目的:观察低氧微环境对胃癌细胞增殖、转移功能的影响，并探讨其相关的分子学机制。方法:细胞增殖检测试剂盒(CCK-8)、Transwell法检测SGC-7901细胞经低氧处理后的增殖、迁移及侵袭能力，应用高通量测序(Illumina Hiseq)对低氧处理后的微小RNA(miRNA，miR)差异基因进行检测；实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)法、干扰低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达法验证低氧环境下HIF-1α诱导miR-210的能力；后在正常胃黏膜组织、胃癌及癌周组织中检测miR-210的表达，分析其表达量与患者临床病理学特征之间相关性；接下来进一步在体外上调/抑制miR-210后，应用CCK-8、Transwell检测miR-210对胃癌细胞株AGS、SGC-7901增殖、迁移及侵袭能力的影响；后应用生物信息分析、报告基因实验、蛋白质免疫印迹(Western blot)及靶基因干扰实验探讨其发挥功能的具体分子学机制。两组间比较采用 t检验。 结果:与常氧组比较，低氧可明显促进SGC-7901细胞的增殖(0.43±0.13比0.56±0.17， t＝5.43， P<0.05)、迁移(250±28比390±30， t＝10.28， P<0.05)及侵袭能力(220±40比310±45， t＝9.74， P<0.05)；miR-210低氧处理后显著上调的差异miRNA之一；低氧在胃癌细胞中可通过HIF-1α诱导miR-210的表达；胃癌组织中异常表达的miR-210与肿瘤的大小及临床分期相关( P<0.05)；与对照组比较，过表达miR-210可明显促进AGS与SGC-7901细胞的增殖(0.58±0.16比0.73±0.21， t＝6.58， P<0.05)、(0.53±0.11比0.63±0.25， t＝7.18， P<0.05)，迁移(200±20比295±35， t＝8.36， P<0.05)、(185±20比260±10， t＝7.54， P<0.05)，及侵袭(150±25比215±30， t＝5.87， P<0.05)、(145±25比190±30， t＝4.37， P<0.05)能力，而其拮抗剂却显著抑制胃癌细胞的上述恶性能力；最后Western blot等研究表明磷脂酶和张力蛋白同源物(PTEN)是miR-210在胃癌细胞中发挥促癌功能的靶基因。 结论:低氧环境下HIF-1α介导miR-210可通过靶向调控PTEN的表达促进胃癌细胞的增殖及转移能力。

目的 基于荧光多酶恒温快速扩增(MIRA)技术,建立一种快速准确检测食品中产气荚膜梭菌的方法.方法 利用产气荚膜梭菌共有α毒素编码基因plc保守序列设计引物探针,并建立和优化荧光MIRA方法;提取17种非目标菌基因组DNA进行方法特异性验证;梯度稀释目标菌基因组DNA和菌液用于方法灵敏度评价;选取4种食品进行基质干扰试验,评估方法的稳定性;检测实际样品并与国家标准方法进行比较,以验证该方法的实用性.结果 该方法特异性强,检测多种非目标致病菌均呈阴性反应;灵敏度高,以基因组DNA为模板和菌液为模板时最低检测限分别为1.05×101fg/μL和7.5×10℃FU/mL;该方法不受基质影响,抗干扰能力强;耗时短,约20 min即可完成检测.结论 本研究中的荧光MIRA方法快速准确、灵敏度高、特异性强,可用于食品中产气荚膜梭菌的快速检测.

目的 建立逆转录多酶恒温扩增试纸条法(RT-MIRA-LFD),用于快速检测新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸.方法 依据SARS-CoV-2开放阅读框(ORF1ab)基因和核壳蛋白(N)基因序列设计RT-MIRA反应引物;筛选RT-MIRA-LF反应的最佳引物和探针;评价RT-MIRA-LF检测 SARS-CoV-2的敏感度、特异度、阳性符合率和阴性预测值等诊断效能.结果 建立的RT-MIRA-LFD方法检测SARS-CoV-2核酸特异性良好,与其他类型的病毒均无交叉反应.该方法检测ORF1ab基因和N基因的最低检出限均为100拷贝/μL,该方法的敏感度为90.00%,特异度为100.00%,阳性预测值均为100.00%,阴性预测值为95.24%.结论 基于RT-MIRA-LFD技术建立的检测SARS-CoV-2核酸新方法具有良好的临床诊断效能.

为了建立一种灵敏度高、特异性强并且适合现场诊断的大口黑鲈弹状病毒(Micropterus salmoides rha-bdovirus,MSRV)检测方法,研究基于CRISPR-Cas13a系统并结合多酶恒温核酸快速扩增(MIRA)技术建立了一种MSRV的检测方法.实验对MSRV序列进行多重序列比对分析后,针对MSRV衣壳蛋白(CP)基因的特异性区域设计两个靶点,并通过体外转录成特异性的crRNA,同时设计合成MIRA引物序列实现目标序列的等温扩增,最后结合Cas13a蛋白、crRNA、恒温扩增体系构建检测体系,并从高效crRNA的选择、反应温度、ssRNA报告探针浓度和Cas13a与crRNA的浓度比四个方面优化了反应体系,并采用最优检测体系对大口黑鲈样本进行检测验证.结果显示,在20μL检测体系中加入200 nmo1/L Cas13a、100 nmol/L crRNA1、100 nmol/L crRNA2及500 nmol/L ssRNA报告探针,在37℃的情况下能够获得最佳的检测效果.并且该检测体系可以检测到102 fM的MSRV病毒,具有良好的特异性和灵敏性,此外检测结果可直接通过紫外灯照射直接观察.研究基于CRISPR/Cas13a系统结合等温扩增MIRA技术建立的MSRV检测方法,可在室温下且不需要昂贵的仪器进行MSRV病毒检测,检测结果可以肉眼直接观察,能在多种场合下使用,研究结果为检测MSRV提供了有效方法.

目的 通过长期监测和数据对比,探索奇异变形杆菌某些缓慢而持续的变化趋势,为临床感染性疾病的诊疗及院感防控提供方向及依据.方法 使用WHONET 5.6软件及SPSSAU数据科学分析平台(Cochran-armit-age检验),回顾性分析江苏省中医院2015年1月1日-2022年12月31日期间,临床标本中分离的奇异变形杆菌的检出率、耐药率、标本分布及科室分布的变化趋势.结果 去除同一住院患者重复分离的相同菌株后,共1 569株奇异变形杆菌纳入分析;2015-2022年奇异变形杆菌的总检出率为3.32％,在革兰阴性菌、肠杆菌科细菌、变形杆菌属细菌中的检出率分别为4.90％、8.80％和85.46％,连续8年检出率均呈上升趋势(P＜0.05);奇异变形杆菌主要分布于痰标本、尿标本及分泌物标本中,且在痰标本中的占比呈上升趋势(P＜0.05),在尿标本中的占比呈下降趋势(P＜0.05);奇异变形杆菌检出前三的科室为ICU、老年科和泌尿外科,在ICU及老年科的占比呈上升趋势(P＜0.05);奇异变形杆菌对环丙沙星、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶、头孢曲松、左氧氟沙星、氨苄西林/舒巴坦的耐药率呈上升趋势(P＜0.001),对哌拉西林/他唑巴坦的耐药率呈下降趋势(P＜0.05).结论 奇异变形杆菌在该医院内存在流行趋势,可能成为医院感染,特别是呼吸道感染的更常见病原菌.在ICU及老年科等综合性科室流行的风险更高,应加强对相关科室的目标性监测,督促临床合理使用抗菌药物.

目的 旨在建立基于实时荧光多酶恒温扩增(exo-MIRA)技术的小鼠细小病毒(MVM)核酸检测新方法.方法 收集2021年1月至2022年1月南京大学医学院附属金陵医院实验动物室共75份小鼠肠道内容物标本.针对MVM VP2基因的保守区域设计4对引物,琼脂糖凝胶电泳分析扩增产物以筛选最优引物对,并设计特异性荧光探针,构建exo-MIRA 检测法.通过检测梯度稀释模拟样本,进行检出限评价.检测其他小鼠病毒,包括仙台病毒(SV)、小鼠肝炎病毒(MHV)、小鼠鼠痘病毒(Ect)、小鼠肺炎病毒(PVM)、呼肠孤病毒(Reo),分析exo-MIRA法的交叉反应性.采用qPCR法和exo-MIRA法同时检测收集的75份标本,统计分析两种方法的一致性.以qPCR法为参比方法,评估该法的敏感度和特异度,进行诊断效能评价.结果 采用exo-MIRA技术建立MVM核酸检测方法,该方法检测MVM的检出限为10 copies/μL,且与其他五种小鼠病毒无交叉反应,可特异性检出MVM.75份标本检出结果显示,exo-MIRA法和qPCR法高度一致,Kappa值为0.921(P＜0.05),exo-MIRA法的敏感度为100.0％,特异度为96.7％.结论 建立了一种基于实时荧光MIRA恒温扩增技术的MVM核酸检测方法,具有简单快速、实验要求低、敏感特异等优点.该方法可应用于现场复杂环境的即时检测,在实验动物质量检测应用上有一定前景.

目的 采用GC-MS法分析得荣县光核桃Prunus mira Koehne仁油中脂溶性成分.方法 热榨法榨取光核桃仁油,GC-MS法分离、鉴定,并测定各个化合物相对含有量,对结果进行聚类分析和主成分分析.结果 夺松村的光核桃仁油中有20个化合物,β-谷甾醇、反式角鲨烯和油酸羟丙基酯含有量较高,1个特有化合物(4-甲基壬烷);日堆村的有22个化合物,β-谷甾醇、油酸和γ-生育酚含有量较高,1个特有化合物(1,2,4-三甲基环己烷);绒贡村的有24个化合物,油酸、β-谷甾醇和反式角鲨烯含有量较高;张仁村的有22个化合物,以β-谷甾醇、油酸和γ-生育酚含有量较高,2个特有化合物(反式-2,4-癸二烯醛和二十八醛).10批样品分为6类.夺松村第一主成分的累积贡献率81.86％.结论 得荣县光核桃仁油有35个化合物,以油酸、β-谷甾醇、反式角鲨烯、γ-生育酚和维生素E为主,特有化合物4个.

目的 分析人群日本血吸虫病治疗后抗体滴度变化,为制订监测巩固方案提供科学依据.方法 采用定群前瞻性研究法,以江陵县2014年检出的粪检阳性病人及血检阳性滴度1:80以上(含1:80)者为对象,先用吡喹酮2日疗法治疗,于治疗后半年、1年、2年分别采集血样、粪样,进行IHA抗体检测和集卵孵化法检测.结果2014年粪检阳性病例251人,年龄以41岁以上为主,占93.23%(234/251);IHA法检测抗体高滴度病例581人,年龄以41岁以上为主,占89.16% (518/581).粪检阳性人群治疗后半年、1年、2年粪检转阴率分别为99.60%(250/251)、100%(239/239)、100%(234/234), IHA法检测抗体转阴率分别是21.91%(55/251)、64.11%(156/239)和76.89%(193/234);IHA法检测抗体高滴度人群治疗后半年、1年、2年转阴率分别为38.04%(221/581)、64.11%(359/560)、77.86%(429/551);抗体转阴率进行χ2检验,差异均有统计学意义(χ2=77.538、183.412、25.469,P值均<0.001).分别对两组人群治疗前后不同时间段抗体滴度的几何均值进行t检验,治疗前两组人群的抗体滴度几何均值差异有统计学意义(t=23.576,P<0.01);治疗后半年、1年、2年两组人群抗体滴度的几何均值差异均无统计学意义(t=-0.046、1.165、-0.132,P均>0.01).结论 日本血吸虫病治疗后人群血清中抗体水平消退缓慢,尚需开发特异的诊断技术以满足监测需求.

[目的]获取哈氏蜈蚣线粒体基因组全序列.[方法]应用差速离心以及滚环扩增的方法得到纯度较高的线粒体DNA,采用Illumina HiSeq X Ten技术对扩增得到的哈氏蜈蚣线粒体DNA进行测序,采用从头组装和mapping近缘种的方法拼接组装线粒体基因组,应用MITOS在线注释及与近缘种进行本地注释等方法注释线粒体基因组.[结果]获得14538 bp哈氏蜈蚣线粒体基因组全序列.其共有20个tRNA及13个蛋白基因,2个rRNA(16S rRNA、12S rRNA).[结论]获取哈氏蜈蚣线粒体基因组全序列,并可用于药用蜈蚣的资源调查与保护研究.

目的 比较精制芒硝与柴芍承气汤在治疗重度急性胰腺炎(SAP)并腹腔间隔室综合征(ACS)的临床疗效差异.方法 SAP合并ACS患者60例,随机分为治疗组32例,对照组28例.治疗组在常规西医治疗基础上,予以精制芒硝鼻饲+灌肠;对照组在常规西医治疗基础上,予以柴芍承气汤鼻饲+灌肠.比较两组患者治疗前与治疗第1、3、7天的APACHEⅡ评分、腹内压、内毒素、降钙素原(PCT)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)变化;比较两组患者肠鸣音恢复时间、自主排便恢复时间、住院时间及住院费用.结果 两组患者治疗7 d后,肠道通透性指标(内毒素)及感染相关指标(PCT、TNF-α)均较治疗前显著下降,差异有统计学意义(P<0.05).两组在治疗第1、3、7天腹内压均显著低于治疗前(P<0.05),且同时间两组间比较差异无统计学意义(P > 0.05).治疗第3、7天APACHE Ⅱ评分均较治疗前显著改善(P <0.05),且同时间两组比较差异无统计学意义(P>0.05).在肠鸣音恢复时间、自主排便恢复时间、住院时间、住院费用方面,两组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 精制芒硝辅助治疗SAP合并ACS,能有效降低腹内压,促进肠道功能恢复,保护肠道黏膜屏障功能,减少肠道细菌及内毒素移位,减少感染并发症的发生,有利病情恢复,与柴芍承气汤具有相似的临床疗效.