目的:探究白术内酯-1（ATL-Ⅰ）对矽肺患者肺泡巨噬细胞的作用。方法:于2019年12月，利用随机抽样的方法，选择2019年7至9月在中国煤矿工人北戴河疗养院进行治疗的12例男性矽肺患者，收集其肺泡巨噬细胞分为对照组、ATL-Ⅰ组（100 μmol/L）以及二甲基亚砜（DMSO）组（100 μmol/L）。采用酶联免疫吸附试验检测炎症因子白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）的表达水平，用蛋白免疫印迹法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3（LC3）、自噬底物蛋白p62、溶酶体关联膜蛋白2（LAMP2）、凋亡相关蛋白Cleaved caspase-3和核因子κB（NF-κB）及其磷酸化型（p-NF-κB）的表达水平。结果:与对照组和DMSO组比较，ATL-Ⅰ组肺泡巨噬细胞IL-1β、IL-6和TNF-α的表达明显降低（ P<0.05），且p-NF-κB、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值也明显降低（ P<0.05）；但ATL-Ⅰ组NF-κB、LAMP2、p62以及Cleaved caspase-3表达与对照组和DMSO组差异均无统计学意义（ P>0.05）；对照组与DMSO组的上述指标表达差异均无统计学意义（ P>0.05）。 结论:ATL-1可能减少矽肺患者肺泡巨噬细胞炎症因子的释放，抑制自噬的活性，但未能降低其凋亡水平。

目的 探讨白术内酯I(Atractylenolide I,AT-I)对白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导的关节软骨细胞炎性损伤的影响.方法 人关节软骨细胞来自武汉普诺赛生命科技有限公司.实验分 6 组:对照组(未处理)、模型组(10 ng/mL IL-1β)、AT-I-L组(25 μmol/L)、AT-I-M组(50 μmol/L)、AT-I-H组(100 μmol/L)、AT-I-H+740 Y-P组[100 μmol/L AT-I与50 μg/mL 740 Y-P磷脂酰肌醇 3-激酶(PI3K)激活剂].CCK-8法和流式细胞术分别测定增殖及凋亡;ELISA法测定上清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;Western blot检测PI3K/蛋白激酶B(AKT)/核因子-κB(NF-κB)相关蛋白表达.结果 与对照组相比,模型组OD450 值(24、48 h)降低(P＜0.05),TNF-α、IL-6 表达、凋亡率、PI3K/AKT/NF-κB蛋白表达均升高(P＜0.05).与模型组对比,AT-I-L组OD450 值(24、48 h)、TNF-α、IL-6 表达、凋亡率、PI3K/AKT/NF-κB通路蛋白表达差异不显著(P＞0.05),AT-I-M组、AT-I-H组OD450 值(24 h、48 h)升高(P＜0.05),TNF-α、IL-6 表达、细胞凋亡率、PI3K/AKT/NF-κB通路蛋白表达均降低(P＜0.05).与AT-I-H组对比,AT-I-H+740 Y-P组OD450 值(24、48 h)降低(P＜0.05),TNF-α、IL-6 表达、凋亡率、PI3K/AKT/NF-κB通路蛋白表达均升高(P＜0.05).结论 白术内酯Ⅰ改善IL-1β诱导的关节软骨细胞炎性损伤,其可能机制是促进软骨细胞增殖并抑制炎症反应、细胞凋亡和PI3K/AKT/NF-κB通路实现.

目的 探索经方四妙丸防治高尿酸血症痛风的药效物质.方法 建立高尿酸血症药理模型,采用超高效液相色谱串联四极杆静电场轨道阱质谱联用技术(UPLC-Q-Exactive-MS)分析四妙丸体内外化学成分;以入血成分为基础,采用网络药理学构建四妙丸调控高尿酸血症痛风"活性成分-靶点-通路"网络;以关键活性成分与高尿酸血症痛风关键靶点尿酸生成酶(XDH),尿酸转运体(ABCG2、GLUT9、OAT1、URAT1)及炎症靶点(PTGS2、TLR2、TLR4)进行分子对接,根据对接结果进行实验验证,探讨四妙丸防治高尿酸血症痛风的关键药效物质.结果 UPLC-Q-Exactive-MS法共鉴定四妙丸 89 个成分,包含 74 个入血成分,即候选成分;网络药理学构建了"入血成分-靶点-通路"网络,入血成分匹配 116 个高尿酸靶点和 173 痛风靶点,涉及调节糖脂代谢、氧化应激、炎症反应、ERK1、ERK2 和MAPK级联反应、PI3K信号传导等生物过程;调节血脂与动脉粥样硬化、凋亡、AGE-RAGE、TNF、PI3K-Akt、MAPK、TLRs、JAK-STAT、NF-κB等信号通路,发挥多途径调控高尿酸血症痛风疾病网络的作用.分子对接研究表明小檗碱、黄柏碱、木兰花碱、药根碱、巴马汀、黄柏酮、柠檬苦素、苍术素、花旗松素、白术内酯Ⅲ及β-蜕皮甾酮等成分与尿酸合成酶、尿酸转运体及炎症靶点的亲和力良好,Western Blot验证发现花旗松素具有负调节尿酸盐转运蛋白 1(URAT1)表达的作用,其是四妙丸防治高尿酸血症痛风的主要药效物质.结论 该研究阐述了四妙丸调控高尿酸血症痛风的主要药效物质,可为四妙丸临床应用、质量评价和标准提升提供科学依据.

目的 基于KLF16/PPAR-α信号通路探讨参苓白术散对代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)小鼠肝脏脂质代谢的影响.方法 将C57BL/6 小鼠随机分为正常组、模型组及参苓白术散低、中、高剂量组(2.685、5.369、10.738 g·kg-1·d-1),每组 7 只.除正常组给予标准饲料外,其余各组小鼠均给予高脂饲料连续喂养 12 周,复制MAFLD模型.造模结束后开始灌胃给药,每日 1 次,连续 5 周.测定小鼠体质量及肝脏系数;采用HE及油红O染色观察小鼠肝脏组织病理变化;检测血清谷氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、甘油三酯(TG)及总胆固醇(TC)水平;RT-qPCR法检测肝组织中PPAR-α、KLF16、FAS、SREBP-1c mRNA表达水平.结果 与正常组比较,模型组小鼠的体质量、肝质量及肝脏系数明显升高(P＜0.05,P＜0.01);血清TG、TC、ALT、AST水平显著升高(P＜0.001);肝细胞胞质可见大量空泡,出现大量红染的脂滴,NAS病理评分及油红O染色IOD值显著升高(P＜0.05,P＜0.001);肝组织中PPAR-α、KLF16 mRNA表达显著下调(P＜0.01,P＜0.001),FAS、SREBP-1c mRNA表达显著上调(P＜0.05,P＜0.001).与模型组比较,参苓白术散高剂量组小鼠的体质量、肝质量、肝脏系数明显降低(P＜0.05);参苓白术散低、中、高剂量组小鼠的血清TG、TC、ALT水平显著降低(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001);参苓白术散中、高剂量组小鼠的血清AST 水平显著降低(P＜0.01,P＜0.001);各给药组小鼠肝组织病理变化有明显改善,肝细胞胞质内橘红色脂滴显著减少,参苓白术散高剂量组的NAS病理评分及油红O染色IOD值显著降低(P＜0.05,P＜0.01);参苓白术散低、中、高剂量组小鼠肝组织中 PPAR-α、KLF16 mRNA 表达显著上调(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001),FAS、SREBP-1c mRNA表达显著下调(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001).结论 参苓白术散对MAFLD 小鼠的肝脏脂质代谢有明显改善作用,其机制可能与转录调控核受体KLF16/PPAR-α信号通路有关.

目的 考察提取、浓缩、离心、灭菌工艺对养肝降草合剂整体质量的影响.方法 分析采用菲罗门Luna C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相乙腈-0.1%磷酸,梯度洗脱;体积流量1 mL/min;柱温20℃.建立HPLC指纹图谱,测定红景天苷、栀子苷、连翘酯苷A、特女贞苷、甘草酸、白术内酯Ⅲ的含量,并计算其转移率.结果 15批不同工艺下样品指纹图谱中有 20 个共有峰,相似度大于 0.950.6 种成分在各自范围内线性关系良好(r≥0.999 0),平均加样回收率 96.96%～106.69%,RSD 0.97%～2.87%,转移率大于 80%,总转移率大于 90%.结论 养肝降草合剂在不同工艺下均具有较好的稳定性.

目的 研究泽泻汤对高脂血症急性胰腺炎(hyperlipidemia acute pancreatitis,HLAP)的防治作用及机制.方法 雄性C57BL/6J小鼠以高脂饮食喂养,ig泽泻汤干预8周后,ip雨蛙素(50μg/kg)制备HLAP模型.采用试剂盒检测小鼠血清中三酰甘油(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)水平及淀粉酶(amylase,AMY)、脂肪酶(lipase,LPS)、总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)活性;采用油红O染色观察肝脏组织脂质蓄积情况,苏木素-伊红(HE)染色观察肝脏、胰腺组织病理学变化;采用Western blotting检测胰腺组织中血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、核因子 E2 相关基因(nuclear factor erythroid-2-related factor2,Nrf2)、免疫球蛋白重链结合蛋白(binding immunoglobulin protein,BIP)、真核翻译起始因子 2α(eukaryotic translation initiation factor 2α,eIF2α)、p-eIF2α、Bcl-2 相互作用蛋白(Bcl-2 interacting coiled-coil protein-1,Beclin-1)、自噬蛋白 5(autophagy-related protein 5,ATG5)、自噬蛋白 12(autophagy-related protein 12,ATG12)、微管相关蛋白 1 轻链 3-Ⅱ/Ⅰ(microtubule-associated protein light chain 3-Ⅱ/Ⅰ,LC3-Ⅱ/Ⅰ)及溶酶体相关膜蛋白 1(lysosomal associated membrane protein 1,LAMP-1)表达.采用棕榈酸(200mmol/L)和雨蛙素(10nmol/L)处理胰腺腺泡AR42J细胞构建HLAP细胞模型,给予泽泻汤干预后,采用试剂盒检测细胞培养上清液中LPS、T-SOD活性;采用DCFH-DA荧光探针、线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)荧光探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)及MMP水平;采用透射电镜观察细胞超微结构及自噬变化;采用Western blotting 检测细胞中 HO-1、Nrf2、Kelch 样环氧氯丙烷相关蛋白 1(kelch-like ECH-associatedprotein 1,Keap1)、BIP、eIF2α、p-eIF2α、Beclin-1、ATG5、LC3-Ⅱ/Ⅰ和LAMP-1表达.结果 与模型组比较,泽泻汤能够降低小鼠血清中TC、TG水平及AMY、LPS活性(P＜0.05、0.01、0.001),抑制肝脏组织中的脂滴蓄积,减轻肝脏及胰腺组织病理损伤,同时上调血清及胰腺腺泡细胞中SOD、CAT活性(P＜0.05、0.01),下调ROS水平(P＜0.001),上调胰腺组织及细胞中HO-1、Nrf2、LAMP1表达(P＜0.05、0.01、0.001),下调 Keap1、BIP、eIF2α、p-eIF2α、Beclin-1、ATG5、ATG12 及 LC3-Ⅱ/Ⅰ 表达(P＜0.05、0.01、0.001).结论 泽泻汤可以防治HLAP,其作用机制可能与抑制内质网应激诱导的过度自噬、恢复自噬通量有关.

目的 探究白术内酯Ⅰ在胃癌细胞中抑制输出蛋白T(XPOT)的作用和机制.方法 探究XPOT在胃癌组织中的表达情况.自安徽中医药大学第二附属医院脾胃科病例随访系统中随机调出具有完整临床病理及随访资料的胃癌病例105例,并获取对应的肿瘤组织和癌旁组织.应用免疫组化、qPCR和Western blot技术检测上述标本中XPOT表达情况.使用GSEA分析TCGA、GEO数据库中胃癌患者基因表达数据.通过多种细胞实验检测癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力.并检测XPOT、SKP2、CyclinA、P27的mRNA的蛋白表达水平.结果 生物信息学结果及临床样本均证实,XPOT在胃癌组织中表达高,提示不良预后;体外研究发现:AT-1可抑制胃癌细胞的增殖、侵袭能力;XPOT下调可抑制胃癌细胞的增殖、侵袭能力;AT-1可下调XPOT表达,继而对SKP2、P27、CyclinA进行调控,即通过调控XPOT途径,抑制胃癌细胞的增殖和侵袭.结论 胃癌组织中XPOT过表达可提示患者预后不良.白术内酯Ⅰ可下调XPOT调控泛素化-蛋白酶体途径抑制胃癌细胞的增殖及侵袭.

目的:优选参术调脾颗粒方中白术和陈皮的最佳醇提取工艺.方法:以参术调脾颗粒中醇溶性浸出物、白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ的含量为醇提取工艺的考察指标,通过多指标综合评分法考察不同因素和水平对提取工艺的影响.结果:参术调脾颗粒方中白术和陈皮最佳醇提取工艺为A1B3C2D3,即乙醇浓度65%,加10倍量乙醇,每次提取1.5 h,提取3次.结论:优选的参术调脾颗粒方中白术和陈皮醇提取工艺合理可行,有效成分提取效率高.

玉屏风散是历代医家常用的经典名方之一,由黄芪、白术、防风3味药组成,具有益气固表止汗之功效,主治表虚自汗症,现代药理学研究表明该方具有抗炎、抗菌、抗病毒、调节机体免疫功能、抗肿瘤等药理作用,临床常用于治疗消化系统、免疫系统、呼吸系统、皮肤科及儿科常见疾病.该文总结了近年来玉屏风散的化学成分、药理作用及临床应用的研究情况,并基于中药质量标志物(Q-marker)"五原则"——传递与溯源、特有性、有效性、复方配伍环境及可测性对玉屏风散的Q-marker进行预测分析,提示黄芪甲苷、毛蕊异黄酮苷、芒柄花素、芒柄花苷、升麻素、升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、亥茅酚苷、白术内酯I可作为玉屏风散的Q-marker,后续可选择以上成分为指标对玉屏风散及其制剂进行全程质量把控和评价,并建立质量溯源体系.

目的:建立党参药材的UPLC指纹图谱,结合化学计量学方法进行分析,对党参的质量标志物(Q-Marker)进行预测分析,为党参的质量评价提供科学依据.方法:采用ACQUITY UPLC?BEH C18色谱柱(2.1 mm × 100 mm,1.7 μm),以乙腈-0.1％磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速0.3 mL·min-1,检测波长267 nm,柱温30℃,进样量2 μL.采用高效液相色谱仪,使用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱和乙腈-0.1％磷酸水溶液进行梯度洗脱,建立21批党参样品的UPLC指纹图谱并进行相似度评价,采用聚类分析(HCA)、主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)等化学计量学方法筛选出主要差异性成分,预测党参药材的Q-Marker.结果:建立了党参药材UPLC指纹图谱,确认了 16个共有峰,通过对照品共指认出7个共有峰,分别为腺苷、色氨酸、紫丁香苷、绿原酸、党参苷Ⅰ、党参炔苷、白术内酯Ⅲ,指纹图谱相似度均大于0.85,经HCA、PCA和OPLS-DA筛选出党参苷Ⅰ、党参炔苷、腺苷及色氨酸为不同产地党参药材的重要差异性成分,可作为党参潜在的Q-Marker.结论:通过指纹图谱结合化学计量学分析预测了党参药材潜在的Q-Marker,为党参质量评价提供一定的参考.