目的:探讨1例RhD(-)女性先证者的 RH基因型及其分子生物学机制。 方法:选取2019年8月就诊于郑州大学第一附属医院的1例26岁女性先证者作为研究对象。采集先证者及其父母的外周血样，对其进行卡式法Rh表型检测。用PCR-基于序列法(PCR-sequence-based typing, PCR-SBT)和基因测序法检测先证者及其父母的 RHD合子型和 RH基因型。用生物信息学软件进行Rh蛋白同源建模，并通过分子动力学模拟变异所造成的蛋白结构改变。本研究通过郑州大学第一附属医院医学伦理委员会的审查(伦理号：2023-KY-0870-003)。 结果:血清学检测显示先证者及其父亲Rh分型e抗原减弱。PCR-SBT及基因测序显示3人的基因型分别为 dce/ dCE、 dce/ DcE、 dCE/ DcE，先证者 RHD和 RHCE的基因型分别为 RHD*01N.01/ RHD*01N.16、 RHCE*01.01/ RHCE*04。蛋白模拟和分子动力学分析显示 RHCE* ce(c.48G>C)所导致的ce_16C变异将造成膜内外环结构的改变，主要影响膜外第2、6环和膜内第3、4的摆动性。 结论:RHCE* ce等位基因的c.48G>C变异可能是导致先证者e抗原减弱的原因。

目的:探讨高分辨率熔解曲线（HRM）用于RhCE血型基因分型的可行性。方法:随机选取无输血史患者300例，进行RhCE血型血清学表型分型，从中选出表型为CCee，CcEe，ccEE的患者标本各10例，共30例；表型CCee的为1组，表型CcEe的为2组，表型ccEE的为3组，互为对照组，提取基因组DNA，设计引物3对，利用HRM基因分型方法对RhCE血型进行基因分型实验。结果:30例标本的HRM基因分型结果与血清学表型一致，引物对1的HRM可将各组标本中基因型为CC的检出；引物对2的HRM可将各组标本中CC，Cc，cc基因型全部检出；引物对3的HRM可将各组标本中基因型为Ee的检出；在检测过HRM的引物对3实验产物中加入1组单纯PCR扩增产物后再次行HRM检测，可将各组标本中EE，Ee，ee基因型全部检出。结论:高分辨率溶解曲线可用于RhCE血型基因分型。

目的:从基因学角度研究与探讨1例Rh null血型的形成机制，同时研究其家族成员的Rh血型基因。 方法:通过血型血清学检测泰州市人民医院内科就诊的先证者的Rh血型表型，采用荧光PCR法进行RhCE基因分型，采用桑格法进行RhD、RhCE及RhAG外显子测序，然后分析先证者的Rh null形成机制。作为对比，通过血型血清学检测先证者的姐姐和儿子的Rh血型表型，进行RhCE基因分型和RhD、RhCE、RhAG外显子测序。 结果:先证者的基因型结果为CcDEe，RhAG外显子测序结果为纯合型移码突变，突变位置在Exon 5，核苷酸改变为c.732delC，氨基酸改变为p.Phe245Serfs*16。先证者姐姐的血清学结果、基因分型和RhAG外显子测序结果及突变位置与先证者相同。其子的血清学结果为CCDee，基因型结果为CCDee，RhAG外显子测序结果为杂合型移码突变，与先证者一致。结论:分析发现RhAG基因新的变异位点；此位点使得患者RhAG蛋白表达不完整，进而影响其他Rh抗原在细胞膜上的表达，致血清学结果为Rh null。

目的 研究广州地区RhD阴性献血者D放散型(Del)分布、表型及基因型以了解本地区DEL血型分子生物学背景.方法 对 2021 年 11 月 1 日—2022 年 6 月 30 日期间广州地区献血者采用盐水法初筛为RhD阴性血液进行间接抗人球蛋白试验(IAT)血清学确认、采用RhCE分型卡确定RhCE表型,对 1 146 例确认RhD阴性所有C+(n=459)以及随机抽取部分C-标本(n=175)进行吸收放散(Del)筛查(共 634 例);提取Del阳性标本DNA进行高分辨熔解曲线分析法(HRM)实时荧光PCR检测RHD基因c.1227 位点基因情况;对HRM检测RHD* 1227 位点无突变标本采用限制性片段多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)扩增后产物作PstⅠ酶切,进行电泳分析RHD基因合子型;sanger法进行RHD基因进行外显子测序(exon 1-10),采用SeqMan软件分析基因突变情况;采用第3 代单分子测序技术对可疑Del阳性标本进行RHD全基因分析.结果 634 例确认RhD阴性标本吸收放散试验结果显示Del表型占 36.1%(229/634),占总RhD确认阴性的 20%(229/1 146);229 例DEL的RhCE分型分别为Ccee 181 例,CCee 40 例,CcEe 7 例,ccEe 1 例,HRM结合RHD盒子型分析结果显示 170 例RHD基因为RHD*1227A/01N.01、32 例为RHD*1227A/1227G,26 例为RHD*1227A/1227A、6 例为RHD*1227G/1227G(其RHD基因测序结果显示 1 例为弱D12 型、4 例为D-和 1 例RHD*01EL.02).结论 广州地区献血者DEL个体基因型以RHD*1227A/01N.01 为主且其RhCE表型均为C+的特征;HRM可作为常规筛查"亚洲型"DEL血型基因的分子生物学方法.

目的 研究郑州地区RhD变异型献血者血清学特征及基因突变机制.方法 选择 2023 年 1 月—2023年12 月送至本实验室的 1 619 名RhD阴性献血者为研究对象,应用试管法和微柱凝胶间接抗球蛋白试验方法进行RhD阴性确认试验及RhCE表型检测.采用RHD基因扩增和Sanger测序检测RhD变异型标本基因型.结果 RhD阴性确认试验共检出RhD变异型 69 例,比例为 4.26%(69/1619).RhCE表型分别为ccEe、Ccee、CcEe、CCee.包含 17 种基因型,15 种D变异型表型.RHD*weak partial 15 等位基因最多(33 例),频率为 47.83%(33/69),主要表型为ccEe;其次是RHD*DVI.3 等位基因 20 例,频率为 28.99%(20/69),主要表型为Ccee.RHD*weak partial 15/RHD*01EL.01 杂合子 3 例,频率为 4.35%(3/69),皆为CcEe表型.其他罕见基因型共 13 例,频率为 18.84%(13/69).抗筛阳性 3 例,比例为 4.35%(3/69).女性献血者 2 名,皆有孕产史,经抗体鉴定为抗-D;男性献血者 1 名,为抗-M.结论 郑州地区RhD变异型献血者中RHD*weak partial 15 基因型最常见,其次为RHD*DVI.3 基因型.对保障安全供血,指导临床精准输血具有重要作用.

目的 研究分析1例Rh血型弱D、弱cE患者的血清学与分子生物学特征,为该类患者的临床安全输血提供实验依据.方法 采用微柱凝胶卡法对患者红细胞进行ABO、RhDCcEe抗原的鉴定,同时采用试管法进行血型复核,抗人球蛋白卡法筛查不规则抗体;采用PCR-SSP法对RhDCcEe(RhD、RhC、Rhc、RhE、Rhe)基因型进行检测;三代全长测序技术对RHD/RHCE基因序列进行测序分析.结果 微柱凝胶卡法鉴定ABO、RhD、RhCcEe血型抗原的结果为:A抗原(-)、B抗原(-)、RhD(1+)、RhC(4+)、Rhc(1+)、RhE(1+)、Rhe(4+)、对照孔(-);试管法ABO、RhD、RhCcEe抗原鉴定该患者表型为:A抗原(-)、B抗原(-)、RhD(w+)、RhC(4+)、Rhc(w+)、RhE(w+)、Rhe(4+),对照管(-);抗人球蛋白卡法筛查患者不规则抗体阴性;PCR-SSP法血型基因分型RhDCcEe结果:RhD(+)、RhC(+)、Rhc(+)、RhE(+)、Rhe(+);RHD/RHCE基因结果:RHD单倍体1为外显子 1-10全缺失,而单倍体2为外显子RHD-CE基因重组融合,且确认其重组类型为RHD-CE(3-7)-D,起点在外显子2(g.20238-20312之间),终点在外显子 8(g49184-50480之间),同时RHCE基因第 6外显子存在新碱基点突变RHCE*cE(827C>A).结论 RHD-CE(3-7)-D基因重组融合与RHCE*cE(827C>A)新等位基因突变可能引起D、cE血型抗原弱表达,为临床安全输血提供了重要的实验数据支持.

Rh血型系统是输血医学中重要的常规检测血型系统,因RhD血型不合引起的溶血性输血反应及新生儿溶血病一直以来倍受临床重视.本研究报道了 2例罕见的RHD基因变异型RHD*DEL37个体的血清学和基因特征,这2例个体的血液样本经血清学方法(试管法和微柱凝胶法)鉴定为RhD阴性.采用聚合酶链反应-序列特异性引物(polymerase chain reaction-sequence specific prime,PCR-SSP)对样本进行RHD基因分型和合子型分析,基因分型结果为RHD基因阳性,并排除了常见的几种RHD基因变异体的可能.RHD基因合子型检测阳性,证明其中一条RHD等位基因1～10外显子全部缺失.进一步对样本RHD基因1～10外显子基因进行Sanger法测序,测序结果显示在另一条等位基因第8内含子上的第1154-31号碱基发生了 T＞C突变,国际输血协会(International Society of Blood Transfusion,ISBT)将该突变等位基因命名为RHD*DEL37,表型为 RhD 放散型(D-elute,Del).本研究中,2例血清学初筛RhD阴性的样本通过分子生物学检测,其基因型为RHD*DEL37/RHD-(RHD*01N.01).由于这2例个体无血缘关系,提示我国可能存在携带该基因突变的人群.本研究提示分子生物学方法可辅助鉴别血清学初筛为阴性的RhD变异体样本,联用分子生物学方法和血清学方法在准确鉴定血型、保障患者输血安全方面有重要意义.

目的 应用吸收放散和效价积分法对1例抗-C、e同种抗体合并抗-e、Jkb类同种自身抗体进行鉴别诊断.方法 采用试管法对ABO、Rh和Kidd血型抗原进行鉴定;盐水、凝聚胺、微柱凝胶3种方法联用2套谱细胞进行抗体筛查及抗体特异性鉴定;多重吸收放散试验和效价积分原则对抗体进一步确认;多重PCR技术对RHCE基因、JK基因进行测序.结果 通过血清学分析,该患者血型为A型、Rh分型ccDEE,直抗阳性.结合不同的Rh和Jk表型细胞吸收放散试验以及效价积分原则得出患者血清中含有抗-C、e同种抗体以及抗-e、Jkb类同种自身抗体,红细胞上有抗-e、Jkb类同种自身抗体.基因测序分析RHCE基因第5外显子676位出现G＞C,其余外显子没有发生突变,推断Rh分型ccEE型;JK基因中第9外显子838 G/A杂合,Jk血型表型Jk(a+b+),选择交叉配血相合的A型ccDEE、Jk(a+b-)红细胞给患者输注,输血效果良好.结论 应用吸收放散试验和效价积分法对患者血清进行抗体鉴定,以及血清学结合分子生物学对患者红细胞表型鉴定,可综合分析及区分出抗体的类型,为患者精准输血提供方案.

目的 通过对临床送检的急性髓系白血病(AML)多次输血患者的抗体筛查阳性标本进行鉴定,探讨此类复杂意外抗体的鉴定思路、方法及输血方案.方法 鉴定患者血型,利用抗体筛查细胞和两组谱细胞对MNSs、Kidd和Diego血型系统进行抗体特异性鉴定.通过毛细管离心和基因测序技术鉴定存在混合外观的患者红细胞分型.结果 检测患者血型为B、CcDEe(E、c呈混合外观)、Jka-b+、MN(MN呈混合外观)、Wra-;RHCE基因测序显示分型为RHCE*CcEe,但缺乏c.48G＞C的突变;MN血型测序结果显示基因型为NN.结论 对需要多次输血的血液病患者,意外抗体的鉴定应采用多种谱细胞、多种试验联合进行,以便准确鉴定抗体,做到同型输注,患者红细胞抗原鉴定困难可通过基因测序技术帮助分析,最终保证输血安全有效.

目的 对1例血清学RHD弱阳性的患者进行RHD基因型检测.方法 采用盐水法以及抗人球蛋白法鉴定RHD血型,应用抗球蛋白微柱凝胶卡进行直接抗人球蛋白试验;采用RH血型分型卡检测RHCE表型;对RHD基因的10个外显子进行PCR扩增及直接测序分析.结果 该个体血清学结果显示RHD抗原弱阳性表达,为D变异型,RHCE表型为CcEE,直接抗人球蛋白试验结果为阳性.RHD基因外显子直接测序发现其第9外显子上的第1227号碱基发生了G＞A的杂合突变.同时,第3外显子上的第341号碱基发生了G＞A的杂合突变,导致D抗原表达减弱.综上,该样本属RHD*weak D type 25/RHD*DEL1杂合型.结论 此D变异型个体为弱D25与DEL型杂合的病例,其血清学表现为D变异型,且未检索到中国人群相关病例报道.