目的 从蛋白糖基化修饰角度探讨壳寡糖(COS)减弱动脉粥样硬化(AS)斑块形成的机制.方法 将 40 只ApoE-/-小鼠随机分为对照组和COS组.对照组饲给予高脂饲料 12 周,COS组给予高脂饲料+COS(每天灌胃,500 mg/kg)12 周.全自动生化分析仪检测两组小鼠的血脂水平并对主动脉斑块切片进行HE和油红O染色.凝集素芯片、液相色谱-串联质谱、酶联免疫吸附试验检测血清中糖蛋白变化.胆固醇酯流出实验和游离胆固醇酯测定实验评价清道夫受体B类成员 1(SRBI)糖基化修饰位点改变对巨噬细胞胆固醇流出量的影响.结果 COS显著降低小鼠TC和LDL-C水平(P＜0.05),但对TG、HDL-C、ApoA1 和ApoB100 无影响.与对照组相比,COS组主动脉内膜厚度和斑块大小明显变薄、变小(P＜0.05).两组小鼠血清中变化最明显的小扁豆凝集素(LCA)结合蛋白分子量为 80～90 ku,清道夫受体B类成员 1 为其中之一.COS促进了细胞内胆固醇的流出,抑制了游离胆固醇酯的积累(P＜0.05).SRBI敲低或N108 糖基化位点突变可抑制COS引起的胆固醇流出,增加细胞内游离胆固醇的积累(P＜0.05).结论 COS通过增加SRBI糖基化水平促进脂质外排,从而减少动脉粥样硬化的形成.

目的:探讨老年患者下肢动脉粥样硬化与心血管疾病危险因素关系,为疾病的预防控制和治疗提供依据.方法:收集从2016年1月到2017年1月在南华大学附属第一医院进行下肢静脉彩色多普勒超声检查的715例住院患者的基本临床数据和检测数据,确诊为下肢动脉粥样硬化的患者215例作为实验组,剩余500例为对照组,比较两组心血管危险因素,并采用Logistics回归分析筛选出下肢动脉粥样硬化的独立危险因素.结果:实验组年龄、存在高血压病史及糖尿病史比例及血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、载脂蛋白B(APO-B)、血清肌酐(Cr)、尿酸(UA)、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、空腹血糖(FBG)、血浆纤维蛋白原(Fib)、收缩压(SBP)、舒张压(SDP)水平均高于对照组(P＜0.05),而体质量指数(BMI)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、载脂蛋白AI(APO-AI)、鞘氨醇l-磷酸(SlP)、清道夫受体(SRBI)水平均低于对照组(P＜0.05).多因素Logistics回归分析显示,年龄(OR=1.156)、糖尿病史(OR=2.623)、UA(OR=1.005)、TG(OR=2.345)、FBG (OR=1.066)为下肢动脉粥样硬化的独立危险因素(均P＜0.05).结论:心血管的危险因素与下肢动脉粥样硬化有关,其中年龄、糖尿病史、UA、TG、FBG为下肢动脉粥样硬化的独立危险因素,对上述因素进行针对性干预可以有效预防下肢动脉粥样硬化的发生.

为了研究SRBI基因的结构、功能以及在贝类壳色形成中的作用,利用SMART RACE技术克隆得到文蛤(Meretrix meretrix) SRBI (Mm-SRBI)基因的全长序列, 并对其内含子特征及不同组织、不同壳色群体外套膜中的表达差异进行了分析.结果表明:Mm-SRBI基因cDNA全长1676 bp,开放阅读框1515 bp,编码504个氨基酸,结构域预测发现有一个CD36结构域; 氨基酸序列比对发现, 与华贵栉孔扇贝的同源性最高(55%), 与其他物种的相似性在34%—40%,表明该基因变异较大;在Mm-SRBI基因中扩增出12个内含子,均存在于开放阅读框中,且都遵循GT-AG原则;荧光定量PCR(qRT-PCR)结果表明,Mm-SRBI在闭壳肌、外套膜、斧足、鳃、内脏团和水管6个组织均有表达, 其中在外套膜中表达量显著高于其他组织(P<0.01), 这可能与外套膜中类胡萝卜素含量较高有关; 不同壳色群体外套膜中基因表达分析表明, Mm-SRBI在黑斑和红壳文蛤中的表达量显著高于白壳文蛤(P<0.05).实验结果为文蛤壳色形成研究奠定了基础.

目的 探索三七皂苷R1抑制ApoE基因敲除小鼠肝脏脂质沉积的作用及其相关机制.方法 将C57BL/6J小鼠作为正常组,将ApoE基因敲除小鼠随机分为模型组和三七皂苷R1组(25 μg/g).正常组及模型组接受溶剂治疗.腹腔注射8周进行干预.通过HE染色和油红O染色观察肝脏病理形态学及脂质沉积相关改变.提取肝脏组织总RNA,采用Real-time PCR分析肝脏PPARγ、LXRα、ABCA1和SRBI基因的表达以及miR-26a、miR-33和miR-122表达.结果 肝脏HE染色和油红O染色结果显示:与正常对照组比较,模型组小鼠肝组织出现大量空泡样变,变性的肝细胞肿胀,肝细胞内见大量脂肪空泡和脂质沉积.与模型组比较,三七皂苷R1能显著减轻肝细胞肿胀,减少脂肪空泡和脂质沉积.肝脏脂质代谢相关基因和miRNA表达分析结果提示:与模型组比较,三七皂苷R1可显著上调肝脏PPARγ、LXRα、ABCA1以及SRBI的表达水平(P＜0.05,P＜0.01),显著下调肝脏miR-26a的表达水平(P＜0.05).结论 三七皂苷R1可显著抑制ApoE基因敲除小鼠肝脏脂质沉积,其机制可能与调节胆固醇代谢作用相关.

目的:观察胡椒碱对胆囊胆固醇结石模型小鼠肝脏组织肝脏核受体类似物-1(LRH-1)相关信号通路蛋白表达的影响,并探讨其相关机制.方法:将90只雄性C57BL/6小鼠随机分成正常组,模型组,熊去氧胆酸组(90 mg·kg-1),胡椒碱低、中、高剂量组(20,40,60 mg·kg-1),每组15只,灌胃给药4周.除正常组外,其余各组均采用含2％胆固醇的高脂饲料喂养4周建立胆囊胆固醇结石模型.肉眼观察各组结石形成情况;测量胆囊容积,检测血清中总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠肝脏组织LRH-1,B类-Ⅰ型清道夫受体(SRBI),腺苷三磷酸结合盒转运体G5(ABCG5),ABCG8的蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组大鼠肝脏组织LRH-1,SRBI,ABCG5,ABCG8 mRNA表达.结果:与正常组比较,模型组小鼠成石率明显升高(P＜0.05),胆囊容积明显升高(P＜0.05),血清中TC,TG和LDL-C含量明显升高(P＜0.05),血清中HDL-C含量明显下降(P＜0.05),肝脏组织中LRH-1,SRBI,ABCG5,ABCG8的蛋白和mRNA表达明显升高;与模型组比较,熊去氧胆酸组和胡椒碱中、高剂量组小鼠成石率明显降低(P＜0.05),胆囊容积均明显降低(P＜0.05),血清中TC,TG和LDL-C含量明显降低(P＜0.05),血清中HDL-C含量明显升高(P＜0.05),肝脏组织中LRH-1,SRBI,ABCG5,ABCG8的蛋白和mRNA表达明显降低(P＜0.05).结论:胡椒碱中、高剂量组可能通过抑制肝脏组织LRH-1/SRBI及LRH-1/ABCG5/ABCG8信号通路的表达,改善脂质代谢异常,进而能够抑制高胆固醇饲料诱导的C57BL/6小鼠胆囊胆固醇结石的形成,且胡椒碱高剂量组优于胡椒碱中剂量组.

目的:研究大剂量氢化可的松短期给药诱发小鼠药源性证候的特征及对肾上腺皮质功能的影响.方法:32只雄性ICR小鼠随机分为对照组与氢化可的松不同剂量干预组(12.5 mg·kg-1·d-1组、25 mg·kg-1·d-1组、50 mg·kg-1·d-1组),每组8只.氢化可的松不同剂量组小鼠分别灌胃给予相应浓度的氢化可的松溶液,对照组小鼠灌胃给予相同体积灭菌水,连续5d.分别于给药第1、3、5天称量每只小鼠体质量.末次给药后,采用课题组前期建立的小鼠辨证论治实验方法学检测小鼠表征信息(躯体不同部位红外温度、腋温、抓力);取各只小鼠胸腺、脾脏称重,计算脏器指数;分离肾上腺组织,实时荧光定量PCR技术检测类固醇激素合成酶(Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1)基因表达,Western blot检测StAR、SRBI与LDLR蛋白表达.结果:①给药1、3、5d后,氢化可的松25mg·kg-1 ·d-1和50 mg·kg-1·d-1组小鼠的体质量均较对照组显著降低(P＜0.05,P＜0.01).②给药5d后,氢化可的松12.5 mg·kg-1·d-1和25 mg· kg-1 ·d-1组小鼠的头部最高温度均较对照组显著降低(P＜0.05),但氢化可的松各剂量组小鼠的躯干平均温度、尾部最低温度、腋温、抓力无明显变化.③与对照组相比,氢化可的松各剂量组小鼠的脾脏指数均明显下降(P＜0.01),且呈剂量依赖性;50 mg·kg-1·d-1组小鼠的胸腺指数较对照组显著降低(P＜0.01).④与对照组相比,氢化可的松25mg·kg-1 ·d-1和50mg· kg-1·d-1组肾上腺组织中Star、Cyp1 1a1、Cyp11b1和Cyp21a1的mRNA表达均显著减少(P＜0.05,P＜0.01),StAR、LDLR和SRBI蛋白表达均显著降低(P＜0.05,P＜0.01).结论:大剂量氢化可的松(25 mg· kg-1·d-1和50mg· kg-1·d-1)短期给药5d可显著抑制小鼠肾上腺皮质功能,其证候表现以药源性阴虚证为主.

目的 观察血管紧张素-(1-7) [Ang-(1-7)]及血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)对肌源性泡沫细胞高密度脂蛋白受体(SRBI)、ATP结合盒转运子A1(ABCA1)表达的影响. 方法 在小鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)中加入100 mg/L的oxLDL,培养72 h,使VSMC转化为泡沫细胞,建立肌源性泡沫细胞模型后随机分为:control组,Ang Ⅱ组,Ang(1-7)组,Ang-(1-7)+ Ang Ⅱ组、Ang Ⅱ+Ang-(1-7)+A-779组及A-779组.A-779为Ang-(1-7)受体特异性阻滞剂.分别用Western blot及RT-PCR法检测SR-BI mRNA、ABCA1 mRNA及其蛋白的表达. 结果 与control组相比,Ang Ⅱ组SR-BI mRNA、ABCA1 mRNA及其蛋白的表达均明显减弱(P＜0.05),与Ang Ⅱ组比较,Ang-(1-7)+ Ang Ⅱ组SR-BI mRNA、ABCA1 mRNA及其蛋白的表达增加(P＜0.05);与Ang-(1-7)组比较,Ang Ⅱ+Ang-(1-7)+ A-779组SR-BI mRNA、ABCA1mRNA及其蛋白的表达减弱(P＜0.05),但与Ang Ⅱ组比较差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 Ang Ⅱ可抑制肌源性泡沫细胞SR-BI、ABCA1的表达,而Ang-(1-7)通过其特异性MAS受体可拮抗AngⅡ的上述作用.

目的 评价氢化可的松诱发小鼠药源性脾肾虚证模型,并探索其物质基础.方法 80只ICR小鼠按随机分为对照组、极低、低、中、高剂量组,每组16只,分别采用灭菌水、0.33、0.66、3.3、12.5 mg/(kg·d)氢化可的松灌胃.每日动态观测小鼠体重,并分别在给药第7天和第14天,检测小鼠抓力、旷场活动度、躯体不同部位红外温度等表征信息.分别于给药第8天和第15天各处死小鼠8只,取脾脏、胸腺、心脏和肾脏称重并计算脏器指数;ELI SA检测血清皮质酮(CORT)和促肾上腺皮质激素(ACTH)含量;实时荧光定量PCR检测肾上腺StAR、Cyp 11 a1、Cyp21 a1、Cyp11 b1、Cyp11 b2 mRNA表达;Western Blot检测肾上腺LDLR、SRBI、StAR蛋白表达.结果 与对照组同期比较,低、中剂量组4～14天体重下降(P＜0.05),极低剂量组7天尾部最低温度、StAR、Cyp21 a1 mRNA表达,14天头部最高温度、躯干平均温度、尾部最低温度以及ACTH含量、LDLR、StAR蛋白表达下降(P ＜0.05,P＜0.01),14天抓力上升(P＜0.05);低、中、高剂量组7、14天头部最高温度、躯干平均温度、尾部最低温度、胸腺重量和指数下降(P ＜0.05,P＜0.01);低剂量组7、14天StARmRNA、LDLR、StAR表达下降(P ＜0.05,P＜0.01),14天CORT含量、ACTH、Cyp11a1、Cyp11b1 mRNA表达下降(P＜0.05,P＜0.01);中、高剂量组7、14天脾脏重量和指数、CORT含量、ACTH、StAR、Cyp21a1、Cyp11b1 mRNA、LDLR、SRBI、StAR表达下降(P ＜0.05,P＜0.01),14天Cyp1 1 a1、Cyp11b2 mRNA下降(P ＜0.05,P＜0.01);高剂量组14天体重、旷场活动度下降(P＜0.05).结论 采用0.66及3.3 mg/(kg·d)氢化可的松持续给药14天可建立稳定的药源性脾肾虚证小鼠模型,可能与其降低肾上腺皮质激素合成酶表达和垂体-肾上腺皮质轴功能有关.

目的 研究糖皮质激素药物作用于不同品系小鼠后肾上腺皮质功能抑制程度及其诱导药源性证候的差异性.方法 选用ICR、BALB/c、C57BL/6J、KM和裸小鼠5种小鼠为实验对象,采用泼尼松龙进行干预.每种小鼠16只,其中正常对照组8只,泼尼松龙组8只.以0.5 mg/(kg·d)泼尼松龙连续灌胃14 d,每日观测小鼠体重,在给药第14天,运用小鼠辨证论治实验方法学检测小鼠中医四诊信息,次日处死小鼠,取脾、胸腺称重并计算脏器指数;运用ELISA检测血清皮质酮和ACTH含量;采用实时荧光定量PCR技术检测肾上腺Star、Cyp11a1、Cyp21a1、Cyp11b1、Cyp11b2基因表达;运用Western blot方法检测肾上腺LDLR、SRBI、StAR蛋白表达.结果 与各自对照组比较:1)0.5 mg/(kg·d)泼尼松龙给药后第7天起ICR小鼠体重显著下降(P<0.01);给药后第13天起BALB/c小鼠体重显著下降(P<0.01);给药后第5天起C57BL/6J小鼠体重显著下降(P<0.01);给药后第13天裸鼠体重显著下降(P<0.05).2)泼尼松龙导致ICR小鼠抓力显著下降以及躯干平均温度显著降低(P<0.05).3)泼尼松龙导致ICR小鼠和裸鼠脾重量显著下降(P<0.01)以及裸鼠脾指数下降(P<0.05),泼尼松龙导致ICR、C57BL/6J和KM小鼠胸腺重量和胸腺指数均显著下降(P<0.01).4)泼尼松龙显著导致BALB/c与KM小鼠血清皮质酮下降(P<0.05),也显著引起BALB/c小鼠血清促肾上腺皮质激素(ACTH)含量下降(P<0.01).5)泼尼松龙显著下调ICR小鼠肾上腺Cyp21a1基因表达(P<0.05),下调C57BL/6J小鼠Star基因表达(P<0.01),下调KM小鼠Cyp11a1、Cyp21a1基因表达(P<0.01),下调裸鼠Star与Cyp21a1基因表达(P<0.05);且泼尼松龙抑制ICR小鼠肾上腺LDLR蛋白表达以及KM小鼠肾上腺StAR蛋白表达.结论 泼尼松龙造成的小鼠药源性虚证主要表现为"气虚",涉及中医"肾藏象"与"脾藏象",其物质基础以肾上腺皮质类固醇激素合成酶分子表达被抑制以及垂体-肾上腺皮质轴功能被抑制为主;开展糖皮质激素药源性虚证研究建议首选ICR小鼠.

目的 探讨泼尼松龙诱发小鼠药源性证候的特征及可能物质基础.方法 80只ICR小鼠随机分为正常对照组、极低剂量组、低剂量组、中剂量组、高剂量组各16只.极低剂量组、低剂量组、中剂量组、高剂量组分别给予醋酸泼尼松龙片0.25、0.5、2.5、12.5mg/(kg·d)灌胃,正常对照组给予等量灭菌水.每组16只中8只干预7天,另外8只干预14天.隔日动态观测小鼠体质量,分别比较干预不同时间各组小鼠体质量、抓力、腋温、旷场活动度、躯体不同部位红外温度等表征信息;取小鼠脾脏、胸腺和睾丸称重并计算脏器指数;检测血清皮质酮和促肾上腺皮质激素(ACTH)含量;检测肾上腺功能相关基因表达和肾上腺低密度脂蛋白受体(LDLR)、B族Ⅰ型清道夫受体(SRBI)、类固醇合成急性调节蛋白(StAR)蛋白表达.结果 中剂量组和高剂量组干预7天和干预14天,小鼠体质量、脾脏质量、胸腺质量、脾脏指数、胸腺指数较正常对照组同时间下降,血清皮质酮和ACTH含量、肾上腺功能相关基因表达和肾上腺LDLR、SRBI、StAR蛋白均较正常对照组不同程度降低(P＜0.05),而各组小鼠抓力、腋温、旷场活动度、躯体不同部位红外温度差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 泼尼松龙造成的小鼠药源性虚证为阴虚证,该药源性虚证的物质基础可能以肾上腺皮质类固醇激素合成酶分子表达被抑制以及垂体-肾上腺皮质轴功能被抑制为主.