目的 探讨氧化应激对人卵巢颗粒细胞生长发育的影响.方法 体外培养人卵巢颗粒细胞KGN,用不同浓度的过氧化氢(H2O2)处理KGN细胞,采用CCK8法检测细胞增殖水平,流式细胞术检测细胞内活性氧族(reactive oxy-gen species,ROS)产生量及细胞凋亡情况,Western blot法检测细胞自噬和凋亡相关蛋白的表达水平.结果 随着H2O2浓度的升高,颗粒细胞增殖受到明显抑制,且呈剂量依赖性(F分别为4.906、4.825、4.653、4.614和4.587,P均＜0.001).细胞内ROS水平随着H2O2浓度的增加而升高,同时细胞凋亡率不断升高;加入抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine,NAC)后,ROS水平恢复,细胞凋亡率下降,表明细胞凋亡与ROS的产生有关.H2O2处理后,KGN细胞中LC3-Ⅱ、cleaved-caspase3蛋白的表达水平显著升高(t分别为4.809和5.789,P均＜0.05),LC3-Ⅰ、BCL-2、P62蛋白的表达水平显著降低(t分别为4.014、3.982和4.415,P均＜0.05),表明H2O2能够诱导KGN细胞的自噬和凋亡.结论 H2O2能够抑制人卵巢颗粒细胞增殖,诱导其自噬凋亡.氧化应激状态抑制人卵巢颗粒细胞的生长发育,降低卵母细胞质量,卵巢储备功能下降.

目的:探讨熊果酸对H9C2心肌细胞H2O2过氧化损伤的保护作用及其与热休克蛋白(HSPs)的表达的相关性.方法:采用H2O2诱导H9C2心肌细胞氧化应激模型,实验分为正常对照组(Control)、H2O2组(H2O2)、熊果酸+H2O2组(Ursolic Acid,UA).CCK8检测各组细胞活力值,ELISA法检测培养基上清液 HSP27、HSP70、HSP90 含量,Western blot 检测各组细胞 HSP27、HSP70、HSP90、HSF1 蛋白表达水平.结果:与正常对照组相比,H2O2组细胞活力值降低,HSP27、HSP70、HSP90含量及HSP27、HSP70、HSP90、HSF1的表达水平上升(均P＜0.05);与H2O2组相比,熊果酸+H2O2组细胞活力值升高,HSP27、HSP70、HSP9 0含量及HSP27、HSP70、HSP90、HSF1的表达水平上高(均P＜0.05).结论:熊果酸可以通过促进HSPs的表达提高H9C2心肌细胞的抗氧化能力从而发挥对H2O2过氧化损伤的保护作用.

目的:探讨体外脑出血模型中大蒜素的作用.方法:选择新生SD大鼠提取原代星形胶质细胞(astrocyte,ASC);分别采用氧化血红素和炎症因子(IL-1α、TNF-α、C1q)处理原代ASC,构建对应的模拟脑出血后氧化应激损伤和炎症反应的细胞模型,并用不同浓度大蒜素进行干预.采用CCK-8法检测细胞活力,CFDA探针检测细胞内活性氧聚集水平,Tunel染色法观察凋亡程度,流式细胞仪检测细胞凋亡率,蛋白免疫印迹检测凋亡相关蛋白、ASC表型相关蛋白及血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、核因子 E2 相关因子 2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)等表达变化.结果:大蒜素处理可增强ASC对血红素毒性的抵抗作用,减少血红素引起的活性氧蓄积,减少细胞凋亡,降低促凋亡蛋白表达,并且可抑制A1表型蛋白C3表达,上调A2表型蛋白S100和转化生长因子表达.此外,大蒜素干预能够上调Nrf2和HO-1表达.结论:大蒜素在体外脑出血模型中可减轻氧化应激损伤和炎症反应,发挥神经保护作用.

目的:旨在结合转录组测序的结果，聚焦糖尿病视网膜病变中的氧化应激水平和炎症水平，探讨硒结合蛋白1(selenium binding protein 1，SELENBP1)在糖尿病视网膜病变中的作用。方法:对12周龄的db/m和db/db小鼠的视网膜组织进行转录组测序分析筛选差异基因。实验分为两组：db/m小鼠、db/db小鼠，对视网膜组织切片进行活性氧荧光染色，应用蛋白免疫印迹(Western-blot)检测小鼠视网膜组织中的氧化应激反应相关指标还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NOX)2、NOX4、超氧化物歧化酶2(SOD2)和炎性反应相关指标核因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β的变化趋势；用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western-blot和免疫组化(IHC)分析组织中SELENBP1的水平。在体外，应用高糖干预人视网膜微血管内皮细胞(HRMEC)，实验分为两组：正常糖组(NG组)、高糖干预组(HG组)检测活性氧水平及氧化应激和炎性因子的表达；在HRMEC细胞中转染SELENBP1质粒和SELENBP1小干扰RNA，分为正常糖对照组(NG＋Vector)、SELENBP1质粒组(NG＋SBP1)、高糖对照组(HG＋si-NC)、SELENBP1小干扰RNA组(HG＋si-SBP1)，分析活性氧水平及氧化应激和炎性因子的表达水平。结果:与db/m小鼠相比，db/db小鼠视网膜组织中活性氧含量升高、氧化应激相关因子表达增加、抗氧化因子表达下降、炎性因子表达增加，且SELENBP1的mRNA和蛋白水平都明显升高。体外实验表明，高糖干预HRMEC细胞后，细胞中活性氧水平、氧化应激水平和炎症水平明显升高，SELENBP1的mRNA和蛋白表达均明显升高；在HRMEC细胞中过表达SELENBP1后氧化应激水平和炎症水平明显升高；在HRMEC细胞中敲低SELENBP1后氧化应激水平和炎症水平明显下降。结论:SELENBP1通过促进视网膜的氧化应激水平和炎症水平加重了糖尿病视网膜病变，抑制该基因的表达可能会成为减轻糖尿病视网膜病变的有效治疗靶点。

目的:探讨血必净注射液对体外循环(CPB)下心脏瓣膜置换术患者体内炎症因子水平和呼吸功能的影响。方法:选取2016年9月至2019年9月期间青岛市市立医院心外科进行体外循环下心脏瓣膜置换手术的患者68例作为研究对象进行回顾性研究。根据是否采用血必净治疗将所有研究对象分为观察组(34例)和对照组(34例)。对照组进行积极处理原发病以及对症治疗等，观察组在对照组基础上于麻醉诱导前、手术后当日、术后24 h分别给予100 ml的生理盐水加100 ml血必净注射液输注治疗。观察两组患者各时间点血清中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、超氧化物歧化酶(SOD)的水平，并计算出两组患者各时间点的呼吸指数(RI)、氧合指数(OI)，进行对比分析。结果:两组患者T 1、T 2、T 3、T 4的血清TNF-α、IL-6水平较T 0明显升高( P<0.05)，TNF-α、IL-6水平随着CPB后时间推移而递增，均在T 2时达到最高值，而后逐渐下降，观察组血清TNF-α、IL-6水平的上升幅度明显低于对照组( P<0.05)。两组患者T 1、T 2、T 3、T 4的血清SOD水平较T 0明显降低( P<0.05)，SOD水平随着时间推移而递降，均在T 2时达到最低值，而后逐渐上升，观察组血清SOD各时间点水平明显高于对照组( P<0.05)；两组患者T 1、T 2、T 3、T 4的RI水平较T 0明显升高( P<0.05)，均在T 2时达到最高值，但观察组T 1、T 2、T 3、T 4的RI水平明显低于同时点对照组( P<0.05)。两组患者T 1、T 2、T 3、T 4的OI水平较T 0明显降低( P<0.05)，均在T 2时达到最低值，但观察组T 1、T 2、T 3、T 4的OI水平明显高于同时点对照组( P<0.05)。 结论:血必净注射液具有活血化瘀、消除炎症反应、提高免疫功能、消除氧自由基、抗氧化应激等作用，适用于CPB所引起的急性肺损伤，值得临床运用和推广。

目的:探讨多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）患者血清及卵泡液氧化应激水平与卵子及胚胎质量的关系。方法:采用前瞻性随访研究分析2019年1月至2020年10月期间在浙江省人民医院生殖医学中心行体外受精治疗的67例PCOS患者（PCOS组）和66例单纯输卵管因素行体外受精的患者（对照组）的临床资料。采集患者取卵日血清及直径大于18 mm卵泡的卵泡液。比色法检测总抗氧化能力（total antioxidant capacity，TAC）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）和丙二醛（malondialdehyde，MDA）水平，分析氧化应激指标与卵子质量、胚胎培养结局和移植后临床结局的相关性。结果:PCOS组血清SOD水平［（22.11±3.70）U/mL）］显著低于对照组［（25.70±3.32）U/mL， P<0.001］；PCOS组的卵泡液TAC水平［（0.62±0.05）mmol/L］、MDA水平［（16.64±3.85）nmol/mL］和血清MDA水平［（18.20±4.68）nmol/mL］显著高于对照组［（0.53±0.04）mmol/L， P<0.001；（13.74±2.28）nmol/mL， P<0.001；（15.37±5.34）nmol/mL， P=0.008］；PCOS组优质胚胎率［34.1%（341/1 000）］、着床率［49.5%（54/109）］、临床妊娠率［60.9%（39/64）］和活产率［50.0%（32/64）］均低于对照组［41.7%（306/733）， P=0.013；58.7%（54/92）， P=0.023；70.3%（45/64）， P=0.006；59.4%（38/64）， P=0.007］，差异均有统计学意义；卵泡液TAC水平与优质胚胎率呈显著负相关（ β=-1.83， P=0.012）；各氧化应激指标与临床结局无显著相关性。 结论:PCOS患者卵泡液TAC水平升高，过高的卵泡液TAC水平可能是胚胎质量低下的危险因素之一。

目的:探讨消旋山莨菪碱（654-2）对X射线诱导小鼠肺上皮细胞损伤的保护作用及潜在机制。方法:利用小鼠肺泡上皮细胞MLE-12单次大剂量X线照射建立体外放射性肺损伤（RILI）模型，细胞分组为：对照组（未照射）、照射组（16 Gy照射）、处理1组（16 Gy照射+2 μmol/L 654-2）、处理2组（16 Gy照射+10μmol/L 654-2）、抑制剂组（16 Gy照射+10 μmol/L 654-2+2 μmol/L ML385）。照射后不同时间点收集细胞进行相关检测。细胞衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色检测细胞衰老；细胞集落形成能力检测观察细胞处理后的恢复能力；蛋白质印迹法检测p21、p16、磷酸化组蛋白H2AX（γH2AX）、核因子E2相关因子2（Nrf2）、Nrf2 Ser40位点磷酸化（p-Nrf2）、p62、血红素氧合酶1（HO-1）、NAD（P）H醌脱氢酶1（NQO1）等蛋白表达；流式细胞术检测细胞凋亡及细胞内总活性氧（ROS）产生；按照相关试剂盒检测谷胱甘肽（GSH）、超氧化物歧化酶（SOD）；实时反转录PCR检测检测谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基（GCLC）、谷氨酸半胱氨酸连接酶修饰亚基（GCLM）等mRNA表达情况。计量资料以 xˉ±s表示，两组间比较采用独立样本 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:与照射组相比，处理1、2组细胞SA-β-Gal染色阳性细胞比例减少，细胞衰老减轻（ P均<0.001）。与照射组相比，处理2组的γH2AX蛋白表达减少（ P=0.037），细胞凋亡减少（ P=0.026），细胞增殖能力增强（ P=0.004），GSH（ P=0.002）、SOD（ P<0.001）活力提高，且ROS减少（ P=0.001）。随着654-2的作用时间延长，MLE-12细胞的总蛋白中Nrf2、p-Nrf2的表达增强，同时Nrf2下游抗氧化蛋白NQO1及HO-1的表达增强，GCLC及GCLM mRNA表达增强。当加入Nrf2小分子抑制剂ML385后，抑制剂组的SA-β-Gal染色阳性细胞数（ P=0.145）、ROS（ P=0.317）与照射组的差异无统计学意义。 结论:654-2可以激活Nrf2通路，增强细胞抗氧化能力，抑制细胞衰老，从而发挥对RILI的保护作用。

目的:分析大骨节病（KBD）患者沉默信息调节因子2相关酶类1（SIRT1）的表达及其与软骨细胞凋亡的关系。方法:从青海省KBD病区贵德县选取20例KBD患者作为KBD组，同时在病区选取年龄和性别匹配的40例健康受试者作为对照组。采集研究对象的空腹肘静脉血，采用实时荧光定量PCR（real-time PCR）检测外周血SIRT1及硒蛋白基因[谷胱甘肽过氧化酶（GPX）2、GPX3、硫氧还蛋白还原酶（TXNRD）1、TXNRD3、碘甲腺原氨酸脱碘酶Ⅰ（DIO1）、硒磷酸合成酶2（SPS2）]mRNA水平；并采用曲线拟合法进行KBD患者外周血SIRT1与硒蛋白基因表达关联分析。同时，体外培养人正常软骨细胞，分为对照组（未经任何处理）、单纯白藜芦醇（RES）组（验证RES对SIRT1的激活作用）、叔丁基过氧化氢（tBHP）损伤组（软骨细胞氧化损伤模型）和RES保护组（RES预保护后进行tBHP损伤），采用real-time PCR检测各组细胞SIRT1，硒蛋白基因及凋亡相关基因[B淋巴细胞瘤-2基因（BCL2）、BCL2相关X蛋白（BAX）、核转录因子κB（NF-κB）p65、肿瘤抑制基因P53]mRNA水平。结果:人群研究中，KBD组外周血SIRT1 mRNA水平（1.12 ± 0.38）低于对照组（1.87 ± 0.97），差异有统计学意义（ t = 3.31， P = 0.002）。经曲线拟合分析，KBD组外周血GPX3、TXNRD1和TXNRD3 mRNA水平随SIRT1 mRNA水平的升高均有所升高（ R2 = 0.48、0.66、0.95，均 P < 0.001）；DIO1 mRNA水平随SIRT1 mRNA水平的升高呈现先下降后上升的趋势（ R2 = 0.51， P = 0.024）；GPX2、SPS2 mRNA水平随SIRT1 mRNA水平的升高均未见显著变化趋势（ R2 = 0.16、0.12， P = 0.064、0.114）。细胞实验中，与对照组（1.00 ± 0.10）比较，单纯RES组SIRT1 mRNA水平（1.79 ± 0.07）较高（ P < 0.05）。与tBHP损伤组比较，RES保护组硒蛋白基因GPX3、TXNRD1、TXNRD3、DIO1 mRNA水平均较高（均 P < 0.05）；凋亡相关基因BAX、P53 mRNA水平及BAX/BCL2比值均较低，BCL2、NF-κB p65 mRNA水平均较高（均 P < 0.05）。 结论:KBD患者SIRT1低表达；RES激活SIRT1后可能通过上调硒蛋白基因表达来增强软骨细胞抗氧化能力，从而抑制软骨细胞凋亡。

目的:制备鞣花酸纳米微囊并观察其对乳腺癌MCF-7细胞株行为学特征的影响，以分析其抗肿瘤效果有无改进。方法:采用层层自组装法制备鞣花酸壳聚糖纳米微囊，观察其体外抗氧化活性与游离鞣花酸的差异性。同时体外培养MCF-7细胞，设立MCF-7组、游离鞣花酸组和纳米微囊组(均 n＝3)，MCF-7组正常培养，游离鞣花酸组和纳米微囊组分别加入游离鞣花酸和鞣花酸纳米微囊共培养48 h，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验与流式细胞实验检测细胞增殖与凋亡活力。计量资料先行正态分布和方差齐性检验，计数资料以率和构成比表示，两组间比较采用卡方检验。 结果:抗氧化测试结果显示，鞣花酸纳米微囊的吸光度( A734)值为0.652±0.134，明显低于游离鞣花酸的0.855±0.121( P<0.05)。体外细胞学实验结果显示，MCF-7组、游离鞣花酸组、纳米微囊组的 A450值依次为0.854±0.102、0.595±0.077、0.452±0.046，组间差异有统计学意义( F＝20.265， P<0.01)，且纳米微囊组高于游离鞣花酸组( F＝12.258， P<0.05)，游离鞣花酸组高于MCF-7组( F＝31.024， P<0.05)；MCF-7组、游离鞣花酸组、纳米微囊组的细胞凋亡率依次为(6.25±0.87)%、(15.63±2.22)%、(21.52±2.54)%，组间差异有统计学意义( F＝43.985， P<0.01)，纳米微囊组低于游离鞣花酸组( F＝26.071， P<0.05)，且游离鞣花酸组低于MCF-7组( F＝14.356， P<0.01)。 结论:成功制备了鞣花酸纳米微囊，并证实其体外抗氧化活性和抗乳腺癌活性优于游离的鞣花酸。

目的:探讨黄芪甲苷对高糖诱导的心肌细胞焦亡的影响。方法:体外培养H9c2细胞，分为对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(33.3 mmol/L葡萄糖)、黄芪甲苷组(33.3 mmol/L葡萄糖+100 μmol/L黄芪甲苷)、NLRP3抑制剂组(33.3 mmol/L葡萄糖+1 μmol/L MCC950)。细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测H9c2细胞活性，乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测细胞上清液中LDH含量，超氧化物阴离子荧光探针(DHE)检测细胞内活性氧(ROS)水平，实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)及免疫印迹法(Western blot)检测焦亡相关基因mRNA和蛋白表达水平，免疫荧光法检测NLRP3荧光强度，酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中炎症因子水平。结果:黄芪甲苷浓度为100 μmol/L时可改善高糖诱导的细胞活力下降( P<0.01)，减少LDH释放( P<0.01)。与对照组相比，高糖组ROS水平升高( P<0.01)，细胞焦亡相关分子mRNA和蛋白表达上调(均 P<0.01)，NLRP3荧光强度增加( P<0.01)，细胞上清液中炎症因子水平升高( P<0.01)；与高糖组相比，黄芪甲苷组和抑制剂组ROS水平降低( P<0.01)，细胞焦亡相关分子mRNA和蛋白表达下调( P<0.05或 P<0.01)，NLRP3荧光强度减少( P<0.01)，细胞上清液中炎症因子水平降低( P<0.05或 P<0.01)。 结论:黄芪甲苷通过抑制NLRP3/Caspase-1信号通路，抑制细胞焦亡，对高糖诱导的心肌细胞损伤发挥保护作用。同时，它可以提高细胞模型的抗炎性和抗氧化性。