目的:通过蛋白重组技术低成本、快速制备高浓度人视黄醇结合蛋白4（hRBP4）参考物质，解决临床hRBP4高值参考物质难以获取的需求。方法:在美国国立生物技术信息中心NCB查找hRBP4的互补DNA序列，经大肠埃希菌密码子优化后人工合成，然后将DNA片段克隆至原核表达质粒pET-28a（+）中，以构建重组hRBP4表达载体。将重组质粒转化至 E. coli BL21感受肽中，优化诱导表达条件（如温度、转速和异丙基硫代半乳糖苷IPTG浓度等）、诱导质粒表达并对重组蛋白进行His融合标签纯化，获取纯化后的hRBP4重组蛋白。 结果:DNAMAN软件对比显示编码hRBP4蛋白的碱基序列完全正确，成功构建重组hRBP4原核表达质粒；SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示亲和纯化产物中可清晰可见约相对分子质量26 000电泳条带；临床尿液和血清hRBP4常规检测系统均可检测到纯化的hRBP4蛋白，且稀释倍数与检测浓度间呈现良好线性关系。结论:成功构建重组hRBP4高水平表达系统，重组hRBP4蛋白纯度大、浓度高、生产周期短，有望在室间质量评价质控品和有证参考物质研制中发挥重要作用。

目的:观察渗出型老年性黄斑变性（wAMD）患者负荷抗血管内皮生长因子（VEGF）药物治疗反应与单核苷酸多态性（SNP）基因型的关系。方法:回顾性临床研究。2019年8月至2020年9月在天津医科大学眼科医院检查确诊的wAMD患者103例103只眼纳入研究。其中，男性59例（57.28%，59/103），女性44例（42.72%，44/103 ）；平均年龄（68.74±7.74）岁。采用标准对数视力表检测患眼BCVA，统计时换算为最小分辨角对数（logMAR）视力。采用光相干断层扫描（OCT）检测患眼黄斑中心凹视网膜厚度（CRT）。同时检测患者的高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）。所有患眼均行玻璃体腔注射抗VEGF药物治疗，每月1次，连续3个月。初次治疗前，采集患者外周静脉血，质谱法检测白细胞介素-8 （ IL-8）、补体C3基因（ C3）、补体因子H （ CFH）、肝脂肪酶（ LIPC）、胆固醇脂蛋白转移酶（ CETP）、三磷酸腺苷结合盒亚家族A成员1（ ABCA1）、脂蛋白脂肪酶（ LPL）、脂肪酸去饱和基因簇（ FADS1 ）的SNP。按照基因频率将基因型分为野生型和突变型。临床表型中各基因型分布的频率差异和基因型分布的Hardy-Weinberg平衡等定性数据比较行 χ2检验或Fisher确切检验。 结果:IL-8 rs4073突变型（TA+AA）患者中CRT有反应者较野生型（TT）少[比值比（ OR）=0.310，95%可信区间（ CI）0.106~ 0.910， P<0.05）。其中药物分层检验后，康柏西普治疗组中 IL-8 rs4073位点TT基因型患者CRT无反应者占比更少（ OR=0.179，95% CI =0.034~ 0.960， P=0.033）。 LIPC rs2043085突变型（CT+TT）患者中BCVA提高≥0.2 logMAR单位者较野生型（CC）可能性更高（ OR=3.031，95% CI 1.036~ 8.867， P<0.05）；HDL-C水平显著低于野生型（CC），差异有统计学意义（ t=2.448， P=0.016）。 IL-8 rs4073、 LIPC rs2043085突变型和野生型患者治疗前logMAR BCVA、CRT比较，差异无统计学意义（ IL-8 rs4073： Z=-0.198、-1.651， P=0.843、0.099； LIPC rs2043085 ： Z=-0.532、-0.152， P=0.595、0.879）。 C3 rs 225066、 CFH rs800292、 CETP rs708272、 ABCA1 rs1883025、 FADS1 rs174547、 LPL rs12678919与抗VEGF药物治疗反应无相关性。 结论:wAMD患者负荷抗VEGF药物治疗， IL-8 rs4073位点A基因型者可能对CRT反应性更差； LIPC rs2043085位点T基因型者可能对BCVA反应性相对更好。

目的:探讨伴核孔蛋白(NUP)98-DNA拓扑异构酶( TOP) 1融合基因复发/难治性急性髓细胞白血病(AML)患者的临床、实验室检查特点及诊疗策略，并进行相关文献复习。 方法:选择2022年2月15日海军军医大学附属第一医院(上海长海医院)收治的1例39岁伴 NUP98- TOP1融合基因复发/难治性AML女性患者为研究对象(患者1)。采用回顾性分析方法，对其病史、临床特征、实验室检查结果等进行分析。根据患者1的临床表现、实验室检查结果，对其进行诊断和治疗。对患者1随访时间截至2022年6月30日。本研究以"核孔蛋白98"" NUP98""t(11; 20)"" NUP98- TOP1融合基因""染色体易位""急性髓细胞白血病""AML""nucleoporin 98"" NUP98- TOP1 fusion gene""chromosome translocation""acute myeloid leukemia"为中、英文关键词，检索中国知网数据库、维普数据知识服务平台、万方数据知识服务平台和PubMed数据库中相关文献，总结伴t(11; 20)易位AML患者相关病例的诊疗。检索时间为上述数据库建库至2022年6月30日。本研究符合2013年修订的《世界医学协会赫尔辛基宣言》要求，并取得受试者知情同意。 结果:①患者1因"无明显诱因发热，伴胸闷、恶心1周"于当地医院就诊，经检查诊断为AML，因外院治疗缓解后复发，遂转入本院进一步治疗。②入院后，患者1血常规检查结果示，白细胞计数(WBC)、红细胞计数、血红蛋白(Hb)值、血小板计数分别为5.34×10 9/L、3.91×10 12/L、143 g/L和154×10 9/L。骨髓细胞形态学检查结果示未缓解。染色体核型为46，XX，t(11；20)(p15；q12)[10]/46，idem，del(9)(q12q22)[4]/46，XX[6]；荧光原位杂交(FISH)结果示， NUP98重排， NUP98- TOP1融合基因；逆转录PCR结果示， NUP98- TOP1、 TOP1- NUP98融合基因均呈阳性。③患者1被诊断为伴 NUP98- TOP1融合基因复发/难治性AML。予患者1小剂量HAG[高三尖杉酯碱1 mg/(m 2·d)，d1～7；阿糖胞苷10 mg/(m 2·d)，d1～7；重组人粒细胞集落刺激因子2 000 μg/(m 2·d)，d1～14，当中性粒细胞绝对数>5×10 9/L或者WBC>20×10 9/L时，暂停用药]方案化疗后，对其进行人类白细胞抗原(HLA)全相合异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)。移植后患者获得造血重建，未见白血病残留细胞，嵌合度为99.6%。截至随访结束，其一般状况良好。④按照本研究设定的文献检索策略，共纳入10篇文献，报道10例伴t(11；20)易位AML患者(患者2～11)，加上患者1，共计11例患者被纳入以下研究。其中，5例(患者1、3、5、6、10)伴 NUP98- TOP1融合基因，1例(患者9)伴 FLT3突变。7例(患者1～4、6、9、10)接受化疗。2例患者(患者1、2)接受allo-HSCT，其生存期长于未接受造血干细胞移植(HSCT)者。 结论:在初诊AML患者中常规检测 NUP98重排，有利于发现伴 NUP98重排患者，从而选择个体化治疗方案，allo-HSCT可改善患者预后。

目的:对丝氨酸水解酶家族1（FSH1）蛋白在犬小孢子菌中进行亚细胞定位分析。方法:以前期构建的犬小孢子菌FSH1质粒及载体pCAMBIA-LRP-增强型绿色荧光蛋白（EGFP）为模板，PCR扩增FSH1基因及EGFP基因；同时利用SnaBI/KpnI对pCAMBIA-LRP-EGFP质粒双酶切获得载体DNA，将扩增的EGFP基因克隆至酶切好的载体DNA中获得EGFP表达载体；将扩增的FSH1基因及EGFP基因克隆至酶切好的载体DNA中获得融合载体Ptrcp-FSH1-EGFP-Ttrcp。通过根癌农杆菌介导的遗传转化方法，用重组质粒转化犬小孢子菌，使融合基因FSH1-EGFP在真菌通用启动子（Ptrpc）和终止子（Ttrpc）调控下在犬小孢子菌中整合型表达，利用激光共聚焦显微镜观察融合蛋白的细胞定位。结果:成功构建根癌农杆菌转化系统及犬小孢子菌EGFP表达载体；融合基因FSH1-EGFP在犬小孢子菌中获得整合型表达。激光共聚焦显微镜显示FSH1-EGFP融合蛋白的荧光信号呈颗粒状或团块状集中于犬小孢子菌的细胞质及细胞核中。结论:FSH1-EGFP融合蛋白成功定位于犬小孢子菌的细胞质及细胞核中，为进一步明确犬小孢子菌FSH1基因的功能及致病机制奠定了基础。

目的:构建人降钙素原（hPCT）原核表达载体，低成本、快速、高浓度、高纯度获取hPCT纯化蛋白，为临床实验室检测制备质控品和参考物质奠定基础。方法:将GenBank提供的hPCT编码序列经大肠杆菌密码子优化后，人工合成DNA片段克隆至pET-28a(+)原核表达载体以构建重组hPCT表达质粒。转化至大肠杆菌 E. coli BL21感受态中，优化诱导表达条件、诱导质粒表达并对重组蛋白进行His融合标签纯化。 结果:成功构建重组hPCT原核表达质粒，优化异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导重组蛋白表达浓度及诱导温度，最适IPTG浓度为0.2 mmol/L，最佳诱导温度为37 ℃。纯化后hPCT蛋白可通过临床检测，且稀释倍数与检测浓度间呈现良好线性关系，回归方程为y=-0.0085x+112.63， R2值为0.9975。 结论:成功构建重组hPCT的高效表达系统，重组hPCT蛋白纯度大、浓度高、生产周期短，有成为候选室间质量评价参考物质的潜力。

目的:观察玻璃体腔注射阿柏西普（IVA）初始治疗及换药治疗对渗出型老年性黄斑变性（eAMD）的短期疗效。方法:回顾性临床研究。2018年6月至2021年2月于解放军中部战区总医院眼科行IVA治疗的eAMD患者38例49只眼纳入研究。其中，男性24例29只眼，女性14例20只眼；平均年龄（66.82±8.71）岁。所有患眼均行IVA治疗。起始负荷剂量2.0 mg，每月注射1次，连续3个月，随后每月复查并评估按需治疗。49只眼中，26只眼为初始治疗（初治组），即首次发病3个月内确诊并行IVA治疗，且从发病到初诊未进行眼内药物及手术治疗；23只眼为换药治疗（换药组），其换用阿柏西普治疗前6个月接受玻璃体腔注射雷珠单抗和（或）康柏西普治疗≥4次，期间存在持续性黄斑区视网膜层间囊样水肿和（或）视网膜下积液（SRF）、无改善的色素上皮脱离（PED）。IVA治疗前两组患眼最佳矫正视力（BCVA）、黄斑中心凹视网膜厚度（CMT）、PED高度（PEDH）、PED体积（PEDV）比较，差异均无统计学意义（ P>0.05）。治疗后1、3、6个月采用与治疗前相同的设备和方法行相关检查，记录两组患眼BCVA、CMT、PEDH、PEDV变化及并发症发生情况。两组间的BCVA、CMT、PEDH、PEDV比较采用重复测量方差分析。 结果:治疗后6个月，初治组、换药组患眼IVA注射次数分别为（4.15±0.73）、（4.39±0.72）次，差异无统计学意义（ t=-1.141， P=0.260）。初治组（ F=5.345、22.995、6.764、5.425）、换药组（ F=12.519、15.576、8.843、9.406）患眼治疗后1、3、6个月BCVA、CMT、PEDH、PEDV均较治疗前明显改善，差异均有统计学意义（ P<0.05）。初治组与换药组患眼治疗后各时间点BCVA、CMT、PEDH、PEDV比较，差异均无统计学意义（ F=1.741、0.069、0.876、3.455， P>0.05）。随访期间所有患眼均未出现持续性眼压升高、眼内炎、视网膜色素上皮撕裂等并发症的发生。 结论:IVA治疗eAMD可提高患眼视力，降低CMT、PEDH、PEDV；初始治疗与换药治疗疗效相当。

目的:观察康柏西普治疗不同类型糖尿病黄斑水肿（DME）的疗效。方法:回顾性临床研究。2019年3月至2021年3月于西安市第三医院眼科检查确诊的DME患者136例136只眼纳入研究。其中，男性65例，女性71例；平均年龄（56.65±8.65）岁。所有患者均行最佳矫正视力（BCVA）、光相干断层扫描（OCT）检查以及糖化血红蛋白（HbA1c）水平检测。采用糖尿病视网膜病变早期治疗研究视力表行BCVA检查，统计时换算为最小分辨角对数（logMAR）视力。采用OCT仪测量黄斑中心凹视网膜厚度（CRT）。依据OCT特征，将DME分为弥漫性黄斑水肿（DRT）型、囊样黄斑水肿（CME）型、浆液性视网膜脱离（SRD）型、混合型，并据此分组，分别为30、38、33、35只眼。4组患者年龄（ F=1.189 ）、性别构成比（ χ2=1.331）、HbA1c水平（ F=3.164）比较，差异均无统计学意义（ P>0.05）。所有患眼均行玻璃体腔注射10 mg/ml的康柏西普0.05 ml（含康柏西普0.5 mg）治疗，每一个月1次，连续3次，其后经评估按需治疗。治疗后1、3、6个月采用与治疗前相同的设备和方法行BCVA、OCT检查。对比观察患眼治疗前后的BCVA、CRT变化。服从正态分布的计量资料，组间比较行单因素方差分析；计数资料比较行 χ2检验。 结果:治疗前，DRT型组、CME型组、SRD型组、混合型组患眼logMAR BCVA分别为0.68±0.11、0.69±0.15、0.71±0.12、0.73±0.14，CRT分别为（631.4±50.7）、（640.6±55.7）、（652.3±63.4）、（660.4±61.8）μm。与治疗前比较，治疗后1、3、6个月，DRT型组（BCVA： t=8.139、11.552、11.672；CRT： t=16.163、21.653、25.855）、CME型组（BCVA： t=8.923、9.995、13.842；CRT： t=16.163、21.653、25.855）、SRD型组（BCVA： t=5.171、7.315、6.051；CRT： t=9.099、13.731、21.306 ）、混合型组（BCVA： t=5.072、6.939、7.142；CRT： t=6.920、15.352、17.538）患眼BCVA均明显提高，CRT明显下降，差异均有统计学意义（ P<0.05）。治疗后6个月，4组患眼logMAR BCVA、CRT比较，差异均有统计学意义（ χ2=58.478、64.228， P<0.05）。DRT型组、CME型组、SRD型组、混合型组患眼平均注射次数分别为（3.37±1.35）、（3.68± 1.38）、（4.18±1.40）、（4.13±1.50）次；4组患眼平均注射次数比较，差异有统计学意义（ χ2=9.139 ， P=0.028 ）。 结论:康柏西普可有效降低不同类型DME患眼CRT，提高BCVA。与SRD型、混合型比较，DRT、CME型患眼视力改善更有效，CRT降低程度更大，注射次数更少。

皮肤穿透肽(SPP)是一类能够促进药物或活性成分通过皮肤屏障的肽类分子.SPP具有良好的生物相容性和安全性,可用于输送各种类型的药物或活性成分,包括小分子药物、蛋白质和核酸.这些特点使得SPP在医药和化妆品领域中具有广泛的应用前景.目前国内外科研人员对于SPP的结构、机制、设计和应用进行了广泛的探索和实验.按来源分类,SPP可分为3类:蛋白质来源的SPP、基因重组来源的SPP和人工设计合成的SPP;其促渗机制可以从作用于角质层和作用于皮肤附属器这2个方面来阐述;其主要的应用方式包括4种:SPP与药物的物理混合、SPP与药物形成共价连接、SPP与蛋白类药物形成融合蛋白、SPP修饰药物载体,综述SPP不同来源SPP种类、不同SPP的促渗机制及应用方式,分析其研究与应用中存在的问题,以期为SPP的开发和创新提供有价值的参考.

白细胞介素35(interleukin-35,IL-35)是非常重要的免疫抑制性细胞因子,被证实在多种疾病的免疫应答中发挥作用.本研究通过克隆人IL-35基因编码序列,构建单亚基表达载体pXC17.4-p35和pcDNA3.1(+)-EBI3,共转染CHO-K1细胞体外表达IL-35,经检测未发现p35亚基与EBI3亚基的结合.Knobs-into-Holes(KIH)可解决异源抗体重链错配的问题,因此,在原始序列的基础上融合KIH结构构建表达载体pXC17.4-p35-Fch和pcDNA3.1(+)-EBI3-Fck来表达KIH-IL-35重组融合蛋白质;同时交换2个亚基的表达载体来验证不同表达载体对KIH-IL-35表达量的影响.经过多种蛋白质检测方法的分析,显示KIH-IL-35结构的正确表达率明显提高.大量表达后对KIH-IL-35进行亲和纯化,采用ELISA法检测纯化后的KIH-IL-35与糖蛋白130(gp130)分子的结合活性,结果表明,KIH-IL-35与gp130的结合呈浓度依赖性.采用细胞活性检测方法检测KIH-IL-35与M1细胞的间接活性,结果表明,M1细胞的抑制率与KIH-IL-35的浓度呈剂量依赖性增长.此外,本研究成功建立了 一种利用激活的人外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)对IL-35进行活性检测的方法,结果显示,激活的PBMCs与KIH-IL-35的浓度呈剂量依赖性增长.总之,本研究利用KIH-IL-35模型,提高了重组人IL-35的正确表达率,并验证其在体外的高活性,为IL-35的研究及类似异源二聚体细胞因子的重组表达提供新思路.

目的 评价腰椎融合术中应用重组人骨形态发生蛋白2(rhBMP-2)辅助治疗腰椎退行性疾病(LDD)的可行性及安全性.方法 回顾性分析2016年1月—2019年12月采用腰椎融合术治疗的LDD患者136例,其中57例术中采用rhBMP-2辅助治疗(试验组),79例术中未使用rhBMP-2辅助治疗(对照组).采用疼痛视觉模拟量表(VAS)评分、Oswestry功能障碍指数(ODI)、并发症发生情况、影像学融合结果评估2组患者临床疗效.并进一步统计并发症发生率与rhBMP-2剂量的相关性.结果 所有手术顺利完成,患者随访(4.68±1.70)年.术后1个月、末次随访时2组VAS评分和ODI较术前显著改善,差异均有统计学意义(P<0.05);末次随访时2组ODI较术后1个月进一步改善,对照组VAS评分较术后1个月进一步改善,差异均有统计学意义(P<0.05).术后1个月2组VAS评分差异有统计学意义(P<0.05),其余各时间点2组VAS评分和ODI差异无统计学意义(P>0.05).试验组并发症发生率为12.3%,对照组为13.9%,2组并发症发生率差异无统计学意义(P>0.05);rhBMP-2剂量增加与并发症发生率无显著相关性.183个椎间隙术后Lenke分级,试验组优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 腰椎融合术中应用rhBMP-2辅助治疗LDD可改善融合情况,使用时须充分评估适应证、谨慎选择剂量以降低相关并发症的发生风险.