目的 探讨水苏碱(Sta)调节超音速刺猬因子(Shh)/胶质瘤相关癌基因同源物1(Gli1)信号通路对口腔癌(OC)细胞迁移、侵袭和上皮间质转化(EMT)的影响.方法 采用蛋白质印迹技术检测Shh、Gli1在正常口腔上皮角质细胞HOK和OC细胞株系(Cal-27、Tca8113、SCC-9、HSC-3)中的表达,选择其中高表达的HSC-3细胞为研究对象,随机分为Control组、L-Sta组、M-Sta组、H-Sta组、PM组.EdU染色检测HSC-3细胞增殖;划痕实验检测HSC-3细胞的迁移;Transwell实验检测HSC-3细胞侵袭;采用蛋白质印迹技术检测Sta对E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Shh、Gli1蛋白表达的影响;小鼠荷瘤实验验证Sta对OC肿瘤生长和OC组织Shh、Gli1蛋白表达的影响.结果 L-Sta组、M-Sta组、H-Sta组HSC-3细胞EdU阳性细胞率、划痕愈合率、侵袭数、N-cadherin、Vimentin、Shh、Gli1表达低于Control组,E-cadherin表达高于Control组(P<0.05);与H-Sta组相比,PM组EdU阳性细胞率、划痕愈合率、侵袭数、N-cadherin、Vimentin、Shh、Gli1表达升高,E-cadherin表达降低(P<0.05).Sta组移植瘤质量、体积、Shh阳性率、Gli1阳性率低于对照组(P<0.05).结论 Sta可以抑制OC细胞迁移、侵袭和EMT,其机制可能是通过调节Shh/Gli1信号通路实现的.

大面积深度烧伤患者因汗腺毁损导致体温调节功能基本丧失，生活质量受到严重影响。目前对于修复汗腺功能的研究较多，然而人体汗腺发育的机制尚未完全阐明。越来越多的研究表明Wnt/β连环蛋白、外胚叶发育不全/外胚叶发育不全受体/核因子κB、音猬因子、叉头框转录因子等信号通路彼此级联共同影响汗腺发育，并且已有研究报道可以利用级联信号通路实现汗腺样细胞的体外重建。现就影响汗腺发育的信号通路及其参与汗腺样细胞的体外重建情况作一综述。

目的:探讨转录因子En1在食管鳞状细胞癌（ESCC）细胞中的功能及机制。方法:利用癌症基因组图谱数据库（TCGA）中9 397例泛癌患者的En1表达和总生存资料、4 349例泛癌患者的En1表达和无进展生存资料，分析泛癌中En1表达水平与患者预后的关系。利用基因表达综合数据库（GEO）的53对和国家基因组科学数据中心-组学原始数据归档库（NGDC-GSA）的155对ESCC组织和配对癌旁组织的基因表达资料分析ESCC组织中En1的表达水平。以慢病毒系统介导ESCC细胞KYSE180和KYSE450中En1基因敲降，采用细胞计数试剂盒8法和克隆形成实验检测细胞的增殖能力，Transwell实验检测细胞的迁移能力，采用裸鼠皮下移植瘤实验检测En1对ESCC细胞体内肿瘤生长的影响。采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测细胞中En1及Hedgehog通路主要调控因子胶质瘤相关癌基因家族锌指1（GLI1）、GLI2和平滑蛋白（SMO）的表达。结果:来自TCGA数据库的泛癌样本资料显示，En1低表达患者的总生存时间和无进展生存时间均比En1高表达患者更长（均 P＜0.001）。来自GEO和NGDC-GSA数据库的资料显示，ESCC组织中En1的表达水平高于配对癌旁组织（均 P＜0.001）。功能研究显示，与shNC组相比，敲降En1能显著抑制KYSE180和KYSE450细胞的增殖（均 P＜0.001）、抑制克隆形成［KYSE180细胞：shEn1#1组和shEn1#2组的克隆形成数分别为（138.33±23.07）个和（127.00±19.70）个，均低于shNC组的（340.67±12.06）个（均 P＜0.001）；KYSE450细胞：shEn1#1组和shEn1#2组的克隆形成数分别为（65.33±2.52）个和（9.00±3.00）个，均低于shNC组的（139.00±13.00）个（均 P＜0.001）］、抑制迁移［KYSE180细胞：shEn1#1组和shEn1#2组的迁移细胞数分别为（66.67±12.66）和（71.33±11.02）个，均低于shNC组的（334.67±16.56）个（均 P＜0.001）；KYSE450细胞：shEn1#1组和shEn1#2组的迁移细胞数分别为（112.33±14.57）和（54.33±5.51）个，均低于shNC组的（253.33±21.03）个（均 P＜0.001）］。裸鼠皮下移植瘤实验显示，敲降En1肿瘤的生长速度减慢，shEn1#1组和shEn1#2组小鼠的移植瘤重量分别为（0.046±0.026）g和（0.047±0.025）g，均低于shNC组［（0.130±0.038）g，均 P＜0.001］。RT-qPCR检测结果显示，shEn1#1组和shEn1#2组KYSE180细胞中GLI1 mRNA表达量分别为0.326±0.162和0.322±0.133，shEn1#1组和shEn1#2组KYSE450细胞中GLI1 mRNA表达量分别为0.131±0.006和0.352±0.050，均低于shNC组（均 P＜0.01）。在敲降En1的KYSE450细胞中过表达GLI1，能减弱敲降En1对细胞增殖（ P＜0.001）、克隆形成［shEn1#1-GLI1组的克隆形成数为（151.00±9.54）个，高于shEn1#1-vector组的（102.33±10.02）个（ P=0.004）］和迁移［shEn1#1-GLI1组的迁移细胞数为（193.67±10.07）个，高于shEn1#1-vector组的（109.33±11.50）个（ P＜0.001）］的抑制作用。ESCC组织中GLI1、GLI2、GLI3、音猬因子、SMO和补缀同源物1的表达水平均高于配对癌旁组织，Hedgehog通路被激活。 结论:En1在ESCC组织中高表达，其通过调节Hedgehog信号通路在促进ESCC细胞增殖和迁移中发挥重要作用。

目的:评价音猬因子(Shh)/胶质瘤相关癌基因同源物1(Gli1)信号通路在睡眠剥夺致幼鼠认知功能障碍中的作用。方法:SPF级健康雄性C57BL/6小鼠48只，4周龄，体重14~16 g，采用随机数字表法分为3组( n＝16)：对照组(C组)、睡眠剥夺组(SD组)和睡眠剥夺＋Shh激动剂SAG组(SD＋SAG组)。采用多平台水环境法制备小鼠睡眠剥夺模型，每天睡眠剥夺20 h，连续10 d。SD＋SAG组于每次造模前5 min腹腔注射SAG 10 mg/kg，C组和SD组腹腔注射等量生理盐水。造模结束后随机取10只小鼠行新物体识别和Y迷宫实验，行为学实验结束后处死小鼠取海马，采用高尔基染色法测定海马CA1区树突棘密度，采用Western blot法检测Gli1和脑源性神经营养因子(BDNF)表达，采用RT-qPCR法检测Gli1和BDNF的mRNA表达。 结果:与C组比较，SD组新物体识别、Y迷宫偏好指数及海马CA1区树突棘密度降低，海马Gli1和BDNF及其mRNA表达下调( P<0.05)；与SD组比较，SD＋SAG组新物体识别、Y迷宫偏好指数及海马CA1区树突棘密度升高，海马Gli1和BDNF及其mRNA表达上调( P<0.05)。 结论:Shh/Gli1信号通路抑制，降低海马神经元突触可塑性参与了睡眠剥夺致幼鼠认知功能障碍的过程。

目的:探讨一个多指(趾)畸形家系潜在的致病基因及机制。方法:收集多指(趾)家系5代11人的临床资料及外周血，全外显子测序，Sanger测序进行验证，确定突变位点。构建重组质粒，在293T细胞中进行外源表达，进行免疫印迹实验和免疫共沉淀实验确定突变蛋白分子量及融合抑制因子(suppressor of fused，SUFU)相互作用情况。结果:先证者及其外曾外祖母、外祖母、母亲、舅舅均存在NM_000168.6( GLI3)：[c.2880del，p.(Asp962MetfsTer41)]移码突变，正常成员未见异常。其表达一个分子量约为130 kDa截短的突变体，与SUFU的相互作用显著降低，音速刺猬(sonic hedgehog signaling，SHH)信号通路激活强度受限。根据美国医学遗传学和与基因组学学会遗传变异分类标准与指南评级为致病变异。 结论:GLI3：c.2880del突变是家系中多指(趾)的致病因， GLI3基因突变谱进一步丰富。

目的:初步探讨音猬因子（SHH）信号通路抑制剂NVP-LDE225与放射联用治疗黑色素瘤的潜在作用机制以及可行性。方法:通过qPCR的方法检测处理前后黑色素瘤细胞Melan-A及SK-MEL-2中Gli1的mRNA的表达量。NVP-LDE225、GDC-0449与放射联合处理24 h后，通过细胞计数法和CCK-8法检测黑色素瘤细胞Melan-A及SK-MEL-2的细胞数量与细胞活性，细胞克隆法检测Melan-A及SK-MEL-2的生存以及增殖能力，流式细胞术检测Melan-A细胞周期的变化，Western blot检测Melan-A细胞中凋亡蛋白Bax及Caspase3的表达变化。结果:单纯给予Smo抑制剂NVP-LDE225能够抑制黑色素瘤细胞中Gli1的mRNA表达，减少黑色素瘤细胞的增殖，诱导其凋亡，且将黑色素瘤细胞阻滞于G 0/G 1期。NVP-LDE225处理后1 h给予γ射线照射将进一步抑制SHH信号通路，使黑色素瘤细胞阻滞于G 2/M期，进一步抑制黑色素瘤细胞的增殖。 结论:Smo抑制剂NVP-LDE225能抑制黑色素瘤细胞中SHH信号通路，抑制细胞增殖，与放射联用后，进一步增加抑制细胞增殖的效果。其可以作为一个潜在的与放疗联合治疗黑色素瘤的药物，值得进一步研究。

目的:探讨布托啡诺调节音猬因子（SHH）/神经胶质瘤联合转录因子1（GLI1）信号通路对肺癌细胞增殖、凋亡和血管生成的影响。方法:二苯基四氮唑溴盐（MTT）法检测0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0 μmol/L布托啡诺对肺癌A549细胞增殖的影响，获得最佳干预浓度；将肺癌A549细胞按照完全随机分组法分为5组（每组6孔）：对照组、环巴胺组、布托啡诺组、布托啡诺+空载质粒（pcDNA-NC）组、布托啡诺+过表达SHH质粒（pc-SHH）组。对照组无处理，环巴胺组加入10 μmol/L环巴胺，布托啡诺组加入8 μmol/L布托啡诺，布托啡诺+pcDNA-NC组加入8 μmol/L布托啡诺并转染pcDNA-NC，布托啡诺+pc-SHH组加入8 μmol/L布托啡诺并转染pc-SHH。分别用MTT法、5-乙炔基-2'-脱氧尿苷（Edu）染色、流式细胞术、荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测各组细胞波长为490 nm时的光密度值 D490（24、48 h）、增殖率、凋亡率、SHH信使RNA（mRNA）和GLI1 mRNA水平；Matrigel基质胶三维培养观察各组细胞管腔；免疫印迹法（Western blot）检测血管内皮生长因子（VEGF-A）、血管内皮钙黏蛋白（VE-cadherin）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、SHH、GLI1水平。 结果:0.50~16.0 μmol/L的布托啡诺都可以抑制A549细胞的增殖活力，呈浓度依赖性，8.0 μmol/L接近半数抑制浓度。对照组A549细胞具有较完整的管腔结构，与对照组比较，环巴胺组、布托啡诺组、布托啡诺+pcDNA-NC组A549细胞管腔结构不完整，有明显破坏， D490（24、48 h）、增殖率及SHH mRNA、GLI1 mRNA、VEGF-A、VE-cadherin、Bcl-2、SHH、GLI1水平较低（均 P<0.05），细胞凋亡率、Bax水平较高（均 P<0.05）。环巴胺组与布托啡诺组A549细胞各项检测指标差异无统计学意义（均 P>0.05）。与布托啡诺+pcDNA-NC组比较，布托啡诺+pc-SHH组A549细胞管腔结构相对完整，破坏程度明显较轻， D490（24、48 h）和增殖率、SHH mRNA和GLI1 mRNA水平、VEGF-A、VE-cadherin、Bcl-2、SHH、GLI1水平较高（均 P<0.05），细胞凋亡率、Bax水平较低（均 P<0.05）。 结论:布托啡诺通过阻断SHH/GLI1信号通路进而抑制肺癌A549细胞的增殖和血管形成，并促进其凋亡。

目的:观察丰富环境康复训练(EET)对脑缺血大鼠认知功能及音猬因子(SHH)信号通路的影响。方法:按照随机数字表法将60只成年雄性SD大鼠分为空白对照组、模型组、训练组，再按干预时间不同，细分为空白对照7 d组、空白对照14 d组、模型7 d组、模型14 d组、训练7 d组、训练14 d组，每组10只。模型7 d组及14 d组、训练7 d组及14 d组均采用传统线栓法制备大鼠脑缺血模型，训练7 d组及14 d组于造模后予以EET干预。干预7 d及14 d后，通过Morris水迷宫、跳台试验测试大鼠的认知水平，采用TUNEL染色法检测大鼠海马部位脑细胞凋亡水平，通过qRT-PCR、Western blot、免疫组化技术检测大鼠患侧海马部位SHH、Gli2、PTCH1 RNA蛋白表达水平。结果:与训练7 d组和模型14 d组比较，训练14 d组大鼠Morris水迷宫测试的逃避潜伏期[(63.37±2.78)s]减短、平均游泳速度[(134.27±2.44)mm/s]增加、穿越平台次数[(6.70±0.95)次]增多、平台所在象限停留时间[(37.08±2.07)s]增加( P<0.05)，在跳台试验中遭遇电击的次数[(3.80±0.63)次]少、平台滞留时间[(25.26±1.64)s]短( P<0.05)。TUNEL染色结果显示，训练14 d组大鼠海马细胞凋亡百分比低( P<0.05)。免疫组化结果显示，训练14 d组大鼠患侧海马SHH、Gli2蛋白表达量增加，PTCH1表达量降低( P<0.05)。 结论:EET可以显著改善脑缺血大鼠的认知功能，其机制可能与SHH信号通路的激活增强有关。

目的 探究四神煎对膝骨关节炎大鼠关节软骨的保护作用及其可能的作用机制.方法 40只大鼠分为假手术组、模型组、四神煎低剂量组及高剂量组,每组10只.分组后灌胃给药,每天1次,连续6周.采用HE染色检查膝关节组织形态学变化;采用Micro-CT检测软骨下骨的结构情况并对骨小梁形态学参数进行分析;用qPCR分析各组软骨组织中音猬因子(Shh)、神经胶质瘤相关癌基因同源物1(Gli1)及II型胶原蛋白(Collagen II)的mRNA表达变化.结果 HE染色结果表明,模型组整体染色欠均匀,关节软骨表面破坏明显,且具有明显裂隙,软骨层变薄,软骨数量减少,软骨细胞分布排列紊乱,各层次界限不清晰,潮线明显不规则紊乱,而四神煎低剂量及高剂量组较模型组均有改善.Micro-CT显示模型组关节面破坏严重伴骨赘形成,软骨下骨骨量明显减少,四神煎低剂量及高剂量组均较之改善;与模型组比较,四神煎高剂量组大鼠骨小梁数量(Tb.N)、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、软骨组织中Collagen II的mRNA表达量显著增加(P＜0.05),Shh、Gli1的mRNA表达量明显下降(P＜0.001).结论 四神煎对膝骨关节炎大鼠关节软骨具有保护作用,其作用机制可能与抑制Hedgehog信号通路调控Collagen II的表达有关.

目的 探讨肉桂醛调节音猬因子(Shh)/Gli家族锌指蛋白1(Gli1)信号通路对幽门螺旋杆菌(Hp)胃炎大鼠胃黏膜损伤的影响.方法 将大鼠随机分为对照组、模型组、肉桂醛低剂量组、肉桂醛中剂量组、肉桂醛高剂量组、替普瑞酮组、肉桂醛高剂量+Shh激活剂Purmorphamine(PUR)组,每组18只.通过灌胃Hp的方法构建胃炎大鼠模型.建模成功后,肉桂醛低、中、高剂量组大鼠分别灌胃12.5 mg/kg、25 mg/kg、50 mg/kg肉桂醛,替普瑞酮组大鼠灌胃0.13 g/kg替普瑞酮,肉桂醛高剂量+PUR组大鼠给予50 mg/kg肉桂醛灌胃和6.67 mg/kg PUR腹腔注射,每天给药1次,持续2周.HE染色检测大鼠胃黏膜组织病理变化;透射电镜观察大鼠胃黏膜细胞形态.将GES-1细胞分为vitro-对照组、vitro-模型组、vitro-肉桂醛低剂量组、vitro-肉桂醛中剂量组、vitro-肉桂醛高剂量组、vitro-替普瑞酮组、vitro-肉桂醛高剂量+PUR组.除vitro-对照组外,其他组GES-1细胞均需被Hp感染,感染结束后,vitro-肉桂醛低剂量组、vitro-肉桂醛中剂量组、vitro-肉桂醛高剂量组分别用5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L肉桂醛处理24 h;vitro-替普瑞酮组用1μmol/L替普瑞酮处理24 h;vitro-肉桂醛高剂量+PUR组用20μmol/L肉桂醛和1μmol/L PUR共同处理24 h,CCK-8法检测GES-1细胞增殖抑制率;ELISA法检测大鼠胃黏膜组织及GES-1细胞上清中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;Western blot检测大鼠胃黏膜组织及GES-1细胞中Shh、Gli1蛋白表达.结果 与对照组比较,模型组大鼠胃黏膜组织病理损伤严重,胃黏膜表面上皮细胞固缩,细胞膜破损,IL-1β、TNF-α水平及Shh、Gli1蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,肉桂醛低剂量组、肉桂醛中剂量组、肉桂醛高剂量组、替普瑞酮组大鼠胃黏膜组织病理损伤、胃黏膜表面上皮细胞结构及形态有所改善,IL-1β、TNF-α水平及Shh、Gli1蛋白表达降低(P<0.05);与肉桂醛高剂量组比较,肉桂醛高剂量+PUR组大鼠胃黏膜组织病理损伤加剧,胃黏膜表面上皮细胞结构及形态破环严重,IL-1β、TNF-α水平及Shh、Gli1蛋白表达升高(P<0.05).与vitro-对照组比较,vitro-模型组GES-1细胞增殖抑制率、细胞上清中IL-1β、TNF-α水平及细胞中Shh、Gli1蛋白表达升高(P<0.05);与vitro-模型组比较,vitro-肉桂醛低剂量组、vitro-肉桂醛中剂量组、vitro-肉桂醛高剂量组、vitro-替普瑞酮组GES-1细胞增殖抑制率、细胞上清中IL-1β、TNF-α水平及细胞中Shh、Gli1蛋白表达降低(P<0.05);与vitro-肉桂醛高剂量组比较,vitro-肉桂醛高剂量+PUR组GES-1细胞增殖抑制率、细胞上清中IL-1β、TNF-α水平及细胞中Shh、Gli1蛋白表达升高(P<0.05).结论 肉桂醛可能通过抑制Shh/Gli1通路减轻Hp诱导的胃炎大鼠胃黏膜损伤.