mRNA表达水平；蛋白质印迹法检测肝组织SOCS1、JAK3、STAT5、磷酸化（p）-JAK3、p-STAT5蛋白表达水平；并采用Pearson相关性分析进行各指标间的关联性分析。同时，利用miRNA靶基因在线预测数据库（TargetScan、miRanda及miRBase）分析miR-155与SOCS1 mRNA靶向结合情况，并进一步利用STRING数据库进行通路蛋白互作网络分析。结果:（1）对照，低、中、高砷剂量组大鼠外周血Th17/Treg比值（中位数：0.12、0.15、0.18、0.24），IL-17/IL-10比值（中位数：0.20、0.28、0.35、0.37）及miR-155水平（中位数：1.03、1.60、2.07、3.34）比较，差异均有统计学意义（ H = 9.65、17.15、17.30， P = 0.022、0.001、0.001）；且中、高砷剂量组各指标水平均高于对照组，高砷剂量组各指标水平均高于低砷剂量组（均 P < 0.05）。（2）与对照组比较，中、高砷剂量组大鼠肝组织SOCS1 mRNA及蛋白表达水平均较低，而中、高砷剂量组JAK3、STAT5 mRNA表达水平及高砷剂量组JAK3、p-JAK3、STAT5、p-STAT5蛋白表达水平均较高（均 P < 0.05）。（3）关联性分析发现，大鼠外周血miR-155水平与外周血Th17/Treg、IL-17/IL-10比值均呈正相关（ r = 0.42、0.56， P = 0.016、0.001）；与肝组织SOCS1 mRNA、蛋白表达水平均呈负相关（ r = - 0.38、- 0.41， P = 0.032、0.018），而与肝组织JAK3、p-JAK3、STAT5、p-STAT5蛋白表达水平均呈正相关（ r = 0.39、0.37、0.50、0.47， P = 0.028、0.039、0.004、0.007）。（4）miRNA靶基因在线预测数据库分析结果显示，miR-155与SOCS1 mRNA的3′非编码区存在碱基互补配对序列。STRING数据库分析结果显示，SOCS1可通过JAK3-STAT5通路作用于Treg特异转录因子FOXP3，其主要作用部位为Src同源2结构域。 结论:异常表达的miR-155通过靶向SOCS1调控JAK3-STAT5通路，进而参与砷暴露致肝损伤大鼠Th17/Treg稳态失衡。

现关于中医药干预慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis,CAG)的临床研究和基础实验研究已成为消化系统疾病中的研究热点.Janus蛋白酪氨酸激酶(Janus protein tyrosine kinase,JAK)/信号转导子与激活子(signal transducer and activator of transcription,STAT)信号通路的状态与消化道疾病的发生与进展十分密切.诸多研究表明中药可通过多种机制调控该信号通路干预CAG的进展,大致可分为以下几个方面:通过抑制JAK2/STAT3、核转录因子-κB/STAT1通路激活或促使白介素-4(interleukin-4,IL-4)/STAT6激活达到干预CAG的目的;同时降低IL-6、IL-1β等相关炎症因子表达,不仅可抑制相关通路激活,亦可起到减轻胃黏膜炎症的作用;再者上调抑癌基因p21、下调原癌基因表达防止受损的胃黏膜进一步恶化;最后还可调节生存素、B淋巴细胞瘤2家族调控细胞凋亡/增殖平衡机制逆转胃黏膜萎缩及肠化生.

目的 基于网络药理学和动物实验探讨肉苁蓉苯乙醇苷(CPhGs)对糖尿病肾病(DKD)的作用.方法 UHPLC-QE-MS法分析CPhGs化学成分,TCMSP、Swiss Target Prediction数据库筛选核心成分,OMIM、GeneCards数据库获取DKD相关靶点,获得共同靶标后使用STRING网站构建蛋白互作网络,DAVID数据库进行GO、KEGG通路分析,Cytoscape软件构建"CPhGs核心成分-靶点-通路"网络.随机选取 10 只大鼠作为正常组,其余大鼠用高糖高脂饲料喂养及单次腹腔注射STZ建立DKD模型,分为模型组、达格列净(1 mg/kg)组和CPhGs高、中、低剂量(500、250、125 mg/kg)组,每组10 只,药物干预6 周,观察一般情况,每周称定体质量并检测血糖;末次给药后收集24h尿液,检测 24h尿蛋白总量(24-UTP);腹主动脉取血并处死,分离血清,检测尿素氮(BUN)、尿酸(UA)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)水平,HE染色及Masson染色观察肾组织病理变化,ELISA 法检测血清 IL-1β、IL-6、TNF-α 水平,Western blot 法检测肾组织 JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3、SOCS3 蛋白表达.结果 UHPLC-QE-MS技术共检测得到 699 种成分,经筛选后获得CPhGs核心成分 16 种,相关靶点 323 个,CPhGs与DKD共有靶点 99 个,关键靶点为STAT3、SRC、EGFR等.KEGG通路分析筛选了 151 条信号通路,显示IL-17 信号通路、PI3K/Akt信号通路、TNF信号通路等可能在CPhGs治疗DKD的过程中发挥关键作用.CPhGs能增加DKD大鼠体质量(P<0.01),减少饮水量(P<0.01),调节糖脂代谢,降低 24-UTP、BUN水平(P<0.01),改善肾脏组织病理损伤,降低肾组织p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3 蛋白表达(P<0.01),提高SOCS3蛋白表达(P<0.01).结论 CPhGs通过多成分、多靶点、多途径干预DKD,可能通过抑制 DKD大鼠肾脏 JAK2/STAT3 信号通路来发挥作用.

目的 探讨冬凌草甲素(Oridonin,Ori)对糖耐量异常(impaired glucose tolerance,IGT)大鼠胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)的影响及作用机制.方法 采用高脂饮食喂养联合链脲佐菌素注射法构建IGT大鼠IR模型,大鼠分为正常组(CT组)、IGT模型组(IGT组)、Ori组(10 mg·kg-1·d-1)、Ori+Colivelin(COL)组(10 mg·kg-1·d-1 Ori+2 mg/kg COL),每组 6 只.血糖检测仪测定空腹血糖(FPG)、葡萄糖耐量试验(OGTT)2 h血糖(2 hPG),ELISA试剂盒测定空腹胰岛素(FINS)、单核细胞趋化蛋白 1(MCP-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),血液自动分析仪测定血清胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平,HE 染色观察肝脏病理形态,Western blot 验证附睾脂肪磷酸化(p)-激活 Janus 激活激酶 2(JAK2)、JAK2、p-信号转导和转录激活因子 3(STAT3)、STAT3、p-细胞因子信号传导抑制蛋白 1(SOCS-1)、SOCS-1 蛋白表达.结果 与CT组比较,IGT组大鼠肝脏细胞肿胀,胞浆内可见大量大小不一的脂肪空泡,细胞核被脂肪空泡挤压偏位,且发生炎性细胞浸润,FPG、2hPG、FINS、HOMA-IR、TC、TG、LDL-C、MCP-1、TNF-α 以及 p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、p-SOCS-1/SOCS-1蛋白表达水平升高,血清HDL-C水平下降(P<0.05);与IGT组相比,Ori组大鼠肝脏细胞胞浆内脂肪滴及空泡数量明显减少,细胞肿胀有所缓解,未见炎性细胞浸润,FPG、2hPG、FINS、HOMA-IR、TC、TG、LDL-C、MCP-1、TNF-α以及p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、p-SOCS-1/SOCS-1蛋白表达水平下降,血清HDL-C水平升高(P<0.05);与Ori组相比,Ori+COL组大鼠肝脏脂肪变状况加剧,细胞肿大,血清FPG、2hPG、FINS、HOMA-IR、TC、TG、LDL-C、MCP-1、TNF-α以及p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3、p-SOCS-1/SOCS-1 蛋白表达水平升高,血清HDL-C水平下降(P<0.05).结论 Ori对IGT大鼠IR的缓解作用可能与抑制JAK2/STAT3/SOCS-1信号通路激活有关.

研究广叶绣球菌多糖(polysaccharides,SLPs)对小鼠CD8+T细胞活化、增殖分化以及效应阶段的影响,探索广叶绣球菌多糖对CD8+T细胞的免疫应答调控机制.通过腹腔注射环磷酰胺溶液(80 mg/kg)构建免疫低下小鼠模型,灌胃广叶绣球菌多糖(低、中和高剂量分别为 100、200 和400 mg/kg),连续饲养20 d后处死,取脾脏和胸腺.血细胞分析仪测定血常规;MTT检测脾T淋巴细胞的扩增能力;流式细胞术分析脾脏CD8+T细胞表面CD28、CTLA-4 和PD1 以及树突状细胞表面MHCⅠ、CD80 和PD-L1 的表达量;ELISA测定外周血中TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-10、穿孔素及颗粒酶 B 的含量;RT-PCR 测定脾脏 Psmb9、Psmd9、TAP1、TAP2、IFN-γ、IL-2、JAK1、JAK2、STAT1、STAT3、SOCS-3 和 Blimp-1 的 mRNA 表达量;Western blot 测定 pJAK2/JAK2、pSTAT3/STAT3 和 Blimp-1 的蛋白表达量.试验表明广叶绣球菌多糖高剂量组脾脏指数显著升高,外周血中红细胞、白细胞、淋巴细胞、单核细胞和血小板的含量显著升高(P＜0.05 或P＜0.01);多糖中、高剂量组脾 T 淋巴细胞的扩增能力显著增强(P＜0.05);中、高剂量组 CD8+T 细胞含量显著降低,CD8+T细胞表面PD-1分子含量显著降低,树突状细胞表面PD-L1分子含量显著降低、MHCⅠ细胞含量显著升高(P＜0.05或P＜0.01);多糖高剂量组TNF-α、IFN-γ、IL-2、穿孔素和颗粒酶B的含量显著升高(P＜0.05 或 P＜0.01),IL-10 的含量显著降低(P＜0.05);中、高剂量组 Psmb9、Pmsd9、TAP1、TAP2和Blimp-1的mRNA含量显著升高(P＜0.05或P＜0.01),JAK1、JAK2、STAT1和STAT3的mRNA和蛋白表达量显著降低(P＜0.05或P＜0.01).多糖中高剂量组Blimp-1蛋白表达量显著升高(P＜0.05),多糖组与阳性对照组趋势一致.因此,认为广叶绣球菌多糖能够调节MHCⅠ类抗原加工呈递分子,并通过JAK2/STAT3信号通路促进CD8+T细胞的活化、增殖分化和效应杀伤过程,从而调控CD8+T细胞的免疫应答,起到改善小鼠免疫低下的作用.

目的 探讨竹叶石膏汤合清气化痰丸对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠IL-6 介导JAK1/STAT3 信号通路的调控作用.方法 将 48 只大鼠随机分为正常组,模型组,中药低、中、高剂量组(5、10、15 g/kg竹叶石膏汤合清气化痰丸)及中药低、中、高剂量(5、10、15 g/kg竹叶石膏汤合清气化痰丸)+伊他替尼(30 mg/kg)组,每组8 只.采用气道滴注脂多糖(LPS)联合烟熏方法建立COPD模型,造模 28d后给药干预.给药 2 周后,采用肺功能检测仪测定肺功能指标[吸气峰流速(PIF)、呼气峰流速(PEF)、分钟通气量(MV)],HE染色观察肺组织病理变化,RT-qPCR、免疫印迹分析和免疫组化法检测肺组织IL-6、JAK1、STAT3、SOCS3 mRNA和蛋白表达.结果 与模型组比较,中药各剂量组PIF、PEF、MV增加(P<0.05),肺组织炎症细胞浸润和充血水肿减轻,肺大泡减少,肺泡腔的破坏、扩张和融合得到缓解,IL-6、JAK1、STAT3 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05),SOCS3 mRNA和蛋白表达升高(P<0.05);给予伊他替尼干预后,中药各剂量组的作用均被逆转(P<0.05).结论 竹叶石膏汤合清气化痰丸可下调IL-6介导的JAK/STAT信号通路过度表达和持续活化,并抑制IL-6表达,减轻气道炎症,抑制COPD症状.

目的:探讨JAK2/STAT3/SOCS1信号通路在电针不同腧穴对大鼠急性结肠炎的作用机制.方法:将36只SPF级SD大鼠随机分为6组,每组6只.除正常组外,其余各组用冰乙酸溶液灌肠制备急性结肠炎大鼠模型,在造模结束后给予各腧穴组电针治疗,疏密波,频率2～50 Hz,强度2 mA,以肌肉震颤为度,20 min/次,1次/d,连续3 d.观察大鼠一般情况;HE法观察大鼠结肠组织黏膜病理学变化;ELISA法检测血清白介素-4(IL-4)、白介素-8(IL-8)的含量;Western blot和RT-PCR法检测大鼠结肠组织JAK2、STAT3、SOCS1蛋白及mRNA的表达.结果:与正常组相比,模型组大鼠整体状况差,结肠黏膜严重受损、甚则坏死,溃疡面明显,血清IL-4的含量明显降低、IL-8的含量明显升高(P<0.01),结肠组织中JAK2、STAT3蛋白及mRNA表达均明显升高、SOCS1蛋白及mRNA表达均明显降低(P<0.01);与模型组比较,各腧穴组大鼠一般情况明显好转,结肠黏膜损伤坏死、溃疡面明显减轻,血清IL-4的含量明显升高、IL-8的含量明显降低(P<0.01);结肠组织中JAK2、STAT3蛋白及mRNA表达明显下降、SOCS1蛋白及mRNA表达则明显升高(P<0.05);足三里组与天枢、大肠俞、上巨虚穴比较,结肠黏膜损伤显著减轻,血清IL-4的含量显著升高、IL-8的含量显著降低(P<0.05);结肠组织中JAK2、STAT3蛋白及mRNA表达显著下降、SOCS1蛋白及mRNA表达则显著升高(P<0.05).结论:电针各腧穴均能改善结肠组织黏膜的损伤,减轻炎症反应.其中足三里穴治疗效应总体优于天枢、大肠俞、上巨虚穴,其作用机制可能通过调JAK2/STAT3/SOCS1信号通路相关蛋白及炎性细胞因子IL-4、IL-8有关.

目的 基于酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)/信号传导及转录激活因子3(STAT3)/细胞因子信号抑制物1(SOCS-1)通路研究复方降糖玉液对糖尿病肾损伤大鼠的保护作用机制.方法 随机从72 只雄性SD大鼠中取12 只作为空白组,其余大鼠采用高糖高脂饲料联合链脲佐菌素(STZ)法建立糖尿病肾损伤模型.将造模成功大鼠随机分为模型组、厄贝沙坦组及复方降糖玉液低、中、高剂量组,每组12 只.复方降糖玉液低、中、高剂量组分别给予2.5 g/kg、5 g/kg、10 g/kg(以生药含量计)复方降糖玉液灌胃,厄贝沙坦组给予厄贝沙坦 15 mg/kg灌胃,均 1 次/d,连续灌胃 8 周.收集24h尿液测定24h尿蛋白定量,尾静脉取血测定空腹血糖水平,腹主动脉取血测定糖化血红蛋白、尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)水平,取肾组织计算肾指数,ELISA法测定肾组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)含量,HE染色法观察肾组织病理学形态,TUNEL染色法测定肾组织细胞凋亡率,Western blot法测定肾组织中p-JAK2、JAK2、p-STAT3、STAT3 及SOCS-1 蛋白表达情况.结果 与空白组比较,模型组大鼠 24h尿蛋白定量、空腹血糖、糖化血红蛋白、BUN、SCr、肾指数、肾组织细胞凋亡率及肾组织中TNF-α、IL-1β、MCP-1 含量和p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3 比值均明显升高(P均<0.05),肾组织中SOCS-1 蛋白相对表达量明显降低(P<0.05),肾组织炎症浸润、肾小管扩张;与模型组比较,复方降糖玉液各组及厄贝沙坦组大鼠24h尿蛋白定量、空腹血糖、糖化血红蛋白、BUN、SCr、肾指数、肾组织细胞凋亡率及肾组织中TNF-α、IL-1β、MCP-1 含量和p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值均明显降低(P均<0.05),肾组织中 SOCS-1 蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05),肾组织炎症浸润明显减轻,且各项指标随着复方降糖玉液剂量的增加变化更明显.结论 复方降糖玉液能够有效控制糖尿病肾损伤大鼠血糖水平,改善肾功能,抑制肾组织病理进展及肾组织细胞凋亡,其机制可能与调节JAK2/STAT3/SOCS-1 通路有关.