目的:对自制冷冻片微型载体（Strawtop）法与麦管法冷冻保存人微量精液的冻存效果进行系统评价。方法:采用前瞻性研究分析2018年5月1日至2018年6月30日期间于同济大学附属东方医院生殖医学中心行卵胞质内单精子显微注射（ICSI）助孕治疗的患者捐献的部分精液样本，比较自制Strawtop法与麦管法冷冻人精子复苏后的冷冻复苏率、DNA碎片指数（DNA fragmentation index，DFI）、超显微结构和受精能力与胚胎发育情况。结果:Strawtop法冻存人精子的冷冻复苏率（46.8%±17.1%）显著高于麦管法（23.1%±13.7%， P=0.001）；与冷冻前（18.9%±11.6%）相比，麦管法（33.5%±15.0%）冷冻精子复苏后的DFI显著增加（ P=0.019），而Strawtop法冻融人精子的DFI（23.4%±11.7%）与冷冻前相比差异无统计学意义（ P=0.375）；Strawtop法对冷冻精子超显微结构的损伤低于麦管法；Strawtop法冻融精子、麦管法冻融精子和新鲜精子的正常受精率、卵裂率和受精后48 h（第2日）的优质胚胎率差异均无统计学意义（ P>0.05）。 结论:Strawtop法冷冻人微量精液冷冻复苏率高于麦管法，复苏精子的损伤较小，且复苏后无需离心洗涤即可直接用于ICSI，具有较高的临床应用价值。

微量精子样本不仅获取难度大(睾丸/附睾穿刺手术或显微外科取精术)、数目少且质量差,采用传统的冷冻方法还容易导致精子复苏率和回收率低下.为改善微量精子的冷冻保存效果,对现有冷冻保存技术进行了多方面改进,如新研发的多种微量精子冷冻载体在提高活动精子复苏率、精子回收率和操作便利性方面取得了较大进步.抗冻蛋白、卵磷脂、纳米颗粒和抗氧化剂等精子冷冻保护剂辅助因子在一定程度上改善了精子冷冻效果.精子玻璃化冷冻保存技术逐渐展现其发展潜力.综述微量精子冷冻保存技术在冷冻载体、冷冻保护剂和冷冻方案的优化方面的研究进展.

目的 探索一种安全、便捷、有效的用于微量精子冷冻的方法.方法 选择内径130 μm的玻璃剥卵针50支作为冷冻载体,进行10个周期的反复冻融,检测其完整性,计算不同冷冻周期中载体折损率.选取50例经检测合格的精液标本,将密度调整至(0.5 ～1)×106/ml,使用精子冷冻保护剂按照1∶1体积混合预平衡10 min,每份标本装载2支载杆,计算装载时间,其中1支载杆作为快速冷冻组,迅速投入液氮中冷冻保存,另1支载杆采用液氮熏蒸30 min后再投入液氮中保存,比较两种方法解冻后精子的复苏率.结果 50支冷冻载体中,其中有36支完成全部10轮的冷冻-复苏周期测试,折损率为28.0％,损坏原因中78.6％为金属镊子直接夹持导致玻璃剥卵针破裂.玻璃剥卵针至少可耐受4个周期反复冻融,但之后约4％～6％的会出现自发破损.100支冷冻载体装载精子时间为45～398 s,平均为(112.3±94.1)s.冷冻前平均精子活力为65.6％±9.9％,快速冷冻复苏后平均精子活力为36.64％±8.7％,熏蒸法冷冻复苏后平均精子活力为23.48％±6.2％.快速冷冻法精子复苏率为55.9％±11.0％,熏蒸冷冻法精子复苏率为36.3％±9.8％,两者比较,差异具有统计学意义(F=18.31,P＜0.01).结论 采用剥卵针作为冷冻载体,并配合快速冷冻法,冷冻保存微量精子是一种安全、有效、简便的方法,适合临床广泛开展.

目的:分析人类精子库意愿自精保存者保存精液失败的原因,针对性提出应对策略,尽可能提高自体精液冻存成功率,同时也为人类精子库自体精液冻存业务拓展提供建议.方法:回顾性分析广东省人类精子库2016年1月1日至2019年12月31日1156例意愿自精保存者的基本资料、存精理由和存精失败的原因等信息.结果:1156例意愿自精保存者中实际存精成功857例,存精失败299例(25.9％);按存精理由分组的失败率分别为:显微手术取精组56.1％,单纯生殖保险组29.9％,非肿瘤性疾病组21.2％,肿瘤性疾病组17.2％,差异有统计学意义(x2=109.926,P＜0.01).存精失败原因及占比分别为:精液取不出为14.0％ (42/299);精液质量没达到精液冻存标准为67.6％(202/299);精液质量不理想放弃保存为7.4％ (22/299);由于其他原因放弃存精的为11.0％(33/299),其中包括担忧冷冻技术是否可靠(6.0％,18/299)、存精流程过于复杂(3.0％,9/299)、期待停止化疗后生育力恢复(2.0％,6/299).结论:针对存精失败原因,人类精子库可以提供个性化保存方案,其中包括指导手淫取精或使用取精仪器辅助取精;加强宣传,提高肿瘤患者的生殖保护意识,提前保存精子;开展微量精子冷冻或单精子冷冻技术保存微量活动精子;开展睾丸组织冷冻技术保存肿瘤患病儿童生育力.

目的 研究附睾穿刺来源精子冷冻中添加褪黑素对精子冷冻效果的影响.方法 收集2020-10/2021-03月到作者医院就诊的梗阻性无精子症男性行诊断性附睾穿刺来源精子62份,与患者沟通取得知情同意,检测精液的存活率、运动能力、DNA碎片指数(DNA fragmentation index,DFI)等指标.随机分为不添加额外保护剂的空白对照组和添加褪黑素的实验组,采用Vitro商品化精子冷冻液微量冷冻载杆冷冻,液氮保存24h后复苏,检测精液复苏后精子的各项指标,分析冷冻保护剂效果.结果 冷冻复苏后实验组与对照组比较,精液的存活率无统计学差异;精子丙二醛(malondialdetioxidant,MDA)和细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)较低,精子DFI较低,精子顶体完整性较高.结论 附睾穿刺来源精子冷冻中添加褪黑素作为冷冻补充剂,对冷冻复苏附睾精子具有提高DNA和顶体完整性,降低氧化损伤水平的作用.

目的 研究添加亲水性纳米二氧化硅在冷冻复苏引起的精子损伤中的效果.方法 分析2020年9月-2021年2月体检来源符合要求的精液112人份,经过患者知情同意,每份精液混匀后分成两份,一份采用传统甘油蛋黄精子冷冻保护剂为对照组和一份额外添加20 nm亲水性纳米二氧化硅为实验组,0.5 ml微量冷冻管密封,投入液氮后保存一周复苏,评估复苏后精子的存活率、前向运动率、细胞膜完整性和DNA碎片等指标.结果 实验组精子前向运动率、精子膜完整性、顶体完整性、线粒体膜电位均比对照组高,其中前向运动率、顶体完整性、线粒体膜电位的差异有统计学意义(P＜0.05).实验组DNA碎片比对照组低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 在精子冷冻中添加亲水性纳米二氧化硅具有保护冷冻精子的作用.

目的 研究一种创新的寻找隐匿精子症精子的方法,结合自制金属冷冻板法冷冻保存发现的微量精子,以期为患者进一步卵细胞质内单精子注射(ICSI)提供精子保障.方法 选取75例常规精液涂片未见精子的标本,每份标本充分混匀后均分为两份,分别采用传统的玻片法和创新的微滴法寻找精子,发现精子后记录精子数目、活力、圆细胞数目及检测的耗时等;微滴法发现的精子立即应用自制金属冷冻板法冷冻保存大于24 h后复苏,记录复苏后的精子数目、存活数目等.结果 微滴法更容易发现精子,在精子总数小于10条、10～50条及大于50条的各级标本中,微滴法的检出例数(检出率)分别为15例(20.0％)、18例(24.0％)和10例(13.3％),均高于玻片法10例(13.3％)、12例(16.0％)和8例(10.7％),差异有统计学意义.并且微滴法结合自制金属冷冻板法可以将发现的精子冷冻保存利用,获得较高的精子复苏率(91.6％),前向运动+非前向运动(PR+NP)级精子的复苏率达到56.8％.微滴法检测平均用时3.6±0.9 min较玻片法8.5±1.2 min少.结论 隐匿精子症中采用微滴法更易发现精子,结合自制金属冷冻板法冷冻发现的微量精子,有较好的复苏率,复苏后的精子可用于ICSI操作,提高精子的利用率,提升患者成为生物学父亲的机会.

目的 探讨玻璃化冷冻和慢速冷冻对微量精子活动率的影响.方法 收集50份正常精液样本经密度梯度离心和上游法处理后,分别行玻璃化冷冻和慢速冷冻.比较冷冻前,玻璃化冷冻复苏后以及慢速冷冻复苏后精子活动率的变化,评估玻璃化冷冻和慢速冷冻两种方法的复苏效果.结果 冷冻前精子活动率为92.94％±3.72％,玻璃化冷冻复苏组精子活动率为63.46％±5.25％,慢速冷冻复苏组精子活动率为62.86％±5.51％.玻璃化冷冻复苏组和慢速冷冻复苏组的精子活动率与冷冻前比较,均出现显著性降低,差异有统计学意义(P<0.001).但玻璃化冷冻复苏组和慢速冷冻复苏组复苏后的精子活动率对比分析无统计学差异(P>0.05).结论 玻璃化冷冻和慢速冷冻均可导致精子活动率的下降,但两种冷冻方法复苏结果之间无统计学差异.