目的:探讨神经妥乐平对骨癌痛大鼠的镇痛作用及其初步机制。方法:(1)将72只雌性SD大鼠按随机数字表法分为正常组、假手术组、模型组、低剂量神经妥乐平组、中剂量神经妥乐平组、高剂量神经妥乐平组( n=12)，后4组大鼠以胫骨骨髓腔中注射SHZ-88乳腺癌细胞方式构建骨癌痛模型，后3组大鼠分别于建模后第15~21天给予1.2、2.4、3.6个神经妥乐平单位(NU)的神经妥乐平1次/d、连续7 d的腹腔注射。分别于建模后第0、5、7、10、14、17、21天时检测各组大鼠建模侧后肢的机械痛阈值；于建模后第21天时行免疫组化染色检测大鼠中脑导水管周围灰质腹外侧区(vlPAG)中5-羟色胺7(5-HT7)受体阳性细胞数量，Western blotting实验检测大鼠vlPAG中5-HT7受体蛋白的表达。(2)将同批次建模后第21天的24只骨癌痛模型大鼠按随机数字表法分为骨癌痛组、骨癌痛+高剂量神经妥乐平组(腹腔注射3.6个NU的神经妥乐平)及骨癌痛+高剂量神经妥乐平+SB-269970组(vlPAG中微量注射特异性5-HT7受体拮抗剂SB-269970 30 min后再腹腔注射3.6单位的神经妥乐平)( n=8)，分别于神经妥乐平注射后0、15、30、45、60 min时检测各组大鼠建模侧后肢的机械痛阈值。 结果:(1)建模后第17、21天时，低剂量神经妥乐平组、中剂量神经妥乐平组、高剂量神经妥乐平组大鼠建模侧后肢的机械痛阈值均明显高于模型组，且高剂量神经妥乐平组明显高于低剂量神经妥乐平组、中剂量神经妥乐平组，中剂量神经妥乐平组明显高于低剂量神经妥乐平组，差异均有统计学意义( P<0.05)。建模后第21天时，低剂量神经妥乐平组、中剂量神经妥乐平组和高剂量神经妥乐平组大鼠vlPAG中5-HT7受体阳性细胞数及蛋白的表达均明显高于模型组，且高剂量神经妥乐平组明显高于低剂量神经妥乐平组、中剂量神经妥乐平组，中剂量神经妥乐平组明显高于低剂量神经妥乐平组，差异均有统计学意义( P<0.05)。(2)神经妥乐平注射后15、30、45、60 min时，骨癌痛+高剂量神经妥乐平组、骨癌痛+高剂量神经妥乐平+SB-269970组大鼠建模侧后肢的机械痛阈值均明显高于骨癌痛组，但骨癌痛+高剂量神经妥乐平+SB-269970组均明显低于骨癌痛+高剂量神经妥乐平组，差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:vlPAG中5-HT7受体的激活介入了神经妥乐平对骨癌痛的镇痛作用。

腹外侧中脑导水管周围灰质（vlPAG）位于中脑导水管周围灰质（PAG）的腹外侧区域，其含有丰富的γ-氨基丁酸能、谷氨酸能、多巴胺能等神经元及5-羟色胺（5-HT）、谷氨酸、γ-氨基丁酸、乙酰胆碱等神经化学物质，与大脑众多区域都有神经纤维连接，是脑内参与疼痛调节的重要脑区。文章综述了vlPAG的结构组成特点，vlPAG参与疼痛调节的神经生理机制及其与大脑其他区域的神经纤维联系，总结了其在疼痛调控中的关键作用，为研发更多相关镇痛药物及方法提供依据和思路。

目的:观察电针"内关"对足掌注射完全弗氏佐剂(CFA)小鼠疼痛反应的影响,探讨其脑内食欲素1受体(OX1R)-内源性大麻素1受体(CB1R)通路机制.方法:SPF级成年雄性C57BL/6小鼠按两部分实验随机分组,第一部分实验分为对照组、模型组、电针组,第二部分实验分为对照组、模型组、电针组、电针+纳洛酮(Naloxone)组和电针+OX1R拮抗剂(SB33486)组.于小鼠左后肢足掌皮下注射20 μL CFA建立炎性痛模型.电针组、电针+Naloxone组和电针+SB33486组给予电针双侧"内关",疏波,频率 2 Hz,强度2 mA,20 min/次,1次/d,连续5 d;电针+Naloxone组和电针+SB33486组在电针干预的基础上于第5天分别给予腹腔注射Naloxone和SB33486.采用Tail-flick法和Von Frey法检测小鼠热痛阈值和机械痛阈值,实时荧光定量PCR法检测小鼠中脑导水管周围灰质(PAG)中β-内啡肽mRNA表达水平;免疫荧光法检测小鼠下丘脑外侧区(LH)中OX1R及PAG腹外侧区(vlPAG)中CB1R阳性细胞表达数量.结果:与对照组比较,模型组小鼠热痛阈值、机械痛阈值均降低(P<0.001),PAG中β-内啡肽mRNA表达水平降低(P<0.001),LH内的OX1R及vlPAG内的CB1R阳性细胞数量减少(P<0.05,P<0.001).与模型组比较,电针组热痛阈、机械痛阈值明显升高(P<0.001),LH内的OX1R和vlPAG内的CB1R阳性细胞数量增多(P<0.01,P<0.001).与电针组比较,电针+Naloxone组机械痛阈值差异无统计学意义,电针+SB33486组机械痛阈值则降低(P<0.01),且电针+SB33486组小鼠LH内的OX1R和vlPAG内的CB1R阳性细胞数量减少(P<0.001).结论:电针"内关"可通过激活脑内OX1R-CB1R通路实现对CFA小鼠的镇痛效应,且该效应不依赖于阿片类镇痛物质.

目的:利用囊泡膜谷氨酸转运体2(VGluT2)-ires-cre、谷氨酸脱羧酶2(GAD2)-ires-cre和羟色胺转运体(Sert)-ires-cre小鼠结合重组狂犬病毒介导的逆行跨单级突触追踪技术,研究未定带(ZI)和中脑导水管周围灰质腹外侧区(vlPAG)内特异性神经元之间的纤维联系.方法:首先将辅助病毒注入转基因小鼠右侧vlPAG内,两周过后将重组狂犬病毒(RV)注入相同区域.一周后,在激光共聚焦显微镜下观察RV标记的突触前神经元在ZI内的分布.结果:将RV注入vlPAG后,在VGluT2-ires-cre小鼠ZI的吻尾方向上均可观察到逆标的突触前神经元分布;GAD2-ires-cre小鼠逆标神经元只见于ZI吻侧部,但Sert-ires-cre小鼠ZI内少见RV逆行标记的突触前神经元.结论:ZI神经元发出投射至vlPAG,作用于其中的谷氨酸能神经元或GABA能神经元,该通路可能参与了疼痛或恐惧样行为的调控.

[目的]以肠易激综合征(IBS)小鼠模型为例,采用光遗传技术调控腹外侧中脑导水管周围灰质(vlPAG)中的γ-氨基丁酸(GABA)能神经元,探讨vlPAG中GABA能神经元参与电针缓解IBS小鼠内脏痛的机制.[方法]将Vgat-Cre小鼠随机分为:1)正常组,给予与电针组相同固定.2)模型组,给予与电针组相同固定.3)模型+eNpHR组,注射rAAV2/9-EF1α-DIO-eNpHR3.0-EGFP病毒,给予黄光刺激(20 Hz,5 ms,4 mW).4)模型+ChR2 组,注射rAAV2/9-EF1α-DIO-hChR2-EGFP病毒,给予蓝光刺激(20 Hz,5 ms,4 mW).5)电针组,取双侧"足三里"穴,疏密波,频率 2/100 Hz,电流 1 mA,每次30 min,每日1次,连续治疗7d.采用 2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)灌肠法制备IBS慢性内脏痛模型;通过一般情况观察、腹壁撤回反射(AWR)评分确认模型制备成功后,利用光遗传技术对vlPAG的GABA能神经元进行激活和抑制调控,分析各组小鼠的AWR评分变化.[结果]1)与正常组比较(干预前),模型组小鼠AWR评分上升(P＜0.01).2)与给光前比较,模型+eNpHR组小鼠在给予黄光抑制GABA能神经元时,AWR评分上升(P＜0.05);模型+ChR2 组小鼠在给予蓝光激活GABA能神经元时,AWR评分下降(P＜0.05).3)与正常组比较(干预后),模型组小鼠AWR评分上升(P＜0.01);与模型组比较,模型+eNpHR组AWR评分上升(P＜0.05);模型+ChR2 组AWR评分下降(P＜0.05);电针组AWR评分下降(P＜0.05).[结论]光遗传技术能够有效调控vlPAG脑区中的GABA能神经元,而电针对IBS小鼠的疼痛行为学影响与光遗传激活GABA能神经元产生的效应趋势一致,说明电针可能通过激活vlPAG中的GABA能神经元发挥缓解IBS小鼠内脏痛的作用.

目的 探索中脑导水管周围灰质腹外侧部(vlPAG)星形胶质细胞在钩吻素子(KM)抗糖尿病神经病理性疼痛(DNP)中的具体作用.方法 采用链脲佐菌素(STZ)诱导Ⅰ型糖尿病大鼠DNP模型,观察钩吻素子对vlPAG星形胶质细胞活性的影响;在此基础上,使用氯氮平-N-氧化物(CNO)激活的Gq-DREADDs及Gi-DREADDs分别调控正常大鼠及DNP模型大鼠vlPAG星形胶质细胞活性同时联合应用梯度剂量KM,观察上述手段对实验动物机械痛阈及vlPAG星形胶质细胞活化情况的影响.结果 KM可显著抑制vlPAG星形胶质细胞活化并缓解DNP机械痛敏.KM可拮抗由Gq-DREADDs介导的靶向vlPAG星形胶质细胞活化及由此引发的神经病理性疼痛样症状;此外,KM可增强中剂量CNO作用于Gi-DREADDs介导的vlPAG星形胶质细胞活性抑制作用,并进一步缓解DNP模型动物机械痛敏症状.结论 KM抗DNP作用与其抑制vlPAG星形胶质细胞活化关系密切.

传统观点认为神经病理性痛(NP)在脊髓及脊髓以上水平的调制主要与神经元的中枢敏化有关.然而,目前临床糖尿病神经病理性痛(DNP)治疗药物以神经元为作用靶标,只能暂时阻断神经痛觉信息传递而短时缓解疼痛,疗效不佳.DNP发生机制及其药物治疗靶标亟待探索,诱发中枢敏化的上游因素,特别是星形胶质细胞的异常活化日益受到关注.钩吻素子(KM)具有显著的抗DNP作用,但其脑内作用靶标有待研究.本课题组优先采用化学遗传学技术在体特异性调控脑内痛相关核团星形胶质细胞活性.结果表明,激活基底外侧杏仁核(BLA)、中脑导水管周围灰质腹外侧部(vlPAG)及丘脑腹后外侧核(VPL)星形胶质细胞可诱导NP样痛敏症状;抑制上述核团星形胶质细胞活性可缓解DNP痛敏.KM可拮抗化学遗传学技术诱导的BLA,vlPAG和VPL星形胶质细胞活化并缓解NP样痛敏症状;可协同增强化学遗传学调节产生的BLA,vlPAG和VPL星形胶质细胞活性抑制及DNP痛敏的改善.上述提示,脑内痛相关核团内星形胶质细胞活化可导致DNP的发生发展,星形胶质细胞可能是KM抗DNP作用的重要靶标.

目的 探讨甲醛致急性疼痛大鼠中脑导水管周围灰质腹外侧区(vLPAG)γ-氨基丁酸 A 受体 α1亚基(GABAAα1)的表达变化.方法 将大鼠随机分为对照组(C组,n=12)和甲醛致痛组(F组,n=12):于右侧后足底注射0.9%氯化钠溶液和2%甲醛各50 μL.记录大鼠建模后1 h内每5 min的缩足舔爪时间,分别统计两时相缩足舔爪时间之和,作为大鼠疼痛学评分;记录大鼠建模后1 h内每10 min各时间点的机械痛阈;1 h后处死大鼠,用免疫印迹法检测各组vLPAG处GABAAα1相对表达量.结果 F组大鼠出现了明显的缩足舔爪的急性疼痛表现,且呈两相性,疼痛学评分均高于C组(P<0.05);机械痛阈各时点均低于C组(P<0.05);F组GABAAα1蛋白表达含量较C组明显升高(P<0.05).结论 中脑导水管周围灰质腹外侧区GABAAα1表达上调与大鼠急性疼痛痛阈降低有关.

目的 探讨炎症性疼痛大鼠中脑导水管周围灰质腹外侧区(vlPAG)P2X7受体激活是否介入曲马多对炎症性疼痛的镇痛作用. 方法 112只SD大鼠采用随机数字法分为7组:正常对照组、生理盐水组、福尔马林组、福尔马林+低剂量曲马多组、福尔马林+中剂量曲马多组、福尔马林+高剂量曲马多组和福尔马林+高剂量曲马多+A-438079组,每组16只.对福尔马林组、福尔马林+低剂量曲马多组、福尔马林+中剂量曲马多组、福尔马林+高剂量曲马多组大鼠足底注射5％福尔马林100 μL以建立炎症性疼痛模型,福尔马林+低剂量曲马多组、福尔马林+中剂量曲马多组、福尔马林+高剂量曲马多组大鼠建模成功后分别鞘内注射曲马多5、15、25 μg/kg(溶于20 μL生理盐水中),福尔马林组鞘内注射0.9％生理盐水20μL;福尔马林+高剂量曲马多+A-438079组大鼠于vlPAG注射P2X7受体特异性拮抗剂A-438079(100 pmol/0.3 μL)后足底注射5％福尔马林100μL以建立炎症性疼痛模型,再给予鞘内注射25 μg/kg曲马多(溶于20 μL生理盐水中).于福尔马林注射后5、10、15、25、35、40、50、60 min时间点观察各组大鼠炎症性疼痛行为并进行疼痛评分,观察终点时采用免疫组化染色和Western blotting检测前6组大鼠vlPAG中P2X7受体阳性细胞数和蛋白表达水平. 结果 (1)福尔马林组大鼠在各观察时间点的疼痛评分及vlPAG中P2X7受体阳性细胞数、蛋白表达水平均明显升高,与正常对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).(2)福尔马林+中剂量曲马多组自福尔马林注射后25 min起,福尔马林+高剂量曲马多组自福尔马林注射后15 min起各观察时间点的疼痛评分较福尔马林组均明显降低,vlPAG中P2X7受体阳性细胞数、蛋白表达水平较福尔马林组均明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).(3)福尔马林+高剂量曲马多组自福尔马林注射后15 min起各观察时间点的疼痛评分较福尔马林+中剂量曲马多组均明显降低,vlPAG中P2X7受体阳性细胞数、蛋白表达水平较福尔马林+中剂量曲马多组均明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).(4)福尔马林+高剂量曲马多+A-438079组大鼠自福尔马林注射后15min起各观察时间点的疼痛评分较福尔马林+高剂量曲马多组均明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 鞘内注射曲马多可通过促进vlPAG中P2X7受体表达而对炎症性疼痛大鼠产生镇痛作用.

目的 观察脑源性神经营养因子(BDNF)在腹外侧中脑水管周围灰质(vPAG)持续高表达对癫痫发作的影响.方法 SD大鼠随机分为基因病毒组(72只)、空病毒组(64只)、生理盐水组(64只).将携带BDNF基因的病毒载体、空病毒载体和生理盐水分别导入相应组别大鼠vPAG.应用GFP基因标记法检测注射部位的准确性.应用Western blotting检测各组大鼠BDNF的表达,并观察各组大鼠急性癫痫发作及致癫痫持续状态(SE)的自发性癫痫发作情况.结果 与空病毒组及生理盐水组比较,基因病毒组大鼠目的基因导入后第6、10、15 d BDNF蛋白表达显著升高(P<0.05～0.01).与基因病毒组比较,生理盐水组和空病毒组癫痫发作持续时间显著延长,癫痫发作强度显著升高(均P<0.01);生理盐水组和空病毒组癫痫发作持续时间及发作强度差异无统计学意义(均P>0.05).与基因病毒组比较,生理盐水组及空病毒组自发性癫痫发作频率及发作强度显著升高,发作持续时间显著延长(均P<0.01);生理盐水组及空病毒组两组自发性发作频率、持续时间及发作强度差异无统计学意义(均P>0.05).结论 vPAG局部BDNF持续高表达可抑制急性癫痫发作和慢性自发性癫痫发作的发展.