儿童中克罗恩病(Crohn′s disease，CD)的发病率逐年增加，与成人相比，儿童CD面临更迅速变化的病程、更大范围的肠道受累和生长发育的问题。生物制剂的出现拓宽了儿童CD的治疗途径，其中应用最广泛的是抗肿瘤坏死因子治疗，英夫利昔单抗(Infliximab，IFX)、阿达木单抗(Adalimumab，ADA)已被批准用于儿童CD的诱导和缓解治疗。其他途径的生物制剂，如白细胞介素抑制剂乌斯奴单抗(Ustekinumab，UTK)、抗整合素单克隆抗体维多珠单抗(Vedolizumab，VDZ)和生物类似物在儿童CD中的有效性和安全性已被逐步证实。失应答是生物制剂治疗过程中的一大难题，研发更多的生物制剂作为替代治疗方案是未来仍需努力的方向。该文就生物制剂在儿童CD中的疗效分析作一综述，以助于临床医生进行治疗决策。

目的:分析整合酶(IN)区主要耐药突变对HIV-1 CRF01_AE毒株耐药的影响，并比较与B亚型毒株的差异。方法:根据美国斯坦福大学HIV耐药数据库选择7个IN区突变或联合突变(T66K、F121Y、Q148K、N155H、G118R、R263K、Q148K/N155H)，通过无缝克隆同源重组及点突变的方法引入到HIV-1 B亚型感染性克隆pNL4-3和CRF01_AE感染性克隆pGX002的IN区，转染293T细胞包装病毒，在MT2细胞上扩大培养并测定感染性滴度。检测4种整合酶链转移抑制剂(INSTIs)，拉替拉韦(RAL)、埃替拉韦(EVG)、多替拉韦(DTG)、比昔格韦(BIC)对14株突变病毒的半抑制浓度(IC 50)及其与野生型病毒相比提高的倍数。 结果:成功构建携带7个IN区突变或联合突变的B亚型和CRF01_AE质粒，包装获得14株重组病毒，感染性滴度为10 4~10 6半数组织细胞感染剂量(TCID 50)/ml，在MT2细胞高效复制，上清液中HIV-1 P24抗原浓度可达830~2 700 ng/ml。5个突变或突变组合(T66K、F121Y、Q148K、N155H、Q148K/N155H)均可导致CRF01_AE和B亚型毒株对RAL和EVG高度耐药，与野生病毒相比IC 50分别提高200倍和2 000倍以上，相同突变导致RAL和EVG对CRF01_AE的IC 50提高的倍数均显著低于B亚型( P<0.01)。Q148K/N155H突变导致B亚型和CRF01_AE对DTG和BIC高度耐药，IC 50提高50倍以上，其他突变对DTG和BIC的药物敏感性几乎无影响。 结论:构建了基于CRF01_AE和B亚型的14株携带不同INSTI耐药突变的HIV-1毒株，5个突变可导致对RAL和EVG的高水平交叉耐药，同一突变导致B亚型毒株耐药程度显著高于CRF01_AE毒株。Q148K和N155H突变组合可导致DTG和BIC的高度耐药，表明DTG和BIC耐药的遗传屏障高，可有效抑制携带INSTI耐药突变的毒株，且无明显的亚型耐药差异。

IBD是一类病因不明的肠道慢性、复发性、炎症性疾病，其药物治疗包括传统药物5-氨基水杨酸、糖皮质激素、免疫抑制剂和生物制剂。其中，生物制剂除目前应用广泛的TNF-α抑制剂外，还包括整合素拮抗剂。整合素是表达于细胞表面的受体之一，可以与黏附分子结合介导淋巴细胞归巢至周围组织。肠道选择性淋巴细胞归巢由α4β7整合素和其配体黏膜地址素细胞黏附分子1的结合介导，是IBD的重要病理基础。维得利珠单抗是一种人源化的α4β7整合素单克隆抗体，是目前IBD治疗中一种具有肠道选择性的整合素拮抗剂。现就维得利珠单克隆抗体的作用机制、疗效和安全性加以综述。

目的:探索阿扎胞苷（AZA）联合高三尖杉酯碱（HHT）治疗急性髓系白血病（AML）的协同效应及其分子机制。方法:采用细胞增殖、凋亡和克隆形成实验研究AZA联合HHT在AML中协同效应并计算两药协同效应指数（CI），通过转录组测序、通路抑制剂和基因敲降等方法，探索两药的协同机制。结果:与单药相比，AZA+ HHT可显著抑制AML细胞增殖，并具有显著的协同效应（U937、MV4-11和KG-1细胞中CI值均小于0.9）；AZA+HHT能显著抑制U937（ P<0.001）和MV4-11（ P<0.001）细胞的克隆形成，并显著促进U937（ P<0.001）和MV4-11（ P<0.001）细胞凋亡。AZA联合HHT通过激活整合应激反应（ISR）信号通路介导DDIT3-PUMA依赖的AML细胞凋亡。AZA联合HHT可明显下调c-MYC蛋白，通过激活ISR信号通路，调控c-MYC/DDIT3/PUMA轴，促进细胞凋亡发挥协同抗AML作用。 结论:AZA联合HHT通过激活ISR信号通路，调控c-MYC/DDIT3/PUMA轴，抑制细胞增殖和促进细胞凋亡，发挥协同抗AML作用。

乙型肝炎病毒（HBV）DNA整合发生于HBV复制的逆转录过程中，在HBV感染的早期即已发生并伴随整个病程。整合HBV DNA不利于临床治愈目标的达成，亦增加了发生肝癌的风险。理论上，核苷（酸）类似物可以减少新双链线性DNA合成，但对已存在HBV整合的肝细胞无清除功能，故血清HBV DNA阴转的患者仍存在发展为肝癌的风险；而干扰素作为一种免疫调节药物，不仅可以抑制病毒复制，还可以抑制甚至清除既存的携带整合HBV DNA片段的克隆性扩增肝细胞。然而，目前核苷（酸）类似物与干扰素治疗对HBV DNA整合影响的研究尚少，亟需开展大样本的的临床研究来进一步明确。

目的:探讨人乳头瘤病毒16(human papillomavirus type 16，HPV16)整合感染宫颈上皮细胞(H8细胞)恶性转化的相关基因、信号通路和可能机制。方法:构建H8细胞恶性转化的细胞模型，采用Transwell试验检测恶性转化后H8细胞的细胞侵袭能力、细胞迁移能力的变化，平板克隆形成实验法检测恶性转化后H8细胞克隆形成能力的变化。提取恶性转化的H8细胞、H8细胞的总RNA，采用Illumina Novaseq 6000测序平台对两组细胞进行转录组学测序，鉴定和分析差异表达基因(DEGs)，并进行基因本体(gene ontology，GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG)通路富集分析以及蛋白互作网络分析。结果:恶性转化的H8细胞侵袭能力[(6 503±62.43)个比(298±32.19)个， P<0.001]、迁移能力[(15 241±93.83)个比[(7 753±76.32)个， P<0.001]，克隆形成能力[(428.3±5.03)个比[(281.3±12.10)个， P<0.001]较H8细胞显著升高。转录组学测序结果显示，与H8细胞组相比，恶性转化的H8细胞组共有203个基因存在表达差异，其中98个上调，105个下调。GO富集分析表明DEGs主要参与了细胞内进程、生物调节和代谢过程等生物过程，KEGG分析发现主要与丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢通路、甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢通路、P53信号通路、TGF-β信号通路、PI3K-Akt信号通路相关。PPI分析筛选得到DDIT3、TRIB3、ASNS等10个关键基因。 结论:与H8细胞相比，恶性转化的H8细胞在转录水平出现大量差异表达基因和通路，可进一步为恶性转化致癌的机制提供新思路，以及为预防恶性转化寻找新靶点。

目的:探讨PIEZO1通过YAP传导机械力学信号促进胶质瘤侵袭进展的分子机制。方法:(1)标本检测：选择郑州大学第一附属医院神经外科自2015年2月至2017年3月行胶质瘤切除术的94例患者标本行免疫组化染色，检测不同级别胶质瘤组织中PIEZO1表达。(2)细胞实验：不同基质硬度条件下培养人脑胶质瘤细胞系U87、U251，通过免疫荧光染色实验检测PIEZO1和YAP表达，Western blotting实验检测PIEZO1表达。(3)慢病毒转染后细胞实验：根据有无转染短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体将细胞分为阴性对照组和sh-PIEZO1组，通过克隆形成实验、增殖、侵袭实验、Western blotting实验等方式研究PIEZO1在胶质瘤增殖、侵袭中的作用；同时采用Western blotting实验检测 PIEZO1敲低后YAP、FAK、β1-整合素等力学信号通路蛋白的表达，采用RT-PCR法检测YAP下游靶基因 CTGF、 CYR61的表达，采用免疫荧光染色检测 PIEZO1敲低后YAP的表达。 结果:(1)PIEZO1表达随胶质瘤级别升高而增高，且异柠檬酸脱氢酶( IDH)野生型患者中PIEZO1表达高于 IDH突变型。(2)随着基质硬度增加，PIEZO1及YAP表达增加。Western blotting实验结果显示，与0.2 kPa组相比，16和64 kPa组基质培养细胞PIEZO1蛋白表达明显增高，差异有统计学意义( P<0.05)。(3) PIEZO1敲低后，U87细胞形态变大、触角增多，U251细胞多呈较长梭形。与阴性对照组相比，sh-PIEZO1组细胞克隆数明显减少，各时间点增殖率明显降低，侵袭细胞计数明显减少，差异均有统计学意义( P<0.05)。同时，与阴性对照组比较，sh-PIEZO1组细胞上皮标志物钙黏附蛋白E(E-cadhein)表达明显增加，间质标志物波形蛋白、Snail及Slug表达明显降低，差异均有统计学意义( P<0.05)。最后，Western blotting、RT-PCR实验及免疫荧光实验发现，敲低 PIEZO1显著增加了磷酸化(p)-YAP表达，降低了YAP胞核表达，下调了YAP下游靶基因 Cyr61和 CTGF表达，并且显著减低了β1-整合素和p-FAK水平；阴性对照组与sh-PIEZO1组组间差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:PIEZO1通过YAP调控胶质瘤对机械信号的反应，促进胶质瘤细胞增殖和侵袭，可以作为胶质瘤治疗的新靶点。

目的:通过突变整合于宿主细胞中的人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)16型的 E6、 E7致癌基因，探索预防和治疗宫颈癌的新方法。 方法:以SiHa细胞系为研究对象，设计靶向其内整合的HPV16 E6和 E7基因的小引导RNA(small guide RNA，sgRNA)，将其克隆入CRISPR/Cas9质粒，并应用其将 E6、 E7基因敲除，随后应用错位酶切法和克隆测序检测突变效果，并用细胞迁移与侵袭实验检测细胞的侵袭力。 结果:设计的sgRNA被克隆入CRISPR/Cas9质粒，经测序克隆正确。该质粒转染SiHa细胞后，可以引发靶点DNA的突变，致使 E6和 E7基因密码子改变，无法正确表达。 E6、 E7突变后SiHa细胞侵袭及增殖能力下降( t检验，pCas9组与psgE6-1-1-Cas9组相比， P＝0.0006; pCas9组与psgE7-1-2-Cas9组相比， P＝0.0007)，促进肿瘤抑制因子P53的表达恢复，细胞的恶性度降低。

慢性乙型肝炎病毒感染"免疫耐受期"患者为HBsAg阳性、HBeAg阳性、HBV DNA高水平、丙氨酸转氨酶正常、肝脏病理学无明显炎症坏死和纤维化。但近年来，一些研究发现，慢性HBV感染"免疫耐受期"患者存在HBV DNA整合、克隆性肝细胞扩增、HBV特异性T细胞免疫应答，以及肝损伤和疾病进展。因此，对"免疫耐受期"的概念提出挑战。现对慢性乙型肝炎病毒感染"免疫耐受期"的新认识，包括新的命名及其诊断、治疗和管理的新理念作了简要综述。

第5版WHO造血与淋巴组织肿瘤分类对T细胞和NK细胞增生性疾病和淋巴瘤（T-cell and NK-cell lymphoid proliferations and lymphomas，T/NK-LPD/LYM）根据研究进展以及疾病的临床病理特征，采用了分级系统进行分类。同时纳入了瘤样病变，引入/删除一些肿瘤，修改某些疾病的名称，并修订一些疾病的诊断标准或亚型，将这组疾病从非克隆性增生到高度侵袭性淋巴瘤进行了重新整合，更体现了T/NK-LPD/LYM的疾病本质，有利于临床应用。