目的:探讨长链非编码核旁斑装配转录物1(Lnc NEAT1)靶向微小RNA(miR)-506-3p对结肠癌细胞增殖和迁移的影响及其机制。方法:收集河南省人民医院手术切除的结肠癌组织标本和癌旁正常组织标本各82例，采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测结肠癌组织和癌旁组织中Lnc NEAT1的mRNA表达水平；构建miRNA-Control、miR-506-3p和短发卡RNA(shRNA)-Control、shRNA-Lnc NEAT1慢病毒结肠癌细胞株，采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析Lnc NEAT1和miR-506-3p的靶向关系；采用细胞计数试剂盒(CCK-8)、Transwell分别检测shRNA-Control和shRNA-Lnc NEAT1细胞的增殖、迁移能力；蛋白质印迹法(Western blot)检测shRNA-Control和shRNA-Lnc NEAT1细胞中LAMC1的蛋白表达水平。两组均数比较采用 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:Lnc NEAT1在结肠癌组织(1.93±0.18)中的mRNA相对表达水平显著高于癌旁组织(0.52±0.06， t＝33.337， P<0.05)。过表达Lnc NEAT1-WT后，miR-506-3p细胞的相对荧光素酶活性(0.39±0.04)较miRNA-Control组显著下降(1.50±0.12, t＝26.405， P<0.05)。shRNA-Lnc NEAT1细胞48 h(0.69±0.03比1.15±0.03， t＝20.129， P<0.05)和72 h(0.82±0.07比1.48±0.06， t＝12.651， P<0.05)的增殖活力明显低于shRNA-Control。shRNA-Lnc NEAT1细胞的迁移细胞数明显低于shRNA-Control(47.67±5.81比155.33±12.51， t＝13.649， P<0.05)。shRNA-Lnc NEAT1细胞中LAMC1的蛋白表达水平较shRNA-Control显著下降(0.48±0.04比1.39±0.11， t＝30.883， P<0.05)。 结论:Lnc NEAT1可能通过负向抑制miR-506-3p的表达，增强LAMC1的表达，从而促进结肠癌细胞的增殖和迁移。

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)NEAT1靶向微小RNA(miR)-149-5p对于脑胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其分子机制。方法:采用Lipofectamine 2000进行细胞转染构建si-NEAT1组、过表达miR-149-5p组和miR-149-5p抑制组，细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖抑制率，双荧光素酶报告基因分析Lnc NEAT1靶向调控miR-149-5p，Transwell小室法检测迁移和侵袭细胞数，蛋白质印迹法(Western blot)检测蛋白表达，组间比较采用 t检验。 结果:人胶质瘤细胞U251中NEAT1水平(1.03±0.05)明显增加( t＝13.613， P<0.01)，而miR-149-5p(0.41±0.07)则是明显降低( t＝12.111， P<0.01)。抑制NEAT1表达，si-NEAT1组细胞增殖抑制率明显增加[(29.48±2.67)%， t＝13.809， P<0.01]，而细胞迁移数[(35.33±7.57)个]和侵袭数[(27.33±6.81)个]则明显降低( t＝4.395、4.962， P<0.05)，磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和磷酸化雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)水平明显降低( t＝6.959、8.661， P<0.05)。过表达miR-149-5p，细胞增殖抑制率[(29.32±6.41)%]同样明显增加( t＝6.922， P<0.05)，细胞迁移数(35.67±6.51)和侵袭数(28.00±8.89)同样明显降低( t＝4.392、4.471， P<0.05)，p-Akt和p-mTOR水平明显降低( t＝4.337、9.981， P<0.05)。NEAT1-WT活性受到miR-149-5p的抑制( t＝15.251， P<0.01)，转染pc-DNA-NEAT1能显著降低miR-149-5p( t＝8.178， P<0.01)，而转染si-NEAT1则明显上调miR-149-5p( t＝5.988， P<0.05)。与si-NEAT1+抗NC组比较，si-NEAT1+抗miR-149-5p组细胞增殖抑制率表达明显降低( t＝7.955、13.261， P<0.05)，而迁移细胞数、侵袭细胞数、p-Akt和p-mTOR水平明显增加( t＝4.841、3.784、5.589、4.572， P<0.05)。 结论:Lnc NEAT1靶向miR-149-5p调控Akt/mTOR信号通路可促进脑胶质瘤细胞增殖和转移，抑制miR-149-5p表达可逆转抑制Lnc NEAT1表达后对于脑胶质瘤细胞增殖和转移的影响。

目的 分析视网膜母细胞瘤(Rb)患儿血清长链非编码RNA核内富集转录物1(LncRNA NEAT1)、三叶因子1(TFF1)表达及预后评估价值.方法 选取2018年1月—2021年1月首都医科大学附属北京安贞医院南充医院眼科手术治疗的Rb患儿85例作为Rb组,以同期体检健康者60例为健康对照组.采用实时荧光定量PCR检测血清LncRNA NEAT1水平,采用酶联免疫吸附试验检测血清TFF1;分析血清LncRNA NEAT1、TFF1与临床病理特征的关系;Cox回归分析Rb预后影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清LncRNA NEAT1、TFF1对Rb患儿预后的评估价值.结果 Rb组血清LncRNA NEAT1水平高于健康对照组,血清TFF1低于健康对照组(t/P=38.305/＜0.001、34.858/＜0.001).与肿瘤直径＜20 mm、病理分化型Rb患儿比较,肿瘤直径≥20 mm、未分化型Rb患儿血清 LncRNA NEAT1 较高,TFF1 较低(LncRNA NEAT1:t/P=17.925/＜0.001,16.848/＜0.001;TFF1:t/P=12.505/＜0.001,8.120/＜0.001).血清LncRNA NEAT1高表达组3年无进展生存率低于低表达组(57.50％vs.88.89％),TFF1 低表达组 3 年无进展生存率低于高表达组(57.14％vs.90.70％)(Log rankx2/P=13.551/＜0.001、15.310/＜0.001).病理未分化型、血清LncRNA NEAT1升高是影响Rb预后的危险因素,血清TFF1升高是其保护因素[HR(95％CI)=1.523(1.147～2.024),1.473(1.108～1.957),0.612(0.413～0.908)];血清 LncRNA NEAT1、TFF1及二者联合预测Rb预后的曲线下面积分别为0.836、0.861、0.921,二者联合大于血清LncRNA NEAT1、TFF1单项检测(Z=4.823、4.312,P均＜0.001).结论 Rb患儿血清LncRNA NEAT1升高,血清TFF1水平降低,两者与肿瘤最大径及病理分型有关,均是影响Rb患儿预后的因素,两者联合有助于评估患者预后.

目的 探讨脑胶质瘤患者血清长链非编码核糖核酸(long noncoding RNA,lncRNA)核富集转录体(nuclear enriched abundant transcript 1,NEAT1)表达与放疗敏感性的关系.方法 选取96 例脑胶质瘤患者作为研究对象,患者均进行标准根治术放疗治疗.放疗完成后,参照世界贸易组织(WTO)的实体瘤疗效评定标准(RECIST)将其分为放疗敏感组和放疗耐受组.收集患者年龄、性别、病理分级、肿瘤直径、肿瘤位置、肿瘤数目等临床资料;放疗前采用RT-PCR检测患者血清lnc RNA NEAT1 表达水平;采用Logistic回归分析脑胶质瘤患者发生放疗耐受的影响因素.结果 96 例患者中放疗敏感78 例.放疗敏感组病理分级Ⅰ～Ⅱ级患者(42.31%)多于放疗耐受组(16.67%)(χ2 =4.103,P =0.043),2组年龄、性别、体重指数、肿瘤直径、肿瘤位置、肿瘤数目比较,差异无统计学意义(P>0.05);放疗敏感组血清lnc RNA NEAT1 为(2.04±0.69),低于放疗耐受组的(3.21±1.05),差异有统计学意义(t =5.828,P<0.05).血清 lnc RNA NEAT1(OR =1.086,95%CI:1.015～1.162,P<0.05)是脑胶质瘤患者放疗耐受的影响因素.结论 脑胶质瘤患者血清lnc RNA NEAT1 表达与放疗敏感性密切相关,血清lnc RNA NEAT1 高表达是脑胶质瘤患者发生放疗耐受的危险因素.

目的 探讨长链非编码(Lnc)RNA NEAT1通过靶向调控miR-331对鼻咽癌细胞辐射敏感性的影响.方法 选取2018年1月至2019年1月手术切除鼻咽癌组织及对应的癌旁组织的患者48例样本,qRT-PCR检测Lnc RNA NEAT1在鼻咽癌及相应的癌旁组织、不同的鼻咽癌细胞系中的表达情况;构建Lnc RNA NEAT1沉默细胞系SUNE-1-siNEAT1及阴性对照SUNE-1-siNC,并以SUNE-1作为空白对照;电离辐射后,采用MTT实验、Transwell、免疫荧光标记检测Lnc RNA NEAT1对SUNE-1细胞辐射敏感性、侵袭能力及DNA损伤修复的影响;使用生物信息学网站starBase预测NEAT1可互补结合的微小RNA(microRNA,miRNA),再经双荧光基因报告验证Lnc RNA NEAT1与miR-331的靶向关系.结果 qRT-PCR结果显示,鼻咽癌组织中Lnc RNA NEAT1的表达水平高于癌旁正常组织,且差异有统计学意义(P<0.05),Lnc RNA NEAT1在SUNE-1细胞中表达量最高,与其他细胞株相比差异均具有统计学意义(P<0.05);成功构建Lnc RNA NEAT1沉默细胞系后,与SUNE-1组和SUNE-1-siNC组相比,SUNE-1-siNEAT1组细胞辐射后OD492nm值明显下降,细胞侵袭数量明显减少,γH2AX荧光强度明显增加,差异均具有统计学意义(P<0.05),SUNE-1组与SUNE-1-siNC组相比,差异无统计学意义(P>0.05);starBase网站预测结果显示,Lnc RNA NEAT1与miR-331存在互补结合位点,双荧光基因报告结果显示Lnc RNA NEAT1与miR-331可靶向结合.qRT-PCR证实LncRNA NEAT1负向调控miR-331的表达.结论 lnc RNA NEAT1在鼻咽癌中呈高表达,沉默Lnc RNA NEAT1表达可能通过上调miR-331水平抑制鼻咽癌细胞增殖、侵袭能力,增加鼻咽癌细胞辐射敏感性.

为评估长链非编码RNA 核富集转录体1(long non-coding RNA nuclear enriched abundant transcript 1,lnc-NEAT1)/miR-124轴对儿童哮喘急性发作风险的预测作用,并探讨其与肺部通气功能、疾病严重程度及炎症的关联,连续纳入急性发作期哮喘患儿95例、缓解期哮喘患儿95例及健康对照儿童90例.哮喘患儿和健康儿童均进行肺部通气功能检测,并采集其外周血以检测血浆中lnc-NEAT1和miR-124的表达水平及炎性因子(TNF-a、IL-1β、IL-6和IL-17)水平,评估急性发作期哮喘患儿的疾病严重程度.结果显示,lnc-NEAT1/miR-124轴在急性发作期哮喘患儿中的表达量较缓解期哮喘患儿和健康儿童高(P＜0.001).受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线表明,lnc-NEAT1/miR-124轴可很好地区分急性发作期哮喘患儿与健康儿童[AUC 0.894,95％可信区间(confidence interval,CI)0.850～0.938]、缓解期哮喘患儿(AUC 0.830,95％CI 0.774～0.886),且能区分缓解期哮喘患儿与健康儿童(AUC 0.642,95％CI 0.562～0.722).在急性发作期哮喘患儿中,lnc-NEAT1/miR-124轴表达量与第1秒用力呼气容积(forced expiratory volume in 1 second,FEV1)/用力肺活量(forced vital capacity,FVC)和FEV1％预计值均呈负相关(P＜0.001),与TNF-a、IL-1β、IL-6和IL-17呈正相关(P＜0.05),与急性发作期哮喘严重程度呈正相关(P＜0.001).在缓解期哮喘患儿和健康儿童中,lnc-NEAT1/miR-124轴表达量与肺通气功能无关联,而与TNF-a、IL-1β、IL-6和1L-17呈正相关(P＜0.05).该研究表明,循环lnc-NEAT1/miR-124轴在哮喘患儿中呈高表达,可预测儿童哮喘急性发作的风险,且其高表达与急性发作期哮喘患儿较差的肺通气功能、疾病严重程度和炎症水平相关.

目的 探讨化瘀祛痰方通过影响长链非编码RNA-NEAT1(Lnc-NEAT1)/miRNA-27b(miR-27b)调节高脂血症大鼠胆固醇代谢防治血脂异常机制研究.方法 使用32只SPF级SD大鼠,将其随机分为4组,正常组、模型组、化瘀祛痰方组以及辛伐他汀组,其中每组8只.模型组、化瘀祛痰方组、辛伐他汀组大鼠采用喂饲高脂饲料的方法建立高脂血症模型.造模8周后,灌胃给药.化瘀祛痰方组给予化瘀祛痰方进行灌胃,辛伐他汀组给予辛伐他汀进行灌胃.给予正常组和模型组相应体积的生理盐水进行灌胃.4周后通过全自动生物化学分析仪检测血清甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)的含量;采用HE染色观察肝脏组织病理变化,RT-qPCR法检测Lnc-NEAT1、miR-27b基因表达.RT-qPCR法与Western Blot法分别检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、肝X受体(LXR)、腺苷三磷酸结合盒转运体G5(ABCG5)、腺苷三磷酸结合盒转运体G8 (ABCG8)基因及蛋白表达.结果 相较于正常组,模型组大鼠TC、TG和LDL-C相关水平显著升高,HDL-C水平显著降低,肝细胞体积变大,脂肪空泡明显.大鼠肝脏Lnc-NEAT1基因表达显著降低,miR-27b基因表达显著升高(P＜0.01).PPARγ、 LXR、ABCG5、ABCG8基因及蛋白表达均显著降低(P＜0.05或P＜0.01);与模型组相比,经化瘀祛痰方及辛伐他汀干预的高脂血症大鼠血清血脂异常得以改善,TC、TG和LDL-C水平显著降低,HDL-C水平显著升高,肝细胞脂肪空泡明显减少,化瘀祛痰方组大鼠肝脏miR-27b表达显著降低(P＜0.01),Lnc-NEAT1表达显著升高(P＜0.01).化瘀祛痰方组和辛伐他汀组大鼠肝脏PPARγ,LXR,ABCG5,ABCG8基因及蛋白水平呈上升趋势,其中,化瘀祛痰方组大鼠肝脏LXR基因及蛋白表达显著上调(P＜0.05或P＜0.01).结论 化瘀祛痰方可能通过影响Lnc-NEAT1/miR-27b/PPARγ纠正高脂血症大鼠胆固醇代谢异常,进而起到防治血脂异常的作用.

目的:探讨长链非编码RNA-核富集转录本 1(long non-coding RNA-nuclear enriched abundant transcript 1,lnc-NEAT1)对黑色素瘤(melanoma,MM)细胞增殖、迁移和侵袭的调控机制.方法:体外培养MM细胞系(A375、A875、M14、B16)和人表皮黑色素细胞(HEMa-LP),采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测细胞中 lnc-NEAT1、microRNA-29c-3p(miR-29c-3p)、硫酸软骨素蛋白多糖4(chondroitin sulfate proteoglycan 4,CSPG4)mRNA表达.取对数生长期B16细胞,分为对照组(control组)、si-NC 组、si-NEAT1 组、si-NEAT1+inhibitor-NC 组、si-NEAT1+miR-29c-3p inhibitor组,用 Lipofectamine 3000将相应质粒转染到细胞中.RT-qPCR检测转染效率,MTT法检测细胞增殖活力,Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力,蛋白质印迹法检测细胞CSPG4及增殖、迁移与侵袭相关蛋白表达.双荧光素酶报告基因检测miR-29c-3p与lnc-NEAT1、CSPG4的靶向关系.裸鼠移植瘤实验探究lnc-NEAT1敲低对MM细胞体内生长的影响.结果:MM细胞系中lnc-NEAT1和CSPG4 mRNA水平显著高于HEMa-LP细胞,miR-29c-3p水平显著低于HEMa-LP细胞(P均＜0.05).敲低lnc-NEAT1可显著升高miR-29c-3p表达,降低CSPG4 mRNA和蛋白水平,抑制细胞增殖、迁移和侵袭,并降低Ki-67、N-cadherin与Vimentin蛋白水平,升高E-cadherin蛋白水平(P均＜0.05);下调miR-29c-3p表达可显著升高CSPG4 mRNA和蛋白水平,减弱lnc-NEAT1敲低对MM细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用(P＜0.05).双荧光素酶报告基因检测结果显示,转染miR-29c-3p mimic后,细胞中NEAT1-WT和CSPG4-WT的荧光素酶活性显著降低(P＜0.05).裸鼠移植瘤实验结果显示,敲低lnc-NEAT1可显著抑制体内移植瘤生长,而抑制miR-29c-3p可显著减弱lnc-NEAT1敲低对移植瘤生长的抑制作用(P均＜0.05).结论:lnc-NEAT1可能通过调节miR-29c-3p/CSPG4轴促进MM细胞增殖、迁移和侵袭.

目的 探讨长链非编码RNA富含核的丰富转录物 1(Lnc-NEAT1)对脊髓损伤(SCI)大鼠骨质流失的调控机制.方法 64 只Wistar大鼠随机分为SCI组[脊髓横断(T10)全切术建立SCI,n =56]和假手术组(sham组)(仅切开皮肤即缝合,n =8).随机选择48 只SCI组的大鼠于术后 10d随机分为6 组进行药物注射,包括SCI+Lnc-NEAT1 过表达载体组(SCI+pcDNA-NEAT1 组)、SCI+pcDNA阴性对照组(SCI+pcDNA-NC组)、SCI+pcDNA-NEAT1+miR-1224 拟似物组(SCI+pcDNA-NEAT1+miR-1224-mimic组)、SCI+pcDNA-NEAT1+mimic 阴性对照组(SCI+pcDNA-NEAT1+mimic-NC 组)、SCI+pcDNA-NEAT1+miR-1224-mimic+NF-κB 抑制剂 QNZ 组(SCI+pcDNA-NEAT1+miR-1224-mimic+QNZ组)、SCI+pcDNA-NEAT1+miR-1224-mimic+DMSO组.治疗 10d后通过micro-CT检测骨体积分数(BV/TV)、骨小梁数目(Tb.N)、骨小梁间距(Tb.Sp)、骨小梁厚度(Tb.Th).qPCR法检测 Lnc-NEAT1、miR-1224、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、干扰素(IFN)-γ、可溶性白细胞介素2 受体(sIL-2R)的表达.Western blot测NF-κB、磷酸化的NF-κB p65(p-NF-κB p65)的表达.荧光素酶基因报告实验检测Lnc-NEAT1 和miR-1224 的直接调控关系.结果 与sham组比,SCI组的miR-1224 表达水平降低(P＜0.05),Lnc-NEAT1、NF-κB p65、p-NF-κB p65 的表达量上调(均P＜0.05).与SCI+pcDNA-NC组相比,SCI+pcDNA-NEAT1 组的miR-1224 表达水平和BV/TV、Tb.N、Tb.Th的值都降低(均P＜0.05),而Tb.Sp的值和Lnc-NEAT1、TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-γ、sIL-2R、NF-κB p65、p-NF-κB p65 的表达量上调(均 P＜0.05).SCI+pcDNA-NEAT1+miR-1224-mimic 组抑制了 SCI+pcDNA-NEAT1 组的上述效果(均P＜0.05),但不影响Lnc-NEAT1 的水平.SCI+pcDNA-NEAT1+miR-1224-mimic+QNZ组进一步增加了SCI+pcDNA-NEAT1+miR-1224-mimic 组的治疗效果,使BV/TV、Tb.N、Tb.Th的值都被上调(均P＜0.05),而Tb.Sp的值和TNF-α、IL-6、IL-1β、IFN-γ、sIL-2R、NF-κB p65、p-NF-κB p65 的表达量都被抑制(均P＜0.05).另外证实,Lnc-NEAT1 通过"分子海绵"机制直接抑制miR-1224 的表达.结论 Lnc-NEAT1 通过抑制miR-1224 激活NF-κB信号抑制SCI大鼠的骨丢失并减轻免疫炎症反应.