目的:本研究旨在探讨WWC2-AS1/miR-382-5p/FZD3在多囊卵巢综合征（polycystic ovarian syndrome，PCOS）患者颗粒细胞（GCs）中的作用及其分子机制。方法:借助生物信息学工具预测PCOS中的分子机制。采用qRT-PCR检测PCOS患者及对照组的血清和GCs中WWC2-AS1、miR-382-5p和FZD3的表达。CCK-8和流式细胞术观察WWC2-AS1/miR-382-5p/FZD3对GCs增殖和凋亡的影响。双荧光素酶报告实验验证WWC2-AS1和miR-382-5p、miR-382-5p和FZD3的互作用关系。结果:与对照组相比，PCOS患者的血清和GCs中WWC2-AS1和FZD3表达显著上调，miR-382-5p表达下调（均 P<0.05）。沉默WWC2-AS1能显著促进PCOS中的GCs增殖，抑制GCs凋亡（均 P<0.05）。PCOS中存在WWC2-AS1/miR-382-5p/FZD3互作用网络，miR-382-5p抑制剂或过表达FZD3均可部分逆转沉默WWC2-AS1对PCOS中GCs的调控作用（均 P<0.05）。 结论:本研究表明WWC2-AS1调控miR-382-5p上调FZD3在PCOS进展中促进GCs增殖，抑制细胞凋亡。WWC2-AS1/miR-382-5p/FZD3可能是治疗PCOS的有效分子靶点。

免疫检查点是肿瘤免疫治疗最为有效的研究靶点之一，以程序性死亡受体1及其配体1为主的免疫检查点抑制剂在多种肿瘤治疗中获得良好的响应率，但仍存在部分肿瘤应答率低的问题。近年来，双特异性抗体在肿瘤研究领域发展迅速，因其能靶向多个靶点，在肿瘤治疗中发挥联合作用，能够有效抑制肿瘤免疫逃逸。文章就靶向免疫检查点的双特异抗体研究进展和临床现状进行综述。

肠道微生物群被认为是维持人类宿主健康状态的基石，因为它不仅有助于从摄入的食物中获取营养和能量，还可以通过产生的代谢物调节宿主的能量代谢，对多种代谢性疾病的发生发展起到作用。近年来，糖尿病的治疗也随着科学技术的发展逐步推进，安全有效的降糖药物不断涌现，国内已上市了包括磺脲类、双胍类、格列奈类、糖苷酶抑制剂、二肽基肽酶Ⅳ抑制剂、胰高糖素样肽-1受体激动剂、钠-葡萄糖共转运蛋白2抑制剂和各种胰岛素类似物等在内的多种降糖药物。大量研究证明，肠道菌群可能为降糖药物控制血糖的作用靶点之一。该文针对目前降糖药物对肠道菌群的构成及其营养、能量代谢调节的影响进行综述，为未来新型降糖药物的机制研究及作用靶点提供参考。

目的:探讨微小RNA－17－5p(miR－17－5p)在食管鳞癌(ESCC)中的表达及其对ESCC细胞增殖和侵袭的影响。方法:采用实时荧光定量PCR(RT－qPCR)检测ESCC组织和细胞中miR－17－5p的表达。将miR－17－5p抑制剂和阴性对照转染食管鳞癌细胞EC9706和TE1，RT－qPCR检测转染后细胞中miR－17－5p的表达水平，细胞计数试剂盒8和EdU检测转染后细胞的增殖情况，Transwell小室检测细胞的侵袭能力。采用双荧光素酶报告实验分析miR－17－5p与成视网膜细胞瘤样蛋白2(RBL2)直接的相互作用，Western blot检测转染后RBL2蛋白的表达，RT－qPCR检测RBL2在ESCC组织中的表达，并分析其与miR－17－5p表达的相关性。结果:ESCC组织中miR－17－5p的相对表达水平为4.222±0.39，高于正常食管上皮组织(1.081±0.046， P<0.001)。ESCC细胞EC9706、Eca109、TE1、KYSE450、KYSE70和KYSE520中miR－17－5p的相对表达水平分别为13.84±1.266、6.453±0.293、11.41±0.520、2.613±0.548、5.251±0.239和4.251±0.195，均高于正常食管上皮细胞Het－1A(1.007±0.079，均 P<0.05)。Ⅲ＋Ⅳ期ESCC组织中miR－17－5p的表达水平(5.094±0.562)高于Ⅰ＋Ⅱ期患者(2.934±0.364)，差异有统计学意义( P<0.01)；有淋巴结转移患者中miR－17－5p的表达水平(5.523±0.634)高于无淋巴结转移患者(3.533±0.461)，差异有统计学意义( P<0.05)。miR－17－5p高表达患者的生存率低于miR－17－5p低表达患者，差异有统计学意义( P<0.05)。miR－17－5p抑制剂能下调EC9706和TE1细胞中miR－17－5p的表达，其表达下调抑制细胞的增殖和侵袭能力。双荧光素酶报告实验显示，无论是EC9706细胞还是TE1细胞，在RBL2 3′UTR－WT载体和miR－17－5p mimic共转染后，荧光素酶的活性显著降低( P<0.01)，RBL2是miR－17－5p的直接作用靶点。Western blot检测显示，miR－17－5p抑制剂组EC9706和TE1细胞中RBL2蛋白的表达量分别为0.936±0.055和0.923±0.048，明显高于对照组(分别为0.087±0.019和0.102±0.010)，差异均有统计学意义(均 P<0.001)。ESCC组织中RBL2的表达水平为0.219±0.510，低于正常食管上皮组织(0.983±0.324， P<0.001)。ESCC组织中miR－17－5p的表达水平与RBL2的表达水平呈负相关( r＝－0.462, P<0.001)。RBL2表达下调能逆转miR－17－5p抑制剂引发的细胞增殖和侵袭能力降低。 结论:miR－17－5p参与ESCC的发生、发展过程，有望成为ESCC潜在的分子治疗靶点。

目的:探究乙酰转移酶KAT5对甲状腺未分化癌(ATC)细胞放射敏感性的影响及机制。方法:检测人ATC细胞及正常人甲状腺细胞中内源性KAT5表达水平，使用克隆形成实验探讨KAT5特异性抑制剂NU9056对人ATC细胞及正常甲状腺细胞放射敏感性影响。借助蛋白质印迹、miRNA测序、qRT-PCR、双荧光素酶报告基因等手段，并检索JASPAR、TCGA等数据库，探讨KAT5调控ATC放射敏感性的机制。结果:人ATC细胞中内源性KAT5蛋白及基因水平均显著高于正常人甲状腺细胞，而NU9056能显著提高人ATC细胞8505C和CAL-62的放射敏感性，但对正常人甲状腺细胞Nthy-ori 3-1却无增敏作用。下调KAT5和NU9056均可降低ATC细胞中miR-210水平，而NU9056可降低细胞中转录因子c-Myc表达。miR-210启动子核心区域存在转录因子c-Myc的结合位点，而c-Myc可提高miR-210启动子荧光素酶活性。miR-210高表达是甲状腺癌患者的不良预后因素。上调miR-210能降低ATC细胞中TET2基因表达，而下调miR-210则起相反作用。结论:过度激活的KAT5/miR-210/TET2通路可能造成ATC的放射抵抗，成为临床ATC放射增敏的潜在靶点。

小细胞肺癌(SCLC)属于恶性程度高的神经内分泌肿瘤，侵袭性强，可迅速进展，是肺癌的一种特殊类型。SCLC对放疗和化疗敏感，多年来，放化疗一直是SCLC的主要一线治疗手段，但治疗后极易耐药，因此抗血管生成治疗的研究受到关注。目前，抗血管生成药物主要聚焦于单克隆抗体(如贝伐单抗)、内源性血管生成抑制剂(如恩度)、抗血管生成融合蛋白(如阿柏西普)和小分子酪氨酸激酶抑制剂(如安罗替尼等)4类。但抗血管生成药物的研究和临床应用还存在一些瓶颈，探索更好的联合治疗方案和有效的双领域、多靶点药物是努力的正确方向。

目的:探讨微RNA（microRNA，miRNA）-223在乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）X蛋白（HBV X protein，HBx）诱导的HBV相关性肾炎（HBV-associated glomerulonephritis，HBV-GN）足细胞焦亡中的潜在功能及相关机制。方法:采用人肾足细胞中过表达 HBx基因来模拟HBV-GN的发病机制。实时荧光定量PCR和Western印迹分别检测焦亡相关蛋白［核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3，NLRP3）、胱天蛋白酶1（Caspase-1）、凋亡相关斑点样蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD，ASC）］及炎性因子［白细胞介素1β、白细胞介素18］mRNA和蛋白的表达水平；双荧光素酶报告基因实验验证miRNA-223的下游靶标；TUNEL染色和流式细胞术检测细胞焦亡情况；免疫荧光检测足细胞损伤标志物Desmin和Nephrin的表达；Hoechst 33342染色观察足细胞细胞核的形态和数量变化；酶联免疫吸附测定检测Caspase-1活性。将足细胞分为以下9组：对照组（不予特殊处理）、空质粒组（转染空质粒）、HBx过表达组（转染HBx过表达慢病毒）、HBx过表达+miRNA-223 mimic组（共转染HBx过表达慢病毒和miRNA-223模拟物）、HBx过表达+miRNA-223 inhibitor组（共转染HBx过表达慢病毒和miRNA-223抑制剂）、HBx过表达+miRNA-223 mimic+NLRP3组（共转染HBx过表达慢病毒、miRNA-223模拟物和NLRP3过表达质粒）、HBx过表达+miRNA-223 mimic+NLRP3 siRNA组（共转染HBx过表达慢病毒、miRNA-223模拟物和NLRP3 siRNA）、HBx过表达+miRNA-223 inhibitor+NLRP3组（共转染HBx过表达慢病毒、miRNA-223抑制剂和NLRP3过表达质粒）、HBx过表达+miRNA-223 inhibitor+NLRP3 siRNA组（共转染HBx过表达慢病毒、miRNA-223抑制剂和NLRP3 siRNA）。 结果:与对照组相比，HBx过表达组miRNA-223表达较低（ P < 0.05）。TUNEL染色和免疫荧光结果显示，敲低NLRP3减弱HBx过表达引起的足细胞损伤和焦亡（ P < 0.05）。双荧光素酶报告基因实验证明NLRP3是miRNA-223的下游靶点之一。功能回复实验证明，NLRP3过表达削弱了miRNA-223对足细胞损伤的保护作用（ P < 0.05）。miRNA-223 mimic和NLRP3 siRNA的共同加入使HBx过表达诱导升高的NLRP3炎症小体及炎性因子表达下降，焦亡细胞数量减少（均 P < 0.05）；而同时引入miRNA-223 inhibitor和NLRP3过表达质粒则使足细胞中NLRP3炎症小体和炎性因子的表达上调，Caspase-1活性升高，焦亡细胞数量增加（均 P < 0.05）。 结论:HBx可能通过下调miRNA-223靶向NLRP3炎症小体促进HBV-GN足细胞焦亡。miRNA-223有望成为治疗HBV-GN的潜在靶点。

目的:探究微小RNA-20b(miR-20b)在寻常型银屑病患者外周血血浆中的表达，并进一步分析其对人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞株)增殖和凋亡的影响及潜在机制。方法:收集36例寻常型银屑病患者外周血和36例健康志愿者外周血(健康对照组)，采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血浆中miR-20b的相对表达水平。体外培养HaCaT细胞，随机分为对照组(不予处理)、白介素-22(IL-22)治疗组(采用100 ng/ml IL-22刺激24 h)、IL-22+抑制剂对照组(转染抑制剂阴性对照后，用100 ng/ml IL-22刺激24 h)和IL-22+miR-20b抑制剂组(转染miR-20b抑制剂后，用100 ng/ml IL-22刺激24 h)。采用qRT-PCR检测各组HaCaT细胞中miR-20b的相对表达；CCK-8法和流式细胞术分别检测HaCaT细胞增殖和凋亡。采用生物信息软件预测miR-20b的下游靶点。双荧光素酶报告基因实验验证miR-20b与killin-p53调节DNA复制抑制剂(KLLN)3′UTR的靶向结合关系。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测KLLN蛋白在各组HaCaT细胞中的表达水平。结果:银屑病患者血浆中miR-20b水平显著高于健康对照组[(1.62±0.53) vs (1.00±0.42)]，差异有统计学意义( P<0.001)。qRT-PCR结果显示，miR-20b在IL-22治疗组中表达高于对照组( P<0.05)；miR-20b在IL-22+miR-20b抑制剂组中表达低于IL-22+抑制剂对照组( P<0.05)。CCK-8结果显示，IL-22治疗组的HaCaT细胞的吸光度值在24、48、72 h和96 h时显著高于对照组(均 P<0.05)；IL-22+miR-20b抑制剂组的HaCaT细胞在48、72、96 h时的吸光度值显著低于IL-22+抑制剂对照组(均 P<0.05)。IL-22治疗组细胞的凋亡率显著低于对照组[(4.12±0.37)% vs (7.06±0.58)%]，差异有统计学意义( P<0.05)。IL-22+miR-20b抑制剂组HaCaT细胞的凋亡率显著高于IL-22+抑制剂对照组[(6.59±0.53)% vs (3.94±0.46)%]，差异有统计学意义( P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验验证miR-20b与KLLN的相互作用，结果显示KLLN野生型的荧光素酶活性被miR-20b模拟物显著抑制。Western blot结果显示，IL-22治疗组中KLLN的蛋白表达低于对照组( P<0.05)；IL-22+miR-20b抑制剂组的KLLN的蛋白表达高于IL-22+抑制剂对照组( P<0.05)。 结论:miR-20b在寻常型银屑病患者血浆中高表达，miR-20b可能通过靶向KLLN促进角质形成细胞的增殖和抗凋亡能力。

肿瘤细胞在各种应激条件刺激下，可通过适应性表型重塑，实现免疫逃逸、远处转移及药物抵抗。热休克蛋白90(HSP90)家族蛋白是在热休克刺激下适应性高表达的一组分子伴侣，参与多达200余种客户蛋白的组装、成熟与降解，在胞内信号传导和应激反应过程中发挥重要作用，是服务于癌细胞生存的关键因子。HSP90在结直肠癌(CRC)组织中异常高表达，与患者不良预后密切相关，同时介导CRC的增殖、转移、侵袭、耐药等多种生物学表型，是CRC治疗中极具前景的药物作用靶点。然而，由于HSP90下游调控网络复杂、对正常细胞具有双刃剑作用，由此导致的抗癌疗效与不良反应平衡困难，限制了HSP90的临床转化。为解决上述问题，研究人员近年来针对HSP90开展了多项基础研究与临床试验，包括HSP90促癌机制的研究、高特异性低毒性抑制剂的开发、敏感人群标志物的鉴定以及新型药物递送系统的建立。因此有必要对最新研究进展做一述评，并对未来研究方向进行探讨与展望，旨在推动以HSP90为靶点的CRC治疗取得进展。

目的:探讨RAF抑制剂SB590885、JAK抑制剂AZD1480、PI3K-mTOR双靶点抑制剂BEZ235等BCR-ABL下游通路抑制剂体外对慢性粒细胞白血病（CML）细胞的作用及BEZ235对CML细胞增殖、凋亡及伊马替尼敏感性的影响。方法:用不同浓度药物处理K562细胞，采用MTS法检测K562细胞的增殖抑制率，计算各药物48 h半数抑制浓度（IC 50）；采用流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡率，流式细胞术PI单染色法检测细胞周期。以不同浓度药物处理K562细胞、伊马替尼耐药的T315I突变的人CML KBM7R细胞、伊马替尼耐药的CML患者原代细胞，采用MTS法检测细胞增殖抑制率，分别计算各药物48 h的IC 50。分别单用1.0 μmol/L BEZ235、1.0 μmol/L伊马替尼或两者联合处理KBM7R细胞或CML患者原代细胞，采用流式细胞术PI单染色法检测KBM7R细胞周期，流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染色法检测CML患者原代细胞凋亡率，蛋白质印迹法检测KBM7R细胞p-AKT、cleaved Caspase-3、Cyclin D1蛋白的表达情况。 结果:SB590885、AZD1480、BEZ235均能抑制K562细胞的增殖，三者处理K562细胞48 h的IC 50分别为（11.49±3.14）、（4.83±1.26）、（0.37±0.21）μmol/L。SB590885、AZD1480、BEZ235均能促进K562细胞的凋亡，与未经药物作用的对照组比较，细胞凋亡率均升高（均 P<0.01）。SB590885和BEZ235诱导细胞G 0/G 1期阻滞（均 P<0.05），AZD1480诱导细胞G 2/M期阻滞（ P<0.05）。BEZ235可抑制K562、KBM7R细胞以及患者原代细胞的增殖，其48 h的IC 50分别为（0.37±0.21）、（0.43±0.27）、（0.49±0.24）μmol/L。与单用伊马替尼组相比，0.2 μmol/L BEZ235与不同浓度伊马替尼联用可增加对K562、KBM7R细胞和患者原代细胞的增殖抑制，降低伊马替尼的IC 50，其中，伊马替尼单用和联合BEZ235处理48 h后，K562细胞的伊马替尼IC 50分别为（0.14±0.05）、（0.09±0.04）μmol/L（ t=1.351， P=0.249），KBM7R细胞分别为（3.93±2.29）、（0.44±0.22）μmol/L（ t=2.837， P=0.047），原代细胞分别为（3.12±1.53）、（0.39±0.23）μmol/L（ t=3.925， P=0.042）。未经药物作用的对照组、单用1.0 μmol/L BEZ235、单用1.0 μmol/L伊马替尼及两药联合处理24 h后患者原代细胞凋亡率分别为（4.9±1.4）%、（13.1±3.2）%、（8.8±2.0）%、（40.6±6.0）%，差异有统计学意义（ F=71.031， P<0.01）。与单用伊马替尼相比，BEZ235联合伊马替尼处理12 h的KBM7R细胞p-AKT、Cyclin D1蛋白的表达降低，cleaved Caspase-3蛋白的表达升高。 结论:BCR-ABL下游通路抑制剂可有效抑制K562细胞的增殖，促进细胞凋亡。BEZ235能够抑制K562细胞、伊马替尼耐药的T315I突变的KBM7R细胞以及伊马替尼耐药的CML患者原代细胞的增殖，促进细胞凋亡，与伊马替尼具有协同作用。