目的:检测桥本甲状腺炎患者(Hashimoto′s thyroiditis，HT)甲状腺功能正常组、HT合并亚临床甲状腺功能减退(SCH)组以及对照组外泌体微小RNAs(microRNAs，miRNAs)，探讨HT病程中不同甲状腺状态下的miRNA差异表达谱及其相应的生物学功能。方法:选取HT甲状腺功能正常者、HT合并SCH患者及健康志愿者各3人，提取外周血浆外泌体进行miRNA高通量测序，统计分析3组间差异表达miRNA，并进行靶基因预测、基因本体功能(GO)及京都基因与基因组百科全书通路(KEGG pathway)分析。结果:得到75条差异表达miRNA( log2FC>1且 Q- value≤0.001)，数据挖掘后获得hsa-miR-324-3p、hsa-miR-370-3p、hsa-miR-423-5p、hsa-miR-532-3p等10条核心miRNA。GO分析表明，差异miRNA的靶基因主要参与细胞过程、生物调节、代谢过程等生物学过程，具备结合、催化活性、转录调节活性等分子功能。KEGG分析得到的通路主要为环磷酸腺苷(cAMP)信号通路、人类表皮生长因子受体(human epidermal growth factor receptor，ErbB)信号通路、缺氧诱导因子-1(hypoxia inducible factor-1，HIF-1)信号通路等。 结论:HT患者血浆外泌体miRNA较健康人存在差异表达，其在甲状腺功能正常与SCH两种不同状态中也存在差异表达。hsa-miR-324-3p、hsa-miR-370-3p、hsa-miR-423-5p及hsa-miR-532-3p等miRNA可能通过cAMP、ErbB及HIF-1等信号通路在HT病程进展中发挥一定的作用。

目的 分析淋巴特异性解旋酶(LSH)在肺腺癌PC9细胞过表达后微小RNA(miRNA)的表达差异,并预测其潜在调控基因.方法 采用高通量测序技术检测LSH过表达的PC9细胞系中的总miRNA,并筛选核质比有差异的候选miRNA,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)对候选miRNA的核质比进行验证,应用生物信息学方法对调控基因进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析及基因本位(GO)功能富集分析,构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络对miRNA核靶点进行筛选,利用癌症基因组图谱(TCGA)数据库探究候选靶基因对肺腺癌患者预后的影响.结果 通过对LSH过表达PC9细胞进行测序及基因差异分析,共筛选出5个核质比差异的miRNA:hsa-miRNA-30e-5p、hsa-miRNA-378i、hsa-miRNA-378f、hsa-miRNA-423-5p、hsa-miRNA-4284,其中核内miRNA-4284增加最为显著.经KEGG与GO富集分析发现这些miRNA可能通过结合靶基因参与了RAS信号通路的调控.通过PPI网络及肺癌预后预测发现,差异miRNA可下调CXC趋化因子受体4(CXCR4)表达,增加肺腺癌患者的死亡风险.结论 LSH过表达的肺腺癌PC9细胞核和细胞质中出现多个显著差异表达的miR-NA,以核内miRNA-4248变化最为明显,生物信息学分析发现差异miRNA可能通过下调CXCR4的表达增加肺腺癌患者的死亡风险.

目的 分析血清长链非编码RNA(lncRNA)ANRIL、微小RNA(miR)-423-5p与支气管哮喘患儿气道炎症、重塑的关系及其预测价值.方法 选取2020年6月至2022年12月海口市妇幼保健院收治的98例支气管哮喘患儿,其中46例急性发作期患儿作为发作期组,52例临床缓解期患儿作为缓解期组;另选取同期于该院体检健康的50例儿童作为健康组.采用实时荧光定量聚合酶链反应检测血清lncRNA ANRIL、miR-423-5p相对表达量.采用酶联免疫吸附试验法检测血清炎症因子指标[白细胞介素13(IL-13)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)];测量气道重塑指标[支气管厚度(T/D)、管壁面积/支气管道总横截面积(WA)]与肺功能指标[第一秒用力呼气量(FEV,)、最高呼吸气流(PEF)、最大呼气中期流量(MMEF)];采用Pearson法分析血清lncRNA ANRIL、miR-423-5p表达与气道炎症、重塑指标的相关性;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清lncRNA ANRIL、miR-423-5p诊断支气管哮喘的预测价值.结果 缓解期组与发作期组血清lncRNA ANRIL相对表达量高于健康组,血清miR-423-5p相对表达量低于健康组,差异有统计学意义(P＜0.05);发作期组血清lncRNA ANRIL相对表达量高于缓解期组,血清miR-423-5p相对表达量低于缓解期组,差异有统计学意义(P＜0.05).发作期组与缓解期组血清VEGF、IL-13、TGF-β1水平高于健康组,差异有统计学意义(P＜0.05);发作期组血清VEGF、IL-13、TGF-β1水平高于缓解期组,差异有统计学意义(P＜0.05).缓解期组与发作期组T/D、WA高于健康组,FEV1、PEF、MMEF水平低于健康组,差异有统计学意义(P＜0.05);发作期组T/D、WA高于缓解期组,FEV1、PEF、MMEF水平低于缓解期组,差异有统计学意义(P＜0.05).Pearson相关性分析结果显示,血清lncRNA ANRIL表达与气道炎症、重塑指标呈正相关,与肺功能指标呈负相关(P＜0.05);miR-423-5p表达与气道炎症、重塑指标呈负相关,与肺功能指标呈正相关(P＜0.05).ROC曲线分析显示,lncRNA ANRIL、miR-423-5p单独及联合检测的曲线下面积分别为0.772、0.707、0.865,其中联合检测诊断支气管哮喘的预测价值较高.结论 血清lncRNA ANRIL相对表达量在支气管哮喘患儿中上升、miR-423-5p下降,促进气道炎症、重塑,肺功能下降,对支气管哮喘患儿具有较高的诊断效能.

目的 探讨左西孟旦注射液联合丹参川芎嗪注射液治疗慢性难治性心力衰竭的疗效及对患者脑钠肽(BNP)、心功能、微小RNA-423-5P(miR-423-5P)等的影响.方法 采用随机数字表法将2018 年1 月至2020年1 月西安市北方医院收治的160例慢性难治性心力衰竭患者分为左西孟旦组和联合组,每组80例.左西孟旦组采用左西孟旦注射液治疗,联合组采用左西孟旦注射液联合丹参川芎嗪注射液治疗.比较两组治疗后总有效率、心功能指标[左室射血分数(LVEF)、心脏指数(CI)、每搏输出量(SV)、左室舒张末期内径(LVEDD)、收缩末期内径(LVESD)、舒张早期二尖瓣血流速度/舒张晚期二尖瓣血流速度(E/A)]、心力衰竭标志物[BNP、微管连接蛋白(Nexilin)、心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)]、血管内皮功能指标[内皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)]、miR-423-5P mRNA 水平及不良反应.结果 联合组总有效率(95.00％)高于左西孟旦组(83.75％),差异有统计学意义(P＜0.05).联合组治疗后LVEF、CI、SV、E/A 高于左西孟旦组,LVEDD、LVESD低于左西孟旦组,差异均有统计学意义(P＜0.05).联合组治疗后BNP、Nexilin、H-FABP水平低于左西孟旦组(P＜0.05).联合组治疗后ET-1 水平低于左西孟旦组,NO水平高于左西孟旦组,差异均有统计学意义(P＜0.05).联合组治疗后miR-423-5P mRNA水平低于左西孟旦组(P＜0.05).联合组不良反应发生率(2.50％)与左西孟旦组(5.00％)相比,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 左西孟旦注射液联合丹参川芎嗪注射液治疗慢性难治性心力衰竭,能有效改善患者心功能,保护心肌细胞,缓解内皮功能障碍,安全、可靠,其疗效机制可能与下调miR-423-5P mRNA表达有关.

目的:观察滋阴益气汤联合比索洛尔对慢性心力衰竭病人微小RNA-423-5p(miR-423-5p)、D-二聚体(D-D)的影响.方法:选取2018年1月—2020年12月在陕西中医药大学第二附属医院进行治疗的慢性心力衰竭病人84例,随机分为对照组和观察组,各42例.所有病人均给予血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)及利尿剂等常规治疗,对照组在常规治疗基础上给予比索洛尔治疗,观察组在对照组基础上给予滋阴益气汤治疗.评定两组中医证候积分;采用彩色多普勒超声系统测量病人左室射血分数(LVEF)、左室舒张末期内径(LVEDD);酶联免疫吸附试验法检测脑钠肽(BNP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、D-D水平;采用荧光实时聚合酶链式反应(RT-PCR)测定miR-423-5p相对表达量,比较两组临床疗效.结果:治疗后,两组中医证候积分、LVEDD、BNP、TNF-α、IL-6、IL-1β水平、miR-423-5p相对表达量及D-D水平均降低,LVEF升高,且观察组优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).观察组总有效率高于对照组,差异有统计学意义(90.48％与69.05％,P=0.015).结论:滋阴益气汤联合比索洛尔治疗慢性心力衰竭,可降低病人中医证候评分,改善心功能,减轻机体炎症反应,下调miR-423-5p相对表达量,改善D-D水平.

目的 探讨慢性心力衰竭患者血清微小RNA-423-5p(miR-423-5p)的表达水平及其意义.方法 选择2015年7月至2017年3月我院收治的89例慢性心力衰竭患者为病例组,并于同期随机选取35例健康体检者为对照组,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法对两组受试者血清miR-423-5p水平进行检测.结果 病例组血清miR-423-5P水平为(0.97±0.32),高于对照组的(0.41±0.28),差异有统计学意义(t=9.072,P＜0.01).慢性心力衰竭miR-423-5p高表达患者血清NT-proBNP、LVEDD水平高于miR-423-5p低表达患者,LVEF低于miR-423-5p低表达患者,心功能分级高于miR-423-5p低表达患者,差异均有统计学意义(P＜0.05).MiR-423-5p诊断慢性心力衰竭的灵敏度为89.92％,特异度为93.34％,ROC曲线下面积AUC为0.919(95％CI0.862～0.975).结论 MiR-423-5p在慢性心力衰竭患者血清中异常表达,并且与心功能密切相关,早期检测可作为评估心力衰竭严重程度、诊断慢性心力衰竭的重要生物学标志物.

目的 探讨铁蓄积小鼠骨量下降与微小RNA(miRNA,miR)差异性表达的关系.方法 12周龄雄性ICR小鼠(n=12)随机分为两组:铁蓄积组(FAC组)及对照组(Con组),分别腹腔注射枸橼酸铁胺(FAC)及等量生理盐水,干预8周后检测血清铁蛋白,微计算机断层扫描技术(Micro-CT)检测小鼠股骨骨量,并分析相关骨结构参数.小鼠全血分离白细胞提取RNA,进行TaqmanmiRNA芯片检测表达谱差异,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测验证差异miRNA.利用Targetscan及miRDB数据库预测差异miRNA的下游靶基因,并对预测的下游靶基因进行生物信息学分析,包括细胞成分、生物过程、分子功能和京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路分析.结果 FAC组干预8周后,血清铁蛋白[(218.2 ±29.5) μg/L]相较于对照组[(30.6±9.9)μg/L]明显升高(P =0.000).股骨三维重建示铁蓄积小鼠骨质结构破坏,骨量、骨小梁厚度(Tb.Th)及骨体积分数(BV/TV)显著下降(P=0.001、0.005、0.021),而骨小梁间隙(Tb.Sp)升高(P=0.000).miRNA芯片结果:初步筛选出20个miRNA表达上调:mmu-miR-29b-3p、mmu-miR-324-3p、mmu-miR-133a-5p、mmu-miR-214-5p、mmu-miR-22-3p、mmu-miR-34a-5p、mmu-miR-31-5p、mmu-miR-143-5p、mmu-miR-423-3p、mmu-miR-223、mmu-miR-155、mmu-miR-106a、mmu-miR-2861、mmu-miR-148a、mmu-miR-96、mmu-miR-449a-5p、mmu-miR-423-Sp、mmu-miR-204-5p、mmu-miR-211、mmu-miR-23b及7个miRNA表达下调:mmu-miR-1 8a-3p、mmu-miR-223-3p、mmu-miR-199a-5p、mmu-miR-196a-5p、mmu-miR-30c-5p、mmu-miR-15b、mmu-miR-130b.其中mmu-miR-423-5p表达差异最为显著,q-PCR验证结果显示miR-423-5p的表达趋势与测序结果一致.Targetscan和miRDB预测并筛选miR-423-5p下游靶基因共91个.生物信息学分析表明miR-423-5p的靶基因在磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)、Rap1、Ras及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路上出现聚集.结论 铁蓄积导致的骨量下降可能与miR-423-5p差异性表达相关.

目的 筛选早期矽肺大鼠肺组织中微小RNA(microRNA,miRNA)表达谱的变化,为差异miRNA的功能分析提供信息.方法 将SPF级Wistar雄性大鼠随机分为阴性对照组和二氧化硅(SiO2)染尘组,每组30只.染尘组采用一次性非暴露法气管内灌注1ml SiO2悬浊液建立大鼠矽肺模型,对照组大鼠相同方法气管内注入1 ml灭菌生理盐水,分别于不同处理后1、7、14、21、28 d采集各组大鼠肺组织.其中3只大鼠取出肺组织进行病理学观察,另3只用miRNA微阵列芯片技术筛选肺组织中差异表达的miRNA,通过miRNA芯片筛选结合反转录定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)方法验证miRNA-423-5p和miRNA-26a-5p在两组间的实际表达水平,对miRNA-423-5p和miRNA-26a-5p进行靶基因预测并进行GO(gene ontology)富集分析和KEGG(kyoto encyclopedia of genes and genomes)通路分析.结果 对照组大鼠肺组织21、28 d炎症反应较1、7、14d明显减轻,SiO2染尘组大鼠肺组织有持续性炎性细胞浸润;对照组大鼠21、28 d有少量胶原分布,SiO2染尘组大鼠肺组织21d后开始出现大量胶原纤维沉积.与对照组比较,SiO2染尘组各时间点大鼠肺组织中miRNA-423-5p表达明显上调,miRNA-26a-5p表达明显下调,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 早期矽肺大鼠肺组织中miRNA-423-5p的上调和miRNA-26a-5p的下调可能与早期矽肺的发生发展有关.

本文以鼻咽癌CNE-1和5-8F细胞为研究对象,检测甲基莲心碱(neferine,Nef)抑制鼻咽癌侵袭转移的作用,探讨其抑制侵袭转移的机制.CCK-8法检测鼻咽癌细胞活性;划痕实验、Transwell细胞体外迁移侵袭实验观察Nef对鼻咽癌CNE-l、5-8F细胞侵袭、迁移能力的影响;Western blot法检测上皮-间质转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)相关蛋白及其转录因子表达水平;miRNA基因芯片检测Nef处理过的5-8F细胞与对照组miRNA差异基因表达谱,对差异表达基因进行生物信息学分析及筛选,同时研究其表达与鼻咽癌侵袭转移的相关性.实验结果显示:30 μmol·L-1 Nef对鼻咽癌CNE-1、5-8F细胞活性无明显影响,Nef能显著抑制鼻咽癌细胞的侵袭与转移,Western blot结果显示Nef使鼻咽癌CNE-1、5-8F细胞中神经型钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)表达下调,上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)表达上调,Twist、Snail、Slug转录因子无显著表达差异;miRNA基因芯片结果显示Nef作用后的5-8F鼻咽癌细胞与对照组相比共10个miRNA有2倍以上表达差异,其中hsa-let-7c-5p与hsa-miR-423-5p表达差异最显著,分别下调至30.6％、28.6％.生物信息分析显示hsa-let-7c-5p与hsa-miR-423-5p有共同的下游靶基因:小细胞膜蛋白3 (small integral membrane protein 3,SMIM3)、神经生长因子(nerve growth factor,NGF).鼻咽癌5-8F细胞转染hsa-let-7c-5p mimic与hsa-miR-423-5p mimic后增强其侵袭与转移能力,SMIM3、NGF表达下调.以上研究结果表明,Nef可能通过抑制hsa-let-7c-5p与hsa-miR-423-5p的表达,作用于下游靶基因SMIM3、NGF,抑制EMT相关蛋白的表达,从而抑制鼻咽癌细胞的侵袭转移.研究结果为Nef抑制肿瘤侵袭转移提供实验依据.

肝脏糖脂代谢的平衡与稳定对肝脏胰岛素抵抗有重要意义.微小RNAs可通过调节肝脏糖脂代谢,从而调控肝脏胰岛素抵抗.微小RNA-33a、微小RNA-33b、微小RNA-122、微小RNA-34a、微小RNA-148a-3p以及微小RNA-676可促进脂质合成,抑制脂质分解,导致肝脏脂质积累,诱发肝脏胰岛素抵抗.微小RNA-223与微小RNA-30c可促进脂质分解,抑制脂质合成,减少肝脏脂质积累,改善肝脏胰岛素抵抗.致死因子-7、微小RNA-29、微小RNA-423-5p、微小RNA-802以及微小RNA-155可抑制胰岛素信号途径,从而抑制肝脏葡萄糖摄取,促进肝脏糖异生,导致肝脏胰岛素抵抗.微小RNA-26a与微小RNA-451可抑制肝脏糖异生,改善肝脏胰岛素抵抗.该文通过研究微小RNAs调控肝脏糖脂代谢的机制,阐明了微小RNAs调节肝脏胰岛素抵抗的机制,加深了人们对微小RNAs的认识,为2型糖尿病的治疗提供了有价值的线索.