目的:观察益气活血中药糖痛方对DPN大鼠坐骨神经自噬通路蛋白PI3K、Akt、mTOR表达的影响，探讨其作用机制。方法:雄性SD大鼠60只，随机选取15只作为正常组，其余大鼠经STZ+缺血再灌注方法建立DPN模型，按随机数字表法分为模型组、糖痛方低剂量组、糖痛方高剂量组，每组15只。糖痛方高、低剂量组分别灌胃36.67、18.33 g/kg糖痛方水煎液，1次/d。连续灌胃8周后，检测坐骨神经传导速度，采用qRT-PCR和Western Blot法检测坐骨神经PI3K、Akt、mTOR mRNA及蛋白水平，采用HE染色观察坐骨神经纤维结构。结果:与模型组比较，糖痛方低、高剂量组运动神经传导速度、感觉神经传导速度、肌肉复合动作电位、感觉神经动作电位提高（ P<0.05），坐骨神经PI3K［（6.05±0.18）、（3.36±0.29）比（11.57±1.93）］、Akt［（1.26±0.13）、（0.64±0.04）比（1.86±0.06）］、mTOR［（1.82±0.11）、（0.92±0.06）比（2.68±0.18）］mRNA水平降低（ P<0.05），PI3K［（0.40±0.00）、（0.19±0.02）比（0.61±0.03）］、Akt［（0.64±0.02）、（0.45±0.01）比（0.83±0.02）］、mTOR［（0.17±0.01）、（0.09±0.00）比（0.34±0.01）］蛋白表达降低（ P<0.05）；模型组神经纤维松散肿胀，髓鞘变薄，轴突闭锁，糖痛方低、高剂量组神经形态趋于正常，髓鞘及轴突均形态较好。 结论:糖痛方可改善DPN大鼠坐骨神经的传导速度及电位波幅，改善神经损伤，减轻脱髓鞘改变，改善轴突形态，保护神经纤维结构，其作用机制可能与激活PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制细胞过度自噬有关。

目的:通过体外培养人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)观察微小RNA(miRNA)-29a与第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因(PTEN)的调节对神经细胞增殖和轴突生长的作用。方法:通过上海中科院细胞库购买的SH-SY5Y细胞经过体外培养(4×10 4/ml)分别转染miRNA-29a的激动剂和抑制剂(40 nmol/L)，构建miRNA-29a不同表达水平的细胞。通过实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测细胞转染效果(转染24 h)和人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)基因表达水平(转染48 h)。转染72 h后通过蛋白免疫印迹(Western blot)检测不同细胞中PTEN、Akt和mTOR蛋白的表达和磷酸化水平，通过神经形态学和二苯基四氮唑溴盐比色法(MTT)检测细胞的增殖和轴突长度。通过单因素方差分析及LSD- t法检验比较各组数据。 结果:转染miRNA-29a激动剂组的miRNA-29a表达水平明显高于miRNA-29a抑制组(9.03±0.12比0.31±0.03， t＝241.70， P<0.05)，而激动组PTEN基因和蛋白的表达水平明显低于抑制组(0.31±0.02比3.26±0.23、0.30±0.06比3.36±0.15， t＝45.09、58.79， P<0.05)。miRNA-29a激动组中Akt、mTOR蛋白的磷酸化水平明显高于抑制组(3.26±0.13比0.42±0.03、2.57±0.13比0.31±0.04， t＝71.45、51.55， P<0.05)。在miRNA-29a激动组中，SH-SY5Y细胞增殖活性和轴突长度明显高于miRNA-29a抑制组[0.86±0.07比0.44±0.03、(157.56±11.13) μm比(43.48±4.92) μm， t＝13.89、31.11， P<0.05]。 结论:miRNA-29a可以通过干预PTEN表达，调节磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/Akt/mTOR信号通路中Akt和mTOR蛋白的磷酸化水平，促进SH-SY5Y细胞增殖和轴突生长。

目的:探讨孕期和哺乳期壬基酚(nonylphenol，NP)暴露对后代小鼠脑组织Th17/Treg细胞平衡的影响及其相关机制研究。方法:30只C57BL/6孕鼠随机分为3组：对照组(饮用蒸馏水)和NP处理组(饮用0.2 μg/ml或2.0 μg/ml NP水溶液)。使用ELISA试剂盒测量仔鼠血清中的TNF-α、IFN-γ和IL-17水平，流式细胞术分析仔鼠脾脏Treg、Th17细胞频率，定量RT-PCR分析仔鼠脑组织中RORγt、Foxp3 mRNA表达，Western blot分析仔鼠脑组织中RORγt、Foxp3和PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白质表达，免疫荧光分析仔鼠脑组织中离子钙结合衔接分子1(Iba1)表达情况。结果:与对照组相比，NP暴露增加了雄性后代小鼠的血清IL-17、TNF-α水平( P<0.05)，降低了IFN-γ水平( P<0.05)。流式细胞术分析显示，NP暴露(0.2 μg/ml或2.0 μg/ml)的雄性后代小鼠脾脏中Th17细胞的百分比较对照组显著增加，而Tregs细胞的百分比降低。与对照组相比，NP暴露(0.2 μg/ml或2.0 μg/ml)的雄性后代小鼠脑组织中Foxp3蛋白质水平显著降低，RORγt蛋白质水平显著升高( P<0.05)。在qRT-PCR分析中也观察到类似的mRNA表达结果。在孕期和哺乳期暴露于剂量增加的NP期间，雄性后代小鼠脑组织中mTOR(p-mTOR)及其上游相关调节因子[PI3K、p-Akt(Ser473)、p-Akt(Thr308)]的蛋白质表达水平均升高( P<0.05)。免疫荧光分析显示，与对照组相比，NP暴露(0.2 μg/ml或2.0 μg/ml)的雄性后代小鼠脑组织中Iba1阳性细胞的数量显著增加( P<0.05)。 结论:孕期和哺乳期小鼠暴露于NP可能通过神经免疫轴影响后代神经元的发育/功能，增加后代神经发育障碍的风险。

目的:探讨微小RNA(miRNA，miR)-454对食管癌细胞顺铂敏感性的影响及机制。方法:将转染anti-miR-454、anti-miR-NC的ECA109细胞(中国科学院上海细胞库)设为anti-miR-454组、anti-miR-NC组。噻唑蓝(MTT)法检测顺铂对ECA109细胞增殖抑制率，并计算半数抑制浓度(IC 50)；蛋白质印迹法(Western blot)实验检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、核糖体40S小亚基S6K蛋白激酶(p70S6K)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达水平。多样本计量资料比较采用单因素方差分析，两两样本比较采用SNK- q检验。 结果:anti-miR-454组IC 50值低于anti-miR-NC组[(0.41±0.05) μg/ml比(0.82±0.08) μg/ml， P<0.01]；MTT实验显示，细胞中miR-454下调后，不同顺铂浓度对ECA109细胞增殖抑制率显著升高；Western blot实验显示，细胞中miR-454下调后，PI3K、mTOR、p70S6K蛋白相对表达量，p-Akt/Akt显著降低。 结论:下调miR-454表达可增强食管癌ECA109细胞顺铂敏感性，推测与其靶向上调过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达、抑制Akt信号通路有关。

目的:研究桂枝芍药知母汤(GSZD)调控PI3K/AKT/mTOR信号轴干预类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)大鼠自噬治疗RA的作用机制.方法:将60只大鼠随机分为正常组、模型组、GSZD低、中、高剂量和雷帕霉素组,除正常组外,其余各组均给予牛Ⅱ型胶原蛋白皮下注射建立RA模型,并给予相应药物干预4周.定期监测大鼠足垫厚度并进行关节炎症指数(arthritis index,AI)评分.4周后,取膝关节滑膜组织,采用HE染色观察病理形态变化;透射电镜观察滑膜细胞超微结构变化;qRT-PCR和 Western blot 分别检测 Beclin1、LC3、p62、PI3K、AKT、mTOR mRNA及蛋白表达.结果:GSZD 可有效减轻RA大鼠的足垫厚度、AI评分;透射电镜结果显示RA大鼠滑膜细胞自噬减弱,GSZD治疗后细胞自噬溶酶体和自噬小体数量增加;qRT-PCR和Western blot结果显示,与正常组比较,模型组大鼠滑膜组织Beclin1 mRNA及蛋白、LC3 mRNA及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达显著降低(P＜0.01),p62、PI3K、AKT、mTOR mRNA及蛋白表达显著升高(P＜0.01);与模型组比较,GSZD高剂量组和雷帕霉素组大鼠滑膜组织Beclin1 mRNA及蛋白、LC3 mRNA及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达显著升高(P＜0.05,P＜0.01),p62、PI3K、AKT、mTOR mRNA及蛋白表达显著降低(P＜0.05,P＜0.01).结论:GSZD可改善RA大鼠足垫厚度和病理形态,其治疗机制可能与下调PI3K/AKT/mTOR通路,促进自噬有关.

目的 已知PI3K/AKT/mTOR信号通路与膝骨关节炎(KOA)的进展有关,本研究旨在探讨PI3K/AKT/mTOR信号轴介导的巨噬细胞极化诱导是否是KOA进展的原因.方法 收集KOA KL-Ⅱ与KL-Ⅲ级患者与正常人的滑膜液,检测滑膜液中 M1 巨噬细胞(CD80、CD86)与 M2 巨噬细胞(CD163、CD206)百分比(M1/M2 比值),评估巨噬细胞极化细胞因子白细胞介素(IL)-1、IL-6、IL-10、肿瘤坏死因子(TNF)-α、转化生长因子(TGF)-β在KOA滑膜液中的表达,并对 KOA 滑膜液中 PI3K/AKT/mTOR 信号轴关键分子PI3K、AKT3、mTORC1 和诱导性一氧化氮合酶(iONS)进行检测分析.结果 与正常人的滑膜液相比,KOA患者中M1 型巨噬细胞(CD80、CD86)百分比增加(P<0.01),M1/M2 比值升高(P<0.001);KOA组滑膜液中IL-1、IL-6、TNF-α表达也高于对照组(P<0.01),KOA组IL-10、TGF-β表达明显减少(P<0.01);KOA组滑膜液中PI3K/AKT/mTOR信号通路中关键蛋白PI3K、AKT3、mTORC1 及下游炎症因子iONS)高于对照组(P<0.01).结论 在KOA滑膜液中,M1 型巨噬细胞极化占据主要地位,M1 巨噬细胞极化介导的炎症反应可能是滑膜炎产生的原因,同时PI3K/AKT/mTOR信号通路可能介导M1 型巨噬细胞极化参与KOA炎症反应.

目的 基于GEO数据库联合分析高原病患者外周血差异表达miRNA及其上游转录因子和下游mRNA,从而基于分子层面探讨高原病潜在的发病机制.方法 (1)在GEO数据库获取与高原病相关的miRNA表达谱芯片(GSE90500数据集)和mRNA表达谱芯片(GSE29977数据集),再采用R语言3.6软件limma程序包筛选差异表达miRNA和差异表达mRNA.(2)利用FunRich软件预测差异表达miRNA的下游靶基因(mRNA)和上游转录因子,并对上游转录因子进行功能富集分析.使用R语言3.6软件、DAVID数据库对下游靶基因分别进行功能和通路富集分析.(3)对GSE29977数据集的差异表达mRNA与差异表达miRNA下游靶基因取交集,并根据miRNA及其靶基因的表达关系,筛选miRNA-mRNA调控轴.结果 (1)共筛选出14个差异表达miRNA及其385个下游靶基因、123个上游转录因子.差异表达miRNA主要富集的转录因子包括EGR1、RREB1、MYF5和MEF2A.(2)上游转录因子涉及的生物学过程主要包括信号转导、核酸代谢的调节、脂肪酸代谢、糖代谢、细胞因子和趋化因子介导的信号通路、细胞周期等.下游靶基因富集的生物学过程主要包括转录调控、心肌细胞增殖、血管生成和染色质重塑等,富集的信号通路主要包括PD-L1表达和PD-1免疫检查点通路、细胞衰老、MTOR信号通路、MAPK信号通路及PI3K/AKT信号通路等.(3)共筛选得到443个差异表达mRNA,与差异表达miRNA的下游靶基因取交集后获得与高原病相关的5个核心mRNA,并构建出hsa-miR-155-5p-MYO1D调控轴.结论 高原病中存在多个差异表达的miRNA,其上游转录因子EGR1、RREB1、MYF5、MEF2A可能是参与调控下游靶基因转录的核心因子;差异表达miRNA的上游转录因子和下游靶基因可能通过调控基因转录、细胞增殖与凋亡、炎症过程等生物学过程,共同参与高原病的发生、发展.hsa-miR-155-5p与下游靶基因MYO1D之间的调控关系可能在高原病的发生、发展中发挥重要的作用.

目的 观察化瘀通络灸对血管性痴呆(vascular dementia,VD)大鼠胼胝体磷脂酰肌醇 3 激酶(phosphatidyli-nositol 3 kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapa-mycin,mTOR)信号通路的影响,探讨化瘀通络灸促 VD大鼠髓鞘再生的作用机制.方法 经 Morris水迷宫筛选后,随机选取 12 只大鼠纳入假手术组,剩余大鼠复制 VD模型成功后,随机分为模型组、艾灸组、艾灸+LY294002组,每组 12 只.艾灸组予以化瘀通络灸干预,艾灸+LY294002 组在化瘀通络灸干预的基础上予以 PI3K抑制剂LY294002 腹腔注射,采用 Longa评分法评价各组大鼠神经功能损伤程度,Morris水迷宫实验检测各组大鼠学习记忆能力,Western blot法检测各组大鼠 PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白的表达水平,神经髓鞘固蓝染色法观察各组大鼠胼胝体髓鞘的形态,透射电子显微镜观察各组大鼠髓鞘超微结构.结果 与假手术组比较,模型组和艾灸+LY294002 组大鼠的 Longa评分显著升高(P＜0.05),逃避潜伏期显著延长(P＜0.05),PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白表达水平显著降低(P＜0.05),胼胝体内髓鞘纹理不清,排列混乱,边缘呈空泡或空网状改变,髓鞘线圈样结构离散,部分膨出和崩解,有髓神经轴突数量显著减少(P＜0.05);与模型组和艾灸+LY294002 组比较,艾灸组大鼠 Longa评分显著下降(P＜0.05),逃避潜伏期显著缩短(P＜0.05),PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白表达水平显著提高(P＜0.05),胼胝体内髓鞘结构有所恢复,排列整齐,边缘结构较为致密,有髓神经轴突数量显著增加(P＜0.05).结论 化瘀通络灸可能通过激活 PI3K/AKT/mTOR通路,修复 VD大鼠损伤髓鞘并促进其重塑,恢复脑白质功能.

早发性卵巢功能不全(POI)发病越来越年轻化,严重威胁女性的生殖健康.POI是一个多因素相互作用、逐渐累积的复杂的生物过程,各种因素造成的原始卵泡数目下降是导致POI的关键原因.针灸在治疗POI方面已经取得了非常好的疗效,通过研究发现针灸可以改善卵巢的内分泌功能、增加卵巢的储备功能和诱发卵巢排卵,改善卵泡质量、调节下丘脑-垂体-卵巢轴(HPO)的功能、调节干细胞功能、改善卵巢的血液供应、调节免疫、炎症和氧化应激损伤;其机制可能与调控胰岛素生长因子表达、调控抗凋亡蛋白和促凋亡蛋白比例及激活PI3K/Akt/mTOR信号通路有关.本研究对针灸治疗POI的作用、机制及其发挥作用的通路进行综述.

目的 探讨褪黑素(MLT)对雌性小鼠青春期启动的影响以及对下丘脑磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路表达水平的影响.方法 78只20日龄雌性KM小鼠,随机分为褪黑素(MLT)组和生理盐水(NS)组,每组39只.22日龄开始,给予MLT组皮下注射1 mg/kg褪黑素,给予NS组注射等体积的生理盐水.青春期启动前选取32日龄为取材点,两组分别处死13只小鼠,青春期启动后选取37、42日龄为取材点,两组分别处死13只小鼠.观察小鼠阴门开启时间;取卵巢、子宫称重计算器官指数;HE染色观察卵巢黄体数量;ELISA法检测血清黄体生成素(LH)水平;Real-time PCR和Western blotting检测下丘脑PI3K/Akt/mTOR通路mRNA和蛋白表达水平.结果 与生理盐水组相比,褪黑素组小鼠阴门开启时间显著推迟(P＜0.05);卵巢、子宫的大小和指数明显下降(P＜0.05);血清LH水平明显下降(P＜0.05);下丘脑PI3K/Akt/mTOR通路mRNA和蛋白的表达水平显著下降(P＜0.05).结论 褪黑素可以延缓小鼠青春期启动,机制可能与抑制下丘脑PI3K/Akt/mTOR信号通路相关.