目的:探讨2010—2020年期间北京市某儿童医院儿童主要变应原的致敏特征及变迁情况，为儿童过敏性疾病的诊断、治疗及预防提供依据。方法:回顾性研究，以2010年1月至2020年12月在首都儿科研究所附属儿童医院怀疑过敏性疾病就诊并进行血清免疫球蛋白E（总IgE和特异性IgE）检测的患儿作为研究对象，共纳入45 746例居住在北京地区的儿童，年龄范围0~17岁，中位数（四分位间距）为3.8（2.5，5.3）岁。男童28 918例（63.2%），女童16 828例（36.8%）。婴幼儿组（<3岁）14 984例（32.8%）、学龄前组（3~6岁）22 049例（48.2%）、学龄期组（6岁及以上）8 713例（19.0%）。应用ImmunoCAP变应原系统（荧光酶联免疫法）检测并采用χ2检验进行统计分析11年期间变应原的致敏特征及变化趋势。结果:单价食物变应原sIgE阳性检出率前3位依次为鸡蛋白42.6%（2 788/6 577例次）、牛奶38.4%（2 606/6 782例次）和小麦31.8%（1 417/4 449例次）；单价吸入变应原依次为豚草42.6%（440/1 034例次）、艾蒿38.4%（1 045/3 191例次）、链格孢31.3%（3 358/10 725例次）。鸡蛋白47.0%（1 904/4 048例次）、牛奶41.9%（1 769/4 226例次）、小麦33.9%（973/2 870例次）在婴幼儿组阳性检出率最高，差异有统计学意义（χ2=91.495、73.907、16.966， P均<0.05），坚果混合fx1（22.5%，121/537例次）、花生（24.9%，111/446例次）、大豆（20.0%，74/370例次）和虾（7.48%，44/588例次）在学龄组阳性率最高，差异有统计学意义（χ2=14.436、10.751、11.569、13.703， P均<0.05）。婴幼儿组最常见的吸入变应原为链格孢霉（14.8%，422/2 859例次），学龄前期以豚草（34.5%，143/415例次）和链格孢霉（33.5%，1 762/5 254例次）为主，学龄期豚草（56.4%，282/500例次）和艾蒿（48.2%，573/1 189例次）检出率最高。2010—2020年期间鸡蛋白、牛奶、小麦、芝麻、花生的阳性检出率整体存在差异，呈现出先下降后上升的趋势（χ2=10.293、χ2=12.066、χ2=7.402、χ2=32.458、χ2=31.747， P均<0.05）；大豆阳性检出率呈现下降趋势（2010年21.4%、173/809例次，2020年15.4%、70/455例次），差异有统计学意义（χ2=6.751， P=0.009）。2010—2020年期间霉菌、草花粉、树木花粉、动物皮屑均呈现出上升趋势，霉菌（2010年26.7%、1 066/3 998例次，2020年40.2%、1 705/4 243例次）、草花粉（2010年19.8%、259/1 308例次，2020年39.3%、1 472/3 746例次）、树花粉（2010年17.0%、180/1 058例次，2020年29.8%、916/3 075例次）、动物皮屑（2010年18.5%、111/601例次，2020年26.6%、672/2 522例次）上升显著，差异均有统计学意义（χ 2分别为168.600、163.601、65.931、17.271， P均 <0.001）；但尘螨（2010年30.7%、1 270/4 132例次，2020年26.7%、1 126/4 221例次）呈下降趋势，差异有统计学意义（χ2=16.822， P<0.001）。2010年最常见的吸入变应原为尘螨30.7%（1 270/4 132例次），其次为霉菌26.7%（1 066/ 3 998例次），而2020年最常见的变应原为霉菌40.2%（1 705/1 243例次），其次为草花粉39.3%（1 472/3 746例次）。 结论:2010—2020年期间北京地区儿童主要食物变应原仍以鸡蛋白、牛奶、小麦为主，但霉菌和花粉类逐渐取代尘螨成为最主要的吸入变应原。

目的:探讨天津地区特应性皮炎患儿过敏原特异性免疫球蛋白E（specific immunoglobulin E，sIgE）分布及规律，为临床诊疗提供参考依据。方法:采用回顾性横断面研究方法，应用酶联免疫捕获法，对2021年3月至2023年2月在天津市儿童医院就诊的1 841例特应性皮炎患儿进行20项过敏原sIgE的血清学检测，收集首次检测结果，采用 χ2检验分析其在不同性别、年龄和季节的过敏原分布特征。 结果:1 841例患儿中，有1 247例（67.73%）至少1种过敏原sIgE阳性；食物过敏原sIgE阳性率49.86%（918/1 841），检出前3位依次为鸡蛋32.10%（591/1 841）、牛奶25.91%（477/1 841）、小麦面粉14.61%（269/1 841）；吸入过敏原sIgE阳性率47.96%（883/1 841），检出前3位依次为屋尘24.33%（448/1 841）、交链孢霉20.59%（379/1 841）、粉尘螨14.83%（273/1 841）。食物过敏原sIgE阳性率最高的年龄组为1~3岁组64.11%（434/677）（ χ2=122.854， P<0.001），吸入过敏原sIgE阳性率最高的年龄组为11~14岁组71.26%（62/87）（ χ2=134.968， P<0.001）。食物及吸入过敏原sIgE总的阳性率在不同季节没有明显差异（ χ2=4.047， P=0.256； χ2=7.549， P=0.056），单项分析显示，大豆、牛奶sIgE阳性率在夏季最高（4.86%，30.54%）（ χ2=11.329， P=0.010； χ2=28.720， P<0.001），而交链孢霉、艾蒿sIgE阳性率分别在夏季和秋季最高（24.86%，11.54%）（ χ2=8.462， P=0.037； χ2=10.641， P=0.014）。1 841例患儿中，有32.21%的患儿3种及以上过敏原sIgE阳性；鸡蛋、牛奶及屋尘的sIgE浓度等级以1~2级为主，3级及以上等级的比例均<15%；蟹、虾、花生尽管阳性率低，3级及以上等级的比例均>30%；交链孢霉、粉尘螨、艾蒿、猫毛皮屑阳性患儿的sIgE高浓度等级占比较大，分别为68.07%、49.45%、56.57%和47.83%。 结论:本研究可在一定程度上反映天津地区的特应性皮炎患儿的过敏原sIgE分布特征，不同年龄组中过敏原sIgE阳性率有明显差异，部分过敏原sIgE阳性率存在季节性差异和等级分布差异，有必要根据分布特征和临床症状，合理规避高风险的过敏原，做好特应性皮炎的预防和诊疗。

[背景]丁酸梭菌是专性厌氧的新一代芽孢益生菌,耐热、耐酸、抗逆性强,极具应用价值和开发前景.[目的]优化丁酸梭菌发酵培养基并初步研究其发酵液对黄曲霉菌的抑制作用和降解黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)的能力.[方法]利用响应面法对发酵培养基进行优化,采用牛津杯法对丁酸梭菌发酵液抑制黄曲霉菌生长进行研究,并通过酶联免疫法测定发酵液对 AFB1的降解能力.[结果]优化后的发酵培养基为:葡萄糖 18.1 g/L,大豆蛋白胨 29.7 g/L,磷酸氢二钾 3.8 g/L,氯化钠 2.0 g/L,乙酸钠 4.0 g/L,结晶硫酸镁 1.2 g/L,L-半胱氨酸盐酸盐 0.3 g/L.优化后的丁酸梭菌生物量由 8.99×108 个/mL 提高至 2.28×109 个/mL,是优化前的 2.54 倍.丁酸梭菌发酵液对致病真菌黄曲霉菌的抑菌效果十分显著,其上清液经浓缩后对AFB1 降解 72 h的降解率达到 68.65%,初步分析表明上清液中对 AFB1 具有脱毒作用的活性组分为丁酸梭菌分泌产生的胞外酶.[结论]本研究通过发酵培养基优化明显提高了丁酸梭菌的生物量,并将其应用于抑制黄曲霉菌的生长与降解AFB1,为丁酸梭菌的规模化生产及其微生态制剂的开发应用提供了科学依据.

探讨葛根芩连汤(Gegen Qinlian Decoction,GQD)缓解内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)改善体内外糖代谢的效应机制.分子对接预测GQD入血主要药效成分与ERS相关靶点的结合活性.取冻存正常组、高脂诱导糖尿病模型组、二甲双胍组和GQD组大鼠肝组织,提取RNA和蛋白质,qPCR检测ERS标志蛋白葡萄糖调节蛋白 78(glucose-regulated protein 78,Grp78)、未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)通路基因肌醇需求酶 1(inositol requiring enzyme 1,Ire1)、转化因子6(activating transcription factor 6,Atf6)、Atf4、C/EBP同源蛋白(C/EBP-homologous protein,Chop)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-12 基因mRNA表达;Western blot 检测 GRP78、IRE1、蛋白激酶 R 样内质网激酶(protein kinase R-like ER kinase,PERK)、ATF6、X-盒结合蛋白 1(X-box binding protein 1,XBP1)、ATF4、CHOP、caspase-12、caspase-9 和caspase-3 蛋白表达;比色法检测肝组织钙离子含量.体外采用衣霉素诱导 6 h建立 ERS-HepG2 细胞模型,2.5%、5%、10%GQD 含药血清(GQD-containing serum)给药 9 h,葡萄糖氧化酶法检测细胞外液葡萄糖含量;流式细胞术检测细胞凋亡;糖原染色检测细胞糖原含量;免疫荧光检测ERS标志蛋白GRP78 表达;比色法检测胞内钙离子含量;Western blot检测GRP78 和ERS诱导IRE1、PERK、ATF6 和真核翻译启动因子 2α(eukaryotic translation initiation factor 2α,eIF2α)磷酸化,同时检测胰岛素降糖通路蛋白胰岛素受体底物 1(insulin receptor substrate 1,IRS1)、磷脂酰肌醇 3-激酶p85 调控亚基(phosphatidylinositol 3-kinase regulatory subunit p85,PI3Kp85)和蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)的磷酸化水平.此外,Western blot检测沟通ERS与胰岛素降糖通路的c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNKs)磷酸化水平.分子对接结果显示,GRP78、IRE1、PERK、ATF4 与黄芩素、小檗碱、大豆黄酮、药根碱、甘草苷、棕榈碱、葛根素、汉黄芩苷有较强结合活性,提示GQD可能干预ERS诱导的UPR.体内结果显示,GQD可下调糖尿病大鼠 Ire1、Atf6、Atf4、Grp78、caspase-12、Chop的 mRNA转录,下调 GRP78、IRE1 和 PERK及ERS诱导凋亡相关因子ATF4 和CHOP、caspase-12、caspase-9和caspase-3表达,上调XBP1 增强适应性UPR.此外,GQD可升高肝组织钙离子含量,有助于蛋白正确折叠.体外结果显示,GQD可增加衣霉素诱导ERS-HepG2 细胞葡萄糖消耗量且不明显影响细胞活力,增加肝糖原合成,下调 ATF6 和 p-eIF2α(Ser51)、IRE1、PERK 和 GRP78 的表达,下调 p-IRS1(Ser312)和p-JNKs(Thr183/Tyr185)的表达,上调p-PI3Kp85(Tyr607)和p-Akt(Ser473)的表达.研究提示GQD可缓解肝过度ERS,减轻胰岛素抵抗,改善体内外肝糖代谢.

通过液—液萃取、硅胶和凝胶柱层析法,从佛甲草(Sedum lineare)分离出一种可以抑制水稻细菌性条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv. oryzicola,Xoc)生长的单体化合物,经质谱分析,确定该化合物为没食子酸(gallic acid,GA).在30 mg·mL?1浓度下,GA能抑制一些植物病原细菌如桃细菌性穿孔病菌(X. campestris pv. pruni)、水稻细菌性条斑病菌(X. oryzae pv. oryzicola)、水稻白叶枯病菌(X. oryzae pv. oryzae)、柑橘溃疡病菌(X. axonopodis pv. citri)、大豆细菌性斑点病菌(Pseudomonas syringae pv. glycinea)、番茄细菌性斑点病菌(P. syringae pv. tomato)和胡萝卜软腐果胶杆菌(Pectobacterium carotovora subsp.carotovora)的生长;GA还对11种植物病原真菌如烟草疫霉(Phytophthora nicotianae)、指状青霉(Penicillium digitatum)、滇刺枣褐腐病菌(Streptobotrys strepto?thrix)、瓜果腐霉(Pythium aphanidermatum)、芒果拟盘多毛孢(Pestalotiopsis mangiferae)、新月弯孢霉(Curvularia lunata)、立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)、(Fusarium oxysporum f. sp. niverum)、西瓜专化型尖孢镰刀菌(F. oxysporum f. sp. nicotianae)、番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)和齐整小核菌(Sclerotium rolfsii)的生长具有一定的抑制作用.在300 mg·mL?1浓度下,GA对水稻细菌性条斑病的田间防治效果达到64.62%.该研究结果表明没食子酸具有开发成为一种防治水稻细菌性条斑病的杀菌剂的潜力.

大豆疫霉引起的大豆疫病是大豆生产上的毁灭性病害.深入了解大豆疫霉与寄主在分子层面的互作机制是解析病原菌致病机理、针对性地制定防治措施的必要前提.目前研究表明,植物通过两个层面的识别机制来启动防卫反应,而能否正确识别"非我"分子则是植物开启免疫系统的关键.而对于病原菌,则采用多种分子策略来极力逃避寄主的识别机制,分泌效应分子协同抑制寄主免疫反应.本文综述了一系列大豆抗病基因介导的小种专化抗性丧失的原因,以及大豆疫霉效应分子逃避和破坏寄主免疫反应的分子策略,并讨论了基于这些分子互作机制应用于筛选新型抗病资源和精确育种的可能性.

[背景]大豆疫霉根腐病作为大豆生产上的一种毁灭性病害已被美国、加拿大等多国报道,其病原菌大豆疫霉(Phtophthora sojae Kaufmann and Gerdemann)为典型的土传病原菌.近年来,土传病原菌与植物根系的互作成为研究土传病原菌寄主选择机制的主要方向.[目的]探究寄主大豆和非寄主菜豆根及根分泌物对大豆疫霉的不同影响,阐明这种影响与大豆疫霉对寄主选择的关系.[方法]应用原位土培法种植大豆疫霉感病品种Sloan、抗病品种Williams82和非寄主菜豆一点红,测定了单个大豆疫霉游动孢子对寄主大豆和非寄主菜豆幼根的侵染行为,收集了寄主及非寄主根分泌物,测定了根分泌物对大豆疫霉游动孢子的趋化作用,包括吸引游动孢子的能力以及对游动孢子成囊、孢囊萌发和芽管生长的影响.[结果]大豆疫霉单个游动孢子对寄主大豆幼根表现强烈趋向性,沿着根面进行多次试探性接触后在根尖伸长区快速成囊并萌发,产生的芽管顶端贴附在幼根表面,在感病大豆品种根面上的芽管比抗病大豆品种上的短且粗,而对非寄主菜豆幼根则不具有趋向性,接触一次后即远离,最终在距离幼根75 μm的位置成囊萌发,且芽管生长不具有方向性.此外,大豆疫霉游动孢子对抗病、感病大豆和非寄主菜豆幼根的侵染行为差异完全在根分泌物试验中重现,即寄主大豆根分泌物对大豆疫霉游动孢子具有较强的趋向作用,能够有效吸引游动孢子,促进游动孢子快速成囊及萌发,抑制芽管的伸长,而非寄主菜豆根分泌物不具有上述作用.[结论]大豆疫霉对寄主的选择性与根分泌物有关,为进一步了解大豆疫霉的寄主选择机制提供理论依据.

目的 了解天津市市售植物油受黄曲霉毒素B1(AFB1)及玉米赤霉烯酮(ZEN)的污染状况.方法 用酶联免疫吸附测定法(ELISA)和液相色谱质谱联用法对天津市内采集的100份植物油样品中AFB1及ZEN含量进行检测.结果 100份植物油样品中,AFB1的检出率为23.00％,最高含量为34.81μg/kg,检出于花生油中;花生油及芝麻油受AFB1污染最为严重,分别达到了36.00％和28.57％,其次是核桃油、橄榄油,分别为25.00％和20.00％.ZEN检出率为53.00％,其中最高含量为384.89μg/kg,检出于菜籽油中;除亚麻籽油及茶籽油外,其余植物油均有检出ZEN,其中菜籽油、玉米油、大豆油、花生油、核桃油、芝麻油污染较为严重,检出率达50％以上.天津市内六区的AFB1的检出率明显低于环城四区.散装花生油的AFB1污染率以及含量明显高于桶装花生油,而散装油和桶装油的ZEN差别不是很大.结论 本次天津油样调查提示,天津市食用植物油中真菌毒素污染比较普遍,还需加快开发检测技术、建立全国统一检测机制以及加强农贸市场植物油的监管.

玉米赤霉烯酮(zeralenone,ZEN)具有雌激素活性,主要污染谷物和饲料,大量聚积可导致流产和死胎,给动物和人类健康带来严重威胁.本研究通过将ZEN偶联抗原ZEN-BSA包被于纳米磁珠(magnetic nanoparticles,MNPs),制备纳米磁珠-偶联抗原复合物(MNPs-BSA-ZEN),同时使用金颗粒(Au nanoparticles,AuNPs)和辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)双标记的ZEN单克隆抗体,建立新型酶联免疫检测方法(MNPs-HRP-AuNPs IC-ELISA).检测下限(IC10)达到0.03ng/mL,检测区间(IC20-IC80)为0.05-0.89ng/mL,半数抑制率(IC50)为0.22ng/mL,与ZEN类似物(α-zearalanol、zearalanone、α-zearalenol、β-zearalenol和β-zearalanol)的交叉反应性依次为19.2％、11.7％、8.3％、1.2％和4.3％,与黄曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A、伏马毒素B1、桔青霉素和展青霉毒素几乎不存在交叉反应.在玉米、面粉和大豆样本中的加标回收率可达81.6％-113.5％,与LC-MS/MS同时对天然样本中ZEN含量的检测结果表明,两种方法相关性良好.本研究建立的MNPs-HRP-AuNPs IC-ELISA具备快速和高灵敏的双重优势,也可为其他霉菌毒素精准检测技术的开发提供参考.

赭曲霉毒素A (ochratoxin A,OTA)具有肾毒性、致畸性、致癌性和免疫毒性,广泛存在于各种粮食作物及其副产品中,是食品和饲料原料的重要污染物,可在人类及动物体内蓄积,在已知发现的真菌毒素中,重要性和危害性仅次于黄曲霉毒素.本研究通过采用量子点荧光微球(quantum dots,QDs)标记OTA单克隆抗体,并基于免疫层析原理,优化、建立了OTA高灵敏荧光免疫层析检测方法(FICGA),15min即可实现对农产品中OTA污染的快速定量检测.该方法检测下限(IC10)达到0.04ng/mL,检测区间(IC20-IC80)为0.05-0.59ng/mL,半数抑制率(IC50)为0.18ng/mL.与OTA类似物OTB、OTC交叉反应性为7.3％和11.9％,对其他常见真菌毒素AFB1、ZEN、FB1和DON均无交叉反应.在玉米、面粉和大豆样本中的加标回收率可达83.2％-117.8％,与LC-MS/MS同时对天然样本中OTA含量的检测结果表明,两种方法相关性良好.本研究建立的FICGA快速、灵敏,可满足基层单位和现场的快速检测需求,具有很好的应用前景.