质谱流式技术是近来年发明的一门新兴技术，它利用金属同位素标签替代荧光标签，并利用质谱对标签进行定量，通过结合质谱和流式细胞技术，可以同时对单细胞进行超多参数、无需补偿的测量，大大增强了评估复杂细胞系统和过程的能力，弥补了荧光流式的不足。其高通量、高灵敏度和高稳定性的特点尤其适合于免疫、肿瘤、血液、药物和遗传学等学科的研究中。

目的:探究螨虫诱导的变应性鼻炎（allergic rhinitis，AR）患者血浆细胞外囊泡（extracellular vesicle，EV）蛋白质组学的差异，寻找并鉴定AR潜在的生物标志物。方法:分别收集螨虫诱导的AR患者（AR组）和健康志愿者（HC组）的血液样本，每组各20例。使用超速离心法对AR组与HC组的血浆EV进行分离，并使用透射电子显微镜和纳米流式细胞术对EV进行鉴定和表征。使用液相色谱-串联质谱技术对分离出的EV进行蛋白质组学分析，寻找并鉴定差异表达蛋白质（differentially expression proteins，DEPs）。随后，对DEPs进行基因本体（gene ontology，GO）、京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG）富集分析和蛋白质相互作用（protein-protein interaction，PPI）网络分析。结果:AR组和HC组的血浆EV大小在30~150 nm之间，两组之间无显著性差异。在两组之间共筛选出664种蛋白质，并鉴定出89种表达水平具有显著性差异的蛋白质（ P<0.05）。与HC组相比，AR组中有44种蛋白质表达显著上调，45种蛋白质表达显著下调。通过进行GO分析，发现这89种DEPs可能与免疫调节有关。此外，KEGG富集分析和PPI分析显示，这89种DEPs还与补体和凝血级联反应、雌激素和脂肪细胞因子信号通路等多种途径密切相关。 结论:本研究通过蛋白质组学技术成功筛选出与螨虫诱导AR相关的89种差异表达蛋白质。这些DEPs主要参与调节个体的免疫反应，其中脂联素、补体C1q亚基A和溶质载体家族2等蛋白质可能成为诊断AR的潜在生物标志物。

目的:探讨肿瘤细胞来源的细胞外囊泡装载阿霉素对人肝癌细胞PLC/PRF/5增殖及凋亡的影响。方法:以"直接共同孵育"合成装载阿霉素的细胞外囊泡，即载药囊泡，运用透射电镜观察形态，动态光散射仪测定粒径，蛋白免疫印迹技术鉴定CD 63、HSP 70及TSG 101的表达，液相-质谱联用仪计算载药率，体外药物释放实验模拟体内载药囊泡的药物缓释，采用PKH67染色观察细胞对载药囊泡的摄取，采用MTS实验和流式细胞术检测载药囊泡对人肝癌细胞PLC/PRF/5增殖及凋亡影响。结果:载药囊泡在透射电镜下呈大小不一的椭圆样双层膜结构；动态光散射仪观察直径为(115.9±5.2)nm；蛋白免疫印迹检测表达CD 63、HSP 70及TSG 101；载药囊泡包封率为0.77%；体外释放实验显示载药囊泡能缓慢释放药物；PKH67示踪实验显示16小时内肝癌细胞能够摄取载药囊泡；MTS实验结果显示，经载药囊泡处理72小时后，肝癌细胞PLC/PRF/5的活性为(54.9±3.2)%，显著低于阿霉素组的(77.7±5.4)%，差异有统计学意义( P<0.05)；细胞凋亡检测结果显示，载药囊泡组处理48小时后细胞凋亡率为(47.9±7.0)%，高于阿霉素组的(38.0±1.5)%，差异有统计学意义( P<0.05)。 结论:载药囊泡能够抑制肝癌细胞增殖并促进其凋亡。

单细胞蛋白组学分析能够对细胞异质性进行深层次研究，进一步推动精准医疗和肿瘤研究等领域发展。近年来，基于质谱的蛋白质组学取得重大进展，然而在单细胞水平进行蛋白质组学分析仍然面临着灵敏度挑战。目前液相色谱-串联质谱已成为蛋白质组学主要分析方法，由于其具有高灵敏度，高通量，高稳定性等特点，在单细胞领域得以广泛推广。近几年具有代表性的单细胞蛋白质组学方法，根据样品处理方式的不同，可以分为单管技术、微流控平台、集合处理平台三类。不同的数据采集和分析方法各有优劣。单细胞蛋白质组学目前还停留在实验室研究，若能早日在临床应用，必将推动精准医疗和肿瘤学研究进步发展。

流式细胞术（FCM）是一项集光学、应用流体学、电子学和计算机等多门学科为一体的细胞分析技术。目前，FCM在血液系统肿瘤的诊断与治疗监测中广泛应用，但在非造血系统肿瘤（NHN）的临床应用仍处于初级阶段。近年来，随着分析需求的日益增长和科学技术的发展，一系列与现有高新技术高度整合的新型FCM逐步受到关注，例如质谱流式细胞术（CyTOF）、全光谱流式细胞术（SFC），这些新型FCM的出现为NHN患者临床实验室辅助诊断提供了更多的可能。该文阐述传统FCM、CyTOF与SFC原理及其在NHN诊断和治疗中的应用及前景，为FCM在临床检验的进一步拓展应用提供参考。

目的:利用质谱流式技术分析对照、慢性鼻窦炎不伴鼻息肉（CRSsNP）、非嗜酸粒细胞型慢性鼻窦炎伴鼻息肉（neCRSwNP）和嗜酸粒细胞型慢性鼻窦炎伴鼻息肉（eCRSwNP）患者的鼻腔组织免疫微环境细胞构成特征。方法:招募2022年3—12月就诊于北京协和医院耳鼻咽喉头颈外科行鼻内镜手术的CRS患者13例，其中男8例，女5例，年龄22.3~58.3岁。3例对照黏膜来自经鼻内镜手术的颞下窝良性肿瘤或无功能垂体腺瘤患者的正常筛窦或蝶窦，并排除了变应性鼻炎和鼻窦炎。将16例临床组织样本（对照组3例、CRSsNP 3例、neCRSwNP 4例、eCRSwNP 6例）制备成单细胞悬液。用42种分子标志物构成的组合进行质谱流式检测，分析细胞亚群在各组间的差异。采用GraphPad Prism 9对数据进行分析。结果:根据质谱流式结果将对照、CRSsNP、neCRSwNP和eCRSwNP的细胞划分为7个主要的细胞亚群，并对T/NK细胞和髓样细胞进行详细的分群。在T/NK细胞中，与对照组相比，CRSsNP组的NK CD56 bright细胞数量增加，NK CD56 dim细胞数量减少；与CRSsNP组相比，eCRSwNP组的NKT细胞和CD4 +Tem细胞数量减少；与CRSsNP组相比，eCRSwNP组中CD25在Treg细胞内的表达水平显著增加；与CRSsNP组相比，eCRSwNP组的CD8 +Teff细胞和CD8 +TRM细胞中Tbet表达显著减少；eCRSwNP组中，CD103在CD8 +TRM细胞中的表达明显少于CRSsNP组。在髓样细胞中，与其他3组相比，eCRSwNP组中巨噬细胞明显增多、cDC1和单核细胞显著减少；与对照组和CRSsNP组相比，eCRSwNP组的静息状态巨噬细胞也明显减少；与CRSsNP组相比，eCRSwNP组的cDC2和单核细胞内CX3CR1的水平显著降低；eCRSwNP组的cDC2和巨噬细胞中NLRP3的表达水平显著高于其他3组；与对照组相比，eCRSwNP组中cDC2和巨噬细胞中Gata3的表达水平也显著升高；此外，eCRSwNP组中单核细胞内CCR2的表达低于CRSsNP组。在ILC中，与对照组相比，eCRSwNP组中CCR6的表达减少。 结论:与对照、CRSsNP、neCRSwNP相比，eCRSwNP中巨噬细胞数量增多，cDC1、静息状态巨噬细胞等减少，保护性细胞CD103 +CD8 +TRM耗竭；此外，eCRSwNP的单核细胞中CCR2和CX3CR1表达水平降低。

肿瘤微环境（TME）由肿瘤细胞、免疫细胞和基质细胞共同构成，每个细胞组分之间的相互作用对肿瘤发生发展起着关键影响。TME中免疫细胞和基质细胞通过引起细胞毒性或炎症反应来对抗肿瘤细胞，但它们也通过一系列免疫调节机制参与肿瘤逃逸。既往抗淋巴瘤的治疗主要靶向恶性细胞本身，但随着免疫检查点抑制剂、双特异性抗体和嵌合抗原受体T细胞等免疫治疗的临床应用，消除TME对肿瘤细胞的保护作用也越发得到重视。借助质谱流式分析仪（CyTOF）和成像质谱流式细胞术（IMC）高通量和高维数据的解析能力，大样本量解析淋巴瘤TME构成已经成为可能。

目的 探讨长链非编码RNA-gm33782(LncRNA-gm33782)在急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)肾小管损伤中的功能以及异鼠李素改善肾小管炎性细胞凋亡的作用机制.方法 将 48 只雄性C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组、治疗组(AKI 模型构建后灌胃给予 30 mg/kg 异鼠李素)、空载质粒电转染组、LncRNA-gm33782 敲低组、LncRNA-gm33782 过表达组、LncRNA-gm33782 敲低组+模型组、LncRNA-gm33782 过表达+治疗组 8 组,通过腹腔一次性注射 20 mg/kg顺铂诱导小鼠AKI,原位电转染技术用于介导肾LncRNA-gm33782 的敲低和过表达.采用Chirp实验捕获AKI肾LncRNA-gm33782 结合蛋白进行质谱分析,挖掘LncRNA-gm33782 直接作用靶蛋白;通过观察电转染敲低LncRNA-gm33782 和异鼠李素(isorhamnetin,ISO)治疗干预后小鼠肾功能、病理结构改变、肾炎性因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)表达,评价LncRNA-gm33782 在AKI中的作用;NF-κB被作为介导炎症的关键信号通路,Bax、Bcl-2蛋白表达量以及流式凋亡检测结果被用于评价异鼠李素对AKI肾小管炎性细胞凋亡的治疗作用.结果 AKI小鼠肾表现出严重的肾小管损伤以及巨噬细胞浸润和炎症,异鼠李素的治疗干预和LncRNA-gm33782 电转染敲低均能够减轻AKI肾损伤.LncRNA-gm33782 主要表达于AKI损伤的肾小管细胞,质谱检测发现补体因子-H(complement factor-H,CFH)与其有直接结合关系.体外过表达LncRNA-gm33782 后,CFH表达量随即升高,而异鼠李素对AKI细胞炎性凋亡的治疗作用受到抑制.结论 异鼠李素是通过抑制LncRNA-gm33782 对CFH的调控作用减轻AKI肾小管细胞炎性凋亡.

目的 探讨CD45+CD326+双阳性细胞(double positive cells,DPCs)对膀胱癌预后的影响,并构建膀胱癌DPCs相关基因评分系统,探究不同DPCs评分膀胱癌患者肿瘤微环境的特征.方法 采用单细胞测序技术分析DPCs的分子特征,质谱流式技术分析DPCs高比例组和低比例组患者的肿瘤微环境异质性.基于TCGA-BLCA队列,根据DPCs的特征基因构建评分系统,并在GSE13507队列及GSE32894队列中进行验证.结果 膀胱癌患者中DPCs高比例组患者的预后较低比例组患者的预后差(P=0.0158),且高、低比例组患者的肿瘤微环境存在异质性,高比例组患者较低比例患者的免疫细胞和肿瘤细胞有更高的免疫检查点、共抑制因子和共激活因子的表达水平(均P＜0.05);基于TCGA-BLCA队列构建了 9个基因(APOBEC3G、CD96、CLEC2D、GNG2、GNLY、IL32、PSMB9、RORA、SKAP1)的膀胱癌 DPCs 相关基因评分系统.TCGA-BLCA队列、GSE 13507队列和GSE32894队列分析结果显示,高风险评分组膀胱癌患者的总生存期明显比低DPCs评分组短(均P＜0.01).免疫抑制、雌激素等信号通路在高风险评分组中显著富集.结论 DPCs与膀胱癌不良预后密切相关,基于DPCs特征基因构建的模型可较准确地预测膀胱癌患者的临床预后.

新药联合方案、造血干细胞移植及免疫治疗使多发性骨髓瘤(MM)的治疗完全缓解率不断提高.微小残留病灶(MRD)是MM的一种生物标志物.其阳性提示MM患者经治疗后仍可检测到骨髓瘤细胞,疾病易复发;阴性表示治疗后未检测到骨髓瘤细胞,复发风险较小.因此,MM患者中MRD的检测具有重要的临床意义.近年来,二代流式细胞术、二代测序、影像学检查、液体活检及质谱技术等检测MM患者MRD的方法也在逐渐开展.本文就MRD检测的临床意义及各种检测方法的特点作一综述.