目的:探讨过表达破骨细胞刺激性转膜蛋白（osteoclast stimulatory transmembrane protein，OC-STAMP）对上皮-间质转化的作用及机制。方法:于2021年4月，将小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞MLE-12细胞分为过表达对照组（NC组）、 Ocstamp过表达组（over- Ocstamp组）、法舒地尔（Fasudil）干预组（over- Ocstamp+Fasudil组）、沉默对照组（si-NC组）、 Ocstamp沉默组（si- Ocstamp组）。采用蛋白免疫印迹（Western blotting）法、免疫细胞化学染色法检测OC-STAMP、上皮标志蛋白E-钙黏蛋白（E-cadherin，E-cad）、间质标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）、Ras基因家族成员A（Ras homolog gene family member A，RhoA）、Rho GDP解离抑制因子α（Rho GDP dissociation inhibitor α，Rho GDIα）、Rho相关蛋白激酶（Rho-associated protein kinase，ROCK）、磷酸化肌球蛋白磷酸酶（phosphate myosin phosphatase，p-MYPT）蛋白表达，采用鬼笔环肽法检测细胞骨架肌动蛋白（filamentous actin，f-actin）的变化。采用 t检验比较两组间各蛋白的相对表达量。 结果:Western blotting及免疫细胞化学染色法结果显示，与NC组比较，over- Ocstamp组E-cad蛋白表达下调，α-SMA、Rho GDIα、RhoA、ROCK、p-MYPT蛋白表达增加，F-actin表达增强，差异均有统计学意义（ P<0.05）；与si-NC组比较，si- Ocstamp组E-cad和α-SMA蛋白表达差异均无统计学意义（ P>0.05）；与over- Ocstamp组比较，over- Ocstamp+Fasudil组E-cad蛋白表达上调，α-SMA、Rho GDIα、RhoA、ROCK、p-MYPT蛋白表达下降，F-actin表达减弱，差异均有统计学意义（ P<0.05）。 结论:肺泡Ⅱ型上皮细胞过表达OC-STAMP，可能通过激活Rho GDIα/RhoA/ROCK信号通路，诱导肌动蛋白细胞骨架重塑，进而促进上皮-间质转化。

目的:探索微小RNA(miR)-340-5p在胰腺导管腺癌细胞(PDAC)中表达及影响其生物学行为的机制。方法:实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测40例胰腺导管腺癌与正常细胞中miR-340-5p的表达，研究其表达水平与临床特征之间的联系。检测不同胰腺导管腺癌细胞及人胰腺导管上皮细胞中miR-340-5p水平。miR-340-5p模拟物转染PDAC细胞株PANC-1；甲基噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活性；划痕实验、Transwell侵袭实验检测细胞侵袭迁移能力。RT-qPCR及蛋白质印迹法(Western blot)检测N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达。双荧光素酶报告基因分析实验检测miR-340-5p对RhoA的调控功能。结果:PDAC组织中miR-340-5p水平低于正常胰腺组织(0.362 4±0.083 7、0.965 2±0.129 9， t＝21.272， P<0.01)；PDAC中miR-340-5p表达降低与胰腺癌淋巴结转移( χ2＝7.782， P<0.01)、肝转移( χ2＝17.109， P<0.01)有相关。双荧光素酶报告基因分析结果表明，野生型RhoA的荧光素酶活性在转染miR-340-5p模拟物后低于对照组(0.992 5±0.099 8比0.177 5±0.019 0， t＝18.496， P<0.01)。转染后，转染组细胞增殖活性降低(0.505 2±0.077 1比1.031 0±0.069 1、1.029 5±0.113 5， t＝38.012、7.637， P<0.01、迁移距离减少(0.753 3±0.050 1、0.725 0±0.071 5比0.338 3±0.087 7， t＝11.098、7.031， P<0.01)、迁移细胞数减少(57.000 0±4.290 0、52.666 7±5.785 0比19.833 3±2.994 0， P<0.01)。Western blot及RT-qPCR结果显示，与空白对照组(NC)及阴性对照组(Scramble)比较，miR-340-5p模拟物转染组N-cadherin(1.048 3±0.076 9、1.040 7±0.079 2比0.457 3±0.074 5， t＝11.800、11.585， P<0.01)、Vimentin(1.045 3±0.062 8、0.993 3±0.068 6比0.521 7±0.057 9， t＝10.982、9.585， P<0.05)、MMP-9(1.047 0±0.069 6、1.154 3±0.101 1比0.560 3±0.457 1， t＝32.803、18.559， P<0.01)表达显著降低，E-cadherin(1.053 3±0.100 3、0.987 7±0.083 4比1.976 0±0.154 2， t＝－29.502、－24.203， P<0.01)表达升高。 结论:胰腺导管腺癌中miR-340-5p表达降低，过表达miR-340-5p后能明显抑制PANC-1细胞的体外增殖和转移。其对RhoA信号通路介导的上皮-间充质转化(EMT)进程具有潜在抑制作用。

[目的]探讨藁本内酯对脂多糖(LPS)诱导小鼠肾足细胞损伤的改善作用及机制.[方法](1)体内实验:将小鼠随机分为空白对照组,LPS诱导组,藁本内酯低、高剂量组及藁本内酯高剂量+pcDNA-NC(RhoA阴性对照)组、藁本内酯高剂量+pcDNA-RhoA(RhoA过表达)组.除空白对照组,其他各组小鼠采用LPS诱导法构建急性肾损伤(AKI)模型.干预结束后,检测小鼠血清中尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)水平,高碘酸-希夫(PAS)染色法观察小鼠肾脏组织的病理变化,Western Blot法检测肾脏组织中RhoA、Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)蛋白的表达.(2)体外实验:将培养的小鼠足细胞MPC5分为空白对照组,LPS诱导组,藁本内酯低、高剂量组,藁本内酯高剂量+pcDNA-NC组,藁本内酯高剂量+pcDNA-RhoA组,细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测足细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡,鬼笔环肽染色法分析细胞骨架,Western Blot法检测细胞RhoA、ROCK蛋白的表达.[结果]与空白对照组比较,LPS诱导组小鼠血清中BUN和Cr的水平、肾小管损伤评分、RhoA和ROCK蛋白表达水平升高(P＜0.05);与LPS诱导组比较,藁本内酯低、高剂量组小鼠血清中BUN和Cr水平、肾小管损伤评分、RhoA和ROCK表达水平降低(P＜0.05).与空白对照组比较,LPS诱导组MPC5细胞增殖活性、F-肌动蛋白荧光强度、RhoA和ROCK的表达降低(P＜0.05),凋亡率升高(P＜0.05);与LPS诱导组比较,藁本内酯低、高剂量组MPC5细胞增殖活性、F-肌动蛋白荧光强度、RhoA和ROCK的表达升高(P＜0.05),凋亡率降低(P＜0.05).利用过表达RhoA进行回补实验发现,RhoA过表达逆转了藁本内酯对LPS诱导小鼠肾组织和足细胞损伤的缓解作用(P＜0.01).[结论]藁本内酯可能通过抑制RhoA/ROCK信号通路改善LPS诱导小鼠肾足细胞损伤.

背景 急性肺损伤(acute lung injury,ALI)是一种由多种诱因引发的急性肺部炎症性疾病,目前无有效防治手段.内皮抑制素(endostatin,ES)可特异性抑制血管内皮细胞的增殖和迁移,广泛应用于肿瘤治疗中,但其在急性肺损伤中的作用尚不明确.目的 探讨内皮抑制素对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠急性肺损伤的影响及可能机制.方法 将36只雄性C57BL/6小鼠随机分为 6组,分别为对照组、LPS组(模型组)、ES干预组A(LPS + 1 mg/kg ES 6 h)、ES干预组B(LPS + 1 mg/kg ES 12 h)、ES干预组C(LPS + 5 mg/kg ES 6 h)、ES干预组D(LPS + 5 mg/kg ES 12 h),每组 6只.LPS组:将LPS溶液(15 mg/kg)通过肺部液体定量雾化器装置递送至小鼠肺,作用 24 h,建立小鼠急性肺损伤模型;对照组:在相同时间点以同样的方式递送等体积 0.9%氯化钠注射液,作用 24 h;ES干预组:LPS刺激小鼠 24h后,腹腔注射不同剂量(1 mg/kg或 5 mg/kg)的ES注射液,分别作用 6h与 12 h.观察各组小鼠肺组织形态学改变;测定肺系数变化;行苏木素-伊红染色病理学检查;酶联免疫吸附实验检测小鼠血清中血管内皮生长因子水平;流式细胞术检测小鼠血清与肺泡灌洗液中TNF-α和IL-6水平;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法检测小鼠肺组织细胞凋亡;免疫印记实验检测小鼠肺组织中Ras同源基因家族成员A(Ras homolog gene family member A,RhoA)和Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶 1(Rho-associated coiled-coil-forming protien kinase 1,ROCK1)的表达.结果 与对照组比较,LPS组肺系数增大(P＜0.01),肺损伤评分升高(P＜0.01),肺组织凋亡细胞数增多(P＜0.01),血清血管内皮生长因子水平升高(P＜0.05),血清与BALF中TNF-α和IL-6水平升高(P＜0.05),肺组织RhoA与ROCK1蛋白表达增加(P＜0.05).与LPS组比较,ES干预组D肺部炎性渗出浸润减少,肺间质水肿及肺泡结构破坏减轻,肺损伤评分降低(P＜0.01),肺系数减小(P＜0.01),肺组织凋亡细胞减少(P＜0.01),血清中TNF-α、IL-6和VEGF水平均下降(P均＜0.01),肺组织RhoA和ROCK1表达减少(P＜0.05).结论 内皮抑制素可减轻LPS诱导的小鼠急性肺损伤,减少肺组织细胞凋亡,其降低肺毛细血管内皮细胞通透性和炎症反应的功能可能与抑制RhoA/ROCK信号通路有关.

功能性消化不良(FD)是一种广泛流行的功能性胃肠疾病,其症状常反复发作,病程较长,严重影响患者生活质量.目前西医治疗上并没有取得突破性进展,主要采用促胃肠动力药、抑酸药、抗抑郁/焦虑药物和心理治疗等对症治疗,且存在一定的不足与问题,而中医药在治疗FD方面具有独特优势.通过检索国内外文献发现,目前有关中医治疗FD的作用机制与多种信号通路转导有关,对相关信号通路以及分子机制的研究逐渐成为重点.其中主要以SCF/c-Kit信号通路、5-HT信号通路、CRF信号通路、AMPK信号通路、TRPV1 信号通路、NF-κB信号通路、RhoA/ROCK2/MYPT1 信号通路等为主,此系列信号通路能够促进胃肠动力、减轻焦虑、加速胃排空、降低内脏高敏感及改善十二指肠微炎症治疗FD.该文对中医药通过调控相关信号通路治疗FD研究进行综述,为进一步对中医药靶向治疗FD的研究提供参考和支持.

目的 探讨RhoA/ROCK信号转导通路在高糖诱导大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)增殖和胶原合成中的作用.方法 将SD大鼠肝星状细胞株HSC-T6在1640培养基中培养24 h,实验设置对照组(含5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(含25 mmol/L葡萄糖)、高渗透压组(5.5 mmol/L葡萄糖 +19.5 mmol/L甘露醇)、高糖 + 法舒地尔(12.5 μmol/L、25 μmol/L、50 μmol/L)组.采用MTS法检测细胞增殖率;采用羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)试剂盒测定细胞上清中Hyp水平;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)测定Ⅰ和Ⅲ型前胶原mRNA的相对表达量;采用Western blot检测肌球蛋白磷酸酶靶亚基1(myosin phosphatase target subunit 1,MYPT1)、细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinases,JNK)和p38MAPK的磷酸化和总体水平.结果 与对照组相比,高糖组MYPT1(0.270±0.007 vs 0.090±0.008,P＜0.001)、ERK(0.851±0.027 vs 0.175±0.038,P＜0.001)、JNK(0.869±0.037 vs 0.488±0.022,P＜0.001)和p38MAPK(0.498±0.020 vs 0.144±0.011,P＜0.001)磷酸化水平显著增高,HSC增殖率(A值)(2.372±0.098 vs 1.588±0.087,P＜0.001)和Hyp水平(27.924±1.069 vs 17.643±0.112,P＜0.001)显著增高,Ⅰ型前胶原mRNA(2.783±0.167 vs 1.004±0.008,P＜0.001)和Ⅲ型前胶原mRNA(4.958±0.143 vs 1.098±0.014,P＜0.001)表达显著上调.与高糖组相比,高糖+法舒地尔(25 μmol/L、50 μmol/L)组MYPT1(0.110±0.007,P＜0.001;0.101±0.006,P＜0.001)、ERK(0.473±0.025,P＜0.001;0.223±0.031,P＜0.001)、JNK(0.688±0.024,P = 0.019;0.576±0.035,P＜0.001)和p38MAPK(0.350±0.021,P = 0.012;0.305±0.015,P = 0.019)磷酸化水平显著降低,HSC增殖率(A值)(1.819±0.104,P＜0.001;1.613±0.103,P＜0.001)和Hyp水平(21.430±0.714,P＜0.001;18.574±0.825,P＜0.001)显著降低,Ⅰ型前胶原mRNA(1.580±0.154,P＜0.001;1.167±0.157,P＜0.001)和Ⅲ型前胶原mRNA(3.166±0.073,P＜0.001;2.524±0.085,P＜0.001)表达显著下调.高糖+法舒地尔12.5 μmol/L组MYPT1、ERK、JNK和p38MAPK磷酸化水平及Hcy水平均显著高于高糖+法舒地尔25 μmol/L组和高糖+法舒地尔50 μmol/L组(P均＜0.001),高糖+法舒地尔25 μmol/L组显著高于高糖+法舒地尔50 μmol/L组(P均＜0.001).结论 RhoA/ROCK信号转导通路可能通过激活下游的MAPKs介导了高糖诱导的肝HSC的增殖和胶原合成,ROCK可能是防治糖尿病肝纤维化的新靶点.

阴茎勃起功能障碍(ED)与平滑肌细胞的收缩与舒张失衡相关.ED发生过程中,除舒张功能减弱外,另一重要原因为平滑肌细胞的收缩功能上调.其中,收缩相关性信号通路、胞膜离子通道、平滑肌细胞表型都参与了平滑肌细胞收缩的调节,其功能变化可引起多种平滑肌细胞相关疾病.收缩相关性信号通路Raf/MEK/ERK1/2与RhoA/Rock通路之间存在交互作用,抑制RhoA蛋白表达或降低Rock2磷酸化水平都可能成为ED的治疗途径.电压依赖性钙通道(VDCCs)、瞬时受体电位(TRP)通道功能失调是高血压、糖尿病ED发病的主要原因之一,多种病理因素上调CaV1.2、TRPC1及TRPC4表达可使平滑肌收缩功能加强,进而导致ED的发生;阴茎海绵体表型转化也与ED的发生发展有关.本文就近年平滑肌收缩机制与ED关系研究的进展加以综述.

目的:探讨糖肾平对糖尿病肾病(Diabetic Kidney Disease,DKD)KKAy小鼠肾保护作用及其对RhoA/ROCK信号通路的影响.方法:雌性10周龄SPF级KKAy小鼠60只,KK鼠料诱导10周建立DKD模型,随机分为模型组、厄贝沙坦组、糖肾平低(0.525 g·kg-1)、中(1.05 g·kg-1)、高(2.1 g·kg-1)剂量组,10只雌性C57BL/6J小鼠为正常组.各治疗组灌胃给药,正常组、模型组灌胃等体积去离子水,每4周称体质量并测24 h尿蛋白定量.第26周小鼠麻醉后摘眼球取血,称肾质量、测空腹血糖(Fasting Blood Glucose,FBG)、血尿素氮(Blood Urea Nitrogen,BUN)、血肌酐(Serum creatinine,Scr)和甘油三酯(Triglyceride,TG)含量;HE、Mallory和PAS染色观察肾组织病理;免疫组化、原位杂交测肾组织转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Ras同源基因家族成员A (Ras homolog gene familymember A,RhoA)、Rho相关卷曲蛋白激酶(Rho-assoeiatedcoiledcoi1-containing protein kinase 1,ROCK1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-Smooth Muscle Actin,α-SMA)、E-钙黏素(E-Cadherin,E-Cad)mRNA及蛋白表达.结果:与模型组相比,各治疗组体质量、肾质量/体质量、尿蛋白降低,糖肾平中、高剂量组有显著性差异(P＜0.01);肾病理损害明显减轻,FBG、BUN、Scr、TG含量降低(P＜0.01),E-Cadherin mRNA及蛋白表达增加,TGF-β1、RhoA、ROCK1和α-SMA mRNA和蛋白表达减少,糖肾平中、高剂量组差异显著(P＜0.01).结论:糖肾平对DKD KKAy小鼠肾的保护作用及抑制肾小管上皮细胞转分化的作用,可能与调节RhoA/ROCK信号通路有关.

目的:探讨糖肾平含药血清对高糖刺激肾小管上皮细胞增殖作用及RhoA/ROCK信号通路的影响.方法:制备鼠含药血清;培养肾小管上皮细胞分为:正常组,高糖组,抑制剂(Y27632)组,厄贝沙坦组,糖肾平低、中、高剂量组,3000细胞/孔种于96孔板,每组8个复孔,12、24、48、60 h观察细胞,MTT法检测细胞增殖.Western blotting检测肾小管上皮细胞中RhoA、ROCK1、α-SMA和E-Cadherin蛋白的表达.结果:高糖诱导后细胞呈梭型或不规则三角形;含药血清干预后,细胞呈扁平不规则多角形.MTT:12 h,与正常组比,各组OD值升高;24、48、60 h,与正常组比,高糖组OD值显著升高(P＜0.01);与高糖组比,各治疗组OD值有不同程度降低(P＜0.05),48 h,与Y27632组、厄贝沙坦组和糖肾平高剂量组比,糖肾平低、中剂量组OD值降低(P＜0.05);60 h,与Y27632组比,糖肾平中剂量组降低;与厄贝沙坦组比,糖肾平各剂量组OD值降低(P＜0.05);与糖肾平高剂量组比,糖肾平低剂量组升高(P＜0.05).Western blotting,与正常组比,高糖组E-Cadherin蛋白表达减少,RhoA、ROCK1和α-SMA蛋白表达增加(P＜0.01);与高糖组比,各组E-Cadhenn蛋白表达增加,RhoA、ROCK1和α-SMA蛋白表达减少,高剂量组有显著差异(P＜0.01);与Y27632组比,糖肾平高剂量组ROCK1、E-Cadherin和α-SMA蛋白表达无统计学差异(P＞0.05),RhoA蛋白表达减少(P＜0.01);与厄贝沙坦组比,糖肾平高剂量组RhoA、ROCK1、E-Cadherin和α-SMA蛋白表达无统计学差异(P＞0.05).结论:糖肾平通过抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞增殖和RhoA/ROCK信号通路相关分子的表达,从而逆转上皮-间质转分化,抑制肾间质纤维化,延缓糖尿病肾病病情进展.

目的 探讨盐酸法舒地尔(HF)对脂多糖诱导的大鼠血管内皮功能的影响.方法 清洁级雄性SD大鼠80只,采用随机数字表法分为正常对照组、模型组、实验A组和实验B组,每组20只.实验A组、实验B组和模型组尾静脉注射脂多糖(1 mg/kg)建立大鼠内皮功能障碍模型.0.5h后,实验A组和实验B组分别腹腔注射10mg/kg和30mg/kgHF,模型组和对照组分别注射等量9 g/L生理盐水,连续4周,每天按上述方法注射1次.取各组大鼠胸主动脉标本,TUNEL法检测细胞凋亡,RT-PCR和Western blot分别检测Cx43、Cav-1、eNOS、RhoA和ROCK1的mRNA和蛋白表达.结果 模型组、实验A组和实验B组内皮细胞凋亡指数显著高于对照组(P＜0.05);实验A组和实验B组内皮细胞凋亡指数显著低于模型组(P＜0.05),且实验B组内皮细胞凋亡指数显著低于实验A组(P＜0.05).模型组Cx43、Cav-1 、RhoA和ROCK1的mRNA和蛋白表达水平显著高于对照组(P＜0.05),eNOS mRNA和蛋白表达水平显著低于对照组(P＜0.05);实验A组和实验B组Cx43、Cav-1、RhoA、ROCK1和eNOS mRNA和eNOS蛋白表达水平显著低于对照组(P＜0.05);实验A组和实验B组Cx43 、Cav-1、RhoA和ROCK1 mRNA和蛋白表达水平显著低于模型组(P＜0.05),eNOS mRNA和蛋白表达水平显著高于模型组(P＜0.05);实验B组Cx43、Cav-1 、RhoA和ROCK1 mRNA和蛋白表达水平显著低于实验A组(P＜0.05),而eNOS mRNA和蛋白表达水平显著高于实验A组(P＜0.05).结论 HF可能通过RhoA/Rho激酶信号转导通路,抑制RhoA和ROCK1的表达,从而抑制Cx43、Cav-1,而且可提高eNOS表达水平,从而改善血管内皮功能障碍.