冷冻保存技术已成为细胞治疗、辅助生殖、组织工程和疫苗储存等生物医学应用的必要方法。冰晶的形成是冷冻保存的主要限制因素，并会对生物样本造成致命性损伤。二甲基亚砜(DMSO)是传统上常用的冷冻保护剂，然而考虑到DMSO自身细胞毒性和给药后对机体产生的潜在不良反应，因此寻找具有安全性和有效性的替代DMSO方法的需求逐渐增长。本文拟概述多种治疗性细胞的无DMSO保存的研究进展及面临的问题和挑战，以期推动新型细胞冷冻保存技术更好地开展。

细胞冷冻保存应用广泛，但冷冻会损伤细胞导致代谢紊乱，而冷冻保护剂可缓解该过程。脯氨酸是一种渗透性冷冻保护剂，可快速透过细胞膜进入细胞内，与细胞内水氢键结合抑制低温下冰晶形成，同时可与细胞内水结合减少细胞内水流失，保护细胞内蛋白质的结构和功能，保护细胞膜。脯氨酸可提高植物、动物及人类体细胞冷冻复苏后存活率。在生殖细胞冷冻中，研究表明脯氨酸可用于卵母细胞冷冻，可提高小鼠卵母细胞冷冻后存活率及保护线粒体功能，但其对于精子的冷冻效果报道尚不一致。脯氨酸冷冻保护剂涉及多种细胞类型且冷冻效果较强，其未来可能更广泛应用于低温生物学领域。本文总结了脯氨酸作为天然小分子冷冻保护剂的应用研究进展，希望能够帮助人们更好地了解生殖细胞冻存的低温生物学机制，为改良生育力冷冻保存技术提供参考。

准确、及时的术中快速冷冻病理诊断,对手术患者的良恶性判断和手术范围的决定具有重要意义[1].术中快速冷冻病理诊断通常要求标本送检30 min内完成,缩短冷冻制片时间对提高术中快速冷冻病理诊断至关重要.本科室在实践中通过预冷OCT胶,有效缩短了术中送检组织标本的冷冻时间,现介绍如下.

目的:优选出不同状态(新鲜、干燥)及不同药用部位的不同药用植物(滇重楼、密脉鹅掌柴、铁皮石斛)最适宜的制片方法,提高横切面组织装片制备效率.方法:采用不同防冰晶形成保护剂(不处理、蔗糖和甘油)处理新鲜材料并进行冰冻切片,采用甘油软化干燥材料并进行石蜡切片,比较不同前处理条件和两种制片方法的制片效果.结果:新鲜材料中,密脉鹅掌柴的茎叶,滇重楼的根茎、茎、叶采用甘油溶液做保护剂效果较佳,而铁皮石斛适用蔗糖磷酸缓冲溶液做保护剂;滇重楼的须根用石蜡切片法可获得组织结构完整的装片.此外,经甘油溶液软化,滇重楼的干燥根茎和密脉鹅掌柴的干燥叶可获得质量较好的石蜡切片.结论:质地稍硬的新鲜药材用甘油溶液处理后采用冰冻切片可以获取较为理想的效果;质地柔软的新鲜药材可不经任何处理或经蔗糖磷酸缓冲液浸泡后采用冰冻切片;干燥药材或含淀粉类药材采用石蜡切片法可获得理想的切片效果.

病理科出具术中冰冻诊断报告的时间为30 min[1],而病理技师制片的时间只有15 min,因此快速制作一张高质量的冷冻切片一直是病理技师追求的目标.对于一些富含脂肪(乳腺、淋巴结等)的组织,恒温冷冻切片机速冻效果较差,易产生冰晶,拖延制片时间,影响切片质量[2].快速冷冻仪(以下简称速冻仪)能快速将组织速冻到指定温度,从而避免冰晶形成,缩短制片时间.现将恒温冷冻切片机的常规速冻与速冻仪的超快速冻使用效果进行对比研究.

冷冻消融术是一种肿瘤微创治疗手段.该技术借助冷媒(例如氮气和氦气)进行反复冻融循环,通过冰晶损伤、微循环损伤、细胞凋亡和免疫效应等机理,对肿瘤细胞和组织造成损害.近年来,冷冻消融技术以其侵入性小、靶向性高、能实现术中可视化监测等优点,被广泛应用于许多类型肿瘤的治疗中,然而冷冻消融技术还面临着会引起多种并发症、冷冻边界难以控制等诸多难题.综述冷冻消融的作用机理、技术特点、应用现状、主要优缺点及发展趋势,讨论如何通过优化冻融方案、联合免疫疗法等来改善冷冻消融并发症,并对实现大尺寸肿瘤的完全消融所面临的挑战进行展望和总结.

脑组织淋巴瘤临床较少见,术前影像学诊断困难,需与胶质瘤、转移癌、生殖细胞肿瘤、炎性脱髓鞘假瘤和感染性病变等鉴别.因为各肿瘤治疗方案不同,所以术中冷冻病理诊断直接影响临床手术决策,临床医师对脑肿瘤术中冷冻诊断的依赖度极高.由于脑组织含水量高,冷冻切片常不可避免地产生大量冰晶,导致切片质量欠佳,严重影响病理医师对脑肿瘤的诊断准确率[1].研究表明,细胞学诊断可显著提高术中脑肿瘤诊断与常规最终诊断的符合率[2].本科室采用细胞印片技术改善切片质量,缩短术中冷冻诊断时间,并与冷冻切片对比,在短时间内提高中枢神经系统淋巴瘤术中诊断正确率,现报道如下.

术中快速冷冻诊断结果能够让临床医师在手术过程中尽快了解病变性质,是辅助临床医师选择手术方式及确定手术范围的重要及可靠依据[1].在冷冻制片过程中冰晶的形成是影响病理诊断的重要因素之一.有学者提出利用高渗透压的组织保护液对组织进行前处理[2]以减少冰晶产生,也有学者报道利用甲基纤维素胶包埋结合液氮冷冻以防止冰晶产生[3].但如何对产生冰晶的组织进行补救却未见报道,本科室采取了解冻复温后重新冷冻制片的方法应用到临床实践中,取得了较好效果,现介绍如下.

冷冻切片是病理技术手段之一.临床医生可根据冷冻报告结果决定手术范围.高质量的冷冻切片为精准及时的报告提供物质保证.冷冻制片时组织中易形成冰晶,进而破坏组织细胞的形态结构最终导致漏诊或误诊.速冻是减少切片冰晶形成最有效的方法.然而,速冻极易造成组织的冷冻过度,特别是甲状腺.甲状腺一旦冷冻过度,切片时会出现粉末状、裂隙或褶皱,严重者影响诊断.前期有学者介绍了手捂、放置室温和调节样品头温度等一些关于复温的方法,但易形成冰晶或耗时较长.本科室在日常工作中不断探索,发现一种操作简单、耗时短、且效果较好的甲状腺组织冷冻过度后的复温方法,现介绍如下.

术中快速病理检查具有制片质量要求高、做出诊断时间短、诊断医师责任重等特点,因此制作出一张质量上乘的病理切片对术中快速病理诊断极为重要.在日常工作中,冷冻组织切片经常因组织自身成分的不同而在制片过程中出现差异,尤其是术中送检的病变脑组织,因其组织通常较少,义富含水分,极易形成冰晶,故快速冷冻切片的制作难度大,易影响病理诊断的准确性[1-3].