目的:建立一种快速、灵敏、可视化的H7亚型禽流感病毒等温核酸扩增检测方法。方法:针对H7N9禽流感病毒的HA片段保守区序列设计引物、探针，优化反应温度，建立H7亚型禽流感病毒的重组酶聚合酶扩增结合侧流层析试纸条检测技术，评价其特异性和敏感性，并与Real time PCR方法进行比较。结果:该方法检测H7亚型禽流感病毒的最低检出限为20拷贝/μL，与其他流感/禽流感病毒无交叉反应，反应可在20~50℃温度范围内进行，临床样本检测结果与Real time PCR法一致性为100.0％。结论:该检测方法具有快速、特异及灵敏的特点，为在基层和现场快速检测H7亚型禽流感病毒提供了新的方法。

目的:探讨驱动基因阳性中枢神经系统（CNS）转移性非小细胞肺癌（NSCLC）患者的预后影响因素。方法:回顾性分析2016年1月至2020年12月北京同仁医院收治的103例伴CNS转移性NSCLC患者的临床资料，将患者分为驱动基因阳性组（驱动基因突变阳性且接受相应靶向治疗）和驱动基因阴性组。采用Cox比例风险模型筛选有统计学意义的预后因素，应用受试者工作特征（ROC）曲线比较递归分级分析（RPA）、脑转移基础（BS-BM）、特殊诊断评估预后分级（DS-GPA）及肺癌相关分子分级预后评估（lung-mol GPA）4种评分系统对驱动基因阳性患者预后的预测能力。结果:103例患者中，男48例，女55例，年龄（64.6±9.7）岁。103例患者的中位生存时间为24.0（95% CI：20.0~28.0）个月，59例驱动基因阳性患者的中位生存时间为33.0（95% CI：23.4~42.6）个月，44例驱动基因阴性患者的中位生存时间为17.0（95% CI：14.4~19.6）个月，差异有统计学意义（ χ 2=24.69， P<0.001）。驱动基因阴性（ HR=3.788，95% CI：1.951~7.301， P=0.001）、卡氏功能状态（KPS）评分<70分（ HR=2.613，95% CI：1.185~5.761， P=0.017）及中性粒细胞与淋巴细胞比值（NLR）>3.22（ HR=2.714，95% CI：1.157~6.365， P=0.022）是CNS转移性NSCLC患者预后的危险因素。KPS评分<70分（ HR=3.719，95% CI：1.165~11.876， P=0.027）及未接受放射治疗（ HR=2.032，95% CI：1.033~11.364， P=0.041）是驱动基因阳性CNS转移性NSCLC患者预后的危险因素。ROC曲线分析显示，在4种评分系统中，lung-mol GPA评分系统的曲线下面积（AUC）最高（AUC=0.843，95% CI：0.731~0.956， P<0.001）；而lung-mol GPA联合评分系统ROC曲线的AUC值（AUC=0.904，95% CI：0.816~0.991， P<0.001）高于lung-mol GPA评分系统。 结论:低KPS评分及未接受颅脑放射治疗是影响驱动基因阳性CNS转移性NSCLC患者预后的危险因素；lung-mol GPA联合评分系统更利于驱动基因阳性CNS转移性NSCLC患者的预后评估。

重组酶聚合酶扩增（RPA）技术是一种新型核酸恒温扩增检测技术。该技术可以在37~42 ℃条件下实现待测靶标的快速检测。它具有反应灵敏度高、特异性强、对仪器依赖程度低且可整合多种检测模式等优点，特别适用于基层和现场即时检测。本文从RPA技术的基础理论和实验要点出发概述了开展该项研究需要注意的要点，综述了RPA技术在医学检验领域的应用现状和相关问题，并展望了其未来发展的广泛前景。

目的:探讨基于胸部CT肺动脉造影（CTPA）定量测量的肺小血管与肺截面积比值（%CSA）与肺栓塞患者右心功能相关指标的相关性。方法:回顾性分析2018—2019年宁夏医科大学总医院行CTPA检查的120例肺栓塞患者和72名健康志愿者的资料，120例患者中男54例，女66例，年龄25~88岁，平均（59±13）岁；志愿者中男30名，女42名，年龄30~78岁，平均（61±12）岁。测量研究对象的肺动脉主干内径（mPA）、肺主动脉与升主动脉内径比值（rPA）、右心室/左心室最大横径比值（RVd/LVd）及肺动脉阻塞指数（PAOI）。采用Image J处理软件于CTPA图像上测量所有研究对象的%CSA（肺小血管截面积<5 mm 2和5~10 mm 2分别表示为%CSA <5和%CSA 5-10）。根据危险分层指标将患者分为中高危组（RVd/LVd>1）和低危组（RVd/LVd<1）2个亚组。中高危组、低危组及对照组各指标间的比较采用方差分析，亚组间各指标的比较采用独立样本 t检验，采用spearman相关法分析PE组%CSA与右心室功能参数间的相关性。 结果:中高危组、低危组与对照组间的%CSA <5分别为（0.69±0.19）%、（0.95±0.27）%和（0.99±0.30）%，差异有统计学意义（ P<0.01），3组的%CSA 5-10分别为（0.63±0.15）%、（0.84±0.18）%和（0.85±0.25）%，差异有统计学意义（ P<0.01），中高危组%CSA <5、%CSA 5-10均小于低危组及对照组。相关性分析发现，中高危和低危组%CSA <5、%CSA 5-10与RVd/LVd、mPA、rPA均呈负相关（ r值分别为-0.543和-0.484，-0.367和-0.495，-0.236和-0.352）。 结论:基于CTPA定量测量的%CSA <5及%CSA 5-10与肺栓塞患者RVd/LVd呈负相关，在一定程度上间接反映了病情的严重程度。

目的:对比尿激酶和瑞替普酶在下肢深静脉血栓导管溶栓中的疗效、安全性及总临床获益。方法:回顾性分析88例下肢急性混合型深静脉血栓并接受导管溶栓的患者，其中52例行尿激酶溶栓，36例行瑞替普酶溶栓。采用溶栓率、溶栓前后肢体周径变化评价溶栓效果；采用Villalta评分评价术后第3、6、12个月深静脉血栓形成后综合征的严重程度；并结合溶栓时间、总住院时间、总住院花费及出血风险评价总临床获益。结果:溶栓率尿激酶组75.5%，瑞替普酶组84.2%( P<0.001)；溶栓前后肢体周径变化尿激酶组84.0%，瑞替普酶组90.0%( P<0.001)；3、6、12个月的Villalta临床评分尿激酶组分别为3.03、3.63、4.57；瑞替普酶组分别为2.29、3.06、3.70(均 P<0.001)。接受瑞替普酶溶栓患者的溶栓时间及总住院时间更短，总住院费用未增加。调整瑞替普酶的溶栓速度(5 MU/h降至0.5～1 MU/h)后，出血风险降低。 结论:瑞替普酶较尿激酶具有更高效的静脉溶栓效果，并可降低深静脉血栓形成后综合征的严重程度。

林奇综合征（LS）是最常见的遗传性结直肠癌（CRC）综合征，其特征是错配修复（MMR）相关基因的胚系致病变异导致微卫星不稳定。符合LS和MMR缺陷的临床标准且没有任何已发现的胚系致病变异的患者通常被认为患有林奇样综合征（LLS）。这些患者患结直肠癌和结肠外肿瘤的风险更高，但关于其潜在遗传病因的研究报道十分有限。近年研究发现，在LLS病例中存在MUTYH基因的双等位胚系变异，MUTYH相关的息肉病可通过MMR基因的体细胞失活与LS表型重叠。除此之外，携带POLE和POLD1胚系变异的LLS患者也已被确认。DNA修复基因中存在胚系变异，如MCM8、MCM9、WRN、MCPH1、BARD1、REV3L、EXO1、POLD1、Rfc1、RPA1和MLH3，在LLS患者中也有报道，但LLS的潜在胚系突变谱在巴西人群中的研究结果尚不清楚。该研究纳入了来自巴西巴雷图斯肿瘤医院确诊的20例LLS患者，并对其进行了全外显子组测序（WES）。结果发现，这20例患者中，女性患者占比60%，首次诊断肿瘤的年龄为（48±8）岁。75%的患者（ n=15）以结直肠癌为首发肿瘤，其次为子宫内膜癌（ n=2）、卵巢癌（ n=2）和胃癌（ n=1）。5例患者被诊断出患有第二种肿瘤；这些肿瘤包括结直肠癌、子宫内膜癌、乳腺癌和非黑色素瘤。共有90%的患者有癌症家族史，75%的患者在家族中有LS相关肿瘤。此外，在2 389个基因分析中筛选到了319个高质量的胚系变异。根据美国医学遗传学和基因组学学会（ACMG）标准进行变异分类，其中，33.5%的变异被归类为良性或可能良性（107/319），63.9%的变异具有不确定的意义（204/319），2.5%的变异被归类为致病或可能致病（8/319）。在已知的癌症基因MUTYH和ATM中，35%（7/20）的患者发现了致病或可能致病的变异。这些携带致病变异的患者与非携带致病变异的患者在首次诊断肿瘤的年龄［平均年龄48.3比48.2岁， P=0.974］、肿瘤家族数（平均肿瘤个数3.7比6.7， P=0.193）、肿瘤分级（ P=0.650）或肿瘤分期（ P=0.854）差异均无统计学意义。此外，在DNA修复基因POLN和其他癌症相关基因PPARG、CTC1、DCC和ALPK1中也发现了罕见潜在致病的变异。

目的:探讨TAB182促进同源重组(HR)修复的相关调控分子及机制。方法:利用shRNA敲低人乳腺癌MCF-7细胞中的TAB182基因，TAB182敲低的MCF-7细胞为沉默组，使用shRNA阴性对照物的MCF-7细胞为TAB182阴性对照组。通过RNA测序分析，筛选与TAB182相关差异表达的HR修复基因。qRT-PCR验证相关基因的mRNA表达，Western blot验证相关蛋白的表达。RAD51和BrdU免疫荧光检测DNA断裂末端形成的3′单链DNA(ssDNA)；流式细胞术检测细胞周期阻滞和细胞凋亡；集落形成实验检测细胞的放射敏感性。结果:RNA测序分析和qRT-PCR验证结果一致，TAB182沉默组细胞中RPA2的mRNA表达降低( t＝17.97， P<0.05)。相比于TAB182阴性对照组细胞，TAB182沉默组细胞RPA2在蛋白水平也显著减少。相比于TAB182阴性对照组，TAB182沉默组细胞中RAD51焦点(foci)的表达显著降低；3′ ssDNA结合蛋白标志物BrdU在TAB182沉默组细胞的细胞核中foci形成显著减少。在放射菌素D作用后的第4、8、12 h，相比于TAB182阴性对照组，TAB182沉默组细胞RPA2 mRNA的衰减加快( t＝5.37、3.79、3.69， P<0.05)。相比于TAB182阴性对照组，TAB182沉默组细胞放射敏感性增加( t＝3.48， P<0.05)；且TAB182沉默组放射诱发的凋亡率显著增加( t＝11.05， P<0.05)、照射后24 h的周期阻滞时间延长( t＝8.40， P<0.01)。 结论:TAB182通过维持RPA2 mRNA的稳定性，促进RPA2的表达，在DSBs的同源重组修复通路中发挥作用。TAB182的缺失可增强肿瘤细胞的放射敏感性。

等温扩增技术是在恒温条件下进行扩增的一类新型核酸扩增技术。基于该技术建立的方法操作简便，且具有较高的灵敏度与特异性，在临床与科研等方面展现了较好的应用前景。本文就环介导等温扩增、交叉引物扩增、链替代扩增、依赖核酸序列的等温扩增和滚环扩增等技术的原理、特点及应用进行了综述。

重组聚合酶等温扩增（RPA）技术是新开发的具有高灵敏度、高特异性的等温扩增技术，将RPA与侧流层析试纸条检测（LFS）技术相结合，可快速鉴别目的基因。迄今为止，RPA-LFS技术已广泛运用于医药、食品、植物学等领域。本文将对RPA-LFS技术在病原微生物中的诊断进行综述，为实现病原微生物的即时诊断提供参考。

目的:探讨DNA损伤修复因子DNA损伤特异性结合蛋白1（DDB1）在肝癌组织中的表达情况及DDB1基因沉默对人肝癌SMMC-7721细胞DNA损伤修复和靶向杀伤作用的影响。方法:利用UALCAN平台对癌症基因组图谱（TCGA）数据库中肝细胞肝癌组织（371例）和癌旁组织（50例）中DDB1的表达情况及DDB1表达与肝癌患者总生存的相关性进行生物信息学分析。向SMMC-7721细胞转染靶向DDB1的小干扰RNA（siRNA）和阴性对照siRNA，分别为DDB1沉默组和阴性对照组。用X线照射诱导两组细胞外源性DNA双链断裂（DSB）损伤，采用免疫荧光染色（γH2AX用于评估DSB损伤情况，RPA32s33和Rad51用于评估同源重组修复情况）和蛋白质印迹法（检测RPA32s33蛋白水平）分析DDB1基因沉默对细胞DSB损伤修复的影响。采用姐妹染色体交换（SCE）实验分析DDB1沉默组和阴性对照组细胞同源重组SCE频率。采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法分析PARP抑制剂奥拉帕尼（10 μmol/L）、顺铂（1 μg/ml）及二者联合杀伤DDB1沉默组和阴性对照组SMMC-7721细胞的效果。结果:生物信息学分析发现，肝癌组织DDB1 mRNA水平较癌旁组织高（ P<0.001），DDB1高表达患者总生存较DDB1低表达患者差（ P=0.029）。X线照射后培养24 h，阴性对照组细胞γH2AX灶点已大多消退，DDB1沉默组细胞仍较多[每个细胞中（5.1±2.0）个比（13.4±2.0）个， t=-5.08， P=0.007]。X线照射后培养4 h，阴性对照组RPA32s33灶点数[每个细胞中（30.8±5.0）个比（13.2±1.6）个]和Rad51灶点数[每个细胞中（19.5±1.8）个比（8.3±3.3）个]均高于DDB1沉默组，两组间差异均有统计学意义（均 P<0.01）。阴性对照组SCE频率高于DDB1沉默组[（21.2±3.0）%比（11.2±1.6）%， t=5.07， P=0.007]。MTT法检测显示，奥拉帕尼作用后，DDB1沉默组细胞的存活率低于阴性对照组[（40.3±3.6）%比（79.8±1.3）%， t=17.94， P<0.001]，奥拉帕尼联合顺铂时，两组细胞存活率均进一步降低，且DDB1沉默组细胞存活率低于阴性对照组[（10.2±2.8）%比（29.6±3.4）%， t=7.72， P=0.002]，顺铂单独作用时，DDB1沉默组和阴性对照组细胞存活率差异无统计学意义[（41.9±5.1）%比（49.8±3.3）%， t=2.71， P=0.054]。 结论:DDB1在肝癌组织中高表达，可能是肝癌治疗抵抗和预后较差的重要因素。敲低DDB1基因表达能促进肝癌SMMC-7721细胞对PARP抑制剂的敏感性，其机制很可能与DDB1沉默引起SMMC-7721细胞的同源重组修复缺陷有关。