目的:探讨低氧培养骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs）来源的外泌体中miR-196b-5p对软骨细胞功能的影响及作用机制，并分析其在软骨再生修复中的应用。方法:将软骨细胞分别在常氧培养和低氧培养的BMSCs上清液中培养，通过CCK-8检测软骨细胞的增殖能力，qPCR检测Ⅱ型胶原（collagen type 2，Col2）、Col1、Aggrecan、 SOX9的表达情况，评估低氧培养后BMSCs的外泌体对软骨细胞功能的影响。通过超速离心法获取常氧外泌体和低氧外泌体，采用CCK-8和qPCR检测对比低氧BMSCs外泌体和常氧BMSCs外泌体对软骨细胞增殖及合成代谢相关基因表达的促进作用。验证外泌体miRNA测序结果中低氧外泌体miR-196b-5p的表达情况，敲除低氧BMSCs中miR-196b-5p进行功能抑制实验，对比miR-196b-5p在低氧外泌体促进软骨细胞功能中发挥的作用。使用生物信息学工具预测并验证miR-196b-5p下游靶点。通过转染siRNA分析低氧BMSCs外泌体中miR-196b-5p促进软骨细胞功能的作用机制。采用丝素水凝胶负载低氧外泌体及低表达miR-196b-5p的低氧外泌体，注入裸鼠皮下后培养4周后对取出的组织块行番红O、马松组织学染色及硫酸糖胺聚糖、胶原生化含量检测，评估低氧外泌体及miR-196b-5p在软骨再生修复中的应用情况。 结果:低氧组软骨细胞吸光度为1.20±0.07，较常氧组的0.94±0.04高，差异有统计学意义（ P<0.05）；低氧组软骨细胞Col2（2.95±0.17）、Aggrecan（2.45±0.27）、 SOX9（2.92±0.29）的表达高于常氧组（1.89±0.09、1.67±0.21、1.76±0.16），差异有统计学意义（ P<0.05）。CCK-8示低氧外泌体组软骨细胞的增殖能力（1.28±0.04）较常氧外泌体组（1.05±0.06）更高，差异有统计学意义（ P<0.05）。PmirGLO-BACH1-WT报告载体与miR-196b-5p mimics共转染后（0.73±0.06）的荧光素酶活性降低，差异有统计学意义（ P<0.05）；PmirGLO-BACH1-MUT报告载体与miR-196b-5p mimics共转染后，荧光素酶活性无变化，BACH1为miR-196b-5p下游靶点；裸鼠皮下组织培养生化含量分析显示低氧BMSCs外泌体组软骨基质sGAG（383.2±21.54）和胶原含量（67.40±3.45）增多，低氧BMSCs外泌体miR-196b-5p敲低组sGAG（258.4±19.50）和胶原含量（57.15±4.95）降低，差异均有统计学意义（ P<0.05）。 结论:低氧外泌体通过miR-196b-5p抑制软骨细胞中BACH1的表达，促进软骨细胞功能，可应用于软骨再生修复。

目的:探究过量氟暴露对小鼠睾丸微小RNA（microRNA，miRNA）表达谱的影响，并探讨氟的生殖毒性机制。方法:24只8周龄C57BL/6J雄性小鼠，体重为（23 ± 1）g，按体重采用随机数字表法分为对照组[0 mg/L氟化钠（NaF）]和氟暴露组（50 mg/L NaF），每组12只，处理90 d后麻醉处死小鼠，采集精子检测其数量、活率、畸形率，并对睾丸组织进行HE染色；提取小鼠睾丸组织RNA，利用高通量测序技术检测氟对小鼠睾丸miRNA表达谱的影响，并进行差异表达miRNA筛选及其靶基因预测，同时进行功能注释和通路富集分析；利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）验证差异表达miRNA的表达量。结果:与对照组[精子数量：（11.30 ± 2.52）× 10 6/ml、活率：（90.07 ± 4.34）%、畸形率：（15.49 ± 3.25）%]相比，氟暴露组小鼠精子数量[（9.01 ± 2.25）× 10 6/ml]和活率[（84.34 ± 4.21）%]均下降（ P = 0.041、0.003），而畸形率[（22.36 ± 6.51）%]上升（ P = 0.003）；且HE染色显示，氟暴露组小鼠睾丸间质间距增大，生精小管管腔内精子数量减少，细胞排列紊乱。通过测序，发现氟暴露组小鼠睾丸中存在34个差异表达miRNA；经qRT-PCR验证，与对照组相比，氟暴露组小鼠睾丸mmu-miR-29b-1-5p（ P < 0.001）、mmu-miR-196a-5p（ P = 0.002）和mmu-miR-196b-5p（ P = 0.031）的表达量均显著上升；而mmu-let-7a-2-3p（ P < 0.001）和mmu-miR-466n-3p（ P = 0.018）的表达量均明显下降，与测序结果一致。通过对差异表达miRNA靶基因的KEGG富集，发现氟暴露可改变小鼠睾丸中轴突导向（axon guidance）信号通路、嗅觉传导（olfactory transduction）通路、神经活动配体-受体相互作用（neuroactive ligand-receptor interaction）通路和溶酶体（lysosome）信号通路等。 结论:氟暴露可能通过改变睾丸中miRNA的表达谱，以及通过介导转录后调节的信号通路进而诱导睾丸损伤。睾丸miRNA可能是氟生殖毒性的潜在生物标志物，可为氟中毒机制的探究提供新思路和观点。

目的 探讨血浆外泌体中与食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)发生相关的microRNAs(miRNAs),并评估其在ESCC诊断中的应用价值.方法 选取2020年3月至2021年6月山东大学第二医院胸外科收治的55例ESCC患者为ESCC组,另选取55例健康体检者为对照组,提取受试者血浆外泌体,并通过透射电镜、NanoSight粒径分析及 Western blotting进行鉴定.筛选阶段,送检对照组、ESCC组术前血浆外泌体RNA各5例进行测序.采用qRT-PCR法对训练集、验证集中差异性miRNAs分子表达进行检测,并通过受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估差异性miRNAs分子的诊断价值.结果 测序结果显示,与对照组相比,5 个 miRNAs(miR-548k、miR-6516-5p、let-7b-3p、miR-3934-5p、miR-196a-5p)在 ESCC 组血浆外泌体中表达显著上调,8 个 miRNAs(miR-34c-5p、novel_1 67、miR-548u、miR-548ah-3p、miR-548p、miR-200a-5p、miR-200b-3p、miR-1228-5p)明显下调.通过训练队列证实,miR-548k在ESCC组血浆外泌体中明显上调(P＜0.001),血浆外泌体 miR-548k 用于 ESCC 诊断时 ROC 曲线下面积(area under curve,AUC)为 0.918,明显优于 miR-34c-5p、miR-548u、miR-6516-5p.通过验证队列进一步证实,miR-548k在ESCC组血浆外泌体中高表达(P＜0.001),血浆外泌体miR-548k可用于ESCC患者诊断(AUC值为0.889).结论 miR-548k在ESCC组血浆外泌体中表达显著增高,血浆外泌体miR-548k对ESCC诊断有一定的临床应用价值.

目的 探讨老年冠心病患者经皮冠状动脉介入(PCI)术后血清细胞间黏附分子(ICAM)-1、微小RNA(miR)-19b、视黄醇结合蛋白(RBP)4 水平变化及意义.方法 选取因行PCI术住院治疗的老年冠心病患者 115 例,根据PCI术后6 个月的随访结果分为预后不良组 24 例,预后良好组 91 例.收集老年冠心病患者的性别、年龄、体质量指数(BMI)、饮酒史、吸烟史、发病至球囊扩张时间、多支病变、病程、支架长度、支架直径,病变部位(右冠状动脉、左前降支、左回旋支),冠状动脉Gensini评分.分别于PCI术前、术后 3 d采集外周静脉血5 ml,分离血清,检测血清ICAM-1、RBP4 水平及miR-196 表达.PCI术后进行 6 个月随访,记录主要不良心血管事件发生情况.结果 预后不良组发病至球囊扩张时间、多支病变比例、冠状动脉Gensini评分明显高于预后良好组(P＜0.05).老年冠心病患者PCI术后3 d血清ICAM-1、RBP4 浓度明显低于术前,血清miR-19b表达水平明显高于术前(P＜0.01).预后不良组血清ICAM-1、RBP4 水平明显高于预后良好组,血清miR-19b表达水平明显低于预后良好组(P＜0.05).多支病变比例、冠状动脉Gensini评分及血清ICAM-1、miR-19b、RBP4 水平是PCI预后的独立影响因素.受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,血清ICAM-1、miR-19b、RBP4 对老年冠心病患者PCI预后均具有较高的预测价值(P＜0.01).将血清ICAM-1、miR-19b、RBP4 纳入Logistic回归模型结果显示,各指标联合检测的预测价值最高[曲线下面积(AUC)= 0.942].结论 老年冠心病患者PCI术后3 d血清ICAM-1、RBP4 浓度明显下降,血清miR-19b表达水平明显升高;血清ICAM-1、miR-19b、RBP4 联合检测可用于患者PCI预后评估.

目的 筛选并鉴定靶向调控蚊虫细胞色素P450s酶系(CYP450s)基因的miRNA,分析差异表达miRNA及其靶基因的功能.方法 采集氯氰菊酯敏感(CS)和抗性(CR)品系的淡色库蚊Ⅲ、Ⅳ龄幼蚊各10只、羽化后3d未吸血雌成蚊5只,分别提取总RNA并测序,采用DEGseq软件计算CS和CR品系miRNA的表达差异.使用RNAhybrid软件和miRanda软件筛选差异表达miRNA的靶基因,并进行基因本体论(GO)显著性富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析.选取5个可能调控CYP450s基因表达的差异表达miRNA(miR-11-5p、miR-317_3、miR-278-3p_1、miR-8-5p、miR-305-3p_5)进行实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证测序数据的准确性.qRT-PCR检测 5个差异表达miRNA靶基因(CYP6a8、CYP6BB1v2、CYP6N22、CYP6N26P、CYP9b2)的相对表达水平.结果 测序结果显示,CS、CR品系淡色库蚊间差异表达的miRNA共有196个,只在Ⅲ龄幼蚊中差异表达的占16.3％(32/196),只在Ⅳ龄幼蚊中差异表达的占20.4％(40/196),只在雌成蚊中差异表达的占26.0％(51/196),在3个阶段都差异表达的miRNA占12.2％(24/196).Ⅲ龄幼蚊阶段差异表达的91个miRNA中,有45个上调、46个下调;Ⅳ龄幼蚊阶段差异表达的104个miRNA中,有59个上调、45个下调;雌成蚊阶段差异表达的98个miRNA中,有44个上调、54个下调.GO显著性富集分析和KEGG通路富集分析结果显示,差异表达miRNA的靶基因主要与细胞途径、代谢途径、单细胞生物途径等相关,分子功能主要为结合、催化活性、转运体活性等,主要富集在信号传输、传染性疾病、癌症、寄生虫病等相关通路.qRT-PCR结果显示,5个差异表达miRNA的上调、下调趋势与测序结果基本一致,表达情况与其对应的靶基因(CYP6a8、CYP6BB1v2、CYP6N22、CYP6N26P和CYP9b2)的表达情况相反.结论 本研究所筛选的5个差异表达miRNA(miR-11-5p、miR-317_3、miR-278-3p_1、miR-8-5p、miR-305-3p_5)能够通过调节CYP450s基因表达来调控淡色库蚊的抗药性.

目的 探讨微小RNA(miR)-152和miR-146b-5p在子宫内膜息肉中的表达,及其对术后复发的预测价值.方法 收集2021年1月至2022年10月在石家庄市第六医院接受宫腔镜息肉切除术的196例子宫内膜息肉患者作为子宫内膜息肉组,根据患者术后6个月的复发情况分为复发组(53例)和未复发组(143例),另选取同期因不孕症进行宫腔镜检查的196例患者作为对照组.采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测子宫内膜息肉组织和正常子宫内膜组织中miR-152、miR-146b-5p相对表达水平,并进行组间比较;采用多因素Logistic回归分析子宫内膜息肉患者术后复发的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析子宫内膜息肉中miR-152、miR-146b-5p相对表达水平对子宫内膜息肉患者术后复发的预测价值.结果 复发组miR-152、miR-146b-5p相对表达水平、孕激素受体(PR)水平明显低于未复发组和对照组(P<0.05),血管内皮生长因子(VEGF)、雌激素受体(ER)水平明显高于未复发组和对照组(P<0.05);未复发组 miR-152、miR-146b-5p相对表达水平、PR水平明显低于对照组(P<0.05),VEGF、ER水平明显高于对照组(P<0.05).进一步研究显示,miR-152、miR-146b-5p、VEGF、ER、PR是子宫内膜息肉患者术后复发的影响因素(P<0.05).miR-152、miR-146b-5p二者联合预测子宫内膜息肉患者术后复发的曲线下面积(AUC)为0.949,灵敏度为96.23%,特异度为74.02%,优于二者各自单独预测(Z联合检测-miR-152=4.854、Z联合检测-miR-146b-5p=3.431,P<0.001).结论 子宫内膜息肉组织中miR-152、miR-146b-5p表达明显下调,二者联合对预测子宫内膜息肉患者术后复发有较好的参考价值.

目的:探讨精神分裂症患者及正常人群血浆外泌体微小RNA(miRNA)的差异表达,初步了解差异表达miRNA在精神分裂症病程发展中的作用.方法:采用高通量测序技术检测48 例精神分裂症患者和48 名健康对照者的血浆外泌体miRNA的表达水平,构建miRNA差异表达谱.预测表达差异显著的miRNA的靶基因,再对靶基因进行GO功能注释和KEGG通路分析,确定差异表达miRNA的主要生物学功能及其可能参与的信号通路.结果:与对照组相比,精神分裂症患者血浆外泌体共筛选出353 个miRNA显著异常表达,其中157 个表达上调,196 个表达下调.通过GO富集和KEGG分析,上述差异表达的miRNAs主要涉及神经元细胞体、谷氨酸能突触、神经元间突触、突触前和突触膜等细胞组成,并主要参与轴突新生、化学突触传递调节、跨突触信号调节等生物过程,可能通过MAPK信号通路、PI3K Akt信号通路、TNF信号通路、Wnt信号通路、FoxO信号通路、多巴胺能突触及Hippo等信号通路参与精神分裂症的发生和发展过程.结论:经药治疗精神分裂症患者血浆外泌体中miRNAs存在显著的差异性表达,miRNA-206、miR-142-5p、miR-139-5p、miR-133b等miRNA可能通过MAPK信号通路、PI3K Akt信号通路等在精神分裂症的发生发展过程中发挥重要作用.

目的 探讨原发性肝癌(primary carcinoma of the liver)患者血清微小核糖核酸(microRNA,miR)-196b,微小核糖核酸(microRNA,miR)-520f表达水平及其临床诊断价值.方法 选择 2020 年 6 月～2022 年 6 月攀枝花学院附属医院收治的 73 例原发性肝癌患者作为研究组,患者均符合《原发性肝癌诊疗规范》中的诊断标准;选择同期医院体检的 80 例健康人群作为对照组.抽取研究对象清晨空腹外周静脉血 5ml,采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(real time fluorescent quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测两组血清miR-196b和miR-520f表达水平.分析不同临床病理特征原发性肝癌患者血清miR-196b和miR-520f表达水平差异,采用Pearson相关性分析探讨血清miR-196b与miR-520f的关系,采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析血清miR-196b和miR-520f对原发性肝癌的诊断价值.结果 研究组血清miR-196b表达水平(2.73±0.56)明显高于对照组(0.99±0.24),miR-520f表达水平(1.69±0.44)明显低于对照组(3.34±0.64),差异具有统学意义(t=30.578,12.690,均P＜0.05).与Ⅰ～Ⅱ期、中高分化、无淋巴结转移、肿瘤直径＜5cm患者相比,Ⅲ～Ⅳ期、低分化、淋巴结转移和肿瘤直径≥5cm患者血清miR-196b表达水平均升高,miR-520f表达水平均降低,差异具有统计学意义(tmiR-196b=6.919～13.229,tmiR-520f=3.873～7.814,均P＜0.05).Pearson相关性分析显示,原发性肝癌患者血清miR-196b表达水平与miR-520f表达水平呈负相关(r=-0.445,P=0.006).ROC曲线分析显示,血清miR-196b预测原发性肝癌的曲线下面积、截断值、敏感度、特异度及95%置信区间(95%confidence interval,95%CI)分别为0.842,2.55,91.78%,62.50%和 95%CI(0.810～0.874);miR-520f预测原发性肝癌的的曲线下面积、截断值、敏感度、特异度及95%置信区间分别为 0.872,2.43,91.78%,67.50%和 95%CI(0.848～0.906);血清miR-196b联合miR-520f预测原发性肝癌的曲线下面积、敏感度、特异度及95%置信区间分别为0.923,86.30%,87.50%和95%CI(0.891～0.955).结论 原发性肝癌患者血清miR-196b表达水平上调,miR-520f表达水平下调,其表达水平变化与肿瘤直径、临床分期、分化程度和淋巴结转移密切相关,联合检测血清miR-196b与miR-520f能有效提高原发性肝癌的诊断效能.

目的:研究微小RNA(miR)-196b在结直肠癌患者中的表达及其临床意义,探讨过表达miR-196b的结直肠癌细胞对5-氟尿嘧啶(5-FU)的敏感性.方法:在癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)公共数据库下载结直肠癌患者miRNA测序数据及其对应的临床病理资料,运用SPSS 17.0分析miR-196b在结直肠癌患者中的表达水平以及临床特征;采用瞬时转染的方法在人结直肠癌HCT116细胞中过表达miR-196b,并用MTS法分析过表达miR-196b的细胞对5-FU药物敏感性的变化.结果:miR-196b高表达与结直肠癌患者淋巴结转移及TNM分期相关(P<0.05),与年龄和性别等无相关性.淋巴结转移和远处转移是直肠癌患者生存的独立影响因子(P<0.05),miR-196b的表达水平与患者生存状况无关.过表达miR-196b的HCT116细胞在不同浓度的5-FU作用下,细胞存活率均明显高于对照组(P<0.05).结论:miR-196b可能是结直肠癌患者肿瘤分期和淋巴结转移的分子标志物,并可降低结直肠癌细胞对5-FU的敏感性.

目的 筛选不同转移潜能肝癌细胞株的 microRNA (miRNA)差异表达谱,并预测分析差异表达miRNAs调控的靶基因与功能.方法 提取总RNA进行miRNA芯片分析,通过分析MHCC-97H(高转移)、Hep3B(不转移)两种不同转移潜能肝癌细胞株与正常肝细胞L02比较,以及两种肝癌细胞株相互比较的miRNA差异表达谱,筛选出差异表达明显的miRNAs进行qRT-PCR验证,利用4个靶基因预测软件(TargetScan、miRanda、miRWalk、miRDB)进行靶基因预测,并通过生物信息学分析来探讨候选靶基因的生物学功能.结果 与正常肝细胞 L02相比,肝癌细胞株 MHCC-97H、Hep3B中的 miR-192-5p、miR-215-5p 表达均明显上调,而miR-130a-3p、miR-196a-5p 则明显降低;与不转移肝癌细胞株Hep3B相比,miR-224-5p在肝癌细胞株 MHCC-97H中明显上调,而miR-146a-5p、miR-483-3p、miR-200b-3p则明显降低.qRT-PCR验证结果与芯片结果相一致.结论 MHCC-97H及Hep3B两种转移能力不同的肝癌细胞株的 miRNAs存在差异表达,这些差异表达的miRNAs与肝细胞癌的发生发展、转移侵袭密切相关.