目的:探讨miRNA-144在2型糖尿病足溃疡(DFU)患者外周血中的表达及与病程发生发展的相关性。方法:回顾性选取2020年3月至2022年6月中国人民解放军西部战区总医院收治的106例DFU患者作为观察组，另选取同期本院收治的未患有DFU的106例2型糖尿病(T2DM)患者作为对照组。根据DFU患者外周血miRNA-144表达水平的中位数作为分割点，将观察组的106例患者分为低表达组和高表达组。比较观察组和对照组的临床资料，分析不同miRNA-144表达水平与DFU患者临床特征的关系；对DFU患者病程发生发展的相关因素进行多因素分析并构建列线图模型进行模型验证。结果:观察组糖尿病病程、空腹血糖(FPG)、红细胞沉降率(ESR)、糖化血红蛋白(HbA 1c)、白细胞计数(WBC)、C反应蛋白(CRP)、促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、白细胞介素-6(IL-6)、肾上腺素(E)、去甲肾上腺素(NE)、皮质醇(Cor)以及miRNA-144表达水平显著高于对照组，而经皮氧分压(TcPO 2)、踝肱指数(ABI)、甘油三酯(TG)和血红蛋白(Hb)则显著低于对照组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。miRNA-144高表达组DFU患者8周后溃疡愈合率、Wagner分级、溃疡病程与低表达组比较差异有统计学意义(均 P<0.05)。多因素回归分析结果显示，糖尿病病程>5年、HbA 1c>8.5%、TcPO 2<60 mmHg、CRP>10 mg/L、Cor>190 μg/L以及miRNA-144表达水平>35是T2DM患者发生DFU的独立危险因素，以上因素构建列线图预测模型后总分315分，对应DFU发生发展概率为72.56%。 结论:DFU患者外周血中miRNA-144表达水平与病程发生发展有显著相关性，且糖尿病病程以及HbA 1c、TcPO 2、CRP、Cor水平变化均为DFU发生发展的独立危险因素，临床应重点关注。

目的:探讨微小RNA-92a-3p （micro RNA-92a-3p, miR-92a-3p）靶向调控PTEN对神经母细胞瘤（neuroblastoma，NB）细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:采用miR-92a-3p mimics及其抑制基因（inhibitor）分别转染至SH-SY5Y细胞，根据实验需要分为miR-92a-3p过表达组、NC过表达组、miR-92a-3p抑制组、NC抑制组，采用实时荧光定量聚合酶链反应（real time fluorescent quantitative polymerase chain reaction，qRT-PCR）检测转染后细胞内miR-92a-3p的表达水平；采用CCK-8检测实验、细胞克隆形成实验、细胞划痕实验、细胞侵袭实验检测miR-92a-3p对细胞增殖、侵袭和迁移能力的变化；采用基因软件预测miR-92a-3p的靶基因并用双荧光素酶报告体系进行验证；最后采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测过表达miR-92a-3p和抑制miR-92a-3p后对PTEN/PI3K/AKT信号通路相关分子的表达情况。结果:qRT-PCR结果显示miR-92a-3p过表达组的表达含量（65.73±20.07）比miR-92a-3p抑制组的表达含量（0.33±0.02）显著增高，且差异有统计学意义（ t=5.64， P=0.005）。CCK-8检测实验显示，miR-92a-3p过表达组能促进SH-SY5Y细胞的增殖活性（ P均<0.001 ），miR- 92a-3p抑制组则能有效抑制SH-SY5Y细胞的增殖活性（ P=0.031， P=0.012， P<0.001， P<0.001）。细胞克隆形成实验结果显示，miR-92a-3p过表达组的细胞克隆数为（210±19）个，高于NC过表达组的细胞克隆数（144±5）个，组间比较差异有统计学意义（ P=0.005）；miR-92a-3p抑制组的细胞克隆数为（83±6）个，低于NC抑制组的细胞克隆数（137±13）个，组间比较差异有统计学意义（ P＝0.003）。细胞划痕实验及细胞侵袭实验结果显示，miR-92a-3p过表达组细胞迁移愈合率为（90.37±0.67）%，高于miR-92a-3p抑制组（41.03±0.56）%，组间比较差异有统计学意义（ P<0.001）；miR-92a-3p过表达组细胞穿膜数量为（106.80±9.28）个，高于miR-92a-3p抑制组（33.40±7.56）个，组间比较差异有统计学意义（ P<0.001）。qRT-PCR和蛋白质印迹法结果显示，与NC过表达组相比，miR-92a-3p过表达组PTEN的mRNA表达量（0.43±0.02）和蛋白水平明显降低，而PI3K mRNA表达量（2.00±0.10）、AKT mRNA表达量（1.41±0.19）和各自蛋白水平明显升高，且差异均有统计学意义（ P<0.001、 P< 0.001和 P=0.028）；miRNA-92a-3p抑制组可逆转上述作用，且差异均有统计学意义（ P＝0.043、 P= 0.046和 P<0.001）。 结论:PTEN基因是miR-92a-3p的靶基因，miR-92a-3p可能通过促进NB细胞增殖、促进NB细胞侵袭、促进NB细胞迁移和抑制PTEN mRNA表达引发PTEN蛋白水平的降低。

目的:研究微小RNA-144-3p(miRNA-144-3p)靶向调控配对盒基因8(PAX8)对甲状腺癌细胞顺铂耐药性的影响。方法:体外培养人甲状腺癌细胞株FTC-133，并构建对顺铂耐药的人甲状腺癌细胞株FTC-133，采用反转录PCR(RT-PCR)检测FTC-133细胞和顺铂耐药FTC-133细胞中miRNA-144-3p相对表达量。将顺铂耐药FTC-133细胞分为A组、B组、C组，A组不作任何处理，B组转染空质粒，C组转染pCDNA3. 1＋miRNA-144-3p质粒，采用RT-PCR检测各组miRNA-144-3p、PAX8相对表达量，采用MTT法检测各组顺铂耐药细胞的半数抑制浓度(IC 50)值；采用CCK-8法检测各组增殖率，采用流式细胞术检测各组凋亡率。 结果:顺铂耐药FTC-133细胞中miRNA-144-3p相对表达量显著高于FTC-133细胞[(0.93±0.24) vs (0.26±0.04), P<0.05]；B组顺铂耐药FTC-133细胞IC 50值、增殖率、凋亡率及miRNA-144-3p、PAX8相对表达量与A组比较差异无统计学意义( P>0.05)；C组顺铂耐药FTC-133细胞IC 50值、增殖率及miRNA-144-3p相对表达量显著高于B组( P<0.05)，细胞凋亡率、PAX8相对表达量显著低于B组( P<0.05)。 结论:miRNA-144-3p过表达可能通过下调PAX8基因表达而增加甲状腺癌细胞的顺铂耐药性，促进甲状腺癌细胞增殖并抑制其凋亡。

目的:筛选针刺内迎香穴治疗变应性鼻炎(AR)大鼠血浆外泌体中差异表达的miRNA,并对其进行生物信息学分析,探讨针刺内迎香穴治疗AR的可能作用机制.方法:将30只SPF级SD大鼠随机分为空白组(Ko组)、模型组(Mu组)和针刺组(Zh组),每组各10只.模型组和针刺组采用卵清蛋白腹腔注射及鼻黏膜刺激法建立变应性鼻炎大鼠模型,造模后对针刺组大鼠予针刺内迎香穴进行干预,每周2次,连续3周.HE染色观察鼻黏膜病理形态改变;超速离心法提取大鼠血浆外泌体,透射电镜(TEM)和粒径分析(NTA)检测外泌体形态和粒径浓度;高通量测序以P＜0.05的标准筛选大鼠血浆外泌体中显著差异表达的miRNA;利用miRanda和Targetscan得出差异表达miRNA靶基因,进行基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析.结果:针刺作用关键miRNA共有10个,其中5个上调,5个下调,共得出7 408个靶基因,涉及1 130个生物过程、158个细胞组分、166个分子功能,KEGG信号通路有31条(P＜0.05).结论:针刺内迎香穴可明显改善AR大鼠鼻黏膜组织炎性细胞浸润情况,其机制可能与通过调节 rno-miR-92a-3p、rno-let-7d-3p、rno-miR-328a-3p、rno-miR-223-3p、rno-miR-23a-3p、rno-miR-451-5p、novel_314、rno-miR-144-5p、rno-miR-23b-3p及rno-miR-144-3p的表达,进而调控MAPK信号通路有关.

[目的]研究环形 RNA circ_0120051对心肌成纤维细胞的纤维化表型的调控作用和机制.[方法]通过实时萤光定量PCR(RT-qPCR)检测健康器官捐献者(n=24)与心力衰竭(HF)病人(n=21)心肌标本中 circ_0120051及其宿主基因溶质载体家族8成员A1(SLC8A1)的表达水平.核糖核酸外切酶(RNase R)消化实验鉴定circ_0120051的RNA稳定性.RT-qPCR检测circ_0120051在人心肌细胞AC16中的核质分布情况.利用腺病毒在C57BL/6乳小鼠心肌成纤维细胞(mCFs)中过表达circ_0120051,通过RT-qPCR和Western blot检测过表达circ_0120051对mCFs中纤维化相关基因表达的影响,利用细胞划痕实验检测对mCFs迁移能力的影响.通过RNA免疫共沉淀技术(RIP)验证circ_0120051与miR-144-3p间的结合作用,利用双萤光素酶报告基因实验鉴定miR-144-3p与靶基因异柠檬酸脱氢酶2(Idh2)3'-UTR的结合位点.[结果]Circ_0120051在心衰病人心肌中表达显著增加,而其宿主基因SLC8A1表达无显著差异.Circ_0120051主要定位于人心肌细胞的胞质中.RNase R消化实验证实circ_0120051相对于线性SLC8A1 mRNA具有典型的环状RNA稳定性.过表达circ_0120051可抑制mCFs中纤维化相关基因表达和mCFs的迁移能力.RIP实验证实circ_0120051与miR-144-3p之间具有明显结合作用.在mCFs中转染miR-144-3p可促进纤维化相关基因的表达,并有效逆转circ_0120051对mCFs纤维化表型的抑制作用.双萤光素酶报告基因实验证实miR-144-3p与Idh2的3'-UTR存在结合作用.miR-144-3p可在转录水平抑制mCFs中Idh2表达,而过表达circ_0120051可增加mCFs中IDH2表达.在mCFs中转染miR-144-3p和Idh2的小干扰RNA(siRNA),可一致性地逆转circ_0120051对纤维化相关基因表达和mCFs迁移的抑制作用.[结论]Circ_0120051通过特异结合miR-144-3p并增加其靶基因IDH2表达来发挥抑制mCFs纤维化表型的作用.

目的 探讨温阳复元方对miRNA-137/线粒体铁死亡通路的调控作用,阐明该方对脑缺血再灌注损伤(CIRI)的神经保护作用机制.方法 线栓法制备大鼠CIRI模型,将144只SD大鼠随机分为假手术(SO)组、模型(I/R)组、补阳还五汤对照(BYHW)组、温阳复元方(WYFY)组、温阳复元方+miRNA-137模拟物(WYFY+mimic)组、温阳复元方+miRNA-137抑制物(WYFY+Inhibitor)组,每组按再灌注时间点分为3个亚组.采用Zea-Longa评分法进行神经功能缺损评分(NFS);TTC染色测量脑梗死体积;qRT-PCR和Western blot法观察miRNA-137、膜铁转运蛋白(FPN)和二价金属离子转运体1(DMT1)的mRNA及其蛋白表达水平.结果 ①NFS结果:I/R组NFS较SO组显著增加(P＜0.01),与I/R组相比,BYHW组NFS仅在12 h时评分降低(P＜0.05),而WYFY组在24 h和3 d的 NFS 明 显降低(P＜0.05或P＜0.01),WYFY+mimic组NFS显著下降(P＜0.01),WYFY+Inhibitor组在3 d时NFS降低(P＜0.05);与WYFY组相比,WYFY+mimic组NFS仅在12 h时明显降低(P＜0.05).②TTC染色结果:I/R组梗死体积较SO组显著增大(P＜0.01),BYHW组和WYFY组较I/R组明显减小(P＜0.05或P＜0.01),WYFY组梗死体积较BYHW组进一步减小(P＜0.01);相较于WYFY组,WYFY+mimic组能进一步减小其梗死体积(P＜0.05),而 WYFY+Inhibitor组梗死灶明显增大(P＜0.05).③miRNA-137 mRNA表达水平:I/R组miRNA-137 mRNA的表达较SO组显著下降(P＜0.01),WYFY治疗后其表达量显著增加(P＜0.01),且WYFY组其表达水平较BYHW组进一步增高(P＜0.01);与WYFY组同期比较,WYFY+mimic组miRNA-137 mRNA表达量均进一步升高(P＜0.01),WYFY+Inhibitor组抑制该表达(P＜0.01).④FPN mRNA及蛋白表达水平:I/R组FPN mRNA和蛋白表达水平较SO组均降低(P＜0.01),WYFY组能显著增加其表达(P＜0.01),该组在12 h和3 d时的表达量较BYHW组进一步增加(P＜0.05或P＜0.01);与WYFY组同期对比,WYFY+mimic组其表达水平在24 h及3 d时增加(P＜0.01),而WYFY+Inhibitor组其表达水平均降低(P＜0.01).⑤DMT1 mRNA及蛋白表达水平:I/R组DMT1 mRNA和蛋白表达量较SO组均显著增加(P＜0.01);与I/R组比较,WYFY能降低其表达水平(P＜0.01),且WYFY组在3 d时其表达量较BYHW组进一步降低(P＜0.05);与WYFY组同期相比,WYFY+mimic组其表达水平在24 h和3d时均降低(P＜0.01),而WYFY+Inhibitor组其表达水平均显著增加(P＜0.01).结论 温阳复元方可能通过上调miRNA-137的表达,进而上调铁转运蛋白FPN的表达,下调DMT1的表达,调节铁代谢,最终抑制线粒体铁死亡,发挥其神经保护作用,其疗效优于补阳还五汤.

目的:探讨DNA损伤激活的长链非编码RNA(NORAD)对多发性骨髓瘤(MM)细胞增殖及对硼替佐米(BTZ)化疗耐药性的影响.方法:应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测健康人和骨髓瘤患者、不同MM细胞系中NORAD表达差异,并分析其与MM患者生存率关系;运用慢病毒转染技术,干扰细胞系中NORAD的表达,检测其表达差异;定量PCR(qPCR)检测骨髓瘤细胞系中人类非编码RNA-144a-3p(hsa-miR-144a-3p)的表达;采用双荧光酶素报告验证NORAD和hsa-miR-144a-3p的结合;通过RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)实验进一步验证LncRNA和miRNA的结合;细胞计数试剂8(CCK8)法检测各细胞处理后细胞活性.细胞克隆试验检测细胞增殖能力.结果:MM患者细胞系中NORAD常高表达,提示预后差,生存期短;敲除NORAD基因后,MM耐药细胞系对BTZ药物敏感性增加.MM患者hsa-miR-144a-3p高表达,在骨髓瘤细胞系中加用miR-144a-3p类似物时细胞增殖能力下降;NORAD低表达可显著抑制细胞增殖,细胞对药物敏感性增强.细胞克隆形成实验也证实NORAD低表达可抑制癌细胞增殖.结论:NORAD高表达可增强MM对BTZ化疗耐药性,NORAD可直接与hsa-miR-144a-3p结合,上调其在MM细胞中的表达,进一步调控癌细胞增殖,同时调控患者对BTZ药物敏感性.

目的:探究lncRNA MEG3对胃癌(GC)细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制.方法:qRT-PCR检测人正常胃上皮细胞 GES-1 和 GC 细胞(BGC823、MGC803、SGC7901、AGS、MKN28、MKN451)中MEG3及miR-27a-3p表达差异;将AGS细胞分为对照组、GV144组、GV144-MEG3组、GV144-MEG3+miR-27a-3p NC 组、GV144-MEG3+miR-27a-3p mimics 组;比较各组 AGS 细胞中MEG3及miR-27a-3p表达情况;检测细胞增殖、迁移和侵袭能力,Western blot检测ki-67、MMP-2、MMP-9蛋白表达,双荧光素酶报告实验验证MEG3与miR-27a-3p的靶向关系.结果:与GES-1细胞相比,GC细胞中MEG3水平降低,miR-27a-3p水平升高(P＜0.05);与对照组相比,GV144-MEG3组MEG3水平升高,miR-27a-3p、ki-67、MMP-2、MMP-9水平及增殖、迁移和侵袭能力降低(P＜0.05);上调miR-27a-3p表达可减弱MEG3过表达对AGS细胞恶性行为的抑制作用.miR-27a-3p是MEG3的靶基因.结论:过表达MEG3可能通过靶向下调miRNA-27a-3p表达抑制AGS细胞增殖、迁移及侵袭.

目的 探讨糖类抗原125(CA125)、人附睾蛋白4(HE4)、miRNA-144-3p对卵巢癌患者化疗疗效的预测价值及影响因素.方法 选取60例卵巢癌患者,术后给予化疗,根据化疗效果将其分为有效组和无效组,比较两组患者的CA125、HE4、miRNA-144-3p水平.卵巢癌患者化疗疗效的影响因素采用多因素Logistic回归分析;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,计算曲线下面积(AUC),评估CA125、HE4、miRNA-144-3p单独及联合检测对卵巢癌患者化疗疗效的预测价值.结果 化疗后,治疗有效39例,治疗无效21例,分别作为有效组和无效组.化疗前,有效组患者血清CA125、HE4水平均明显低于无效组,miRNA-144-3p水平明显高于无效组,差异均有统计学意义(P﹤0.01).多因素Logistic回归分析结果显示,化疗前CA125水平≥35 U/ml、化疗前HE4水平≥140 pmol/L、化疗前miRNA-144-3p水平﹤3、肿瘤直径﹥5cm均是卵巢癌患者化疗疗效的独立危险因素(P﹤0.05).ROC曲线显示,血清化疗前CA125、HE4、miRNA-144-3p联合检测预测卵巢癌患者化疗疗效的AUC为0.965(95%CI:0.924～0.999),此时的灵敏度为 89.74%,特异度为 95.24%,准确度为 91.67%.结论 化疗前CA125、HE4、miRNA-144-3p联合检测卵巢癌患者化疗疗效具有较高的预测价值,较低的化疗前CA125、HE4水平和较高的miRNA-144-3p水平提示卵巢癌患者的化疗疗效较好.

目的 本文研究了小分子核糖核酸-144-3p (miR-144-3p)分子与胶质瘤发生发展的相关性.方法 本实验所需胶质瘤组织均来自于西京医院神经外科胶质瘤患者,共50例;利用人源神经元细胞系HCN-2(human cortical neuron-2,HCN-2)、U251胶质瘤细胞系、U87MG胶质瘤细胞系等.通过细胞培养及miRNA转染,细胞及组织RNA提取,反转录多聚酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR),实时定量PCR对miR-144-3p分子在胶质瘤中的表达进行检测.结果 miR-144-3p分子在人和小鼠染色质定位高度保守;miR-144-3p分子在胶质瘤患者不同组织中的表达差异;miR-144-3p分子在不同病理学分级胶质瘤中的表达差异;miR-144-3p分子在不同人源胶质瘤细胞系中的表达差异,其表达量与患者预后相关性.结论 miR-144-3p分子在哺乳动物中高度保守,与患者的预后有关.