目的 采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)方法检测百日咳毒素(pertussis toxin,PT)、丝状血凝素(filamentous hemagglutinin,FHA)和百日咳黏附素(pertactin,PRN)精制抗原纯度,并进行验证.方法 对样品进行SDS-PAGE电泳、考马斯亮蓝染色后,使用凝胶成像系统拍照并用Image Lab软件进行分析,获得样品各蛋白条带的光密度值.对建立的方法进行系统适用性、线性、准确度、重复性、中间精密度、灵敏度和耐用性验证.结果 对应 2 套分子量标准蛋白,PT、FHA和PRN精制抗原分别在10.00～50.00 μg/mL的低质量浓度范围和 50.00～600.00 μg/mL的高质量浓度范围内,蛋白浓度和对应条带光密度值之间具有良好的线性关系,相关系数(coefficient of correlation,r)≥0.99.3 种精制抗原杂质水平准确度和重复性回收率均在 80%～120%,且重复性验证相对标准差(relative standard deviation,RSD)≤10%;抗原水平准确度和重复性回收率均在90%～110%,重复性验证RSD≤10%;灵敏度 12.50 μg/mL的回收率均在 80%～120%,RSD≤10%;中间精密度验证RSD≤10%.结论 建立的测定PT、FHA和PRN精制抗原纯度的SDS-PAGE法,其系统适用性、准确度、重复性、中间精密度和灵敏度均良好,可用于以上精制抗原的纯度检测.

目的:开发一种基于重组酶介导的等温扩增（RAA）和成簇的规律间隔短回文重复序列（CRISPR）及其相关蛋白（Cas13a）系统的幽门螺杆菌核酸检测体系。方法:选取2021—2022年于应急总医院收集的30株幽门螺杆菌以及大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、阴沟肠杆菌和肺炎克雷伯菌各2株。针对幽门螺杆菌UreC基因保守区序列，设计RAA-Cas13a 核酸检测体系所需的特异性引物及CRISPR RNA（crRNA）。再通过琼脂糖凝胶电泳筛选出产生非特异性产物最少的引物对，并应用Cas13a切割荧光探针产生的荧光强度筛选出切割效率最高的crRNA序列，构建了RAA-Cas13a核酸检测体系，通过检测梯度浓度稀释的幽门螺杆菌ATCC 43504基因组DNA以及5种不同的临床常见病原体基因组DNA，评价基于RAA-Cas13a核酸检测体系的最低检测限及特异性。通过RAA-Cas13a核酸检测体系与已建立的荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）方法同时检测临床菌株，得到该方法与qPCR方法的一致性。采用双侧配对 t检验对两组间的荧光值进行比较， P<0.05为差异有统计学意义。 结果:建立的RAA-Cas13a核酸检测系统可以在1 h内检测出低至10拷贝/μl的靶标DNA（ t=11.05， P<0.01），且与其他5种临床常见菌株无交叉反应。RAA-Cas13a方法与传统的qPCR方法具有良好的一致性，Kappa系数为1。 结论:建立了一种将RAA与CRISPR-Cas13a结合进行幽门螺杆菌检测的方法，可用于快速且灵敏的识别幽门螺杆菌感染。

目的:分析桂西地区血红蛋白H病(hemoglobin H, HbH)的阳性检出率、基因变异类型及其血液学特征。方法:选取2013年1月至2018年12月期间本院确诊为HbH病的1246例患者为研究对象，应用红细胞参数分析和血红蛋白电泳，跨越断裂点PCR和PCR结合反向点杂交技术检测中国人常见的6种α地中海贫血(简称地贫)和17种β地贫基因型，同时与其他地区HbH病基因分布情况比较。结果:HbH病的阳性检出率为5.66%，1246例HbH病患者中检出614例(49.28%)缺失型HbH病，包括-α 3.7/-- SEA(35.32%)、-α 4.2/-- SEA(13.72%)和-α 3.7/-- THAI(0.24%)；632例非缺失型HbH病(50.72%)，以α CSα/-- SEA(44.86%)为主，其次为α WSα/-- SEA(4.33%)、α QSα/-- SEA(1.45%)和α CSα/-- THAI(0.08%)。检出HbH病复合β地贫54例(4.33%)。HbH病患者大部分表现为轻中度贫血，极少部分为重度贫血，其中HbH-CS患者贫血程度最重，HbH-WS最轻。单纯HbH病患者的Hb水平均低于HbH复合β地贫患者。与其他地区人群HbH病的发病率及基因型比较存在差异。 结论:桂西地区HbH病的阳性检出率高，基因类型以非缺失型为主，其中α CSα/-- SEA最多见，大部分为中度贫血，非缺失型HbH病患者比缺失型HbH病患者贫血严重，当HbH病患者合并β地贫时，其贫血程度有所减轻。与其他地区人群比较存在不同程度差异，这种差异可能是导致HbH病在不同地区人群间临床表现和发病率存在较大差异的因素之一。

目的:探讨压力可调控的大孔隙抗菌水凝胶对感染创面的修复作用及机制。方法:用金黄色葡萄球菌建立C57BL/6小鼠伤口感染模型，按不同处理方式分为3组：阴性对照组（A组），普通医用凝胶对照组（B组），压力可调控的大孔隙抗菌水凝胶实验组（C组）。在第1、3、6、9、12天，比较三组干预方式对小鼠创面的愈合面积、痂下菌量的影响；鉴定创面成纤维细胞中Ⅰ型前胶原，比较三种处理方式对伤口成纤维细胞凋亡的变化；并通过检测炎症因子白细胞介素（IL-6）和肿瘤坏死因子（TNF-α）的表达情况比较三组处理方式对伤口修复过程中炎症的抑制作用。结果:在第1、3天，三组创面面积差异无统计学意义（ P>0.05）。第6、9、12天，三组创面面积差异均有统计学意义（ P< 0.05）。第6天，B组、C组创面面积[（1.23±0.16）、（1.14±0.12）cm 2]均小于A组[（1.56±0.16）cm 2]，差异均有统计学意义（ P<0.05），但B、C两组间差异无统计学意义（ P>0.05）；第9、12天B组创面面积[（0.97±0.13）、（0.76±0.10）cm 2]、C组创面面积[（0.66±0.06）、（0.48±0.07）cm 2]均小于A组[（1.49±0.11）、（1.39±0.13）cm 2]，且C组小于B组，以上项目比较差异均有统计学意义（ P< 0.05）。第1天，三组每克痂下菌量对数值比较差异无统计学意义（ P>0.05）。第3、6、9、12天，B组和C组痂下菌落数均小于A组( P<0.05)，且C组细菌菌落数均小于B组，差异均有统计学意义（ P< 0.05)。核酸电泳图显示C组中条带灰度明显较A组、B组深。C组成纤维细胞早期凋亡率[Low-right阳性荧光占比（LR%）：9.72%]要明显低于A组（43.99%）和B组(38.43%)，B组低于A组，差异均有统计学意义（ P<0.05）。第12天C组成纤维细胞中的IL-6和β-actin的灰度值比值（0.64±0.10）、TNF-α和β-actin的灰度值比值（0.34±0.05）表达均较A组（1.22±0.21、0.60±0.14）和B组（0.88±0.02、0.41±0.06）小，差异有统计学意义（ P<0.01）。 结论:压力可调控的大孔隙抗菌水凝胶对感染创面有较强的抗炎及组织修复能力，其机制与减少成纤维细胞凋亡相关。

目的:了解多重RT-PCR方法检测13种常见呼吸道感染病原体，在老年患者呼吸系统感染病原体检测中的应用价值。方法:317例2016年6月至2017年5月在石家庄市第一医院老年科就诊的具有呼吸系统感染症状的老年患者，年龄60～98岁，采集其抽吸痰液，提取病毒DNA/RNA，利用多重RT-PCR技术扩增，通过毛细管电泳，同时检测13种呼吸道病原体；并以直接测序方法和荧光实时PCR法为标准，评价该试剂的临床性能。结果:使用直接测序和荧光实时PCR结果为参照，多重RT-PCR技术的准确性为99.93% (95% CI: 99.79%～99.98%)，阳性预测值为99.24% (95% CI: 97.78%～99.74%)，阴性预测值为100% (95% CI: 99.9%～100%)，Cohen’s kappa值为0.9958 (95% CI: 0.965 2～1.026)。在317例老年患者中，呼吸道病原阳性检出率为75.7% (240/317)，其中甲型流感病毒最高，为20.2% (64/317)，主要为H3亚型(70.3% (45/64)；其次为鼻病毒、腺病毒、肺炎支原体和乙型流感病毒，检出率分别为15.5% (49/317)、13.6% (43/317)、11.0% (35/317)和10.1% (32/317)。此外，同时检出2种以及2种以上病原体的老年患者为81例，检出率为25.6% (81/317)。 结论:多重RT-PCR方法能满足临床对呼吸道病原体检测的需求，并为老年患者呼吸系统感染的防治提供有效的临床资料。

目的:构建一种太赫兹（THz）超材料传感方法用于microRNA-21（miRNA-21）的信号放大检测。方法:首先构建THz超材料传感方法，并用聚丙烯酰胺凝胶电泳及zeta电位验证方法的可行性；对传感器检测条件进行优化之后，对不同浓度的miRNA-21以及其他不同的miRNAs进行检测，并与其他microRNA检测方法进行比较；最后，对该传感器的回收率进行了评价。结果:在最优实验条件下，通过双链特异性核酸酶（DSN）循环识别与滚环扩增（RCA）的双重信号放大策略，该THz超材料传感器对靶标miRNA-21的响应范围为10 fmol/L至10 nmol/L，检测限为8.49 fmol/L。并且该传感器具有较好的特异性，具备了从多种miRNAs中识别靶标miRNA-21的能力，并且在商业化人血清样本中的回收率可达94.33%到115.33%。结论:该THz传感器可以实现靶标miRNA-21的高灵敏、高特异性检测，具备了在miRNA相关疾病无标记诊断与早期预警的潜力。

目的:了解贵州省黔东南州人群的新生儿地中海贫血检出率及基因分型情况，为当地少数民族地中海贫血防控体系的构建提供相关依据。方法:依托贵州省新生儿疾病筛查中心信息网络平台，采取知情同意原则，收集2023年1-9月黔东南州苗族侗族自治州出生的新生儿足跟滤纸血片，进行地中海贫血血红蛋白电泳筛查，分析其中确诊的苗族、侗族及汉族基因类型及分布特点。结果:22 556例新生儿中，地中海贫血可疑阳性患儿共2347例，阳性率为10.4%，共召回1157例，经过基因检测检出为地中海贫血携带者的共有940例，其中苗、侗、汉三族地中海贫血基因携带者中：α地中海贫血335例(35.64%)，β地中海贫血140例(14.89%)，α复合β地中海贫血10例(1.06%)。结论:贵州省黔东南侗族苗族自治州新生儿地中海贫血类型以α地中海贫血为主，其中又以标准型(基因型-- SEA/αα)和静止型(基因型-α 3.7/αα)最为常见，β地中海贫血以基因型β 41-42/β N和β 17/β N为常见。本研究为阐明贵州省少数民族区域特有地中海贫血基因类型奠定了一定基础，对指导当地地中海贫血遗传咨询，降低中、重型地贫患儿的出生具有重要作用。

目的:探讨寡克隆区带（OCB）阳性的神经型布鲁菌病（NB）患者的临床、影像学及脑脊液特点。方法:回顾性分析郑州大学第一附属医院2020年1月至2023年6月间确诊为NB的23例患者，男9例，女14例，年龄47（34，59）岁。根据血清及脑脊液IgG电泳结果将NB患者分为OCB阳性组和OCB阴性组，比较两组的临床、影像学及脑脊液特点。结果:23例NB中脑脊液OCB阳性者占65.2%（15/23），以Ⅱ型（14/15）为主；阴性组8例。OCB阳性组临床重型占比（11/15）、脑脊液白细胞计数升高占比（15/15）、IgG指数［ M（ Q1， Q3），0.97（0.57，2.11）］，24 h鞘内合成率［55.6（15.3，232.2）mg/24 h］显著高于阴性组［1/8，5/8，0.63（0.51，0.69），11.6（-1.6，17.3）mg/24 h，均 P<0.05］。两组患者在病程、临床分型上差异无统计学意义（均 P>0.05）。OCB阳性组可表现为全脑（幕上合并幕下）脑实质多发病灶（5/15），但OCB阴性组均未发现幕下脑实质受累（0/8）。 结论:NB患者OCB阳性检出率为65.2%。OCB阳性者临床重症患者更多，神经系统鞘内体液免疫炎性反应更严重，较OCB阴性组更易出现幕下脑实质受累。

目的:制备一种针对整合素αM(CD11b)受体的预定位分子探针 68Ga-1，4，7-三氮杂环壬烷-1，4，7-三乙酸-甘氨酸-精氨酸-谷氨酸-精氨酸-谷氨酸-十一聚乙二醇-1，2，4，5-四嗪/CD11b抗体片段-反式-环辛烯[ 68Ga-NOTA-Polypeptide-PEG 11-Tz/anti-CD11b-F(ab′) 2-TCO]，并通过microPET显像探讨其作为CD11b受体靶向分子探针的可行性。 方法:采用免疫荧光法检测小鼠巨噬细胞RAW264.7膜表面CD11b受体的表达情况。将CD11b抗体与TCO连接，并通过酶切法得到anti-CD11b-F(ab′) 2-TCO。对配体NOTA-Polypeptide-PEG 11-Tz进行 68Ga标记，检测标记率以及放化纯。进行预定位细胞结合实验，建立CT26结肠癌荷瘤裸鼠模型，进行预定位生物分布以及microPET显像实验。用免疫组织化学检查验证肿瘤微环境中CD11b +细胞的浸润情况。用单因素方差分析比较组间差异。 结果:免疫荧光检测结果显示RAW264.7细胞膜表面高度表达CD11b受体。十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)验证成功合成anti-CD11b-F(ab′) 2-TCO。放射性配体 68Ga-NOTA-Polypeptide-PEG 11-Tz标记率约为94.6%，比活度为7.0~7.4 MBq/μg，放化纯大于95%。预定位细胞结合实验证实该分子探针与CD11b受体有较好的靶向性。生物分布及显像结果示，在预定位4、12以及24 h时间间隔下，模型鼠肾放射性摄取较高，表明分子探针通过肾代谢；肿瘤/肌肉比值为9.23±1.45、12.53±1.36和10.74±1.11( F＝848.8， P<0.05)；在预定位12 h注射放射性配体后1 h显像，肿瘤与非靶器官对比度最佳：肿瘤标准摄取值(SUV)为0.67±0.12，肌肉SUV为0.09±0.04。免疫组织化学结果示，CT26结肠癌微环境中浸润了大量CD11b +细胞。 结论:成功合成预定位分子探针 68Ga-NOTA-Polypeptide-PEG 11-Tz/anti-CD11b-F(ab′) 2-TCO，该标记物对CD11b阳性结肠癌具有较强的靶向能力，有望用于靶向CD11b受体的体内示踪。

目的:探讨IgD型多发性骨髓瘤（MM）的临床特征及应用达雷妥尤单抗为主方案联合治疗的效果及预后。方法:回顾性分析青岛大学附属医院2019年12月收治的1例接受达雷妥尤单抗治疗的IgD型MM进展伴髓外浸润患者的临床病理资料，并复习相关文献。结果:患者为74岁女性，经骨髓穿刺及免疫固定电泳等检查诊断为IgD型MM，先后给予VD（硼替佐米、地塞米松）、RD（来那度胺、地塞米松）和ID（伊沙佐米、地塞米松）方案治疗。2020年6月患者出现多发皮下结节，评估病情为疾病进展伴多发髓外浸润，给予达雷妥尤单抗+PAD（脂质体多柔比星、硼替佐米、地塞米松）方案治疗，患者皮下结节较前明显缩小伴部分消失，一般情况较前改善。但患者处于恶病质状态，治疗欠规范，病情反复并持续进展，最终死亡。结论:IgD型MM发病率低，生存期短，尚无统一治疗方案，尽早应用达雷妥尤单抗联合蛋白酶体抑制剂、免疫调节剂、细胞毒性药物及造血干细胞移植可能会延长患者生存期。