目的:探讨连翘苷对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响及其对环状RNA_0054537(circ_0054537)/微小RNA(miRNA，miR)-409-3p的调控作用。方法:体外培养肝癌细胞Hep3B，使用不同剂量(5、10、20 μmol/L)的连翘苷处理Hep3B细胞；采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡率；Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭能力；采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测circ_0054537、miR-409-3p的表达量；双荧光素酶报告实验检测circ_0054537、miR-409-3p的靶向关系；Hep3B细胞中分别转染si-circ_0054537、pcDNA-circ_0054537，采用上述方法检测细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭。组间比较采用独立样本 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:连翘苷可明显降低细胞活力[(1.276±0.110)个比(1.031±0.090)、(0.637±0.050)、(0.507±0.040)个， F＝244.841， P<0.05]，增高凋亡率[(7.34±0.62)%比(12.44±1.03)%、(22.86±2.12)%、(28.16±2.71)%， F＝244.841， P<0.05]，减少迁移细胞数[(154.15±12.76)个比(124.06±10.04)、(78.05±7.25)、(61.13±5.83)个]及侵袭细胞数[(112.04±10.08)个比(89.43±8.13)、(57.11±5.12)、(43.08±4.05)个， F＝186.018、166.514， P<0.05]，抑制circ_0054537的表达[(1.00±0.10)比(0.40±0.04)， t＝16.713， P<0.05]，促进miR-409-3p的表达[(1.02±0.11)比(3.42±0.31)， t＝21.889， P<0.05]；转染si-circ_0054537可明显抑制细胞活力[(1.264±0.10)比(0.686±0.06)]、迁移[(151.96±11.17)比(79.03±7.21)]及侵袭能力[(115.28±11.05)比(68.14±6.43)， t＝14.869、16.457、11.062， P<0.05]，增高凋亡率[(7.26±0.71)%比(23.79±2.06)%， t＝22.759， P<0.05]；双荧光素酶报告实验证实circ_0054537可靶向结合miR-409-3p；转染pcDNA-circ_0054537可明显逆转连翘苷对Hep3B细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的调控作用。 结论:连翘苷可通过下调circ_0054537的表达而上调miR-409-3p的表达从而抑制肝癌细胞增殖、迁移、侵袭及促进细胞凋亡。

目的 用生物信息学方法预测脂肪酸结合蛋白4(FABP4)的上游调控miRNA,体外培养子宫内膜癌细胞Ishikawa,了解微小核糖核酸-409-3p(miR-409-3p)是否通过抑制FABP4的表达水平,进而影响Ishikawa细胞的生物学行为.方法 实验分为control组、miR-409-3p mimics组、miR-409-3p inhibitor组、miR-409-3p NC组、FABP4-OE组及FABP4-shRNA组6组,采用实时定量聚合酶链式反应及蛋白质印迹法检测miR-409-3p及FABP4在Ishikawa中的表达情况;采用细胞增殖实验(CCK-8)、细胞侵袭及迁移实验(Transwell法)检测miR-409-3p与FABP4对Ishikawa细胞增殖、侵袭以及迁移能力的影响;用双荧光素酶报告基因实验在Ishikawa细胞中检测miR-409-3p对FABP4的调控作用.结果 1)在Ishikawa细胞中下调FABP4的表达后,Ishikawa细胞的增殖、侵袭和迁移能力均显著降低(P<0.05);在Ishikawa细胞中上调FABP4的表达后,Ishikawa细胞的增殖、侵袭和迁移能力均显著升高(P<0.05).2)在Ishikawa细胞中转染miR-409-3p mimics后,FABP4的表达水平以及Ishikawa细胞的增殖、侵袭和迁移能力均显著降低(P<0.05);而转染miR-409-3p inhibitor后,FABP4的表达水平以及Ishikawa细胞的增殖、侵袭和迁移能力均显著升高(P<0.05).3)双荧光素酶报告基因结果显示,在Ishikawa细胞中miR-409-3p可靶向调控FABP4.结论 高表达的FABP4促进Ishikawa细胞增殖、侵袭及迁移,miR-409-3p可通过下调FABP4的表达进而抑制Ishikawa细胞发生转移.

目的 探讨腺病毒肺炎患儿外周血中微小核糖核酸(miRNA)-127-3p、miRNA-493-5p与miRNA-409-3p的表达水平及临床意义.方法 纳入2023年1-11月长春市儿童医院收治的腺病毒肺炎患儿100例为观察组,按照病情轻重分为轻度组和重度组;纳入同期在该院健康体检儿童30例为对照组.分别采集两组儿童外周血,采用qRT-PCR方法检测外周血中miRNA-127-3p、miRNA-493-5p 及 miRNA-409-3p 表达水平.结果 观察组患儿 miRNA-127-3p、miRNA-493-5p 及 miRNA-409-3p 表达水平分别为(4.77±1.30)、(4.40±1.20)、(3.82±1.07),对照组表达水平分别为(3.15±0.54)、(1.71±0.58)、(1.49±0.54),两组比较差异均有统计学意义(t=6.605、11.770及11.410,均P＜0.05).轻度组患儿外周血miRNA-127-3p、miRNA-493-5p 及 miRNA-409-3p 表达水平分别为(4.35±1.06)、(4.01±1.06)、(3.36±0.82),重度组患儿外周血 miRNA-127-3p、miRNA-493-5p及miRNA-409-3p表达水平分别为(5.39±1.40)、(4.99±1.17)、(4.51±1.04),轻度组与重度组比较差异均有统计学意义(t=4.190、4.390 及 6.110,均 P＜0.05).经 ROC 分析发现 miRNA-127-3p、miRNA-493-5p 及 miRNA-409-3p的曲线下面积(AUC)分别为0.741、0.828及0.859.结论 腺病毒肺炎患儿外周血中miRNA-127-3p、miRNA-493-5p及miRNA-409-3p表达增高,且与疾病严重程度有关,有望成为腺病毒肺炎的生物标记物.

目的 探讨微小RNA(miRNA)在右归丸对激素型肾阳虚证肾组织与正常肾组织中的表达差异,并用生物信息学方法分析其意义,为右归丸干预肾阳虚证的进一步机制研究奠定基础.方法 15只SD大鼠随机分为正常组(5只)和造模组(10只),正常组注射2 mL生理盐水,造模组后肢肌注氢化可的松注射液.成模后将造模组随机分为模型组和右归丸组,每组5只.右归丸组给予右归丸汤剂灌胃,模型组和正常组给予生理盐水灌胃.麻醉处死后使用TRIzol法提取肾组织中RNA,使用NanoDrop ND-1000对总RNA进行质量检测,用标记后的RNA与Agilent Rat 8 ×60k miRNA芯片进行杂交.收集原始数据进行标准化处理,进行聚类分析和火山图分析.利用生物信息学方法,预测差异miRNA富集的基因本体论(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路.结果 筛选出右归丸干预肾阳虚证相关差异表达miRNA 18 条(|log2FC|≥ 1.5,P≤0.05),其中包括 5 条上调 miRNA,分别是 rno-miR-149-3p、rno-miR-188-5p、rno-miR-221-5p、rno-miR-762、rno-miR-877;13 条下调 miRNA,分别是 rno-miR-101b-5p、rno-miR-125a-3p、rno-miR-125b-2-3p、rno-miR-3085、rno-miR-344a-5p、rno-miR-347、rno-miR-34b-3p、rno-miR-351-3p、rno-miR-3573-3、rno-miR-370-3p、rno-miR-409a-3p、rno-miR-448-3p、rno-miR-503-3p.GO分析显示差异表达miRNA主要参与DNA、RNA转录的正调控进程且与ATP的结合显著相关.KEGG分析显示差异表达miRNA显著富集于cAMP通路和FoxO信号通路,这两条通路与线粒体功能密切相关.结论 右归丸通过干预miRNA的表达,改善肾阳虚证大鼠线粒体功能,调节能量代谢异常,进一步为右归丸干预肾阳虚证的机制研究提供理论依据.

目的 探讨宫颈癌中微小RNA-409-3p(miRNA-409-3p)、血管内皮生长因子(VEGF)、Grb2协同结合蛋白2(Gab2)表达与调强适形放疗同步化疗疗效及治疗后3年生存情况的关系.方法 采用回顾性研究方法,选取2019年1月至2020年2月在新疆医科大学附属肿瘤医院治疗的宫颈癌患者138例,均给予调强适形放疗同步化疗.同时随访所有患者疗效及治疗后3年生存情况,分为化疗有效组(n=92)和治疗无效组(n=56)、死亡组(n=26)和存活组(n=112).观察不同临床特征、疗效、预后患者宫颈癌组织miRNA-409-3p、VEGF、Gab2表达水平.结果 低分化宫颈癌组织miRNA-409-3p相对表达量明显低于中高分化宫颈癌组织,而VEGF mRNA和Gab2 mRNA相对表达量明显高于中高分化宫颈癌组织,差异均有统计学意义(P＜0.05).FIGO分期Ⅲ期宫颈癌组织miRNA-409-3p相对表达量明显低于Ⅱ期宫颈癌组织,而VEGF mRNA和Gab2 mRNA相对表达量明显高于Ⅱ期宫颈癌组织,差异均有统计学意义(P＜0.05).治疗有效组患者miRNA-409-3p相对表达量明显高于治疗无效组,而VEGF mRNA和Gab2 mRNA相对表达量明显高于治疗无效组,差异均有统计学意义(P＜0.05).死亡组患者miRNA-409-3p相对表达量明显高于存活组患者,而VEGF mRNA和Gab2 mRNA相对表达量明显高于存活组患者,差异均有统计学意义(P＜0.05).miRNA-409-3p、VEGF、Gab2表达预测疗效有效的ROC曲线下面积分别为0.647、0.779和0.616,预测价值较好(P＜0.05).miRNA-409-3p、VEGF、Gab2表达预测死亡的ROC曲线下面积分别为0.715、0.653和0.785,预测价值较好(P＜0.05).结论 宫颈癌组织miRNA-409-3p表达下调,而VEGF、Gab2表达上调,与调强适形放疗同步化疗疗效及预后有关,其中VEGF预测疗效有一定价值,而Gab2预测预后有一定价值.

Objective:Gastrointestinal stromal tumors(GISTs)can rapidly proliferate through angiogenesis.Previous studies indicated the potential influence of microRNA on the progression of tumor immature angiogenesis.This study aimed to explore the specific mechanism by which microRNA-409-5p(miR-409-5p)contributes to GIST.Methods:To identify genes potentially involved in the development and progression of GIST,the differences of miR-409-5p between tumors and adjacent tissues were first analyzed.Following this analysis,target genes were predicted.To further investigate the function of miRNA in GIST cells,two GIST cell lines(GIST-T1 and GIST882)were transfected with lentiviruses that stably expressed miR-409-5p and scrambled miRNA(negative control).Later,the cells were subjected to Western blotting and ELSA to determine any differences in angiogenesis-related genes.Results:In GISTs,there was a decrease in the expression levels of miR-409-5p compared to the adjacent tissues.It was observed that the upregulation of miR-409-5p in GIST cell lines effectively inhibited the proteins hypoxia-inducible transcription factor 1β(HIF1β)and vascular endothelial growth factor A(VEGF-A).Further investigations revealed that miR-409-5p acted as an inhibitor of angiogenesis by binding to the 3'-UTR of Lysine-specific demethylase 4D(KDM4D)mRNA.Moreover,the combination of miR-409-5p with imatinib enhanced its inhibitory effect on angiogenesis.Conclusion:This study demonstrated that the miRNA-409-5p/KDM4D/HIF1β/VEGF-A signaling pathway could serve as a novel target for the development of therapeutic strategies for the treatment of imatinib-resistance in GIST patients.

目的 探讨微小RNA-409-3p(miRNA-409-3p)表达水平对宫颈癌细胞增殖及顺铂化疗敏感性的影响.方法 将HeLa细胞分为正常对照组、NC对照组和miRNA-409-3p mimic组,RT-PCR法检测不同宫颈组织及转染miR-NA-409-3p mimic后各组细胞中miRNA-409-3p mRNA的表达,CCK-8法检测细胞增殖率,Western blot法检测Fip200、LC3、Caspase-3蛋白的表达.结果 宫颈癌组织中miRNA-409-3p mRNA的相对表达水平显著低于正常宫颈组织和癌旁组织(P<0. 05);通过转染miRNA-409-3p mimic后,miRNA-409-3p mimic组miRNA-409-3p mRNA的相对表达水平较正常对照组显著上调(P<0. 05),NC对照组miRNA-409-3p mRNA的相对表达水平较正常对照组无统计学差异(P>0. 05). miRNA-409-3p mimic组HeLa细胞增殖率较正常对照组和NC对照组显著降低(P<0. 05).给予顺铂干预后,miR-NA-409-3p mimic组细胞增殖显著被抑制(P<0. 05);同时,miRNA-409-3p mimic组细胞中Fip200蛋白表达水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值显著低于正常对照组和NC对照组(P<0. 05).结论 miRNA-409-3p在宫颈癌组织中低表达,可能与宫颈癌的发生发展有关,上调miRNA-409-3p水平可以抑制HeLa细胞增殖,增加HeLa细胞对顺铂的敏感性.

目的:探讨丹红注射液(DHI)对急性心肌梗死(AMI)模型大鼠基因表达谱的影响.方法:将雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和DHI组(0.76 mL/kg),每组10只.模型组和DHI组采用冠状动脉左前降支结扎法复制AMI模型.造模后,假手术组和模型组大鼠均肌内注射等容生理盐水,DHI组大鼠肌内注射相应药物,每日1次,连续14 d.末次给药后,分离大鼠梗死边缘区心肌组织,采用基因芯片技术检测基因表达谱的变化情况,以相对表达量差异倍数为指标,筛选差异表达微RNA(miRNA).在检索其对应基因的基础上,利用DAVID生物信息学资源数据库和KEGG通路数据库分别进行基因本体(GO)和KEGG通路富集分析;借助TargetScan数据库预测差异表达miRNA对应的靶基因信使RNA(mRNA),采用Cytoscape 3.6.1软件构建miRNA-mRNA网络并进行分析,采用Agilent GeneSpring GX v11.5软件筛选上述网络中与炎症相关的靶基因和miRNA.结果:与假手术组比较,模型组差异表达miRNA共22个,其中上调5个、下调17个;与模型组比较,DHI组差异表达miRNA共26个,均为上调;与DHI治疗AMI有关的差异表达miRNA包括rno-let-7a-5p、rno-let-7d-5p、rno-let-7f-5p、rno-miR-26b-5p、rno-miR-29b-3p、cel-miR-39-3p、cel-miR-39-5p、rno-miR-142-5p、rno-miR-191a-5p、rno-miR-409a-3p.GO和KEGG通路富集分析结果显示,差异表达miR-NA对应基因主要集中在膜结合细胞器、细胞质、内膜系统等细胞组分中,通过解剖结构发育、多细胞组织发育、发育过程等生物过程来发挥蛋白结合、离子结合等分子功能;其主要富集于钙信号通路,过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)信号通路,血管内皮生长因子(VEGF)信号通路,细胞凋亡,糖基磷脂酰肌醇锚定生物合成,缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸降解等信号通路上.miR-NA-mRNA网络分析结果显示,与差异表达miRNA对应的靶基因mRNA共25个,与之关联的miRNA共24个;该网络中与炎症相关的靶基因共6个(IL6、IL1b、TNF、TLR4、CRP、CXCL12),涉及差异表达miRNA共19个.结论:DHI对AMI的治疗作用可能与调节相关miRNA的表达,影响钙离子、PPAR、VEGF等通路的信号转导,调控白细胞介素、趋化因子、C反应蛋白等炎症标志物的分泌有关.

目的:探讨miRNA-409-3p/Beclin-1信号轴在小细胞肺癌耐药中的作用机制.方法:qRT-PCR检测用于分析基因表达情况;Western blot检测蛋白表达情况;mimic NC、miRNA-409-3p mimic、pcDNA3.1质粒和pcDNA3.1-Bec-lin-1质粒分别转染依托泊苷(VP16)和顺铂(DDP)耐药的小细胞肺癌细胞系SBC-5/EP;荧光素酶活性分析实验用于检测基因靶向关系;GFP-LC3绿色荧光融合蛋白实验用于检测细胞自噬;克隆形成实验和流式细胞术实验用于检测细胞的增殖和凋亡;MTT法用于检测细胞对VP16-DDP的敏感性.结果:在VP16-DDP耐药的小细胞肺癌组织和小细胞肺癌细胞(SBC-5/EP)中,miRNA-409-3p表达量低,Beclin-1表达量高;荧光素酶活性分析实验显示miRNA-409-3p靶向作用于Beclin-1;miRNA-409-3p mimic可抑制SBC-5/EP细胞自噬和增殖,促进细胞凋亡,提高SBC-5/EP细胞对VP16-DDP的敏感性,抑制PI3KC3和Vpsl5蛋白表达.pcDNA3.1-Beclin-1可逆转miRNA-409-3p mimic对SBC-5/EP细胞自噬和增殖的抑制作用、对细胞凋亡的促进作用、对VP16-DDP药物敏感性的提高作用,以及对PI3KC3和Vpsl5蛋白表达的抑制作用.结论:miRNA-409-3p通过靶向作用于Beclin-1而抑制VP16-DDP耐药的小细胞肺癌细胞的自噬和增殖,促进细胞凋亡,提高耐药的小细胞肺癌细胞对VP16-DDP的药物敏感性,可能与PI3KC3/Vpsl5信号通路相关.

目的 本研究通过高通量测序技术,分析阳虚体质人与平和体质人外泌体miRNA表达谱的相同点与不同点.从而得到阳虚体质人与平和体质人的异同.方法 根据《中医体质分类与判定》标准进行体质判定,确定阳虚体质与平和体质之后,采集受试者外周血.利用高通量测序平台对外泌体miRNA进行测序,分析阳虚体质与平和体质差异的外泌体miRNA.利用差异miRNA预测差异靶基因,通过GO和KEGG分析对差异基因进行富集分析.结果 阳虚体质人与平和体质人相比,共有28种miRNA发生改变,其中上调19种,下调9种.阳虚体质上调的miRNA包括hsa-miR-101-3p、hsa-miR-144-3p、hsa-miR-19b-3p等.阳虚体质下调的miRNA包括hsa-miR-409-3p、hsa-miR-625-3p等.功能富集分析发现,相关的生物学过程包括转录及转录调节、信号转导、RNA聚合酶II调节、蛋白磷酸化等.细胞成分包括细胞核、细胞质、胞浆等.分子功能包括蛋白结合、金属离子结合、ATP结合、DNA结合等.相关疾病中,包括肿瘤、感染性疾病、内分泌代谢性疾病等.结论 本研究通过研究阳虚体质与平和体质的外泌体miRNA,得到阳虚体质与平和体质差异的生物学基础.