目的:评价Rho亚家族蛋白A(RhoA)/Rho相关的卷曲连接蛋白激酶2(ROCK2)信号通路在三叶苷减轻大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用。方法:清洁级健康雄性SD大鼠80只，6~8周龄，体重230~280 g，采用随机数字表法分为4组( n＝20)：假手术组(S组)、脑缺血再灌注组(IR组)、脑缺血再灌注+三叶苷组(T组)和脑缺血再灌注+三叶苷+RhoA/ROCK2信号通路激动剂AA组(A组)。采用大脑中动脉栓塞法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型。T组和A组大鼠于缺血前3 d给予三叶苷15 mg/kg灌胃，2次/d，连续3 d，A组大鼠于每次灌胃前腹腔注射RhoA/ROCK2信号通路激动剂AA 10 mg/kg。于再灌注24 h时行神经行为学评分，随后处死大鼠取海马组织，采用流式细胞术检测海马神经元凋亡率，TTC染色确定脑梗死体积，采用Western blot法检测磷酸化RhoA(p-RhoA)、ROCK2和裂解的caspase-3(cleaved caspase-3)的表达，透射电镜下观察海马神经元超微结构。 结果:与S组比较，IR组大鼠神经行为学评分和海马神经元凋亡率升高，脑梗死体积增加，p-RhoA、ROCK2和cleaved caspase-3表达上调( P<0.05)，海马神经元病理学损伤加重；与IR组比较，T组大鼠神经行为学评分和海马神经元凋亡率降低，脑梗死体积减少，p-RhoA、ROCK2和cleaved caspase-3表达下调( P<0.05)，海马神经元病理学损伤减轻；与T组比较，A组大鼠神经行为学评分和海马神经元凋亡率升高，脑梗死体积增加，p-RhoA、ROCK2和cleaved caspase-3表达上调( P<0.05)，海马神经元病理学损伤加重。 结论:RhoA/ROCK2信号通路参与了三叶苷减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的过程，可能与抑制海马神经元凋亡有关。

目的:探讨过表达破骨细胞刺激性转膜蛋白（osteoclast stimulatory transmembrane protein，OC-STAMP）对上皮-间质转化的作用及机制。方法:于2021年4月，将小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞MLE-12细胞分为过表达对照组（NC组）、 Ocstamp过表达组（over- Ocstamp组）、法舒地尔（Fasudil）干预组（over- Ocstamp+Fasudil组）、沉默对照组（si-NC组）、 Ocstamp沉默组（si- Ocstamp组）。采用蛋白免疫印迹（Western blotting）法、免疫细胞化学染色法检测OC-STAMP、上皮标志蛋白E-钙黏蛋白（E-cadherin，E-cad）、间质标志蛋白α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）、Ras基因家族成员A（Ras homolog gene family member A，RhoA）、Rho GDP解离抑制因子α（Rho GDP dissociation inhibitor α，Rho GDIα）、Rho相关蛋白激酶（Rho-associated protein kinase，ROCK）、磷酸化肌球蛋白磷酸酶（phosphate myosin phosphatase，p-MYPT）蛋白表达，采用鬼笔环肽法检测细胞骨架肌动蛋白（filamentous actin，f-actin）的变化。采用 t检验比较两组间各蛋白的相对表达量。 结果:Western blotting及免疫细胞化学染色法结果显示，与NC组比较，over- Ocstamp组E-cad蛋白表达下调，α-SMA、Rho GDIα、RhoA、ROCK、p-MYPT蛋白表达增加，F-actin表达增强，差异均有统计学意义（ P<0.05）；与si-NC组比较，si- Ocstamp组E-cad和α-SMA蛋白表达差异均无统计学意义（ P>0.05）；与over- Ocstamp组比较，over- Ocstamp+Fasudil组E-cad蛋白表达上调，α-SMA、Rho GDIα、RhoA、ROCK、p-MYPT蛋白表达下降，F-actin表达减弱，差异均有统计学意义（ P<0.05）。 结论:肺泡Ⅱ型上皮细胞过表达OC-STAMP，可能通过激活Rho GDIα/RhoA/ROCK信号通路，诱导肌动蛋白细胞骨架重塑，进而促进上皮-间质转化。

目的:探讨法舒地尔对脓毒症小鼠急性肺损伤的保护作用。方法:4~6周龄雄性C57BL小鼠45只随机（随机数字法）分为对照组（Control组）、脂多糖组（LPS组）、法舒地尔干预组（FAS+LPS组），每组15只。LPS溶液腹腔注射及气道内滴注建立脓毒症小鼠急性肺损伤模型。法舒地尔干预组分别于腹腔注射LPS前30 min和气道滴注LPS后1 h，腹腔内注射盐酸法舒地尔溶液（10 mg/kg）。造模后4 h处死小鼠取肺组织。HE染色观察病理形态学变化；测定肺组织湿重/干重比（W/D）；TBA比色法测定MDA含量及MPO活性；IHC测定caspase-3表达水平；Western Blot法检测肺组织中RhoA、ROCK1、eNOS及p-eNOS的蛋白表达水平。结果:FAS预处理后肺组织中炎性细胞浸润和红细胞渗出显著减少，间质水肿及肺泡结构破坏显著减轻。与LPS组相比，FAS+LPS组的W/D值、MDA含量及MPO活性较LPS组均显著降低( P<0.01)。FAS+LPS组的Caspase-3表达较LPS组显著下降( P<0.01)。与Control组比，LPS组的RhoA、ROCK1的蛋白表达水平增高( P<0.05)，p-eNOS的蛋白表达水平下降( P<0.05)；与LPS组比，FAS+LPS组的RhoA和ROCK1的蛋白表达下调( P<0.05)，但p-eNOS的蛋白表达上调( P<0.05)；三组的eNOS总蛋白表达水平差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:法舒地尔可减轻脓毒症小鼠肺组织炎性细胞浸润程度，下调肺组织细胞凋亡，抑制RhoA/ROCK1信号通路活性并促进eNOS的磷酸化表达。

目的:探讨Rho激酶抑制剂对脓毒症大鼠肠损伤的影响及其可能机制。方法:将32只成年雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组（Sham组）、Rho激酶抑制剂Y-27632对照组（Y+Sham组）、脓毒症模型组〔盲肠结扎穿孔术（CLP）组〕及Y-27632预处理组（Y+CLP组），每组8只。采用CLP法制备大鼠脓毒症模型；Sham组和Y+Sham组只游离拨动盲肠、不进行结扎穿孔。Y+Sham组和Y+CLP组大鼠于术前15 min腹腔注射Y-27632溶液5 mg/kg进行预处理；Sham组及CLP组大鼠则腹腔注射等量磷酸盐缓冲液（PBS）。于术后24 h取大鼠心脏血，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定血清二胺氧化酶（DAO）含量。收集小肠组织，苏木素-伊红（HE）染色后，光镜下观察肠组织病理学变化，并进行肠黏膜损伤评分（Chiu's评分）；采用免疫组化法检测肠组织Rho相关卷曲螺旋激酶1（ROCK1）和核转录因子-κB（NF-κB）阳性表达；采用ELISA法检测肠组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-10（IL-10）的含量。结果:Sham组和Y+Sham组肠组织结构完整，黏膜纤毛排列整齐；与Sham组相比，CLP组肠道黏膜纤毛排列紊乱，大量炎症细胞浸润，Chiu's评分显著升高（分：3.83±0.27比0.12±0.11， P<0.05），说明大鼠发生了脓毒症肠损伤；与CLP组相比，Y+CLP组大鼠肠上皮细胞坏死程度减轻，可见少量炎症细胞浸润，Chiu's评分显著降低（分：2.85±0.21比3.83±0.27， P<0.05），说明Y-27632预处理可以减轻脓毒症大鼠肠损伤。与Sham组相比，CLP组肠组织ROCK1和NF-κB阳性表达、血清DAO及肠组织TNF-α含量显著增加〔ROCK1表达（ A值）：0.19（0.18，0.22）比0.10（0.09，0.11），NF-κB表达（ A值）：0.40±0.02比0.15±0.01，DAO（ng/L）：287.81±23.31比144.92±17.72，TNF-α（ng/L）：101.08±5.62比74.81±5.56，均 P<0.05〕，而肠组织IL-10含量显著降低（μg/L：55.16±5.20比95.95±7.53， P<0.05）；与CLP组相比，Y+CLP组肠组织ROCK1和NF-κB的阳性表达、血清DAO及肠组织TNF-α的含量均显著降低〔ROCK1表达（ A值）：0.15（0.13，0.18）比0.19（0.18，0.22），NF-κB表达（ A值）：0.28±0.01比0.40±0.02，DAO（ng/L）：243.34±19.76比287.81±23.31，TNF-α（ng/L）：90.41±8.79比101.08±5.62，均 P<0.05〕，而肠组织IL-10的含量则显著增加（μg/L：66.15±5.74比55.16±5.20， P<0.05），说明Y-27632预处理对脓毒症肠损伤大鼠的保护作用可能与调节RhoA/ROCK1/NF-κB信号通路有关。 结论:Rho激酶抑制剂可以减轻脓毒症大鼠肠损伤，其机制可能与抑制肠道RhoA/ROCK1/NF-κB信号通路，减轻肠道炎症反应有关。

目的:探索微小RNA(miR)-340-5p在胰腺导管腺癌细胞(PDAC)中表达及影响其生物学行为的机制。方法:实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测40例胰腺导管腺癌与正常细胞中miR-340-5p的表达，研究其表达水平与临床特征之间的联系。检测不同胰腺导管腺癌细胞及人胰腺导管上皮细胞中miR-340-5p水平。miR-340-5p模拟物转染PDAC细胞株PANC-1；甲基噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活性；划痕实验、Transwell侵袭实验检测细胞侵袭迁移能力。RT-qPCR及蛋白质印迹法(Western blot)检测N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达。双荧光素酶报告基因分析实验检测miR-340-5p对RhoA的调控功能。结果:PDAC组织中miR-340-5p水平低于正常胰腺组织(0.362 4±0.083 7、0.965 2±0.129 9， t＝21.272， P<0.01)；PDAC中miR-340-5p表达降低与胰腺癌淋巴结转移( χ2＝7.782， P<0.01)、肝转移( χ2＝17.109， P<0.01)有相关。双荧光素酶报告基因分析结果表明，野生型RhoA的荧光素酶活性在转染miR-340-5p模拟物后低于对照组(0.992 5±0.099 8比0.177 5±0.019 0， t＝18.496， P<0.01)。转染后，转染组细胞增殖活性降低(0.505 2±0.077 1比1.031 0±0.069 1、1.029 5±0.113 5， t＝38.012、7.637， P<0.01、迁移距离减少(0.753 3±0.050 1、0.725 0±0.071 5比0.338 3±0.087 7， t＝11.098、7.031， P<0.01)、迁移细胞数减少(57.000 0±4.290 0、52.666 7±5.785 0比19.833 3±2.994 0， P<0.01)。Western blot及RT-qPCR结果显示，与空白对照组(NC)及阴性对照组(Scramble)比较，miR-340-5p模拟物转染组N-cadherin(1.048 3±0.076 9、1.040 7±0.079 2比0.457 3±0.074 5， t＝11.800、11.585， P<0.01)、Vimentin(1.045 3±0.062 8、0.993 3±0.068 6比0.521 7±0.057 9， t＝10.982、9.585， P<0.05)、MMP-9(1.047 0±0.069 6、1.154 3±0.101 1比0.560 3±0.457 1， t＝32.803、18.559， P<0.01)表达显著降低，E-cadherin(1.053 3±0.100 3、0.987 7±0.083 4比1.976 0±0.154 2， t＝－29.502、－24.203， P<0.01)表达升高。 结论:胰腺导管腺癌中miR-340-5p表达降低，过表达miR-340-5p后能明显抑制PANC-1细胞的体外增殖和转移。其对RhoA信号通路介导的上皮-间充质转化(EMT)进程具有潜在抑制作用。

糖尿病肾脏病（DKD）是糖尿病患者严重的微血管并发症之一，寻找DKD发病的机制对延缓DKD的进展十分重要。RhoA/ROCK信号通路参与了DKD的多个病理生理紊乱，如炎症反应、上皮间充质转化、线粒体功能障碍、氧化应激和屏障功能损伤等。该文重点从上述几个方面综述RhoA/ROCK信号通路在DKD中的作用及其可能机制。

目的:探讨白细胞介素-33（IL-33）对脂多糖（LPS）诱导的大鼠心脏微血管内皮细胞（RCMECs）通透性的影响。方法:体外培养RCMECs，分为空白对照组、LPS组、IL-33组和LPS+IL-33组。用细胞计数试剂（CCK8）检测IL-33对RCMECs增殖的影响。异硫氰酸荧光素（FITC）-葡聚糖法检测4组单层RCMECs通透性。Western Blot检测4组RCMECs中血管内皮钙黏蛋白、Ras同源基因家族（Rho）成员A（RhoA）、磷酸化Rho相关含卷曲螺旋蛋白激酶（p-ROCK2）蛋白表达。高通量测序比较LPS组和LPS+IL-33组的差异基因表达，并对差异基因进行基因本体（GO）富集分析。结果:10~50 ng/ml的IL-33对RCMECs增殖无显著影响（ P>0.05）。与空白对照组比，LPS组RCMECs通透性增加（相对灰度值1.404±0.029 比 1.000±0.200， P<0.05），血管内皮钙黏蛋白表达显著下调（相对灰度值0.429 5±0.012 9 比 0.594 9±0.014 2， P<0.05）；而与LPS组比，LPS+IL-33组可降低RCMECs通透性（相对灰度值0.948±0.013， P<0.01），上调血管内皮钙黏蛋白表达（相对灰度值0.549 1±0.012 0， P<0.005）。与空白对照组比，LPS组RhoA（相对灰度值0.211 4±0.009 9 比 0.135 0±0.007 6， P<0.000 1）、p-ROCK（相对灰度值0.656 3±0.013 2 比 0.503 6±0.036 2， P<0.000 1，）蛋白表达上调；与LPS组比，LPS+IL-33组RhoA（相对灰度值 0.157 7±0.010 7， P=0.000 2）、p-ROCK（相对灰度值0.427 7±0.003 8， P<0.000 1）蛋白表达降低。高通量测序发现，LPS组、LPS+IL-33组下调的差异基因与细胞骨架及Rho信号通路相关。 结论:IL-33可能通过抑制Rho/Rho相关含卷曲螺旋蛋白激酶信号通路RhoA、p-ROCK蛋白表达，改善LPS诱导的心脏微血管内皮细胞的高通透性。

目的:探讨双氢睾酮（DHT）对人外周血早期内皮祖细胞（PB-EPCs）增殖、迁移功能的影响及RhoA/ROCK信号通路在其中的作用。方法:取健康成人外周血分离、培养出早期EPCs并鉴定。分别以不同浓度DHT(1、10、100 nmol/L)干预，得出最佳浓度和最佳作用时间后用于后续干预实验。分组：对照组、DHT、RhoA抑制剂C3 exoenzyme+DHT组、ROCK抑制剂Y-27632+DHT组。检测各组EPCs的增殖、迁移能力。ELISA法检测各组细胞上清液液中VEGF蛋白含量。结果:DHT在一定范围内呈浓度-时间依赖性促进EPCs增值、迁移功能，分别在浓度为10 nmol/L和24 h达到最大作用效果。与单纯10 nmol/L的DHT刺激组相比，C3 exoenzyme[(0.22±0.02) vs (0.26±0.05), P>0.05]和Y-27632[(0.21±0.04) vs (0.26±0.05), P>0.05]能够减弱DHT诱导的EPCs增殖，但差异无统计学意义。DHT对EPCs迁移能力的促进作用可被C3 exoenzyme[(35.26±4.27) vs (46.92±5.46), P<0.05]和Y-27632[(33.61±5.33) vs (46.92±5.46), P<0.01]抑制。DHT对EPCs分泌VEGF能力的促进作用可被C3 exoenzyme[(116.75±7.42) vs (156.80±21.74), P<0.05]和Y-27632[(121.73±5.33) vs (156.80 ±21.74), P<0.01]抑制。 结论:DHT呈一定的浓度-时间依赖性促进EPCs的增殖、迁移以及VEGF的表达，其中RhoA/ROCK信号通路参与调控了此过程。

目的:探究呼吸康复训练联合百令胶囊通过人RAS同源基因家族成员A（RhoA）/Rho-kinase信号通路对慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者的疗效及肺功能的影响。方法:选择2016年2月至2017年9月陆军第八十一集团军医院100例COPD患者，按照随机数字表法分为对照组和联用组，每组50例，同期挑选50例健康人群作为空白组。对照组患者给予百令胶囊进行治疗，百令胶囊+呼吸康复训练联用组采用呼吸康复训练联合百令胶囊进行治疗。分别分析各组患者肺功能[最大深吸气后第1秒用力呼出气体容积（FEV 1）、用力肺活量（FVC）、FEV 1/FVC]情况和临床疗效，通过免疫印迹、实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测RhoA、RockⅠ/Ⅱ蛋白和mRNA的表达。 结果:经治疗，联用组的肺功能各项指标FEV 1、FVC、FEV 1/FVC显著高于对照组[（2.34 ± 0.91）L比（1.91 ± 0.83）L、（2.98 ± 0.83）L比（2.34 ± 0.86）L、（79.63 ± 9.95）%比（76.13 ± 6.97）%]（ P<0.05）；与空白组相比，其余各组RhoA mRNA、RockⅠ/Ⅱ mRNA显著增高（ P<0.05），与对照组相比，联用组RhoA mRNA、RockⅠ/Ⅱ mRNA显著降低（2.46 ± 0.18比4.38 ± 0.21、1.72 ± 0.11比2.36 ± 0.24、1.79 ± 0.24比3.34 ± 0.21）（ P<0.05）；经治疗后，联用组6 min步行实验（6MWD）和临床总有效率[92.00%（46/50）比78.00%（39/50）]显著优于对照组（ P<0.05）。 结论:呼吸康复训练与百令胶囊联用能够显著改善COPD患者肺功能，提高临床疗效，并且可以通过RhoA/Rho-kinase信号通路下调RhoA、RockⅠ/Ⅱ蛋白和mRNA的表达。

目的:评价肝素对脓毒症小鼠急性肺损伤(ALI)时黏着斑激酶(FAK)/Ras同源家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)信号通路的影响。方法:SPF级健康成年雄性C57BL/6J小鼠30只，6～8周龄，体质量20～23 g，采用随机数字表法分为3组( n＝10)：对照组(C组)、ALI组和肝素组(H组)。采用腹腔注射LPS 15 mg/kg的方法制备脓毒症小鼠ALI模型，C组注射等量生理盐水。H组尾静脉注射肝素钠10 U，30 min后制备模型，C组和ALI组注射等量生理盐水。于注射LPS后24 h时深麻醉下采集眼球静脉血样，随后处死小鼠取肺组织。采用ELISA法测定血清IL-1β、IL-6和TNF-α浓度；HE染色法观察肺组织病理学结果并行肺损伤(LI)评分，确定肺湿质量/干质量(W/D)比值；免疫组化染色法观察血管内皮黏附因子1(VCAM-1)表达；Western blot法检测FAK、磷酸化FAK(p-FAK)、RhoA、结合GTP形式Rho蛋白A(RhoA-GTP)和ROCK表达。 结果:与C组相比，ALI组血清IL-1β、IL-6、TNF-α浓度、肺W/D比值、LI评分和VCAM-1表达水平升高，肺组织p-FAK、RhoA-GTP和ROCK表达上调( P<0.05)；与ALI组相比，H组血清IL-1β、IL-6、TNF-α浓度、肺W/D比值、LI评分和VCAM-1表达水平降低，肺组织p-FAK、RhoA-GTP和ROCK表达下调( P<0.05)。 结论:肝素减轻脓毒症小鼠ALI的机制与抑制FAK/RhoA/ROCK信号通路有关。