目的:探讨miRNA-133b（miR-133b）和miRNA-150（miR-150）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达情况及临床意义。方法:选取2018年6月至2019年6月连云港市第一人民医院手术并经病理确诊的30例NSCLC患者，收集患者术前清晨空腹外周血10 ml以及术后新鲜癌组织、癌旁组织（距离癌组织≤3 cm）、正常肺组织（距离癌组织>5 cm）。以30名同期健康体检者作为健康对照组，收集清晨空腹外周血10 ml。采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测两组受试者血清及NSCLC患者各组织中miR-133b、miR-150的相对表达量。分析NSCLC患者血清miR-133b、miR-150水平与临床病理特征的关系；以病理诊断为金标准，应用受试者工作特征（ROC）曲线判断miR-133b、miR-150诊断NSCLC的效能。结果:NSCLC患者中，miR-133b在癌、癌旁、正常肺组织中的相对表达量分别为0.55±0.17、0.68±0.11、0.69±0.12，癌组织中miR-133b表达水平低于癌旁组织和正常肺组织（均 P<0.01）；miR-150在癌、癌旁、正常肺组织中的相对表达量分别为1.19±0.14、1.13±0.13、1.09±0.12，癌组织与癌旁组织间miR-150表达水平差异无统计学意义（ t＝1.98， P＝0.051），癌组织中miR-150表达水平高于正常肺组织（ t＝3.06， P＝0.003）。NSCLC患者血清miR-133b相对表达量较健康对照组低（0.43±0.11比0.55±0.16， t＝3.68， P<0.05），miR-150相对表达量较健康对照组高（1.14±0.13比1.04±0.12， t＝-3.18， P<0.05）。NSCLC患者血清中miR-133b的表达水平与淋巴结转移有关（ P＝0.003），而与患者的性别、年龄、病理分型、TNM分期均不相关（均 P>0.05）。NSCLC患者血清中miR-150表达水平与各项临床病理特征均不相关（均 P>0.05）。根据ROC曲线，NSCLC患者血清中miR-133b、miR-150的曲线下面积分别为0.732、0.726，二者联合检测的曲线下面积为0.811。 结论:NSCLC患者癌组织和血清中miR-133b表达水平均降低，miR-150表达水平均升高，二者在NSCLC患者的癌组织与血清中的表达趋势一致。miR-133b可能与NSCLC的恶性程度和侵袭、转移有关。miR-133b、miR-150可能成为诊断NSCLC的分子标志物，二者联合检测的诊断效能更高。

目的:探讨miR-133a-5p靶向细胞间黏附分子1(ICAM1)对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞A549损伤的影响。方法:双荧光素酶报告基因分析法验证miR-133a-5p对ICAM1的靶向作用。体外用LPS诱导A549细胞，分为对照组、LPS组、LPS＋阴性对照(miR-NC)组、LPS＋miR-133a-5p组、LPS＋小干扰RNA(si)-NC组、LPS＋si-ICAM1组。采用实时荧光定量PCR检测miR-133a-5p和ICAM1 mRNA的表达水平；流式细胞仪检测细胞凋亡；Western blot检测ICAM1、Bcl-2、Bax和活化半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved caspase-3)蛋白的表达；酶联免疫吸附检测白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达。结果:与对照组比较，LPS组A549细胞miR-133a-5p的表达水平(0.39±0.04比1.00±0.09)显著降低，ICAM1的表达水平(0.86±0.08比0.39±0.03)显著升高，细胞凋亡率[(27.65±2.47)%比(8.13±0.89)%]显著升高，IL-6[(624.59±51.42) ng/L比(194.25±18.43) ng/L]和TNF-α[(548.35±51.42) ng/L比(174.26±19.43) ng/L]的分泌显著增加，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。与LPS＋miR-NC组比较，LPS＋miR-133a-5p组A549细胞凋亡率[(13.46±1.38)%比(28.71±2.54)%]显著降低，IL-6[(296.43±23.51) ng/L比(635.86±55.41) ng/L]和TNF-α[(321.14±30.56) ng/L比(563.24±49.52) ng/L]的分泌显著减少，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；与LPS＋si-NC组比较，LPS＋si-ICAM1组A549细胞凋亡率[(13.65±1.64)%比(23.51±2.33)%]显著降低，IL-6[(324.15±29.41) ng/L比(625.39±52.59) ng/L]和TNF-α[(334.65±20.46) ng/L比(534.97±51.42) ng/L]的分泌显著减少，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:miR-133a-5p能减轻LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤，其机制可能与下调ICAM1表达有关。

目的:研究二甲双胍对2型糖尿病患者微小RNA(miRNA)表达水平的影响，并利用网络药理学进行分析，预测其治疗作用潜在的靶点及途径。方法:筛选本院入院治疗的初发2型糖尿病患者15例，住院期间及出院后均规律服用盐酸二甲双胍片。患者服药6个月后，对比其用药前后血清基质金属蛋白酶(MMP)-9、转化生长因子(TGF)-β1及心肌纤维化相关miRNA的表达水平。对呈现统计学差异表达的miRNA进行基因本体论(GO)和KEGG通路富集分析，并构建差异表达miRNA对应靶基因信使RNA(mRNA)网络图。结果:患者用药后，血清MMP-9水平较用药前明显下降( P<0.05)。二甲双胍可显著下调患者血清人类微小RNA(hsa-miR) 29a-3p、hsa-miR133a-5p、hsa-miR21-5p、hsa-miR30c-5p、hsa-miR1-3p表达水平( P<0.05或 P<0.01)。GO和KEGG分析结果显示，差异表达miRNA主要集中在内质网腔、突触、基膜等细胞组分中，通过胶原分解代谢过程、短时神经元突触可塑性调节、轴突延伸等生物过程来发挥Rho GTP酶(Rho GTPase)结合、参与细胞外基质结构成分等分子功能；其主要富集于糖尿病并发症晚期糖基化终末产物-糖基化终末产物受体(AGE-RAGE)信号通路、肿瘤坏死因子(TNF)信号通路、Wnt信号通路等多种细胞信号转导通路。miRNA-mRNA网络分析结果显示，与差异表达miRNA对应mRNA共230个。 结论:二甲双胍可通过下调相关miRNA表达，参与相关细胞信号通路转导，调控染色质、核酸结合及酶活性过程而发挥其治疗2型糖尿病的作用。

目的:探讨miR-146b在甲状腺乳头状癌（papillary thyroid carcinoma, PTC）细胞增殖、转移和凋亡中的作用及相关机制。方法:qRT-PCR检测miR-146b在PTC细胞（NPA、GLAG-66、ONCNO-DG1和B-CPAP）和正常人甲状腺细胞系HTori3中的表达水平。miR-146b抑制剂转染B-CPAP细胞后，通过qRT-PCR检测其抑制效率，利用MTT实验、Transwell实验和流式细胞术分别检测miR-146b对PTC细胞增殖、侵袭能力及凋亡率的影响。SiRNA-IRAK1转染B-CPAP细胞后，利用MTT实验、细胞划痕实验和流式细胞术分别检测IRAK1对PTC细胞增殖率、转移及凋亡率的影响。利用生物信息学软件预测miR-146b的靶基因白介素1关联受体激酶1（interleukin-1 receptor-associated kinases, IRAK1），并通过双荧光素报告基因实验验证miR-146b对IRAK1的调控作用。应用SPSS 20.0软件进行分析，组间对比采用两独立样本 t检验。 结果:qRT-PCR结果表明，与正常细胞HTori3相比，miR-146b在NPA87、KAT-5、FTC-133和B-CPAP细胞系中表达显著升高，尤以B-CPAP较高[相对表达量1 vs（1.61±0.11）、（1.92±0.21）、（1.93±0.22）、（2.43±0.31）， P<0.05]。miR-146b抑制剂转染后可显著降低B-CPAP细胞中miR-146b的表达水平[相对表达量1 vs（0.41±0.12， P<0.01]。MTT结果发现，miR-146b抑制剂可抑制B-CPAP细胞的增殖能力[相对增殖率值1.00 vs（0.52±0.12）、（0.56±0.11）、（0.62±0.12）， P<0.05]。流式细胞仪检测发现，miR-146b抑制剂可促进B-CPAP细胞的凋亡能力[（3.74%±0.12%）vs（7.62%±0.21%）， P<0.05]。Transwell结果表明，miR-146b抑制剂可减弱B-CPAP细胞的侵袭能力[侵袭细胞数目（280.00±67.00）vs（82.00±32.00）， P<0.05]。转染入siRNA-IRAK1后，B-CPAP细胞增殖率显著升高[MTT实验，相对增殖率1 vs（2.11±0.21）、（2.33±0.18）、（2.21±0.16）]、转移能力增强[细胞划痕实验，24 h相对迁移率（0.58%±0.11%）vs（0.81%±0.21%）]且细胞凋亡率显著降低[流式细胞术，相对凋亡率（6.96%±1.12%）vs（24.30±1.52%）， P<0.05]。双荧光素酶报告基因结果显示，IRAK1是miR-146b的靶基因[相对荧光素酶活性（0.85±0.11）vs（1.19±0.17）， P<0.05]，miR-146b抑制剂可显著上调B-CPAP细胞中IRAK1蛋白的表达水平[相对灰度值1.00 vs（2.76±0.99）， P<0.05）]。 结论:miR-146b可能通过抑制下游靶蛋白IRAK1的表达来促进PTC细胞增殖、转移和抑制细胞凋亡的作用。

目的:筛选肝癌干细胞来源外泌体中差异表达的miRNA并分析其对肝癌细胞恶性生物学特征的影响。方法:采用miRNA表达谱芯片分析肝癌干细胞来源外泌体中差异表达的miRNA并鉴定miRNA对肝癌干细胞恶性表型的作用。采用不同浓度(0、150、300 μmol/L)多柔比星处理细胞，采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测miR-196a表达水平的变化；分别采用肝癌干细胞来源外泌体(Exo-NC组)、转染miR-196a抑制剂处理后的外泌体(Exo-Inhibitor组)培养肝癌细胞，检测肝癌细胞的凋亡情况以及caspase3/7的活性。按照随机数字表法将裸鼠分为Do-PBS组、Do-Exo-Inhibitor组、Do-Exo-NC组，每组各5只，采用裸鼠移植瘤实验分析miR-196a对肝癌细胞裸鼠移植瘤模型的作用。结果:本研究分离纯化了CD133 ＋ Huh7干细胞培养上清中的外泌体，发现miR-7162-3p、miR-1910-5p、miR-3613-3p、miR-196a、miR-155-5p表达上调，miR-1246和miR-3613-5p表达下调。外泌体中miR-7162-3p、miR-196a和miR-155-5p对肝癌干细胞的自我更新能力具有重要影响；miR-1910-5p、miR-196a和miR-155-5p对肝癌干细胞的侵袭能力具有重要影响，其中miR-196a的抑制效果最显著。在反应24 h时，多柔比星浓度在0、150、300 μmol/L时miR-196a的表达量分别为0.96±0.05、1.23±0.05和2.33±0.03，差异具有统计学意义( F＝996.90， P<0.001)；48 h时，多柔比星浓度在0、150、300 μmol/L时miR-196a的表达量分别为1.02±0.07、2.35±0.05和2.89±0.55，差异具有统计学意义( F＝303.00， P<0.001)。Exo-NC组肝癌细胞在多柔比星浓度为0和300 μmol/L时的细胞凋亡率分别为9.37%±0.19%和11.64%±0.27%，Exo-Inhibitor组分别为18.80%±1.91%和22.79%±1.57%，差异均具有统计学意义( t＝4.41， P＝0.048； t＝4.96， P＝0.038)。未使用多柔比星处理时，Exo-NC组在24 h和48 h的caspase3/7比值分别为0.94±0.08和0.97±0.09，Exo-Inhibitor组分别为1.56±0.01和1.58±0.01，差异均具有统计学意义( t＝11.41， P＝0.008； t＝6.07， P＝0.026)。使用300 μmol/L多柔比星处理细胞后，Exo-NC组在24 h和48 h的caspase3/7比值分别为0.95±0.07、1.36±0.08，Exo-Inhibitor组分别为2.84±0.08、3.20±0.14，差异均具有统计学意义( t＝24.20， P＝0.002； t＝15.78， P＝0.004)。Do-PBS组、Do-Exo-Inhibitor组和Do-Exo-NC组3组裸鼠的移植瘤体积依次增大，分别为(1 051.86±89.90)mm 3、(1 310.91±86.66)mm 3和(2 185.14±352.34)mm 3，差异具有统计学意义( F＝30.28， P<0.001)；3组移植瘤重量依次增加，分别为(0.36±0.10)g、(0.39±0.12)g和(0.76±0.16)g，差异具有统计学意义( F＝11.81， P＝0.002)；转染miR-196a抑制剂后裸鼠移植瘤肿瘤内miR-196a的表达显著降低，3组表达量分别为1.05±0.16、0.38±0.08和2.17±0.26，差异具有统计学意义( F＝48.93， P<0.001)。 结论:肝癌干细胞分泌的外泌体可通过其中的miR-196a增强肝癌细胞对多柔比星的耐药性。

目的:探索高糖诱导核糖核酸氧化增加对胰岛β细胞功能和活性的影响及分子机制。方法:体外培养大鼠胰岛β细胞瘤INS-1细胞，高糖干预后同位素稀释超高效液相串联质谱(ID LC MS/MS)评估核酸氧化。利用8-氧代鸟苷-5'-三磷酸酯(8-oxoGTP)体外模拟INS-1细胞RNA氧化增加，CCK-8评估细胞增殖，流式细胞术评估细胞凋亡，实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)评估胰岛素(INS)、胰-十二指肠同源盒1(PDX1)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Casp3)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶6(Casp6)基因信使RNA(mRNA)表达，全转录组测序分析RNA氧化影响INS-1细胞的分子机制。结果:高糖致INS-1细胞RNA氧化增加。RNA氧化增加抑制INS-1细胞增殖，降低INS和PDX1基因mRNA水平，促进凋亡相关casp3和casp6基因mRNA合成。全转录组测序分析发现，RNA氧化增加导致INS-1细胞内mRNA、长链非编码RNA(lncRNA)、微RNA(miRNA)和环状RNA(circRNA)差异表达，显著下调Mafa、Pdx1、Pax6和Mnx1转录因子，上调rno-miR-124-3p，rno-miR-133a-3p，rno-miR-3120，rno-miR-212-3p，rno-miR-7a-2-3p，促使相关lncRNAs差异表达，从而抑制胰岛素合成和分泌及β细胞增殖。结论:RNA氧化增加下调β细胞关键转录因子mRNAs水平，促使相关非编码RNA(ncRNA)特别是lncRNAs差异表达，影响β细胞胰岛素合成和分泌，抑制细胞增殖，是2型糖尿病(T2DM)β细胞功能障碍和活性降低的重要原因。

目的:探讨微小核糖核酸-133a(miR-133a)和沉默交配型信息调节2同源基因1(SIRT1)在电针促进废用性肌萎缩恢复中的作用。方法:将C57BL/6小鼠30只按随机数字表法随机分为正常组、实验对照组、实验组，每组10只小鼠，将实验对照组和实验组小鼠进行尾悬吊构建废用性肌萎缩模型，实验组在尾悬吊的同时进行电针刺激，刺激穴位为阳陵泉和足三里，每日刺激1次，每次15 min，连续治疗14 d。正常组和实验对照组则常规饲养，不进行任何干预。3组大鼠均于实验组干预14 d后统一取材，测定比目鱼肌、腓肠肌的湿重比和横截面积，采用透射电镜观察其骨骼肌和线粒体结构，Western Blot检测沉默交配型信息调节2同源基因1(SIRT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体C辅激活因子1a(PGC-1a)、尼克酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT)、腺苷酸活化蛋白激酶α(AMPK-a)以及磷酸化-AMPK-a(P-AMPK-a)蛋白的表达，实时荧光聚合酶链式反应(RT-PCR)检测肌肉萎缩F盒蛋白(Atrogin-1)、肌肉特异性环指蛋白1(MuRF1)、微小核糖核酸-133a(miR-133a)、SIRT1、配对盒基因(Pax7)、生肌调节因子(MyoD)和肌细胞生成素(MyoG)基因的表达，试剂盒检测尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)的浓度和NAD+/还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)。结果:干预14 d后，与实验对照组比较，实验组比目鱼肌的湿重和横截面积分别增加了21.03%、30.25%( P<0.05)，腓肠肌的湿重和横截面积与实验对照组比较，分别增加了5.24%、16.96%( P<0.05)。实验组Atrogin-1、MuRF1、SIRT1、PGC-1a、NAMPT、P-AMPK-a/AMPK-a的表达和NAD+浓度、NAD+/NADH均显著低于实验对照组( P<0.05)，而实验组miR-133a的表达则较实验对照组干预14 d后增加了163.3%( P<0.05)。干预14 d后，与细胞增殖相关的Pax7、MyoD基因在实验对照组中表达的显著上调，与正常组和实验组比较，差异均有统计学意义( P<0.05)；实验组与细胞分化相关的MyoG基因则呈高表达状态，与正常组和实验对照组比较，差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:SIRT1相关通路属于机体反射性保护机制之一，参与介导骨骼肌的自然恢复；电针刺激经miR-133a/SIRT1增强成肌细胞分化，改善线粒体能量代谢，从而促进废用性肌萎缩的恢复。

目的:探讨利拉鲁肽对2型糖尿病(T2DM)患者血清miRNA表达谱及相关细胞信号通路蛋白水平的影响。方法:选取唐山市人民医院于2020年10月至2021年10月期间收治的26例T2DM患者，均接受利拉鲁肽治疗，所有患者持续治疗3个月，比对治疗前后血清miRNA变化情况，采用 Pearson相关分析hsa-miR29a-3p变化值与血清基质金属蛋白酶9(MMP-9)、转化生长因子(TGF)-β1变化值的相关性。对治疗前后表达水平变化差异显著的miRNA行基因本体论(GO)和KEGG通路富集分析，以及miRNA-mRNA网络分析。 结果:治疗后患者的糖化血红蛋白A1c(HbAlc)、空腹血糖(FPG)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)、MMP-9以及TGF-β1水平均明显降低，而高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)水平明显增加( P均<0.05)。治疗后hsa-miR1-3p、hsa-miR21-5p、hsa-miR29a-3p、hsa-miR30c-5p、hsa-miR133a-5p、hsa-miR500-5p、hsa-mi6806-5p均明显降低( P均<0.05)，其中hsa-miR29a-3p降低程度最明显( P<0.001)。 Pearson相关分析显示hsa-miR29a-3p变化值与MMP-9、TGF-β1变化值均呈正相关( r＝0.638，0.586)，差异有统计学意义( P均<0.05)。GO分析结果显示：胶原分解代谢过程、轴突延伸以及细胞黏附占生物过程前3位。细胞组分中内质网腔、突触后密度以及细胞连接占据前3位。分子功能中Rho GTPase结合、细胞外基质结构成分、磷脂酰肌醇3磷酸结合占据前3位。KEGG分析显示：差异表达基因主要富集于晚期糖基化终末产物受体信号通路、肿瘤坏死因子信号通路、Wnt信号通路( P均<0.05)。miRNA-mRNA网络分析显示差异表达miRNA对应244个靶基因mRNA。 结论:T2DM患者经利拉鲁肽治疗后，血清hsa-miR29a-3p等与炎症、胶原分解代谢过程相关的miRNA表达下调，可能有利于减少患者心肌纤维化。

Background::Recent studies have demonstrated that microRNAs (miRNAs) in the blood circulation can serve as promising diagnostic markers for cancers. This four-stage study aimed at finding serum miRNAs as potential biomarkers for lung adenocarcinoma (LA) diagnosis.Methods::The study was carried out between 2016 and 2017. The Exiqon miRNA qPCR panel (3 LA vs. 1 normal control [NC] pooled serum samples) was used for initial screening to acquire miRNA profiles. Thirty-five dysregulated miRNAs were further evaluated in the training (24 LA vs. 24 NCs) and testing stages (110 LA vs. 110 NCs) using quantitative real-time polymerase chain reaction assays. Results::Four serum miRNAs (miR-133a-3p, miR-584-5p, miR-10b-5p, and miR-221-3p) were significantly overexpressed in LA patients compared with NCs. The diagnostic value of the four-miRNA panel was validated by an external cohort (36 LA vs. 36 NCs). The areas under the receiver operating characteristic curve of the four-miRNA panel in the training, testing, and external validation stages were 0.734, 0.803, and 0.894 respectively. Meanwhile, the expression level of miR-221-3p was much higher in LA tumor samples than that in the adjacent normal tissues (19 LA vs. 19 NCs). The expression level of miR-10b-5p was also elevated in the serum-derived exosomes samples (18 LA vs. 18 NCs). The expression of miR-133a-3p, miR-584-5p, and miR-10b-5p was significantly elevated in LA patients with epidermal growth factor receptor mutation compared with NCs. Conclusion::The study established a four-miRNA signature in serum that could improve the diagnostic capability of LA.

目的:探究微小RNA(miRNA，miR)-143通过调控Kras的表达影响前列腺癌PC-3细胞的增殖与迁移的机制。方法:选用购自美国典型培养物保藏中心细胞株PC-3，保持在补充有10%胎牛血清(Hyclone)的F-12培养基(Hyclone)中。细胞在5%CO 2和37 ℃的湿润环境下生长。根据实验需求对细胞进行实验分组，随机分为PC-3转染组、PC-3对照组。通过细胞计数试剂盒(CCK-8)试剂盒对细胞活力进行测定。通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组细胞中miR-143与Kras mRNA表达；通过蛋白质印迹反应检测各组细胞因子CD133、Oct4、Klf4的蛋白表达情况。组间比较采用单因素方差分析或者重复测量的方差分析，组间两两比较采用LSD- t检验。 结果:RT-qPCR分析各组miR-143 mRA和Kras mRNA表达为：miR-143 mRNA PC-3对照组(1.06±0.02)较PC-3转染组(3.17±0.23)降低；Kras mRNA PC-3对照组(2.75±0.11)较PC-3转染组(1.23±0.03)升高，差异有统计学意义( t＝5.167， P<0.05)。蛋白印迹检测发现CD133、Oct4、Klf4的蛋白表达PC-3对照组(2.67±0.11、3.18±0.23、2.84±0.26)较PC-3转染组(1.15±0.03、1.26±0.14、1.18±0.15)升高，差异有统计学意义( t＝4.862， P<0.05)。细胞活力检测发现PC-3对照组(1.62±0.14)较PC-3转染组(0.58±0.02)细胞活力值升高，差异有统计学意义( t＝4.154， P<0.05)。 结论:miR-143可通过抑制Kras的基因表达来控制前列腺PC-3的增殖及迁移状况，miR-143的高表达可有效抑制前列腺癌细胞的增殖及侵袭。