目的:研究淫羊藿不同炮制品的细胞毒性，以及其毒性的物质基础。方法:采用磺酰罗丹明B（SRB）比色法考察淫羊藿不同炮制品对HaCaT细胞增殖的影响，并基于灰色关联度分析法建立HPLC指纹图谱-毒效数据谱效关系，确定其毒性成分及炮制方法。结果:淫羊藿不同炮制品的半抑制浓度（IC 50）值依次为醋炙>羊脂油炙>生品>单炒>盐炙>酒炙，12个特征色谱峰中3号峰（木兰花碱，关联度为0.870）和6号峰（朝藿定C，关联度为0.851）与毒性参考值关联度较高。 结论:醋炙、羊脂油炙均具有减毒作用，木兰花碱、朝藿定C可能是淫羊藿的主要毒性成分，本研究可为淫羊藿炮制减毒的工艺优化提供依据。

目的 探索经方四妙丸防治高尿酸血症痛风的药效物质.方法 建立高尿酸血症药理模型,采用超高效液相色谱串联四极杆静电场轨道阱质谱联用技术(UPLC-Q-Exactive-MS)分析四妙丸体内外化学成分;以入血成分为基础,采用网络药理学构建四妙丸调控高尿酸血症痛风"活性成分-靶点-通路"网络;以关键活性成分与高尿酸血症痛风关键靶点尿酸生成酶(XDH),尿酸转运体(ABCG2、GLUT9、OAT1、URAT1)及炎症靶点(PTGS2、TLR2、TLR4)进行分子对接,根据对接结果进行实验验证,探讨四妙丸防治高尿酸血症痛风的关键药效物质.结果 UPLC-Q-Exactive-MS法共鉴定四妙丸 89 个成分,包含 74 个入血成分,即候选成分;网络药理学构建了"入血成分-靶点-通路"网络,入血成分匹配 116 个高尿酸靶点和 173 痛风靶点,涉及调节糖脂代谢、氧化应激、炎症反应、ERK1、ERK2 和MAPK级联反应、PI3K信号传导等生物过程;调节血脂与动脉粥样硬化、凋亡、AGE-RAGE、TNF、PI3K-Akt、MAPK、TLRs、JAK-STAT、NF-κB等信号通路,发挥多途径调控高尿酸血症痛风疾病网络的作用.分子对接研究表明小檗碱、黄柏碱、木兰花碱、药根碱、巴马汀、黄柏酮、柠檬苦素、苍术素、花旗松素、白术内酯Ⅲ及β-蜕皮甾酮等成分与尿酸合成酶、尿酸转运体及炎症靶点的亲和力良好,Western Blot验证发现花旗松素具有负调节尿酸盐转运蛋白 1(URAT1)表达的作用,其是四妙丸防治高尿酸血症痛风的主要药效物质.结论 该研究阐述了四妙丸调控高尿酸血症痛风的主要药效物质,可为四妙丸临床应用、质量评价和标准提升提供科学依据.

目的 分析不同配比"黄连-苦参"药对的特征性成分量-质变化相关性,为该药对的量-效相关性及临床应用提供合理的用量比例参考.方法 采用HPLC法,建立不同配比9批"黄连-苦参"药对(5∶1、4∶1、3∶1、2∶1、1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5),建立药对HPLC特征指纹图谱及其特征性成分含量测定方法,分析9组样品成分的差异性与相关性.结果 9种配比的黄连-苦参药对共确定16个共有峰,指认苦参碱、槐定碱、氧化苦参碱、木兰花碱、非洲防己碱、表小檗碱、药根碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱共10个共有峰.含量测定结果显示,黄连-苦参配对后相比黄连药材及苦参药材,特征性成分均有显著性差异.黄连-苦参(5∶1)时苦参碱、槐定碱、木兰花碱含量为各比例最高,相比单药材提取具有显著性差异;黄连-苦参(4∶1)时,非洲防己碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱含量为各比例最高,相比单药材提取具有显著性差异,且黄连总生物碱溶出最高;黄连-苦参(1∶1)时苦参总生物碱含量最高,且药根碱含量为各比例最高;黄连-苦参(1∶3)时氧化苦参碱含量为各比例最高.结论 黄连-苦参不同配比时,以特征性成分个数与含量为标示的"质"与配伍用"量"之间的相关差异性较明显,显示出一定的成分相互促溶作用.苦参中3种成分的溶出量随黄连比例的降低呈现"U"型分布,而黄连中7种成分溶出量随黄连比例的降低整体呈现降低趋势.与黄连、苦参各药材单提相比,各比例下苦参中总生物碱类成分的溶出均有不同程度的提升,黄连中总生物碱类成分在黄连-苦参(5∶1)及(4∶1)比例下溶出表现为提升,其他比例表现为降低.药对中生物碱类成分的溶出规律与临床验方中药对的使用配比成正相关.为进一步开展该药对的量-效关联性分析确定了物质基础,也为临床潜方时确定适宜用量提供参考.

该研究建立了一种简便、快速、灵敏的超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS),能够同时测定给药炒酸枣仁提取物后比格犬血浆中木兰花碱、乌药碱、维采宁Ⅱ、异斯皮诺素、斯皮诺素、当药黄素、N-去甲基荷叶碱、6?-阿魏酰斯皮诺素和酸枣仁皂苷B的含量.采用Waters HSS-T3 C18 色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8 μm),流动相为甲醇-水(含0.01%甲酸),梯度洗脱,9 种成分和 2 种内标于 8 min内完全分离;质谱检测在电喷雾离子源正、负离子切换模式下,采用多反应监测模式进行检测.分析方法经特异性、选择性、线性范围、准确度、精密度、回收率、基质效应和稳定性验证,可满足犬灌胃炒酸枣仁提取物后的药代动力学的研究要求.结果显示,比格犬单次灌胃给药后,木兰花碱、乌药碱、维采宁Ⅱ、异斯皮诺素、斯皮诺素、6?-阿魏酰斯皮诺素和酸枣仁皂苷B的Tmax 为2.40～3.20 h,t1/2 为2.08～6.79 h,其中木兰花碱和斯皮诺素的暴露量相对较高,Cmax 分别为 76.7、31.5 ng·mL-1,AUC0-∞分别为 581、315 ng·h·mL-1;其余 5 种暴露较弱的化合物的 Cmax 为 0.81～13.0 ng·mL-1,AUC0-∞为 6.00～106 ng·h·mL-1.该研究为炒酸枣仁后续相关药理研究提供了参考依据.

建立淫羊藿Epimedium brevieornu中13种化学成分新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、木兰花碱、金丝桃苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、宝藿苷Ⅱ、箭藿苷A、淫羊藿次苷Ⅰ、宝藿苷Ⅰ的一测多评法,考察该方法在评价不同产地和不同品种的淫羊藿药材质量中具有一定的可行性和准确性.通过对实验方法的科学性及准确性考察,采用外标法测定淫羊藿中13种化学成分的含量,同时,以淫羊藿苷为内标,分别建立淫羊藿苷与新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、木兰花碱、金丝桃苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、宝藿苷Ⅱ、箭藿苷A、淫羊藿次苷Ⅰ、宝藿苷Ⅰ的相对较正因子,计算淫羊藿中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、木兰花碱、金丝桃苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、宝藿苷Ⅱ、箭藿苷A、淫羊藿次苷Ⅰ、宝藿苷Ⅰ的含量,实现用一测多评法测定其含量,最后比较实测值与计算值的差异,来验证一测多评法在测定中的准确性及科学性.各成分相对校正因子重复性较好,外标法测定结果与一测多评测定结果无显著性差异.以淫羊藿苷为内标,同时测定新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、木兰花碱、金丝桃苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、宝藿苷Ⅱ、箭藿苷A、淫羊藿次苷Ⅰ、宝藿苷Ⅰ的一测多评法可用于淫羊藿的定量分析.

目的 评价北豆根配方颗粒质量.方法 制备 15 批标准汤剂和 3 批配方颗粒,测定出膏率及木兰花碱、蝙蝠葛苏林碱、蝙蝠葛碱含量、转移率,建立HPLC特征图谱,聚类分析进行化学模式识别.结果 3 批配方颗粒出膏率为15.1%～16.6%,木兰花碱、蝙蝠葛苏林碱、蝙蝠葛碱含量分别为18.93～19.39、9.42～9.60、6.79～6.85 mg/g,三者从饮片到配方颗粒的转移率分别为 34.42%～35.25%、43.81%～44.65%、27.27%～27.51%;特征图谱中有 7 个特征峰,相似度均大于 0.95,与标准汤剂一致性良好,并符合相关限度要求.15 批标准汤剂聚为 2 类,吉林、河北、山东产药材可用于配方颗粒制备.结论 该方法合理可靠,可为北豆根配方颗粒质量控制、临床应用提供参考.

目的 比较防己黄芪汤中活性成分在大鼠体内的药动学行为,并研究防己黄芪汤及其主要入血成分粉防己碱抑制刀豆球蛋白A(concanavalin A,ConA)诱导T淋巴细胞增殖的作用机制.方法 采用超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)检测大鼠ig不同剂量防己黄芪汤及粉防己碱后,入血成分在不同时间点的血药浓度,并分析其药动学行为.采用MTT法和3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法检测防己黄芪汤对T淋巴细胞毒性及增殖的抑制作用;采用ELISA法测定上清液中白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)、IL-2、γ-干扰素(γ-interferon,IFN-γ)水平;采用流式细胞仪检测调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)数量.结果 防己黄芪汤在大鼠体内主要入血成分为防己诺林碱、木兰花碱、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草苷、黄芪甲苷、甘草次酸和粉防己碱.除防己诺林碱外,其他6个成分在体内的吸收具有剂量相关性.粉防己碱、防己诺林碱和甘草次酸在体内吸收速率慢,消除速率慢,驻留时间长[平均滞留时间(MRT)＞10 h、清除率(CL)＜8 L/(h·kg)];木兰花碱、毛蕊异黄酮葡萄糖苷和甘草苷在体内具有吸收和消除速度快、体内驻留时间短的特点[达峰时间(tmax)＜1 h、MRT＜5.2 h、CL＞50U(h·kg)].与单一成分给药相比,防己黄芪汤中的粉防己碱的吸收程度明显增加,而消除速率明显降低.防己黄芪汤可以抑制T淋巴细胞的增殖,还可降低细胞上清液中促炎因子IL-2、IL-17和IFN-γ水平(P＜0.05、0.01),增加Treg的分化数量(P＜0.05、0.01),防己黄芪汤主要入血成分之一粉防己碱可降低细胞上清液中IL-17水平并增加Treg分化数量(P＜0.05、0.01).结论 君药防己和黄芪的特征成分是防己黄芪汤的主要入血成分;君药防己含有的粉防己碱与防己黄芪汤中其他成分存在协同作用.防己黄芪汤可抑制T淋巴细胞的增殖,其作用机制可能是通过调节Treg的增殖分化过程,使激活的免疫反应受到影响,而防己黄芪汤中的粉防己碱可能起到重要作用.

目的 通过UPLC-Q-TOF-MS技术,探讨不同基原淫羊藿和巫山淫羊藿的药材体外化学成分的差异,为淫羊藿及巫山淫羊藿药材鉴定及质量控制奠定基础.方法 采用Agilent SB-C18(2.1 mm×100 mm,2.7 μm)色谱柱,以0.1%甲酸水溶液-甲醇(+)及水-甲醇(-)为流动相进行梯度洗脱,流速0.4 mL·min-1.质谱采用电喷雾(ESI)离子源,在正、负离子模式下进行数据采集.通过保留时间、相对分子质量及二级碎片离子对巫山淫羊藿、淫羊藿、柔毛淫羊藿、箭叶淫羊藿及朝鲜淫羊藿药材中的化学成分进行鉴定,并基于所鉴定出的化合物对不同基原淫羊藿及巫山淫羊藿药材的化学成分通过SIMCA软件进行差异分析.结果 不同基原淫羊藿及巫山淫羊藿药材中共鉴定出朝霍定A、朝霍定B、朝霍定C、淫羊藿苷等 37 种化学成分,经过对比发现不同基原的淫羊藿及巫山淫羊藿药材中淫羊藿定L、2''-鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ、木兰花碱等12 种成分的相对含量具有明显差异,差异化合物经鉴定主要为黄酮类化合物.结论 本试验所发现的差异化合物可以作为区分不同基原淫羊藿及巫山淫羊藿药材的指标,这5种药材的鉴别和质量控制奠定基础.

目的:研究蝙蝠葛Menispermum dauricum DC.根茎中的化学成分及其生物活性.方法:运用各种正、反相色谱技术对蝙蝠葛根茎的醇提物进行分离纯化,通过各种波谱学手段鉴定化合物结构,并对其进行细胞毒活性测试和抗炎活性评价.结果:从蝙蝠葛根茎 95%乙醇提取物中分离得到 10 个生物碱,分别鉴定为:6-acetyl-5,6-di-hydro-1,2-dimethoxy-4H-dibenzo[de,g]-quinoline(1)、sinotumine G(2)、齐兰西夫林碱(3)、amurolin(4)、木兰花碱(5)、N-demethyl-N-formyldehydronuciferine(6)、thalifoline(7)、O-甲基黄堇碱(8)、pecrassipine B(9)、O-甲基蝙蝠葛碱(10).活性筛选结果表明,化合物 1、4、7 有一定活性.结论:化合物 1 为新天然产物,化合物 2、3 为首次从该属植物中分离得到.化合物 4 对MCF-7细胞、SMMC-7721 细胞有抑制作用,化合物 7 对 5 种人癌细胞有抑制作用.化合物 1 一定程度上可抑制LPS诱导RAW264.7 巨噬细胞释放NO,具有一定的抗炎作用.

目的 建立同时测定蓝芩口服液中16种化学成分含量的方法.方法 采用液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS).Fortis Xi C18柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm);流动相为0.1％甲酸水溶液(A)-乙腈(B);梯度洗脱;流速:0.3 mL/min;进样量:2μL;柱温:40℃;质谱采用电喷雾离子源(ESI)正负离子模式,多反应监测(MRM)方式进行测定.结果 蓝芩口服液中汉黄芩苷、黄芩苷、异牡荆苷、栀子苷、巴马汀、黄柏碱、木兰花碱、小檗碱、鸟苷、汉黄芩素、黄芩素、腺苷、胞苷、表告依春、山栀苷和绿原酸等16个成分浓度分别在所考察的浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系(r>0.9990);精密度、稳定性、重复性RSD均<2.5％,加样回收率(n=9)在91.7％～108.3％范围内,RSD<3.5％.结论 所建立的LC-MS/MS方法简便、可靠、选择性好、灵敏度高,可用于蓝芩口服液的质量控制.