目的:基于生物信息学分析慢性阻塞性肺疾病(COPD)状态对非小细胞肺癌(NSCLC)的影响，以期揭示COPD状态对非小细胞肺癌的影响。方法:从癌症基因组图谱数据库中下载161例肺癌患者的相关信息并根据病理类型与肺功能结果进行分组。在同一病理下，比较有无COPD的两组的差异。京都基因与基因组百科全书(KEGG)和基因本体论(GO)分析用于功能富集分析，进行加权共表达网络分析(WGCNA)并构建蛋白互作网络(PPI)筛选核心枢纽基因。所有计量资料组间比较采用 t检验，计数资料组间比较采用 χ2检验。 结果:本研究纳入了161例肺癌患者的样本数据。有、无COPD在临床特征、体细胞基因突变频率以及免疫细胞浸润上差异无统计学意义( P>0.05)。在鳞癌及腺癌中，COPD组别中大量代谢有关通路上调，而细胞趋化能力的调节等通路下调。后续WGCNA及PPI分析鉴定出钠离子通道α2亚基(SCN2A)、富酪蛋白(STATH)、细胞色素P450家族成员(CYP1A2及CYP1B1)、γ-氨基丁酸A型受体亚基(GABRA1)紧密连接蛋白17 (CLDN17)、调节突触膜胞吐蛋白1 (RIMS1)、维生素D结合蛋白(GC)以及血浆铜蓝蛋白(CP)可能是潜在枢纽基因。只有在腺癌中，COPD组的患者年龄组成比率上[<60岁：80.8%(21/26)；>60岁：19.2%(5/26)]相比无COPD组[<60岁：56.1%(32/57)；>60岁：43.9%(25/57)]，结果差异有统计学意义( χ2＝4.693， P<0.05)。 结论:COPD状态对肺癌的预后，体细胞突变等无贡献，并提出9个潜在的COPD型肺癌关键枢纽基因。

目的:探讨CXCR4特异性拮抗剂AMD3100影响癫痫发作的分子机制。方法:(1)动物实验：36只成年雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组、癫痫组和AMD3100处理组，每组12只。癫痫组大鼠腹腔注射戊四氮(PTZ)构建癫痫模型，剂量为40 mg/kg；AMD3100处理组大鼠侧脑室注射5 μL(5 mg/mL) AMD3100 20 min后腹腔注射同等剂量PTZ；对照组大鼠腹腔注射等量生理盐水。采用Racine分级评估各组大鼠癫痫发作等级并记录其癫痫发作潜伏期，采用脑电图(EEG)记录各组大鼠脑神经元异常放电情况，采用ELISA试剂盒检测各组大鼠海马组织 γ-氨基丁酸(GABA)含量。应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测各组大鼠海马组织神经元γ-氨基丁酸A受体α1亚单位( GABAAR α1) mRNA水平。(2)细胞实验：另取SD大鼠鼠婴(1日龄)培养原代海马神经元，培养7 d后将细胞分为对照组、癫痫组和AMD3100处理组。癫痫组神经元采用无镁外液诱导的方法构建癫痫细胞模型；AMD3100处理组神经元在含有10 nmol/L AMD3100的无镁外液中培养3 h，随后换为Neurobasal继续培养；对照组采用Neurobasal培养基常规培养。采用全细胞膜片钳技术检测各组神经元灌流AMD3100(10 nmol/L)后自发性抑制性突触后电流(sIPSC)。 结果:(1)动物实验：AMD3100处理组大鼠发作潜伏期较癫痫组大鼠明显缩短[分别为(663.30±74.84) s、(164.40±17.20) s]，差异有统计学意义( t=6.490， P<0.001)；AMD3100处理组大鼠4级以上发作次数较癫痫组大鼠明显减少[分别为(3.75±0.39)次、(9.00±0.73)次]，差异有统计学意义( t=4.680， P<0.001)。ELISA实验结果显示，3组大鼠GABA含量差异有统计学意义( F=17.850， P<0.001)，其中癫痫组明显低于对照组，AMD3100处理组大鼠明显高于癫痫组，差异均有统计学意义( P<0.05)。qRT-PCR实验结果显示，3组大鼠 GABAAR α1 mRNA含量差异有统计学意义( F=14.400， P<0.001)，其中癫痫组明显低于对照组，AMD3100处理组大鼠明显高于癫痫组，差异均有统计学意义( P<0.05)。EEG结果显示，与癫痫组大鼠比较，AMD3100处理组大鼠放电频率有所降低。3组大鼠EEG功率差异无统计学意义( F=3.220， P=0.062)，但与癫痫组、对照组大鼠比较，AMD3100处理组大鼠EEG功率有所降低。(2)细胞实验：膜片钳技术检测结果显示，3组神经元sIPSCs的频率和波幅差异均有统计学意义( F=13.670， P<0.001； F=10.920， P<0.001)。与对照组、癫痫组比较，AMD3100处理组神经元sIPSCs的频率和波幅均显著增加，差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:CXCR4拮抗剂AMD3100可通过增强抑制性神经传递降低癫痫发作频率。

目的:探讨γ-氨基丁酸受体α5(α5 subunit of gamma-aminobutyric acid receptor subtype A，GABRA5)受体基因多态性与抑郁症患者临床特征及认知功能的关联性。方法:2018年8月至2020年9月，在徐州市东方人民医院招募符合DSM-Ⅳ-TR中抑郁发作诊断标准的住院抑郁症患者180例，同时招募性别、年龄与之匹配的健康对照者120例，抽取受试者的肘静脉血测试基因多态性，应用17项汉密尔顿抑郁量表(17 items Hamilton depression scale，HAMD-17)评估抑郁症患者的严重程度，应用威斯康辛卡片分类测试软件(Wisconsin card sorting test，WCST)及事件相关电位P300测试受试者的认知功能。使用SPSS 17.0软件进行统计分析，两组间数据比较采用 t检验或 χ2检验。 结果:GABRA5受体基因rs140685位点携带T等位基因的抑郁症患者认知功能明显低于C等位基因患者( t＝2.35~3.45， P<0.05)，且认知功能障碍与睡眠及焦虑/躯体化症状存在关联( r＝－0.197~0.409， P<0.05)；抑郁症患者焦虑/躯体化症状在GABRA5受体基因多态性与认知功能障碍间存在部分中介作用(效应值＝－0.611，95% CI＝－1.393~－0.057)。 结论:GABRA5受体基因多态性与抑郁症患者认知功能障碍存在关联，且焦虑/躯体化症状部分介导了GABRA5受体基因多态性所致认知功能的损害。

目的:探讨羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A，HSYA)对慢性束缚应激模型小鼠抑郁样行为及海马γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid，GABA)A型受体(type A GABA receptor，GABAAR)表达的影响。方法:将健康雄性SPF级C57BL/6C小鼠按照随机数字表法分为对照组、HSYA组、模型组、模型+HSYA组、模型+氟西汀组，每组12只。采用慢性束缚应激方法建立抑郁小鼠模型，HSYA组和模型+HSYA组小鼠腹腔注射给予HSYA(20 mg/kg)，模型+氟西汀组小鼠腹腔注射氟西汀(10 mg/kg)，对照组和模型组小鼠给予等体积0.9%氯化钠溶液，1次/d，连续给药14 d。采用强迫游泳实验和悬尾实验评价动物的抑郁样行为，Western blot检测小鼠海马组织内GABAAR不同亚型的蛋白表达水平。采用SPSS 19.0和GraphPad Prism 8.0软件分析数据和制图，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用Tukey-HSD检验。结果:(1)在行为学实验中，5组小鼠在强迫游泳实验中的漂浮不动时间和悬尾实验中的悬尾不动时间均差异有统计学意义( F＝21.59，20.81，均 P<0.05)。模型组小鼠漂浮不动时间[(143.91±9.97)s]和悬尾不动时间[(107.00±6.54)s]均高于对照组[(52.92±6.70)s，(43.50±5.96)s，均 P<0.05]。模型+HSYA组小鼠的游泳漂浮不动时间[(26.17±7.69)s]和悬尾不动时间[(20.17±7.89)s]与模型+氟西汀组[ (61.60±16.22)s, (34.14±10.74)s]相比均差异无统计学意义(均 P>0.05)，但两组的游泳漂浮时间和悬尾不动时间均低于模型组(均 P<0.05)。(2)Western blot结果显示，4组小鼠海马组织内GABAAR亚型GABAARβ1和GABAARβ2的蛋白表达水平均差异有统计学意义( F＝12.21，11.40，均 P<0.05)。模型组小鼠海马组织内GABAARβ1(45.60±10.76)和GABAARβ2(46.27±4.82)的蛋白表达水平均低于对照组[GABAARβ1(100.00±3.44)，GABAARβ2(100.00±3.26)，均 P<0.05]。与模型组相比，模型+HSYA组GABAARβ1(79.91±5.00)和GABAARβ2(79.08±5.53)蛋白表达水平均较高(均 P<0.05)。此外，4组小鼠海马组织内GABAARα1和GABAARγ1蛋白表达均差异无统计学意义( F＝0.23，0.10，均 P>0.05)。 结论:HSYA能有效缓解抑郁模型小鼠的抑郁样行为，这可能与其上调海马组织GABAARβ1和GABAARβ2的表达有关。

目的 探究热灭活副干酪乳酪杆菌 N1115 对原代培养的海马神经细胞发育的影响.方法 出生 24 h 内Wistar 乳鼠经断头后剥离海马组织,立即进行原代海马神经细胞分离培养.培养 7 d 后的原代海马神经细胞被随机分为空白对照组(C组)、热灭活副干酪乳杆菌N1115 干预组(N组),C组不做干预,仅加入DMEM高糖培养液,N组加入经热灭活处理的N1115 菌悬液,两组细胞于 37℃,5%CO2 的细胞孵箱分别培养 6、24 h,培养结束后MTT法检测海马神经细胞活力,RT-PCR 和 Western blot 测定原代海马神经细胞的脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、γ-氨基丁酸 A 型受体α1 亚型(γ-aminobutyric acid type A receptor α1,GABAAα1)、γ-氨基丁酸 B 型受体 1 亚型(γ-aminobutyric acid type B receptor 1,GABAb1)和 5-羟色胺受体 1A(HTR1-A-5-hydroxytryptamine receptor 1A Gene,5HT1A)的mRNA及蛋白表达情况.结果 与C组相比,干预 6、24 h时,原代海马神经细胞的细胞活率明显上升(P＜0.05);干预 6 h时BDNF基因表达量升高(P＜0.01),GABAb1 的基因表达量降低(P＜0.01).干预 6、24 h时,BDNF、5HT1A的蛋白表达量均升高(P＜0.05),GABAAα1、GABAb1 的蛋白表达量均降低(P＜0.01).结论 热灭活副干酪乳酪杆菌N1115 可以显著提高海马神经细胞的活率,增加BDNF的分泌和 5HT1A的表达,并抑制GABAAα1、GABAb1 的表达,展现出调控神经细胞发育和神经递质功能表达的潜力.

[目的]采用网络药理学与生物信息预测分析并结合体内与分子实验验证百合抗焦虑抗抑郁的作用机制.[方法]采用中药系统药理学数据库与分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP)检索百合抗焦虑抗抑郁的潜在活性成分;通过治疗靶点数据库(Therapeutic Target Database,TTD)检索活性成分抗焦虑抗抑郁的潜在作用靶标,构建成分与靶标网络;采用REACTOME与g:Profiler软件进行基因本体(gene ontology,GO)分析,京都基因和基因组数据库(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)、REAC 和 WikiPathways 代谢通路(WikiPathways,WP)富集分析.以行为绝望抑郁悬尾和强迫游泳实验评价百合水提液抗抑郁活性,以酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测ICR小鼠海马内神经递质含量,以实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time polymerase chain reaction,Real-time PCR)分析抑郁小鼠脑内抑郁相关基因表达水平.[结果]百合通过β-谷甾醇、3-去甲基秋水仙碱与26-O-β-D-吡喃葡萄糖基-3β,26-二羟基胆甾烷-16,22-二氧基-3-0-α-L-鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷等5个潜在活性成分,可通过调控hsa-miR-203和hsa-miR-206等miRNAs与特异性蛋白 1(specificity protein 1,SP1)、RE1沉默转录因子(RE1 silencing transcription factor,REST)和CCCTC 结合因子(CCCTC-binding factor,CTCF)等转录因子的表达,进而共同调控蛋白激酶C epsilon型(protein kinase C epsilon,PRKCE)、γ-氨基丁酸 B 型受体亚基 2(gamma-aminobutyric acid type B receptor subunit 2,GABBR2)、γ-氨基丁酸 A 型受体亚基 p2(gamma-aminobutyric acid type A receptor subunit beta 2,GABRB2)和溶质载体家族6 成员 4(solute carrier family 6 member 4,SLC6A4)等基因的表达,可能最终影响了 γ-氨基丁酸通路、5-羟色胺通路、G蛋白偶联受体通路和单胺氧化酶通路等,增加抑郁小鼠脑内神经递质含量,发挥抗焦虑抗抑郁作用.[结论]采用网络药理学、生物信息预测以及实验验证百合抗焦虑抗抑郁的活性成分、潜在靶标和信号通路,为百合抗焦虑抗抑郁研究提供参考.

目的 探究罗格列酮对哮喘小鼠肺组织γ氨基丁酸A受体α亚单位(GABAARα)及MUC5AC表达的影响.方法 2017年12月—2018年1月,将50只健康雌性BABL/C小鼠随机分为对照组、哮喘组、地塞米松组、罗格列酮组及联合治疗组,每组10只.动物模型制备分为致敏、激发、取材3部分,哮喘组、地塞米松组、罗格列酮组及联合治疗组小鼠均进行致敏、激发,其中地塞米松组小鼠于激发前30 min给予地塞米松雾化吸入,罗格列酮组小鼠给予罗格列酮雾化吸入,联合治疗组小鼠给予地塞米松联合罗格列酮雾化吸入;对照组小鼠在致敏、激发阶段均给予0.9％氯化钠溶液.最后1次激发后24 h取小鼠肺组织进行检测.采用苏木素-伊红染色(HE染色)观察肺组织病理学表现,采用蛋白质印迹法检测肺组织GABAARα及MUC5AC蛋白浓度,采用聚合酶链反应检测肺组织GABAARα及MUC5AC mRNA相对表达量.结果 (1)HE染色结果显示,哮喘组小鼠气道黏膜上皮局部脱落,黏膜下充血水肿,支气管壁及血管壁周围有较多炎性细胞浸润;地塞米松组、罗格列酮组及联合治疗组小鼠上述表现较哮喘组减轻.(2)哮喘组、地塞米松组、罗格列酮组及联合治疗组小鼠肺组织GABAARα、MUC5AC蛋白浓度及其mRNA相对表达量高于对照组,地塞米松组、罗格列酮组及联合治疗组小鼠肺组织GABAARα、MUC5AC蛋白浓度及其mRNA相对表达量低于哮喘组(P<0.05);而地塞米松组、罗格列酮组及联合治疗组小鼠肺组织GABAARα、MUC5AC蛋白浓度及其mRNA相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 罗格列酮对哮喘小鼠肺组织GABAARα、MUC5AC表达的影响与地塞米松及地塞米松联合罗格列酮相当,其可能通过下调GABAARα、MUC5AC表达而减少哮喘小鼠气道黏液过度分泌.

自身免疫性脑炎(autoimmune encephalitis,AE) 泛指一类针对中枢神经系统抗原产生免疫反应而导致的脑病,呈急性或亚急性起病,以癫痫发作、 认知障碍及精神症状为主要临床表现.AE 抗体可分为两类: 一类为抗神经元细胞内抗原抗体,包括抗 Hu、 Yo、 Ri、 Ma2、 CV2、 Amphiphysin 抗体等; 一类为抗神经元细胞表面抗原抗体,包括抗 N-甲基-D 天冬氨酸受体(NMDAR) 、 富亮氨酸胶质瘤失活蛋白 1(LGI1) 、 α-氨基-3 羟基-5-甲基-4-异唑酸受体(AMPAR) 、 γ-氨基丁酸 A 型受体(GABAAR) 、 代谢性谷氨酸受体(mGluR5) 抗体等.抗 Yo抗体脑炎临床表现各异,主要与副肿瘤性小脑变性(paraneoplastic cerebellar degeneration,PCD) 密切相关,PCD 主要临床表现为亚急性小脑性共济失调.迄今为止,国外报道的抗 Yo 抗体脑炎不足 200 例,国内也鲜有报道.现将 1 例抗 Yo抗体阳性的脑炎患者报告如下,供临床工作者借鉴.

本研究利用PCR基因芯片,通过荧光定量PCR检测分析肿瘤坏死因子TNF-α对离体培养的大鼠下丘脑原代细胞不同神经递质受体的影响,以研究TNF-α对神经内分泌系统的影响.研究结果,发现后叶加压素1A受体似vpr1a)、γ-氨基丁酸受体1(Gabrr1)、离子型谷氨酸受体1(Grin1)、5-羟色胺受体4 (Htr4)和转位蛋白(Tspo)5个基因的表达有显著提高.另外肾上腺素能β2受体(Adrb2)、胆囊收缩素B受体(Cckbr)、毒蕈碱亚型胆碱能受体5(Chrm5)、烟碱亚型胆碱能受体6(Chrna6)、γ-氨基丁酸受体5,6(Gabra5,Gabra6)、代谢型谷氨酸受体8 (Grm8)、5-羟色胺受体2c,3a (Htr2c,Htr3a)、生长抑素受体1(Sstr1)和速激肽受体1(Tacr1) 11个基因的表达有明显下降.其中最为明显的是对离子型谷氨酸受体1(Grin1)和速激肽受体1(Tacr1)的影响,分别是提高了3.12和降低了2.76.由此可见,TNF-α可以通过特定的信号传导途径调节下丘脑细胞中多种神经递质受体的转录表达水平,以改变神经元细胞对相应递质分子的应答水平和兴奋性,从而影响下丘脑组织内多种内分泌激素的释放量,并最终影响大鼠的神经内分泌功能.

目的 运用分子对接技术与靶标mRNA表达相结合方法,探索交泰丸治疗失眠症药效物质及分子作用机制.方法 选择5-羟色胺1A(5-HT1A)受体、γ-氨基丁酸(GABAA)受体、多巴胺D3(DRD3)受体作为对接蛋白靶标,将其分别与交泰丸中主要黄连生物碱进行分子对接,明确各成分与靶标结合的强度;腹腔注射对氯苯丙胺酸建立小鼠失眠症模型,并分别予小檗碱(BBR)、黄连碱(COP)、巴马汀(PAL)、表小檗碱(EBBR)、药根碱(JAT)5种生物碱灌胃,连续7 d,测定小鼠脑组织5-HT1A受体、GABAA受体α1亚型(Gabra1)受体和DRD3受体的mRNA表达.结果 以5-HT1A为分子靶标,各配体对接评分顺序为EBBR>阿米替林>COP>BBR>PAL>JAT;以GABAA为分子靶标,对接评分顺序为COP>BBR>EBBR>PAL>JAT>巴比妥;以DRD3为分子靶标,对接评分顺序为BP-897>EBBR>PAL>COP>JAT>BBR.与模型组比较,除COP对DRD3表达上调不明显外,各给药组5-HT1A、Gabra1和DRD3 mRNA表达均显著上调(P<0.05,P<0.01).结论 原小檗碱型生物碱是交泰丸主要药效成分,其中小檗碱作用最强;交泰丸治疗失眠症的机制可能是通过调节5-HT1A、Gabra1、DRD3等受体的表达完成.